老龄鼠实验性牙周炎的免疫特点

目的： 通过口腔涂抹牙周致病菌的方法建立小鼠牙周炎模型,比较低龄小鼠与老龄小鼠牙周炎发病免疫状态差异,分析Th17/Treg细胞相关因子在不同年龄牙周炎小鼠中的表达情况。方法：采用实体显微镜评价牙周骨吸收的程度,H-E染色法观察牙周组织病变的炎细胞浸润情况,TRAP染色法观察牙周骨组织表面破骨细胞浸润情况,实时定量PCR检测牙龈组织中Th17/Treg细胞相关因子TGF-β1、IL-10、IL-17A、RANKL mRNA的表达水平。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：实验4周后,牙周炎组与正常对照组相比,釉-牙骨质界至牙槽嵴顶的距离显著增加（P<0.01）,老龄组小鼠釉-牙骨质界至牙槽嵴顶的距离比低龄组小鼠显著增加（P<0.01）;牙周组织中大量炎细胞浸润,牙周袋加深;牙周组织中 TGF-β1、IL-10 mRNA的表达水平显著降低（P<0.01）,IL-17A、RANKL mRNA表达水平显著增高（P<0.01）。结论：老龄小鼠牙周炎中炎症介质的表达存在异常状态,比低龄小鼠牙周组织病损状态加剧,提示牙周炎的炎症状态可能不仅与其分泌的免疫抑制性细胞因子表达降低有关,更与其增龄性相关。     

睾酮水平对牙周炎小鼠模型炎症性骨吸收的影响及机制探讨

目的：探讨睾酮水平对牙周炎小鼠模型炎症性骨吸收的影响及机制。方法：48只SD小鼠随机分为未结扎组、假手术组、去势组、去势+睾酮组4组,每组各12只,分别进行空白处理、去势模型和牙周炎模型构建。于结扎术后6周采集小鼠内眦静脉血,测定血清睾酮水平。处死小鼠后,取左侧上颌骨组织,进行苏木精-伊红染色和亚甲蓝染色,比较各组小鼠牙槽骨丧失量（alveolar bone loss,ABL）和牙槽骨吸收面积。利用实时荧光定量PCR测定牙龈组织中炎性细胞因子mRNA的表达,同时对血清睾酮水平与ABL、牙槽骨吸收面积及细胞因子进行相关性分析。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：假手术组、去势组和去势+睾酮组小鼠血清睾酮水平显著低于未结扎组（P<0.05）;去势+睾酮组小鼠血清睾酮水平显著高于假手术组和去势组（P<0.05）;去势组小鼠血清睾酮水平显著低于假手术组（P<0.05）;去势+睾酮组小鼠ABL显著大于未结扎组、假手术组和去势组（P<0.05）,去势组小鼠ABL显著小于假手术组（P<0.05）;去势+睾酮组小鼠牙槽骨吸收面积显著大于未结扎组、假手术组和去势组（P<0.05）,去势组小鼠牙槽骨吸收面积显著小于假手术组（P<0.05）;假手术组、去势组和去势+睾酮组小鼠牙龈组织中白介素1β（IL-1β）mRNA、白介素6（IL-6）mRNA及肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA水平显著高于未结扎组,白介素10（IL-10）mRNA水平显著低于未结扎组（P<0.05）;假手术组和去势组小鼠牙龈组织中IL-1β mRNA水平显著低于去势+睾酮组,去势组显著低于假手术组（P<0.05）;血清睾酮水平与ABL、牙槽骨吸收面积、IL-1β呈正相关（P<0.05）。结论：牙周炎小鼠睾酮水平降低,睾酮长期耗竭状态可减少牙槽骨炎症性骨吸收,可能通过降低IL-1β水平而实现。合理降低睾酮水平,有可能成为减少牙周炎患者牙槽骨吸收的治疗新思路。     

程序性死亡受体1及其配体在大鼠牙周炎发展中的时序性表达及意义

目的 研究程序性死亡受体1（programmed death-1,PD-1）及其配体（programmed death ligand 1,PD-L1）在大鼠牙周炎发展中的时序性表达及意义。方法 SD大鼠随机分为对照组和模型组,按照测定时间不同随机分为4个亚组,分别为A组（造模1周）、B组（造模2周）、C组（造模3周）和D组（造模4周）,每个亚组各8只大鼠。对各模型组大鼠采用“丝线结扎+接种牙龈卟啉单胞菌脂多糖”的方法建立大鼠上颌实验性牙周炎模型,对各组大鼠牙周进行组织病理检查和骨吸收面积测定,采用RT-PCR法对各组大鼠牙周组织中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin-1, IL-1β）、白细胞介素6（interleukin 6, IL-6）及转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGF-β）mRNA进行测定,采用Western免疫印迹法对各组大鼠牙周组织PD-1和PD-L1蛋白表达水平进行测定。采用SPSS 22.0 软件包对数据进行统计学分析。结果 建模期间,模型组大鼠第一磨牙釉-牙骨质界到牙槽嵴顶(amelocemental junction-alveolar crest, ACJ-AC)距离和根分叉区骨吸收面积逐渐增加（P<0.05）,与相应时间点对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。建模期间,模型组大鼠牙周组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平持续升高（P<0.05）,TGF-β mRNA表达水平持续降低（P<0.05）,并且与相应时间点对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。建模期间,模型组大鼠牙周组织中PD-1和PD-L1蛋白表达水平持续升高（P<0.05）,与相应时间点对照组相比,差异显著（P<0.01）。疾病发展过程中,大鼠牙周组织中PD-1和PD-L1蛋白表达水平与牙周组织炎症介质TNF-α和IL-6 mRNA表达水平持续正相关（P<0.05）。结论 PD-1作为免疫抑制分子与其受体PD-L1可促进牙周炎症进展,其作用可能通过调节TNF-α和IL-6的表达来实现。调节PD-1和PD-L1的表达,可作为治疗牙周炎症相关性疾病的新靶点。     

不同正畸治疗措施对错畸形患者龈沟液趋化因子CX3CL1、RANKL/OPG水平的影响

目的:探讨不同正畸治疗措施对错畸形患者龈沟液趋化因子CX3CL1、核因子κB受体活化因子配体/骨保护素（RANKL/OPG）水平的影响。方法:随机将96例拟采取正畸治疗的错畸形患者分为4组,所有患者均采用方丝弓矫治器治疗,分别给予0、50、150、250 g的远中正畸力。观察4组患者治疗1、2、3、4周后龈沟液中CX3CL1、RANKL/OPG水平。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:4组患者治疗1~3周后,龈沟液中CX3CL1、RANKL、RANKL/OPG水平持续上升,治疗4周后出现下降（P<0.05）;治疗1~3周后,龈沟液中OPG处于较低水平,治疗4周后出现上升（P<0.05）。龈沟液中CX3CL1、RANKL、OPG、RANKL/OPG水平在A、B、C、D组逐渐增高（P<0.05）,各组间相比,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:龈沟液中CX3CL1、RANKL/OPG水平与正畸力度和治疗时间关系密切,其动态水平变化可作为评估正畸治疗牙槽骨改建的重要指标。     

牙周炎不同阶段Th17/Treg细胞平衡变化初探

目的 建立实验性大鼠牙周炎模型,观察外周血及牙周组织Th17/Treg细胞平衡在牙周炎不同阶段的变化以及牙槽骨高度变化,为探寻用于研究牙周炎正畸牙齿移动的动物模型提供参考。方法 32只SD雄性大鼠随机分为3个实验组(牙周炎A组、牙周炎B组和牙周炎C组,每组8只)和1个对照组(8只)。实验组采用牙颈部丝线结扎并局部注射LPS的方法建立实验性牙周炎模型后,牙周炎A组处死,采用流式细胞仪检测外周血Th17细胞、Treg细胞比例变化。免疫组化检测牙周组织ROR-γt、Foxp3表达。实时定量PCR检测牙龈组织ROR-γt mRNA、Foxp3 mRNA的表达。牙周炎B组和C组去除局部刺激并行牙周洁治,分别于术后第7、14天进行牙周检查,并行上述流式细胞等检测。结果 牙周炎A、B及C组外周血Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg细胞比例及牙龈组织ROR-γt mRNA、Foxp3 mRNA的表达均较对照组明显升高( P <0.05)。牙周炎B组和C组Th17细胞、Th17/Treg细胞比例及牙龈组织ROR-γt mRNA的表达较牙周炎A组明显降低( P <0.05),但Treg细胞及Foxp3 mRNA表达较牙周炎A组明显升高( P <0.05)。牙周炎B组和C组相比,Th17细胞、Treg细胞及Th17/Treg细胞比例差异无统计学意义( P >0.05)。牙周炎A组、B组、C组牙槽嵴顶距釉牙骨质界距离均较对照组明显增加( P <0.05),但三组间差异无统计学意义( P >0.05)。结论 Th17、Treg细胞及Th17/Treg细胞平衡参与不同阶段牙周炎的免疫调控。局部炎症因素去除后,大鼠牙周炎病变稳定,可以尝试作为研究牙周炎正畸牙齿移动的动物模型。     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠牙槽骨RANKL/OPG mRNA影响的研究

目的通过研究胰岛素治疗对糖尿病大鼠牙周组织病理改变及牙槽骨中NF-κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA水平比值情况的影响,探讨糖尿病影响牙周病时牙槽骨吸收的机理。方法将12只大鼠采用静脉注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病模型,并随机分为治疗组和对照组。治疗组给予胰岛素皮下注射,对照组注射等量生理盐水。分别于实验开始时、造模成功后和8周后处死时测量大鼠体重和血糖。右下磨牙区牙周组织脱钙后HE染色观察组织病变状况;应用RT-PCR检测左下磨牙区牙槽骨RANKL和OPG mRNA表达情况,并比较两组大鼠RANKL/OPG比值差异。结果胰岛素治疗组较糖尿病组牙周组织炎症反应减轻,牙槽骨吸收减弱;血糖值(P<0.05)及RANKL/OPGmRNA比值(P<0.01)降低。结论胰岛素治疗可能增加牙周组织修复和再生能力,降低糖尿病大鼠的牙槽骨RANKL/OPGmRNA比值。提示血糖水平增高可能是影响糖尿病大鼠的牙槽骨吸收危险因素之一。     

复方黄芩片对人牙周膜细胞及牙周炎牙槽骨OPG/RANKL表达的影响

目的:探讨复方黄芩片对人牙周膜细胞表面以及对实验性牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。方法:采用酶消化组织块法培养hPDLCs,通过ELISA法测定复方黄芩片对LPS诱导下hPDLCs表面OPG/RANKL表达的影响;LPS局部注射法建立大鼠牙周炎模型,免疫组化法测定复方黄芩片对牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。结果:0.2 mg/L复方黄芩片溶液对10 mg/L LPS诱导下的hPDLCs表面OPG表达无明显影响,而hPDLCs表面RANKL的表达显著降低(P<0.05),且实验组 hPDLCs表面OPG/RANKL的比值较空白对照组显著降低(P<0.05);复方黄芩片治疗3周后各组大鼠OPG/RANKL免疫组化染色阳性细胞计数结果显示牙周炎组大鼠牙周组织中RANKL的表达水平明显高于其他各组,治疗组OPG表达水平明显高于其他各组。结论:复方黄芩片可以上调牙周膜细胞表面OPG/RANKL的比值;按黄芩苷2.85 g/kg·d^-1的剂量给予牙周炎大鼠复方黄芩片灌胃治疗,复方黄芩片可以抑制牙周炎牙槽骨中RANKL的表达,促进OPG的表达。提示复方黄芩片有望用于牙周炎的临床治疗。     

正畸力诱导Th17/Treg平衡与破骨细胞及其相关调节因子的相关性

目的 初步探讨正畸牙齿移动中正畸力诱导Th17/Treg平衡调节牙齿移动的可能机制。方法 20只SD大鼠随机分为空白对照组（C组，4只）与正畸牙齿移动（CM）组(包括CM3-移动3天、CM7-移动7天、CM14-移动14天、CM21-移动21天，4只/组）。使用镍钛拉簧以50g力近中移动双侧上颌第一磨牙，建立正畸加力模型。流式细胞仪检测各时间节点外周血Th17细胞、Treg细胞比例，免疫组化染色检测各时间节点牙周组织中RANK、RANKL、OPG的表达，TRAP染色及破骨细胞计数。使用SPSS 24.0软件行统计分析。结果 Th17/Treg比值先增加再减少，第7天达到峰值；RANKL/OPG比值先增加后减少，峰值在正畸第7天至第14天；破骨细胞数量先增加后减少,第14天达到峰值。Th17细胞、Th17/Treg比值与RANK、RANKL含量、RANKL/OPG比值、破骨细胞数量正相关，与OPG含量负相关。Treg细胞与RANKL含量正相关。结论 Th17/Treg平衡参于调节正畸牙齿移动。正畸力诱导Th17/Treg平衡偏移可能通过调节RANKL/OPG平衡从而调节破骨细胞引起正畸牙...     

IL-12和Th亚群细胞在牙周病免疫病理及免疫调节中的作用

目的：探讨白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）在牙周病免疫病理及免疫调节中的作用。方法：选取2016年1月—2019年1月收治的98例慢性牙周炎患者,按照牙周炎严重程度分为轻度组（30例）、中度组（35例）与重度组（33例）,选取同期进行牙周检查的健康者30例作为对照组,观察各组间临床牙周指标[探诊深度（probing depth,PD）、附着丧失（attachment loss,AL）、菌斑指数（plague index,PLI）、出血指数（bleed index,BI）]、外周血中Th细胞表达（Th1、Th2、Th17）、龈沟液及血清中IL-12水平。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：各组间PD、PLI、BI等指标相比差异有统计学意义（P<0.05）;轻、中、重度3组PD、PLI、BI显著高于对照组（P<0.05）;轻、中、重度3组AL指标相比差异显著（P<0.05）;中、重度组PD、AL、PLI、BI显著高于轻度组（P<0.05）,且重度组PD、AL、PLI、BI显著高于中度组（P<0.05）;轻、中、重度3组Th1、Th2、Th17显著高于对照组（P<0.05）;中、重度组Th1、Th2、Th17显著高于轻度组（P<0.05）,且重度组Th1、Th2、Th17显著高于中度组（P<0.05）;轻、中、重度龈沟液及血清中IL-12水平显著高于对照组（P<0.05）;中、重度组龈沟液及血清中IL-12水平显著高于轻度组（P<0.05）,且重度组龈沟液及血清中IL-12水平显著高于中度组（P<0.05）;龈沟液及血清中IL-12与PD、AL、PLI、BI、Th1、Th2及Th17等指标呈正相关（P<0.05）。H-E染色中、轻度组淋巴细胞较少,中度组淋巴细胞数目明显增加,重度组淋巴细胞表现为密集状态,同时在细胞间质中出血明显;IL-12蛋白阳性染色结果均在牙龈组织淋巴细胞质中表达,可见明显棕褐色,轻、中、重度3组IL-12蛋白阳性染色在牙龈组织中数量显著高于对照组,且着色随着轻、中、重度炎症变化而加重。结论：IL-12参与牙周病的免疫调节机制,可能是牙周炎发生的关键促炎细胞因子。     

爱维治对放疗所致急性口腔黏膜炎的疗效观察

目的:探讨爱维治对放疗患者急性口腔黏膜炎的临床效果及对炎性因子水平的影响。方法:选取青海省第五人民医院肿瘤科2015年7月—2017年9月收治的113例鼻咽癌放疗所致急性口腔黏膜炎患者,采用随机数字表法分为实验组（57例）、对照组（56例）,实验组采用爱维治治疗。对照组采用康复新治疗,对比2组患者治疗前、后疼痛程度（VAS评分）,口腔黏膜炎分级,血清C反应蛋白（c-reactiveprotein,CRP）,白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）,转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的变化。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:治疗前,2组患者的VAS评分差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后1周、2周,2组患者的VAS评分较治疗前均显著降低（P<0.05）,实验组患者的VAS评分显著低于对照组（P<0.05）;治疗后2周,实验组患者的口腔黏膜炎分级显著低于对照组（P<0.05）;治疗前,2组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后2周,2组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平较治疗前均显著降低（P<0.05）,实验组患者血清CRP、IL-6、TGF-β1、TNF-α水平显著低于对照组（P<0.05）。结论:爱维治对放疗患者急性口腔黏膜炎临床效果确切,能显著缓解患者的疼痛感、降低血清炎性因子水平。     

sclerostin在2型糖尿病伴牙周炎大鼠牙槽骨骨重建过程中的表达及意义

目的： 观察2型糖尿病（T2DM）伴牙周炎大鼠牙槽骨骨重建过程中骨硬化蛋白（sclerostin）的表达。方法： 将54只SD大鼠随机分为健康组、牙周炎组、T2DM伴牙周炎组,每组各18只。牙周炎组建立牙周炎大鼠模型,T2DM伴牙周炎组先建立T2DM模型,再建立牙周炎模型。腹腔注射STZ后1、5、10 d,检测糖代谢指标。结扎后8周,检测牙周指标。建模成功后1、3、6个月,免疫组织化学染色检测牙槽骨组织中sclerostin的表达。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 与未建模大鼠相比,T2DM建模大鼠腹腔注射STZ后1、5、10 d空腹血糖（FBG）,腹腔注射STZ后10 d空腹胰岛素（FINS）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均显著升高（P<0.05）。与未建模大鼠相比,牙周炎建模大鼠牙龈出血指数（SBI）、菌斑指数（PLI）、探针深度（PD）均显著增加（P<0.05）。与健康组相比,牙周炎组、T2DM伴牙周炎组建模成功后1、3、6个月牙槽骨组织中sclerostin表达显著增加（P<0.05）,且T2DM伴牙周炎组显著高于牙周炎组（P<0.05）。与建模成功后1个月相比,牙周炎组、T2DM伴牙周炎组建模成功后3、6个月牙槽骨组织中sclerostin表达显著增加（P<0.05）。与建模成功后3个月相比,牙周炎组、T2DM伴牙周炎组建模成功后6个月牙槽骨组织中sclerostin表达显著减少（P<0.05）。结论： sclerostin在牙周炎中表达增加,且合并T2DM进一步上调sclerostin的表达,但在骨重建过程中逐渐下调。     

淫羊藿苷口服给药对骨质疏松牙周炎小鼠牙槽骨吸收的影响

目的:研究口服淫羊藿苷（ICA）对骨质疏松小鼠牙周炎引起的牙槽骨吸收的抑制作用。方法:3月龄、雌性、C57BL/6J小鼠随机分为3组,即正常组（SHAM组）、卵巢切除+口腔涂布牙龈卟啉单胞菌（Pg）+淫羊藿苷组（OVX+Pg+ICA）、卵巢切除+Pg口腔涂布组（OVX+Pg）。小鼠适应性喂养1周,第2周进行双侧卵巢切除术,诱导小鼠骨质疏松形成。从第4周开始,对小鼠牙周涂布Pg,1次/d,连续1周。第12周收集左侧下颌骨进行固定切片及染色,分析各组之间牙槽骨吸收高度的差异。收集右侧下颌骨进行亚甲蓝染色,分析各组间牙槽骨吸收面积的差异;收集双侧上颌骨牙周组织蛋白,分析成骨相关蛋白的表达差异。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:小鼠股骨及牙周组织切片染色显示,成功建立了小鼠骨质疏松牙周炎模型。对牙槽骨吸收距离和面积的测量分析显示,相比于OVX+Pg组,口服淫羊藿苷可显著减少釉-牙骨质界-牙槽嵴顶（CEJ-ABC）的距离及颊舌侧牙槽骨吸收面积（P<0.05）;Western免疫印迹显示,相比于OVX+Pg组,OVX+Pg+ICA组中Runx2、OSX、OCN及OPN蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。结论:口服淫羊藿苷在预防小鼠骨质疏松发生的同时,可有效减少牙周炎引起的牙槽骨吸收。     

雷洛昔芬对骨质疏松性颌骨骨折大鼠骨折愈合及OPG/RANKL/RANK系统的影响

目的 分析雷洛昔芬对骨质疏松性颌骨骨折大鼠骨折愈合及骨保护蛋白（OPG）/核因子κB的受体活化因子配体（RANKL）/核因子κB的受体活化因子（RANK）系统的影响。方法 采用SPF级SD大鼠建立骨质疏松性颌骨骨折模型。建模成功后,以雷洛昔芬12 mg/kg灌胃干预4周。X线摄片检查骨折愈合情况,双能X线骨密度测量仪测量骨痂区骨密度（BMD）,H-E染色检查骨痂区骨组织形态,Western 免疫印迹检测OPG、RANKL、RANK蛋白表达情况。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果 雷洛昔芬组术后2周、4周骨折线恢复较模型组优,H-E染色显示骨痂区骨组织骨小梁、骨基质样团块较模型组多,术后4周与空白对照组相当。雷洛昔芬组术后2、4周骨痂区BMD及OPG蛋白相对表达量显著高于模型组,RANKL、RANK蛋白相对表达量显著低于模型组（P<0.05）,术后4周与空白对照组相当（P>0.05）。结论 雷洛昔芬能调节OPG/RANKL/RANK系统,促进骨质疏松性颌骨骨折大鼠的骨折愈合。     

Differential patterns of receptor activator of nuclear factor kappa B ligand/osteoprotegerin expression in human periapical granulomas: possible association with progressive or stable nature of the lesions

Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) are expressed in apical periodontitis, suggesting a role for these molecules during lesion development. However, the profiles of RANKL/OPG expression in periapical lesions remain unknown. In this study we investigated the patterns of RANKL and OPG mRNA expression by real-time polymerase chain reaction in human periapical granulomas (N = 44) and compared them with sites presenting characteristic bone resorbing activity: healthy (n = 14) and orthodontically stretched and compressed periodontal ligament (n = 26), healthy gingiva (n = 24), chronic gingivitis (n = 32), and chronic periodontitis (n = 34) samples. Both RANKL and OPG mRNA expression was higher in periapical granulomas when compared with healthy periodontal ligament. Distinct patterns of RANKL and OPG expression ratio were found in the granulomas and in different physiologic and pathologic conditions, with characteristic bone resorption activity potentially being indicative of the stable or progressive nature of the lesions. Lesions with radiographic image smaller than 5 mm showed higher RANKL/OPG expression than images greater than 5 mm. Periapical granulomas presented heterogeneous patterns of RANKL and OPG expression, ranging from samples with RANKL/OPG ratio similar to that seen in sites with minimal or absent bone resorption to samples with RANKL/OPG expression pattern comparable with active bone resorption sites.