莪术醇通过激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径诱导人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探讨莪术醇对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度莪术醇处理Tca-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3和p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK以及线粒体和细胞质中Cyt C等蛋白表达水平.采用p38 MAPK抑制剂SB203580联合莪术醇处理Tca-8113细胞,流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK表达水平.结果:莪术醇可呈时间和剂量依赖性抑制Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,并下调Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,上调Bax、Cleaved-caspase-3、p-p38MAPK及细胞质中Cyt C蛋白表达水平,而对p38 MAPK蛋白表达水平无影响.然而,SB203580干预可抑制莪术醇对Tca-8113细胞凋亡、线粒体膜电位改变、p38 MAPK信号通路激活的诱导作用.结论:莪术醇可促进Tca-8113细胞凋亡,其机制可能与激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径有关.     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MCP-1的影响

目的: 探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖对小鼠成骨细胞表达单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)mRNA和蛋白的影响,以及是否有p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路和核因子κB（Nuclear Factor-κB, NF-κB）信号通路的参与。方法: 以不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于细胞不同时间（0~48 h）后,采用实时反转录PCR和酶联免疫吸附测定检测MCP-1mRNA和蛋白的表达。采用p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别预处理细胞1 h,检测其对P.endodontalis脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后MCP-1mRNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果: 不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖（0~50 mg/L）刺激MC3T3-E1细胞后,MCP-1的mRNA表达和蛋白分泌呈剂量依赖性;观察时间内（0~48 h）,20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于MC3T3-E1细胞后,MCP-1 mRNA的表达和蛋白分泌呈时间依赖性;10 mol/L的SB203580和BAY11-7082分别预处理细胞1 h,可以降低P.endodontalis脂多糖诱导MCP-1 mRNA的表达,且SB203580的抑制作用强于BAY11-7082。结论: P.endodontalis脂多糖可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导成骨细胞表达MCP-1mRNA和蛋白。     

小檗碱对牙髓干细胞MAPK/ERK信号通路及成牙本质向分化的影响研究

目的　探讨小檗碱对牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）成牙本质向分化及p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法　采用酶消化法提取DPSCs,将培养鉴定的DPSCs传代培养至第3 ~ 5代,用于以下实验。实验分为对照组（正常培养DPSCs）、矿化液组（加入矿化液）、小檗碱组（加入10 μmol/L小檗碱）、矿化液+MAPK抑制剂组（加入矿化液+10 μmol/L MAPK抑制剂SB203580）、小檗碱+MAPK抑制剂组（10 μmol/L小檗碱+10 μmol/L MAPK抑制剂SB203580）。CCK-8法检测各组培养1、7、10、14 d时的细胞增殖情况。各组处理14 d,茜素红染色观察细胞矿化情况;实时荧光定量PCR检测细胞碱性磷酸酶（ALP）、牙本质涎磷蛋白（DSPP）、骨桥蛋白（OPN） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、ERK、磷酸化ERK（p-ERK）蛋白表达水平。结果 5组细胞处理1、7、10、14 d,对照组、矿化液组、小檗碱组光密度（OD）值差异无统计学意义（P > 0.05）,说明3组的细胞增殖能力相似;分别与对照组、矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组和小檗碱+MAPK抑制剂组的OD值升高（均P < 0.05）,说明其细胞增殖能力增强。与对照组相比,矿化液组和小檗碱组的DPSCs矿化结节形成能力增强,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值升高（P < 0.05）。分别与矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组、小檗碱+MAPK抑制剂组的DPSCs矿化结节形成能力减弱,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值降低（P < 0.05）。结论 小檗碱可促进DPSCs成牙本质向分化,可能是通过激活p38 MAPK/ERK信号通路实现的。     

肝细胞生长因子对人舌鳞癌 Tca8113细胞 VEGF-C 表达的影响及作用机制的初步研究

目的：研究 HGF 对人舌鳞癌 Tca8113细胞中 VEGF-C 表达的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养 Tca8113细胞,应用 ELISA 方法测定不同浓度 HGF 作用下以及分别用 LY294002、U0126、SP600125、SB203580信号通路抑制剂阻断PI3K/Akt、P44/P22MAPK、JNK、P38MAPK 信号通路后 VEGF-C 的表达水平。结果：随着培养液中 HGF 浓度的增加,Tca8113细胞中 VEGF-C 的表达水平出现先增高后降低的趋势,当 HGF 浓度为40 ng/ml 时,VEGF-C 表达水平最高。PI3K/Akt 信号通路抑制剂（LY294002）和 P42/44MAPK 信号通路抑制剂（U0126）显著抑制了 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达（P ＜0．01）;而 JNK 信号通路抑制剂（SP600125）和 P38MAPK 信号通路抑制剂（SB203580）对 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达影响甚微（P ＞0．05）。结论：在人舌鳞癌 Tca8113细胞中,随着 HGF 浓度的增加,VEGF-C 的表达先增高后降低。PI3K/Akt 和 P44/P22MAPK 信号通路在口腔鳞状细胞癌淋巴转移中可能发挥作用。     

P38MAPK在滑膜细胞表达炎性因子中的作用

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)在脂多糖(LPS)诱导大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)合成炎性因子IL-1β、MMP3中的作用.方法:采用酶消化法分离获得大鼠SF,体外培养并鉴定,分别作为空白对照组、与不同浓度LPS共培养、以SB203580预处理后与LPS共培养,24h后免疫化学染色、RT-PCR分别检测通路活化水平和炎性因子蛋白及mRNA表达量.结果:LPS可刺激SF使IL-1β、MMP3蛋白和mRNA表达上调,表达量随LPS浓度增高而增加(与对照组相比P＜0.05);且与LPS共培养后SF中p38 MAPK通路活化,阻断p38 MAPK后,炎性因子表达显著下调(P＜0.05).结论:LPS诱导SF高表达IL-1β、MMP3,p38 MAPK在其中发挥重要作用.     

P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对高糖状态下成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的:探讨P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对高糖状态下成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响。方法:将培养的MC3T3-E1细胞按培养基内含葡萄糖浓度分为5.5 mmol/L正常对照组,25.5 mmol/L高糖组和25.5 mmol/L+SB203580组,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节(AR-S)、成骨相关基因Runx2和OCN mRNA的表达。结果:高糖培养后,MC3T3-E1细胞增殖明显受到抑制(P<0.05)。高糖组的ALP活性光密度值在各个时间点均低于对照组(P<0.05),OCN mRNA,Runx2 mRNA表达随着葡萄糖浓度升高而明显下降,给予SB203580处理后,细胞增殖仍呈下降趋势,OCN、Runx2 mRNA、ALP活性较未加入抑制剂组升高。结论:SB203580可抑制P38MAPK在高糖状态对MC3T3-E1的作用。     

岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:观察岩黄连总碱对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度的岩黄连总碱分别处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后的细胞增殖抑制情况,Hochest33258染色及DNA ladder检测细胞凋亡,并用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)原位检测细胞凋亡及细胞凋亡率。结果:岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),且呈现出一定的时间和浓度依赖性;Hochest33258检测发现岩黄连总碱作用48 h后可见凋亡细胞;DNA ladder检测可见凋亡特有的180～200 bp整数倍DNA条带;TUNEL结果显示岩黄连总碱处理组细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。结论:岩黄连总碱能抑制Tca8113细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;同时能诱导Tca8113细胞凋亡,且诱导凋亡的作用也呈时间和浓度依赖性。     

丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及p27Kip1蛋白表达的影响

目的 通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖影响及p27Kip1蛋白表达改变,探讨丁酸钠调控人口腔癌细胞增殖的分子机制.方法 人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞经不同浓度丁酸钠[0 mmol/L(空白对照组),2、4、6、8 mmol/L(4个实验组)]作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白的表达.结果 丁酸钠能够呈时间剂量依赖性抑制Tca8113细胞的增殖,丁酸钠处理后的Tca8113细胞出现了凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0～G1期,丁酸钠2 mmol/L组G0～G1期达(63.2±2.4)%,4 mmol/L组G0～G1期达(77.2±3.8)%,空白对照组G0～G1期达(48.1±2.4)%,P＜0.05;p27Kip1蛋白表达水平明显上调.结论 丁酸钠能够抑制人口腔癌细胞的增殖,该作用可能与p27KiP1蛋白表达上调及G0～G1期细胞周期阻滞有关.     

牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达炎症因子的信号通路研究

目的检测细胞外信号调节激酶（ERK）1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素（LPS）诱导成骨细胞白细胞介素（IL）-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响,探讨根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制。方法成骨细胞MG-63经PD98059和SB203580预处理1 h后,加入牙髓卟啉单胞菌LPS作用6 h,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平。结果PD98059预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA的水平下降。SB203580预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA水平均下降。结论牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63细胞表达IL-1β mRNA依赖ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,表达IL-6 mRNA依赖p38MAPK信号转导通路。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对口腔鳞癌细胞Tca-8113凋亡的研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对Tca-8113细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法：倒置显微镜、荧光显微镜观察Apicidin对Tca-8113细胞的影响;CCK-8法观察24h、48h、72h不同浓度Apicidin对Tca-8113细胞增殖的影响;DNA ladder检测细胞凋亡;流式细胞术检测凋亡率。结果：不同浓度的Apicidin对Tca-8113细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Apicidin能诱导Tca-8113细胞的凋亡且随着时间和剂量的延长越明显。结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin能抑制人口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

双氢青蒿素对人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药的影响

目的 检测双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药的作用,并探讨其与ROS-MAPK通路的关系。方法 利用MTT法检测不同浓度DHA对KB、KBV200细胞增殖的影响,顺铂（cisplatin,DDP）、长春新碱（vincristine,VCR）、阿霉素（adriamycin,ADM）、依托泊苷（etoposide,VP-16）对KB、KBV200细胞的增殖抑制率及加入DHA后的变化;分别联合ROS诱导剂3-AT、ERK抑制剂UO126、JNK抑制剂SP600125、p38MAPK抑制剂SB203580,观察干预前、后的逆转差异。利用流式细胞术检测各组细胞内ROS的荧光强度,采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果 与KB细胞相比,KBV200细胞对VCR、VP-16、ADM药物的耐药性显著提高（P<0.05）,10、20、30 μg/mL DHA作用后,KBV200细胞对VCR、VP-16、ADM的IC₅₀显著降低,呈浓度依赖性（P<0.05）。与KB组细胞相比,KBV200组细胞ROS荧光强度显著降低（P<0.05）;DHA处理后,ROS荧光强度显著增高,VCR、VP-16、ADM IC50 显著降低（P<0.05）,与ROS促进剂效果一致。与KB细胞相比,KBV200细胞p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK水平显著升高（P<0.05）;DHA处理后,p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK水平显著降低,VCR、VP-16、ADM IC₅₀ 显著增高（P<0.05）;加入ERK抑制剂UO126、JNK抑制剂SP600125、p38MAPK抑制剂SB203580后,KBV200细胞VCR、VP-16、ADM IC₅₀ 进一步降低。结论 双氢青蒿素可能通过促进ROS生成、抑制MAPK通路而逆转KBV2001细胞的多药耐药性。     

p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中作用的研究

目的：研究p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中的作用。方法：采用Western blotting观察LPS对牙龈成纤维细胞内p38 MAPK活性的影响；蛋白激酶活性实验SB203580地p38 MAPK活性的抑制作用；Northern blotting观察SB203580对LPS诱导uPA表达的影响。结果：LPS能够迅速地激活牙龈成纤维细胞内p38 MAPK的活性；SB203580能够有效地抑制牙龈成纤维细胞内的p38 MAPK的活性；经SB203580处理后，LPS对uPA的诱导作用受到显著的抑制。结论：LPS通过p38 MAPK信号转导途径诱导牙龈成纤维细胞表达uPA。     

核因子-κB传导通路与舌癌细胞平阳霉素化疗敏感性的关系

的 探讨核因子-κB（NF-κB）/p65信号传导通路与Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性的关系。方法 以脂质体为载体,转染2 mg/L的p65反义寡核苷酸于Tca8113细胞 后,8 mg/L的平阳霉素处理细胞,3 h、6 h后免疫组化、Western blot法检测细胞核内p65形态和含量变化,48 h后MTT法检测细胞抑制率。结果 平阳霉素能激活细胞内的NF-κB/p65信号传导通路,而p65反义寡核苷酸转染能明显抑制该信号通路,在6 h时胞核内p65含量显著减少（P<0.05）,48 h时细胞抑制率明显提高（P<0.05）。结论 抑制NF-κB/p65信号传导通路能够提高Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性。     

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制.方法:用2～10 μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞.MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入...     

IGF-1对体外培养髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：：研究IGF-1对IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：组织块培养法分离培养人髁突软骨细胞,通过细胞形态观察和免疫细胞化学染色进行鉴定。将培养的细胞分为：对照组、IL-1β组(10μg/L)、 IL-1β+IGF-1组(0、1、10、50、100μg/L), MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3以及p38 MAPK/NF-κB蛋白表达变化。结果：人髁突软骨细胞生长状态良好,甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,II型胶原呈阳性表达。与对照组比较,IL-1β组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值明显降低,早凋与晚凋细胞百分数、Caspase-3、p38 MAPK/NF-κB蛋白表达均明显增加;与IL-1β组比较,1~100μg/L IGF-1预处理组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值逐渐上升(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、p38 MAPK /NF-κB蛋白表达则逐渐下调(P<0.05),均呈现一定的浓度依赖性。结论：IGF-1可抑制IL-1β诱导的髁突软骨细胞凋亡并减轻p38 MAPK/NF-κB的活化。     

二维及三维培养对人舌鳞状细胞癌TCA8113细胞株生物学特性的影响

目的: 比较二维及三维方式培养的人舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)TCA8113细胞株对细胞的增殖、组织形态及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性的影响,为体外舌鳞癌的研究提供培养方法。方法: 倒置显微镜和苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察二维及三维培养的人舌鳞癌TCA8113细胞的形态;噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察两种培养体系中细胞的增殖;酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两种培养体系中LDH活性的改变。结果: 倒置显微镜和HE染色观察到三维培养体系中TCA8113细胞成团生长;与二维培养体系比较,三维培养体系中细胞较长时间保持良好的增殖状态,LDH的活性较二维培养的细胞活性显著增高。结论: TCA8113细胞藻酸盐凝胶三维培养体系较二维培养体系能更好地体现细胞的生物学特性。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34mRNA的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)mRNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与.方法:以不同浓度P.e-LPS(0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 mRNA的表达.以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对Re-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 mRNA表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 mRNA的表达具有剂量依赖性.20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 mRNA的表达量最大;48 h时,IL-34 mRNA的表达量有所下降.10 mol/LBAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 mRNA的表达水平.50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 mRNA的表达.结论:Re-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 mRNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路.     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响

目的 研究醋酸棉酚（ GAA）对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响和对人类错配修复基因 1（hMLH1）甲基化水平的影响,初步探讨其抗肿瘤机理。方法 应用 MTT法检测 GAA对Tca8113细胞生长的影响;应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nMSP）检测 Tca8113细胞在 GAA作用 48、72 h后hMLH1基因甲基化状态的改变情况。结果 MTT检测显示,作用 24~72 h,GAA对Tca8113细胞生长具有抑制作用;nMSP检测显示,以终浓度 30、15 μmol•L-1的GAA作用于 Tca8113细胞 48、72 h后, hMLH1基因甲基化条带的平均光度值降低,与未经药物处理组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GAA能抑制舌鳞癌细胞的生长,并能降低 hMLH1基因的甲基化水平。 GAA去甲基化作用可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一。