ANXA1对口腔鳞癌TPF化疗敏感性的影响及作用机制探讨

目的 探讨ANXA1在口腔鳞癌TPF化疗中的作用机制。方法 构建ANXA1过表达及低表达细胞系,通过细胞增殖、细胞毒性实验、实时荧光定量PCR和Western免疫印迹方法,分析ANXA1在TPF化疗中的作用,并探讨ANXA1通过上皮-间质转化（EMT）通路在TPF化疗中的作用机制。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果 过表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率降低,细胞周期减慢,对TPF诱导化药物敏感性降低,口腔鳞癌细胞出现EMT;低表达口腔鳞癌细胞系ANXA1后,细胞生长速率增快,细胞周期加快,对TPF化疗药物敏感性增加,口腔鳞癌细胞出现逆EMT。结论 在口腔鳞癌TPF化疗中,ANXA1过表达导致细胞出现EMT,对化疗敏感性降低。     

膜联蛋白A1的表达对口腔鳞癌TPF化疗效果的影响

目的探讨在口腔鳞癌中,膜联蛋白A1的表达水平对TPF（T=多西他赛,P=顺铂,F=5氟尿嘧啶）化疗药物杀伤癌细胞疗效的影响。方法构建Annexin A1 siRNA的反转录病毒载体,对口腔鳞癌细胞系进行干预,通过细胞增殖实验、细胞毒性实验和免疫印迹方法,分析Annexin A1表达干预对TPF化疗药物作用的影响,以及PI3K/AKT相关信号通路和细胞凋亡的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行双因素方差分析。结果下调Annexin A1的表达,口腔鳞癌细胞的增殖能力增强。通过PI3K/AKT途径抑制P27kip1的表达,口腔鳞癌细胞对TPF化疗药物的敏感性提高,促进了癌细胞的凋亡。结论Annexin A1低表达能增强口腔鳞癌细胞的增殖能力,提高对TPF的敏感性,促进癌细胞凋亡。     

ToPoⅡα在口腔鳞癌PTP方案化疗中的指导意义

目的:探讨口腔鳞癌中ToPoⅡα的表达水平与临床PTP方案(顺铂+替尼泊甙+平阳霉素/博莱霉素)化疗效果之间的相关性,初步评价其表达水平是否可以指导临床PTP的应用。方法:采用回顾性研究的方法检测了46例原发口腔鳞癌标本化疗前ToPoⅡα与p53表达情况,评价其与临床化疗效果的相关性;对比分析其中18例标本化疗前后ToPoⅡα的表达变化。同时,采用Western印迹法分析8种口腔鳞癌细胞系内ToPoⅡα表达水平与化疗药物替尼泊甙的半数抑制浓度之间的关系。结果:46例口腔鳞癌患者中ToPoⅡα均有不同程度的表达,其表达水平与化疗疗效呈显著正相关;体外实验也证实8种细胞系中ToPoⅡα的表达水平与口腔鳞癌细胞系对替尼泊甙的敏感性显著相关。与化疗前相比,化疗后口腔鳞癌标本中ToPoⅡα的表达明显下降,提示有继发性耐药产生的可能性。p53的表达水平与化疗疗效无显著相关性,也与ToPoⅡα的表达水平没有相关性。结论:实验结果表明,ToPoⅡα的表达水平能够指导临床应用PTP化疗方案治疗口腔鳞癌,而p53的表达水平对临床化疗效果提示作用不明显。     

血管内皮生长因子-C基因转染对Tca8113细胞转移能力影响的研究

目的　研究血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对鳞癌细胞淋巴道转移能力的影响 ,以探讨其在口腔黏膜鳞癌淋巴道转移机制中的作用。方法　用本课题组前期建立的 VEGF-C高表达舌癌细胞株 ,以裸小鼠皮下接种构建动物肿瘤模型 ,观察VEGF-C高表达对移植瘤的生长和颈淋巴转移的影响。结果　VEGF-C高表达移植瘤实验组的颈淋巴结转移率高于对照 组 ,但实验组与对照组的移植瘤原发灶生长速度没有明显差异。结论　VEGF-C对舌鳞癌的淋巴道转移有相对特异的作用 ,可作为口腔癌颈淋巴转移预防和治疗的新靶位     

顺铂和氟脲嘧啶联合应用抗口腔鳞癌的实验研究

目的　研究顺铂 (cisplatin ,CDDP)和 5 氟脲嘧啶 (5 fluorouracil,5 FU)联合化疗对口腔鳞癌 (Tca8113细胞株 )的体内外抗瘤作用。方法　应用CDDP和 5 FU单独或联合治疗口腔鳞癌细胞 (Tca8113细胞系 )及其裸鼠移植瘤 ,采用MTT法检测其体外杀伤作用 ;观察移植瘤的生长情况及组织病理学改变 ;高效液相色谱法 (HPLC)检测血液及移植瘤内 5 FU的浓度。结果　CDDP和 5 FU均对口腔鳞癌细胞具有强的体外杀伤作用 ,其IC50 分别为 :0 5 9μmol/L和 2 33μmol/L。与对照组比较 ,移植瘤经CDDP和 5 FU单独或联合治疗后生长均明显受到抑制 (P <0 0 0 1) ,其抑瘤率分别为 :5 7 0 % (5 FU)、84 4 % (CDDP)和 97 2 % (5 FU +CDDP) ,CDDP和 5 FU存在协同的抑瘤作用(P <0 0 0 1) ;组织病理学显示各治疗组移植瘤内出现囊性变和灶性坏死 ;肿瘤组织和血液中可检测到高浓度的 5 FU。结论　CDDP和 5 FU联合化疗可能是口腔鳞癌有效的化疗方案     

口腔鳞癌细胞体外侵袭与血管内皮生长因子和明胶酶-A表达的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)和明胶酶 -A(matrixmetalloproteinase -2 ,MMP -2 )的表达与口腔鳞癌转移的相关性及VEGF和MMP -2的关系。方法 :应用Boyden小室体外侵袭实验比较口腔鳞癌细胞系TSCCa和转移癌细胞系GNM的体外侵袭力 ;采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测两细胞系中VEGF和MMP -2mRNA表达情况 ,同时用酶联免疫吸附实验 (ELISA)的方法定量测定口腔鳞癌TSCCa细胞系和颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF和MMP -2的活性。结果 :Boyden小室体外侵袭实验表明转移癌细胞系GNM的体外侵袭力较强 ,其穿膜细胞相对百分率为 (40± 3.6 ) %,而口腔鳞癌细胞系TSCCa体外侵袭力相对较弱 ,其穿膜细胞相对百分率为 (16± 3.2 ) %,两者差异具有显著性 (P <0 .0 5 ) ;RT -PCR结果显示GNM细胞VEGF和MMP-2mRNA表达水平均较TSCCa细胞高 (P <0 .0 5 ) ;ELISA法显示颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF和MMP-2的活性显著高于口腔鳞癌细胞系TSCCa(P <0 .0 5 )。结论 :口腔鳞癌细胞体外侵袭力与VEGF和MMP -2的表达正相关 ;在口腔鳞癌侵袭转移中 ,VEGF与MMP -2可能具有某种内在联系 ,有可能作为反映口腔鳞癌侵袭转移的生物学指标。     

口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A对自然杀伤细胞与细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性影响的实验研究

目的探讨口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A（MICA）对自然杀伤细胞（NK）与细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性的影响。方法通过绘制细胞生长曲线、检测细胞周期、进行平板集落形成率及裸鼠皮下成瘤等方法对稳定转染并过表达MICA的口腔鳞癌细胞株进行生物学特性鉴定。采用乳酸脱氢酶释放法及流式细胞术分析口腔鳞癌细胞过表达MICA对NK与CTL细胞杀伤活性及自然杀伤细胞2族成员D（NKG2D）受体表达的影响。结果口腔鳞癌细胞转染MICA基因后主要生物学特性未发生改变,但能显著增强NK与CTL细胞杀伤活性并上调其表面NKG2D的表达,与未转染及转染空白载体的细胞比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论MICA可作为口腔鳞癌免疫基因治疗的潜在靶标,值得进一步研究。     

人口腔鳞癌手术标本组织块裸鼠移植瘤模型的建立

目的：口腔鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，建立与人类口腔癌相似的动物模型，对进一步探讨口腔癌的发生、发展、治疗和预后具有重要意义。方法：选取新鲜的口腔鳞癌手术标本，制备成1mm^3组织块，植入BALB／cnu—nu裸鼠皮下．观察其成瘤情况．并对移植瘤的生长特性、组织形态和对化疗药物的反应进行检测。结果：收集了27例临床标本，成功建立了15个裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤率为56％。所建立的口腔鳞癌移植瘤模型能够在裸鼠体内连续成瘤。与细胞系建立的移植瘤模型相比，其组织学特征与人口腔鳞癌标本极为相似。其中，20％（2／10）的移植瘤模型对传统化疗药物顺铂敏感。结论：成功建立了人口腔鳞癌手术标本组织块移植瘤模型。该模型为进一步研究口腔鳞癌提供了基础。     

miR-99a对口腔鳞癌增殖能力的影响

目的:探讨miR-99a在口腔鳞状细胞中的表达及对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响。方法:检索GEO 数据库中与口腔鳞癌相关的miRNA芯片进行二次分析。检测63 例口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞株内miR-99a的表达,分析其与临床病理指标及患者预后之间的关系。上调miR-99a的表达,检测其对口腔鳞癌细胞生长和克隆形成的影响,并通过Targetscan等软件预测其靶基因。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:GSE103931芯片显示,miR-99a在口腔鳞癌中下调最显著,且miR-99a也在口腔鳞癌细胞株内显著低表达。 miR-99a的表达与患者T分期、病理分级和预后密切相关。上调miR-99a的表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖;而抑制miR-99a的表达,则促进口腔鳞癌细胞增殖。通过Targetscan等软件发现,mTOR是miR-99a的靶基因,且与miR-99a的表达呈负相关。结论:miR-99a在口腔鳞癌组织和细胞系中低表达。上调 miR-99a能抑制口腔鳞癌细胞株SCC25和SCC9的增殖能力, 其机制是通过调控mTOR的表达而实现。     

中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。     

Stathmin表达与局部晚期口腔鳞癌患者TPF诱导化疗远期疗效的相关性分析

目的 验证微管解聚蛋白（Stathmin）能否预测口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）患者从多西紫杉醇、顺铂、5氟尿嘧啶（TPF）诱导化疗中远期获益。方法 收集2008年3月—2010年12月入组TPF诱导化疗临床试验的256例OSCC患者的远期随访结果。收集患者肿瘤活检标本,进行Stathmin免疫组织化学染色并评分。根据Stathmin表达评分进行亚组预后分析。采用SPSS 13.0软件包将Stathmin和其他基线特征进行单因素、多因素和Cox回归模型预后分析。结果 Stathmin的表达可预测OSCC患者对TPF诱导化疗的反应,Stathmin低表达的OSCC患者从TPF诱导化疗中获益,而高Stathmin表达的OSCC患者不能获益于TPF诱导化疗。Stathmin的表达是独立的预测因子。结论 Stathmin是独立的预测OSCC诱导化疗疗效的生物标志物,基于Stathmin筛选指导OSCC患者接受TPF诱导化疗的后续临床研究具有重要意义。     

Nrf2对口腔鳞癌患者TPF诱导化疗效果的影响

目的: 检测核转录相关因子2（Nrf2）在口腔鳞癌组织中的表达,探讨其对TPF诱导化疗效果的影响。方法: 选择65例接受TPF诱导化疗的口腔鳞癌患者,采用免疫组织化学方法检测患者活检肿瘤标本中Nrf2的表达,分析Nrf2表达与患者基线资料及预后的关系。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 生存分析发现,口腔鳞癌患者Nrf2表达与TPF诱导化疗预后显著相关,Nrf2低表达者较高表达者具有更好的总生存率、无疾病生存率、局部无复发生存率、无远处转移生存率。单因素及多因素Cox风险模型分析发现,Nrf2是口腔鳞癌患者TPF化疗的独立预后风险因素。结论: Nrf2表达与口鳞癌患者TPF诱导化疗疗效相关,Nrf2低表达患者预后更好,Nrf2可作为预测口腔鳞癌患者TPF诱导化疗效果的生物标志物。     

SREBP2对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响及其调控机制

目的： 探讨胆固醇调节元件结合蛋白2（SREBP2）在口腔鳞癌（OSCC）中的调控机制,通过敲低和过表达SREBP2,分析其对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法： 采用实时定量反转录PCR（qRT-PCR）检测SREBP2在OSCC中的表达量。构建siRNA和过表达质粒并转染 CAL27细胞,通过细胞计数（CCK-8）实验和EdU染色检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞凋亡水平,划痕愈合和Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,通过蛋白免疫印迹法检测SREBP2调控MVA通路相关蛋白表达的改变。数据使用Graphpad 5.0软件绘图,组间比较采用t检验。结果： SREBP2在50对口腔鳞癌组织和OSCC细胞系中表达较正常对照组显著降低。敲低及过表达实验表明,SREBP2表达的变化影响OSCC细胞的增殖、迁移、侵袭,并通过MVA信号通路影响OSCC的发展。结论： SREBP2在OSCC中抑制癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡。     

RNAi-mediated down-regulation of α-actinin-4 decreases invasion potential in oral squamous cell carcinoma

α-actinin-4, originally identified as an actin-binding protein associated with cell motility, invasion, and metastasis of cancer cells, appears to be overexpressed in various human epithelial carcinomas, including colorectal, breast, esophageal, ovarian, and non-small cell lung carcinomas. The authors evaluated whether α-actinin-4 might be appropriate as a molecular target for cancer gene therapy. In 64 primary oral squamous cell carcinomas (OSCCs) and 10 normal oral mucosal specimens, and in seven human OSCC cell lines, α-actinin-4 expression was evaluated immunologically and correlations with clinicopathologic factors were examined. Overexpression of α-actinin-4 was detected in 38 of 64 oral squamous cell carcinomas (70%); significantly more frequently than in normal oral mucosa. The expression of α-actinin-4 was significantly associated with invasion potential defined by the Matrigel invasion assay. Cancer cell lines with higher α-actinin-4 expression had greater invasive potential. An RNAi-mediated decrease in α-actinin-4 expression reduced the invasion potential. These results indicated that the overexpression of α-actinin-4 was associated with an aggressive phenotype of OSCC. The study indicated that α-actinin-4 could be a potential molecular target for gene therapy by RNAi targeting for OSCC.     

Expression of Copper Efflux Transporter (ATP7B) in the Transport of Cisplatin in Cell Lines Derived From Invasive Oral Squamous Cell Carcinoma

Intrinsic or acquired resistance to cisplatin (CDDP) is a problem for its use in cancer chemotherapy. This resistance has been reported to correlate with expression of the human copper transporter 1 and two copper export pumps, ATP7A and ATP7B. In the current study, we investigated the correlation between the expression of these transporters and sensitivity to CDDP using four cell lines derived from each of high invasive oral squamous cell carcinoma (OSCC) and low invasive OSCC. We found that the amount of CDDP accumulated in high invasive OSCC cell lines (Yamamoto-Kohama criteria : grade 4C and 4D) with strong intrinsic tolerance was lower than in low invasive OSCC cell lines (grade 3) with weak intrinsic tolerance. Additionally, overexpression of ATP7B mRNA in cell lines derived from high invasive OSCC conferred low sensitivity to CDDP. Furthermore, the accumulation and sensitivity of CDDP was higher in HOC313 cells transfected with the ATP7B siRNA than in cells transfected with the nonsense siRNA. These results suggest that the overexpression of ATP7B results in the export of and, therefore, resistance to CDDP. Furthermore, ATP7B may be a key determinant of the intrinsic resistance to CDDP.     

Characterization of 3 oral squamous cell carcinoma cell lines with different invasion and/or metastatic potentials.

PURPOSE: Proteolytic enzymes may confer specific types of invasion and metastasis in patients with oral squamous cell carcinoma (OSCC). The purpose of this study was to determine if OSCC that invades adjacent bone has different proteolytic enzyme expression profiles than OSCC that metastasizes to lymph nodes or distant organs. Three OSCC cell lines, BHY, HSC-3, and HN, with known behavior regarding bone invasion and lymph node and distant metastatic profiles, were evaluated. The characteristics of a control, human normal nasal epithelial cell line (HNEC), and BHY, HSC-3 and HN were evaluated with regard to their expression of the matrix metalloproteinases and cathepsins. MATERIALS AND METHODS: Expressions of proteolytic enzymes including matrix metalloproteinase, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-9, extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN), cathepsin B, and cathepsin L were compared using immunocytochemistry and flow cytometry in 3 OSCC cell lines and HNEC. The cell morphologies of these 4 cell lines were compared using transmission electron microscopy (TEM). RESULTS: All OSCC cell lines showed higher expression of all the proteolytic proteins when compared with HNEC, except the HSC-3 cell line showed no difference in the expression of MMP-9. There was no detectable difference at the expression level of MMP-1, MMP-2, MMP-3, cathepsin B, and cathepsin L in any of the OSCC cell lines. However, MMP-9 and EMMPRIN levels were higher in the BHY cell line. According to electron microscopy, the cells of the HSC-3 cell line were the smallest and least differentiated among the 3 OSCC cell lines. The BHY cell line was the most highly differentiated showing interdigitation and numerous cell junctions. CONCLUSIONS: MMPs play an important role in the invasion and metastasis of oral cancer. MMP-9 might play a more important role than MMP-2 during invasion. Increased expression of MMP-1, MMP-9, and EMMPRIN proteins might be involved in invasion of OSCC to adjacent bone, as they are necessary for the collagen matrix degradation. Increased expression of MMP-3, cathepsin B and L in OSCC might be associated with both invasion and a high incidence of metastasis.