牙源性角化囊肿与正角化牙源性囊肿CK10、Bcl-2免疫组化表达

目的 :比较牙源性角化囊肿 (odontogenickeratocyst,OKC)与正角化牙源性囊肿 (orthokeratinizedodonto geniccyst,OOC)中CK10及Bcl- 2的表达情况。方法 :OKC及OOC各 10例 ,分别行CK10、Bcl- 2免疫组化染色 ,并利用SPSS10 .0统计软件对免疫组化染色结果进行统计学处理。结果 :CK10在OKC中的阳性表达率为 80 % (8/10 ) ,而在OOC中为 10 0 % (10 / 10 ) (P >0 .0 5 )。OOC上皮中CK10阳性着色于除基底细胞层外的上皮全层 ,而OKC中CK10阳性着色仅见于上皮表层的不全角化层。Bcl- 2在OKC中的阳性表达率为 6 0 % (6 / 10 ) ,而在OOC中为 10 % (1/ 10 ) (P <0 .0 5 )。结论 :OKC与OOC的衬里上皮中免疫组化表达存在显著差别 ,OOC可能为有别于OKC的一种独立病损。     

nm23-H_1、P~(53)、PCNA的表达与舌鳞状细胞癌淋巴结转移的关系研究

目的 :探讨nm2 3-H1、P53 、PCNA的表达与舌鳞状细胞癌淋巴结转移的关系。方法 :应用免疫组化SP法 ,检测 18例淋巴结转移组和 5 7例非淋巴结转移组肿瘤原发灶中nm2 3-H1、P53 、PCNA的表达分布情况。结果 :nm2 3-H1在非淋巴结转移组中的阳性率 (86 .0 % )显著高于淋巴结转移组 (2 7.8% ) ,与转移呈负相关 (P <0 .0 5 ) ;淋巴结转移组中的P53 阳性率 (77.8% )和PCNA阳性指数 (91.2± 3.4 % )显著高于非淋巴结转移组 (38.6 %、70 .7± 2 .2 % ) ,与转移呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :nm2 3-H1、P53 、PCNA的表达水平可作为预测舌鳞状细胞癌淋巴结转移情况的有效指标。     

DDR1在唾液腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的:探讨盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)在唾液腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学和Western免疫印迹技术检测MEC细胞株M3SP2和MC3中DDR1的表达情况.应用免疫组织化学方法检测58例唾液腺MEC组织及20例正常唾液腺组织中DDR1的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:DDR1在黏液表皮样癌组织中的阳性表达率为79.3％,显著高于正常唾液腺组织(10％,P＜0.01).DDR1的高表达与MEC的临床病理参数无显著相关性(P＞0.05).在黏液表皮癌细胞株M3SP2和MC3中,DDR1表达阳性.结论:DDR1在唾液腺MEC的发生、发展中可能发挥重要作用.     

头颈部鳞癌抑癌基因nm23-H1的表达、DNA倍体与淋巴结转移的关系

目的 :研究头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC)nm2 3 H1基因的表达、DNA含量与淋巴结转移的关系。方法 :选择 3 0例未经治疗的HNSCC患者术后新鲜肿瘤标本 ,应用免疫组化ABC技术和流式细胞术 (FCM )检测瘤细胞nm 2 3 -H1基因表达、异倍体 (aneuploid)和S期细胞比例 (S phasefraction ,SPF) ,探索这 3个参数与淋巴结转移之间的关系。结果 :nm 2 3 H1的阳性率为 60 % ,异倍体检出率为 66.7%。nm 2 3 H1表达、DNA倍体和SPF与淋巴结转移有关 (均为P <0 .0 1)。nm 2 3 H1表达与DNA倍体无关 (P >0 .0 5 ) ,nm 2 3 H1表达与SPF有关 (P <0 .0 5 )。结论 :对nm2 3 H1表达、DNA倍体和SPF的检测可预测HNSCC淋巴结转移趋势和预后 ,是指导临床治疗有意义的一项生物学指标     

人黏液表皮样癌裸鼠耐药移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的:建立一种耐药性稳定的人涎腺黏液表皮样癌裸鼠移植瘤模型.方法:将人涎腺黏液表皮样癌多药耐药细胞接种于裸鼠皮下,成瘤后经腹腔注射小剂量5-FU进行体内诱导,建立稳定的黏液表皮样癌裸鼠移植瘤模型.结果:裸鼠移植瘤原代培养的MEC/5-FU/NU细胞与体外培养细胞结构类似,MEC/5-FU/NU细胞对5-FU的耐药指数为27.82.RT-PCR显示耐药相关基因ABCB1、ABCB11、GSTA1在MEC/5-FU/NU细胞中明显高表达(P<0.05).免疫荧光显示多药耐药蛋白MDR-1在MEC/5-FU/NU细胞中高表达.结论:以MEC/5-FU建立的黏液表皮样癌裸鼠皮下移植瘤模型仍保持MEC/5-FU细胞的形态学特征和多药耐药性,可为耐药性人涎腺黏液表皮样癌耐药机制和逆转的研究提供较理想的动物模型.     

PTEN和VEGF在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的表达及意义

目的　探讨抑癌基因PTEN和血管内皮生长因子 (VEGF)在口腔鳞状细胞癌 (oralsquamouscellcancer,OSCC)发生发展不同阶段中的蛋白表达及意义。方法　应用免疫组化S -P法检测 10例正常口腔粘膜、10例上皮单纯增生、15例上皮异常增生及 32例口腔鳞状细胞癌组织中PTEN和VEGF的蛋白表达情况 ,比较这两种蛋白表达之间的关系。结果　PTEN蛋白在正常口腔粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生、和口腔鳞状细胞癌组织中阳性表达率分别为 10 0 % (10 / 10 )、10 0 % (10 / 10 )、93.3% (14 / 15 )和 71.9% (2 3/ 32 ) ;口腔鳞状细胞癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率显著低于正常口腔粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生组织 (P <0 .0 5 ) ;高、中、低分化口腔鳞状细胞癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为 85 .7%、75 %和 33.3% ,统计学分析表明PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度明显相关 (P <0 .0 5 )。PTEN蛋白与VEGF蛋白表达呈负相关趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　PTEN蛋白在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的表达呈进行性下调或缺失 ,可能是通过降低细胞粘附、促进血管形成等途径参与口腔鳞状细胞癌的发生和演进过程     

基质金属蛋白酶-2、CD44v6在腮腺多形性腺瘤中的表达研究

目的:探讨基质金属蛋白酶 -2 (MMP2 )、CD44v6在腮腺多形性腺瘤中的表达及其与肿瘤复发的关系。方法:采用免疫组化S- P法检测5 0例初发腮腺多形性瘤(PA ) ,3 2例复发腮腺多形性腺瘤(CPA)及10例正常腮腺组织中CD44v6和MMP2的表达。结果:CD44v6在初发瘤、复发瘤及正常腮腺组织中阳性表达率分别为5 4.0 0 %、78.13 %、2 0 .0 0 % ,彼此间有显著性差异(P <0 .0 5 ) ;MMP2在初发瘤和复发瘤组织中阳性表达率分别为48.0 0 %、5 3 .13 % ,显著高于正常腮腺组织的10 .0 0 % (P <0 .0 5 ) ,而初发瘤和复发瘤间阳性表达率无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;CD44v6与MMP2在初发瘤及复发瘤中的阳性表达分别有显著相关性(P <0 .0 5 )。结论:MMP2、CD 44v6在腮腺多形性腺瘤中的过度表达与肿瘤的复发有明显关系,肿瘤复发可能是其本身所固有的生物学特性。     

p53蛋白在口腔疣状癌组织中的表达及意义

目的 :研究口腔疣状癌中p5 3蛋白的表达状况及与口腔粘膜鳞状细胞癌的表达对比 ,探讨p5 3蛋白在口腔疣状癌发生过程中的生物学意义。方法 :采用SP免疫组化方法分别检测 8例正常口腔粘膜、1 3例疣状癌、1 0例高分化鳞癌、1 0例低分化鳞癌组织中p5 3蛋白的表达。结果 :疣状癌p5 3蛋白阳性表达率为 6 9.2 % (9/ 1 3) ,高分化鳞癌组和低分化鳞癌组阳性表达率均为 80 % (8/ 1 0 ) ,而正常口腔粘膜上皮均呈阴性表达 ,疣状癌p5 3蛋白平均染色强度低于高分化鳞癌和低分化鳞癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;高分化鳞癌的平均染色强度低于低分化鳞癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :口腔疣状癌的发生过程中可能存在p5 3基因突变 ,疣状癌与高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中p5 3蛋白的表达差异可作为其鉴别诊断的有用指标之一     

黏液表皮样癌中CEACAM5和CEACAM6的表达及意义

目的检测癌胚抗原相关细胞黏附分子5(CEACAM5)和癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)在涎腺黏液表皮样癌(MEC)组织中的表达情况,分析二者与涎腺黏液表皮样癌发生发展的关系。方法 60例黏液表皮样癌标本,以30例癌旁正常涎腺组织作对照,通过免疫组化法分别检测CEACAM5和CEACAM6在标本中的表达情况。结果 MEC组中CEACAM5和CEACAM6的蛋白阳性表达率分别为(68.3%,65%),明显高于正常涎腺组织中的表达率(40%,36.7%)(P<0.05),MEC组中CEACAM5和CEACAM6蛋白的阳性表达与MEC的分化程度、临床分期及颈部淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者的性别和年龄无关(P>0.05)。CEACAM5和CEACAM6在MEC组织中的阳性表达呈正相关。结论 CEACAM5和CEACAM6在黏液表皮样癌组织中的异常表达促进肿瘤的发生,均参与肿瘤的进展,联合检测可能与患者的预后密切相关。     

Ets-1在颌骨骨肉瘤中的表达

目的 :分析Ets- 1(E2 6transformation -specific)在颌骨骨肉瘤的表达及意义。方法 :采用免疫组织化学ABC法检测Ets- 1蛋白在 2 0例颌骨骨肉瘤和 8例骨软骨瘤中的表达。结果 :5 5 % (11 2 0 )的骨肉瘤中Ets - 1呈阳性表达 ,阳性表达率在各病理学分型间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而转移组明显高于未转移组 (P <0 .0 5 ) ;12 .5 % (1 8)的骨软骨瘤呈Ets - 1阳性 ,与骨肉瘤相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :Ets - 1在颌骨骨肉瘤中过表达并与骨肉瘤的转移有关。     

人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞及其亲本细胞的线粒体分布及特点

目的 比较人粘液表皮样癌耐药细胞株(MEC—1／5—FU)及其亲本细胞(MEC—1)的线粒体数量和分布特点。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光扫描共聚焦显微镜、透射电镜观察两种细胞的线粒体分布及表达特征；细胞计数法观察细胞生长曲线及群体倍增时间。结果 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞增殖活跃，细胞群体倍增时间分别为30h和28．8h；MEC—1／5—FU细胞线粒体的数量与分布较MEC—1细胞数量更多，多集中分布于细胞质内，且集中分布在粗面内质网附近。MEC—1／5—FU细胞线粒体外形较不规则，嵴较发达。结论 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞线粒体数量和分布的不同以及线粒体嵴的数量、形态及排列方式、线粒体外形、嵴的发达程度等的差异均提示二者可能在能量消耗、细胞代谢及蛋白质合成功能方面存在差异。     

六亚甲基二乙酰胺对MEC—1细胞凋亡及bcl—2基因表达的影响

目的：研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺（hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞系MEC－1细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法：用2mmol/LHMBA和1mg/L5-FU对培养的MEC－1细胞进行体外诱导72h后,分别采用光镜。TUNEL染色、免疫组化,原位杂交、图像分析等方法进行凋亡指数、bcl-2蛋白及mRNA表达水平的检测。结果：HMBA诱导的MEC－1细胞凋亡指数为68．5％,明显高于对照组和5－FU组（P＜0．01）;bcl-2蛋白及mRNA的表 度均显著高于其它组（P＜0．01）。结论：HMBA对人粘液表皮样癌MEC－1细胞具有明显的诱导凋亡作用,其作用机制可能与减弱了凋亡相关基因bcl-2的负调控作用有关。     

多药耐药基因1和多药耐药相关蛋白基因1在腺样囊性癌细胞系ACC-2及其耐药细胞系ACC-2/BLM中表达的研究

目的检测多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因1(MRP1)在腺样囊性癌细胞系ACC-2及其耐药细胞系ACC-2/BLM中的表达。方法应用RT-PCR和免疫细胞化学技术分别检测MDR1和MRP1的mRNA表达以及相对应的P-gp和MRP1蛋白在两组细胞系中的表达。结果RT-PCR检测结果显示ACC-2以及ACC-2/BLM细胞均不表达MDR1mRNA,MRP1mRNA在ACC-2/BLM细胞中的表达明显强于ACC-2细胞。免疫细胞化学结果显示,2组细胞均不表达P-gp,在ACC-2/BLM细胞中MRP1蛋白表达强于ACC-2细胞。结论MRP1基因及其编码的MRP1蛋白在ACC-2/BLM细胞中高表达,可能与ACC-2/BLM细胞系产生多药耐药有关。     

体外短期化疗诱导Tca8113细胞株产生耐药性的研究

目的　探讨短期接触化疗药物后肿瘤细胞耐药性的产生情况及与化疗药物的关系。方法　将Tca8113 细胞株在体外与化疗药物短期接触后,采用RT-PCR法检测其在mRNA水平上多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白基因(MRP)的表达情况,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化,以耐药的白血病细胞株K562/ADM作为对照。结果　化疗对敏感的Tca8113细胞株有明显的抑制作用,而对K562/ADM抑制作用不明显;Tca8113细胞株短期接触化疗药物后,在mRNA水平可检测到微量的MDR1和MRP的表达;耐药的K562/ADM细胞内药物浓度明显低于敏感的Tca8113细胞株。结论　耐药性的产生与MDR1和MRP表达水平密切相关。Tca8113细胞株短期接触化疗后即有微量的MDR1 mRNA和MRP mRNA的表达,证实了药物对继发性多药耐药的诱导作用。     

8一甲氧基补骨脂素对MEC-1细胞癌基因/抑癌基因表达的影响

目的：研究8-甲氧基补骨脂素（8－MOP）对MEC－1细胞部分基因表达的影响。方法：细胞贴壁后用30％细胞生长抑制浓度的药物处理120h,常规制备标本,ABC法免疫组织化学杂色。结果：药物处理后细胞P16和nm23－H1蛋白表达强度增强,而CDK4和H－ras蛋白表达强度减弱。结论：8－MOP可以调节MEC－1细胞部分基因的表达,从而可能影响细胞相关的生物学特性。     

骨桥蛋白对鼠皮肤表皮干细胞的生物学影响

目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态,采用β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色鉴定,并进行细胞生长曲线测定,流式细胞仪分析及细胞克隆形成率测定,以角质形成细胞作为对照。实验对不同浓度rrOPN处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞生长率,ELISA法测定IL-6、IL-1炎性因子分泌的变化。结果:倒置显微镜观察所得鼠表皮干细胞呈上皮样生长,电镜观察细胞胞核大,较多处于分裂象。免疫组织化学检测表皮干细胞β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色均呈阳性。细胞周期分析表皮干细胞中48.9%的细胞处于DNA合成期,细胞克隆形成率为34.7%。5～50 ng/mL的rrOPN促进角质形成细胞生长,浓度为15 ng/mL的rrOPN促进细胞生长作用最显著(P<0.05)。rrOPN引起IL-6明显升高(P<0.05),IL-1β未见明显上调。结论:成功建立大鼠表皮干细胞分离、培养方法,rrOPN促进表皮干细胞增殖,并促其炎性因子分泌,影响创口愈合。     

肿瘤抑制基因nm23-H1在口腔鳞癌组织中的蛋白表达及其与预后的关系

目的　研究nm2 3 H1 蛋白在口腔鳞癌中的表达情况 ,并探讨它与口腔鳞癌患者预后的关系。方法　采用免疫组化SABC法检测 75例口腔鳞癌、19例癌旁粘膜、8例正常口腔粘膜及 9例颈淋巴结转移灶中的nm2 3 H1 蛋白染色 ,利用 χ2 检验及单因素、多因素Cox比例风险模型进行统计分析。结果　χ2 检验发现 ,nm2 3 H1 蛋白表达水平在生存期小于 3年组和大于 7年组间差异有显著性(P <0 0 5 )。单因素Cox模型分析发现nm2 3 H1 蛋白表达水平等因素与预后有关 ;多因素Cox分析未发现nm2 3 H1 蛋白表达水平等因素与预后有关。结论　nm2 3 H1 蛋白表达水平的高低可能不是影响口腔鳞癌患者预后的主要因素 ,nm2 3 H1 蛋白可能通过对转移的作用间接影响预后。     

siRNA干扰MDR1逆转口腔舌癌耐药性表型的实验研究

目的：探讨MDR1siRNA对人舌癌耐药细胞株TCA8113多药耐药性的影响。方法：以人舌癌耐药细胞株TCA8113/DDP为靶细胞,将针对MDR1基因合成,并已鉴定和测序后的siRNA分子利用脂质体介导转染TCA8113/DDP细胞,采用G418筛选克隆细胞,RT-PCR检测MDR1基因mRNA表达,免疫组织化学法测定P-糖蛋白（P-gp）表达;MTT比色法检测TCA8113/DDP细胞对顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、平阳霉素（PYM）的敏感性。结果：经转染成功的阳性克隆细胞TCA8113/DDP的MDR1mRNA和P-gp的表达均被抑制。TCA8113人舌癌耐药细胞顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、平阳霉素（PYM）的IC50分别降至3.43μmol/L,1.72μmol/L和1.05μmol/L（P〈0.01）。结论：稳定转染含编码MDR1siRNA的质粒载体能特异性地阻抑人舌癌多药耐药细胞TCA8113细胞MDR1基因的表达,逆转其对抗癌药物的耐受性。     

白细胞介素-23通过无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白通路增强舌鳞状细胞癌抗凋亡及耐药能力

目的 检测白细胞介素-23（IL-23）在舌鳞状细胞癌组织中表达水平与临床预后的关系,研究舌鳞状细胞癌细胞系SCC9经IL-23处理后抗凋亡及耐药能力的变化。方法 免疫组织化学法检测28例舌鳞状细胞癌患者组织中IL-23的表达情况;实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同浓度的IL-23处理后,SCC9中无翅基因相关整合位点（Wnt）1及c-myc的mRNA表达水平;结合小分子干扰RNA（siRNA）,Western blot法检测IL-23对SCC9细胞的β-连环蛋白（β-catenin）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）、P-糖蛋白（P-gp）表达影响及潜在机制;甲基噻唑基四唑法检测SCC9细胞在IL-23作用下对顺铂的抗凋亡能力改变。结果 舌鳞状细胞癌组织中IL-23表达强度与淋巴结转移、神经侵犯及治疗复发有相关性（P<0.05）; IL-23可增强癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和耐药相关蛋白ABCG2、P-gp的表达,并且与Wnt通路活化程度密切相关;IL-23能够显著加强SCC9细胞对顺铂的抵抗性（P<0.01）。结论 IL-23通过上调舌鳞状细胞癌细胞的Wnt通路增强其抗凋亡及耐药能力。