人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

神经嵴细胞的特性和培养

在胚胎的发育中，神经嵴细胞是一组特殊的细胞群，可以分化为神经元、神经胶质细胞及多种非神经细胞，是机体内最具多能性的结构之一。在口腔颌面部的发育中，大部分组织如牙乳头、牙囊、牙周膜、骨组织、肌肉中所包含的细胞几乎无一例外地均来源于神经嵴细胞。因此，神经嵴细胞，尤其是     

细胞外基质与造牙本质细胞分化

内釉上诱导牙乳头细胞分化为造牙本质细胞，基底膜起介导作用；在无内釉上皮或基底膜存在的条件下，牙本质基质仍可诱导造牙本质细胞的分化。近年研究表明某些胞外基质成分在造牙本质细胞分化过程中起关键性作用。     

肿瘤exosome诱导特异性T杀伤细胞的研究

目的检测癌细胞来源的exosome在体外刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力.方法分离纯化舌鳞癌Tca8113细胞,培养上清液中的exosome,制备癌细胞的冻融抗原(FTA),并把两者负载到从血液分离和培养的树突状细胞(DC)上,测定其诱导的CTL对Tca8113的杀伤活性,以SPCA-1人肺腺癌细胞系和95-D人巨细胞癌为对照组.结果体外FTA和exosome冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对细胞系Tca8113具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时12 h平均分别为45.19%+4.57%和43.60%+5.66%(P＜0.01);exosome冲击致敏的DC诱导的CTL对SPCA-1人肺腺癌也有明显的杀伤作用(P＜0.05),但FTA冲击致敏的DC诱导的CTL却无此功能.结论肿瘤细胞培养上清液中分离出的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔癌的免疫治疗开拓了新的途径.exosome特异的CTL也可杀死其他肿瘤细胞,说明肿瘤来源的exosome是一种可引起肿瘤消退的共同抗原.     

人牙髓细胞在体外传代培养过程中的生物学行为变化

目的 探讨人牙髓细胞在体外传代过程中的生物学行为变化,为其在口腔材料生物相容性及牙髓损伤修复等研究中的应用提供依据.方法 选取第4、8、10和15代人牙髓细胞,从细胞形态及增殖能力、碱性磷酸酶活性、老化相关β-半乳糖苷酶的表达及p53基因的表达对牙髓细胞进行评价.结果 人牙髓细胞培养至第15代时,胞质增大、胞体扁平,增殖缓慢,第7天时A值仅为0.124±0.017,显著低于第4、8代(A值分别为0.391±0.030、0.317±0.049)(F=126.465,P =0.000);第15代细胞的碱性磷酸酶活性[(21.96±4.03) U/g蛋白]显著低于第4、8、10代细胞[分别为(85.67 ±4.64)、(84.22 ±2.99)、(29.64±3.53) U/g蛋白](P=0.000),并出现了大量β-半乳糖苷酶染色阳性细胞,p53基因表达显著上升,其相对表达量为(2.3±0.1),与第4代(设为1.0)比较差异有统计学意义(t=18.622,P=0.000).结论 人牙髓细胞在传代培养过程中细胞体积增大、代谢酶指标下降、细胞老化相关酶及p53基因表达升高.     

Periostin抗体的制备和Periostin组织表达特异性的研究

目的:制备抗Periostin抗体,并了解Periostin的组织表达特性。方法:以重组、纯化的小鼠Periostin为抗原,混入Freund完全佐剂充分乳化后,免疫新西兰大白兔;用双向免疫扩散试验检测抗体效价,将获得的多克隆抗血清初步纯化后,用Western blot和免疫组化检测小鼠Periostin的组织表达特异性。结果:Western blot显示Periostin在小鼠颅盖骨及牙周组织总蛋白中有特异性表达,而在肝、肾和脑组织总蛋白中没有表达。免疫组化检测,下颌骨表面骨膜和牙周膜组织中的Periostin染色呈强阳性,而在牙骨质、牙本质、牙槽骨和牙髓组织中则为阴性,并且它不是粘附于细胞表面,而是分布在由成骨细胞和牙周膜细胞分泌于其周围的细胞外基质中,牙槽骨中的骨细胞也不产生Periostin。结论:Periostin这种在有骨形成能力组织中的高表达,而在成熟骨组织中无表达的特点提示了其可能与矿化组织的早期形成有关。     

血清对神经嵴细胞向神经胶质细胞分化诱导的体外研究

目的：探讨神经嵴细胞在含血清培养基中向神经细胞的自发分化过程，方法：取妊娠第8．5天的BALB／c胎鼠的神经嵴细胞，分别在无血清和含血清培养基中培养，免疫组化和透射电镜鉴定和观察神经嵴细胞的分化情况.结果：在无血清的培养基中，NSE染色结果阳性，透射电镜下未见神经内分泌颗粒，神经嵴细胞保持其原有的特性，在有血清的培养基中，神经嵴细胞自发分化，胶质纤维酸性蛋白（GFAP），神经特性烯醇化酶（NSE）和S－100染色阳性，透射电镜下可见大量的神经内分泌颗粒。结论：血清可使神经嵴细胞自发的向神经胶质细胞分化。     

细胞凝聚区的形态在C57BL／6N系小鼠下颌骨发育中的作用意义

观察胚胎早期间充质细胞增殖、分化的改变，明确下颌骨在胚胎早期由细胞凝聚到定向分化成成骨细胞而发育形成的过程。方法：用免疫组化及ＴＵＮＥＬ染色等方法，检测了胚龄１３－１９ｄ及出生１ｄ的小鼠下颌骨下未分化间充质细胞增殖、细胞程序性死亡及表型转化的生物学改变。     

小鼠重组OSF-2对人牙周膜细胞附着和伸展的影响

目的：观察小鼠重组牙周膜细胞特异性因子2（OSF-2）对牙周膜细胞附着和伸展的作用。方法：采用固相结合分析实验及四唑盐比色等细胞生物学技术，观察牙周膜细胞在OSF-2基质上的附着能力和伸展率。结果：牙周膜细胞在OSF-2基质上附着和伸展良好，当浓度在20ug／ml以上时，作用尤其显著（P〈0．01），与在FN基质的生长结果相似。结论：小鼠重组OSF-2可有效促进牙周膜细胞的附着和伸展。     

十二烷基硫酸钠对人牙周膜细胞活性影响的实验研究

目的:观察不同浓度十二烷基硫酸钠(sod ium dodecyl su lfate,SDS)对人牙周膜细胞(perio-dontal ligam ent cell,PDLC)活性的影响,探讨牙膏中存在的去垢成分SDS是否对人体健康存在着潜在危害。方法:采用细胞培养技术及四唑盐(MTT)比色方法,检测加入SDS后与对照组比较细胞活性的变化。结果:PDLC在加入100μg/mL SDS后,细胞活性与正常组比较已明显降低,在SDS浓度≥200μg/mL时PDLC已全部死亡。SDS浓度≤25μg/mL对PDLC生长无明显影响。结论:SDS在低浓度时即对PDLC有明显的细胞毒作用。     

小牛皮胶原蛋白对成纤维细胞的细胞相容性研究

采用体外细胞培养检测自制小牛皮胶原的细胞毒性，将材料与人成纤维细胞共同培养，观察其对细胞形态和增殖率的影响，来评价小牛皮胶原蛋白的细胞毒性，结果显示，小牛皮胶原蛋白对细胞形态无影响。对细胞增殖有一定促进作用。细胞相容性好，符合国际标准化组织（ISO）规定标准。     

树突状细胞在牙髓或牙周组织中的作用机制

牙髓或牙周的急、慢性炎症是由宿主对病原体发生的免疫反应造成的，明确机体抵御病原微生物的免疫机制对弄清牙髓或牙周病的发病机制十分重要。已经知道在牙髓或牙周系统中存在各种炎性和免疫细胞。在这些细胞中，树突状细胞作为专职的抗原呈递细胞，在诱导免疫反应中扮演着不可缺少的角色。树突状细胞捕捉和搬运来自外界的信息给获得性免疫系统的细胞，所以树突状细胞架起了先天性免疫和获得性免疫之间的桥梁。最近，很多研究集中在树突状细胞怎样调控牙髓或牙周病的免疫应答，从而为疾病的治愈和发展可行的免疫治疗提供依据。     

RhoE在舌鳞状细胞癌中的表达及其对细胞迁移和侵袭的影响

初步探讨RhoE在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达水平，及其对TSCC细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。     

树状细胞疫苗抑制肿瘤的实验观察

目的观察经肿瘤抗原致敏的树状细胞（DC）疫苗对荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）协同诱导人外周血单核细胞成为DC。Tea8113舌癌细胞可溶性抗原体外致敏DC，将同源人T淋巴细胞与之共同培养诱导出抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs），共同接种至荷瘤裸鼠体内行免疫治疗。结果人外周血单核细胞在细胞因子协同诱导下可获得功能正常的DC，用致敏DC＋CTLs免疫治疗的荷瘤裸鼠与其他实验组相比，明显抑制肿瘤生长，肿瘤倍增时间显著提高（P〈0．05）。结论从人外周血来源的单核细胞在多种细胞因子作用下可诱导为功能正常的DC、冻融抗原体外致敏的DC，经其激活的肿瘤特异性CTLs对荷舌鳞癌裸鼠有明显的免疫治疗作用，可望成为口腔颌面部舌癌免疫治疗的新途径。     

骨骼肌卫星细胞体外培养及分化为成骨样细胞的实验研究

目的:评估骨骼肌卫星细胞(skeletalmusclesatellitecells,SMSCs)体外分化为成骨样细胞的能力,探讨骨骼肌卫星细胞作为骨组织工程种子细胞的可能性。方法:取新生Wistar大鼠骨骼肌,采用酶消化法分离出SMSCs,体外原代及传代培养,经腺病毒介导的人骨形成蛋白2(Ad-BMP2)基因转染后,行成骨细胞标志物活性的检测及细胞化学染色,并进行细胞体外矿化能力的测定。结果:转染后细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性增强(P<0.01)且组织化学染色呈阳性,骨钙素及I型胶原的免疫细胞化学染色呈阳性,21d后见钙结节形成。结论:体外培养的骨骼肌卫星细胞可以向成骨方向转化,有望成为骨组织工程的种子细胞。     

非内皮细胞在血管瘤生长周期中的作用

血管瘤是婴儿和青少年常见的肿瘤,通常情况下血管瘤的生长可分为增殖期、消退期以及消退完成期。目前多种因素都被证实可以导致血管瘤血管内皮细胞的异常增殖,本文从非内皮细胞的角度,总结了近年的研究成果,探讨血管瘤发生发展的机制。     

几种胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达及意义

目的检测部分胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达。方法通过酶解组织块法分离牙周膜细胞,利用多向分化实验和流式细胞术分析表面标志对获得细胞进行鉴定。利用免疫荧光法和RT-PCR法检测牙周膜细胞中Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81这些胚胎干细胞标志的表达。结果牙周膜细胞为成纤维细胞样,可分化为成骨细胞和成软骨细胞,可均一表达间充质细胞标志CD44、CD90、CD105,异质性表达间充质标志CD146、Stro-1。细胞免疫荧光实验显示牙周膜细胞表达部分胚胎干细胞标志:Oct4、Nanog、SSEA-4、TRA-1-60阳性,Sox2、TRA-1-81阴性。半定量RTPCR结果显示P3和P8代牙周膜细胞表达Oct4和Nanog,表达量差异不大,Sox2则为阴性。结论牙周膜细胞除了表达常用间充质干细胞标志外,也可表达部分胚胎干细胞标志,这对牙周膜细胞的鉴定和进一步分选纯化有一定应用价值。