生理和药理浓度下1，25（OH）2D3对软骨细胞增殖、成熟和钙化的影响研究

目的　体外观察生理和不同药理浓度的1,25（OH）2D3对原发性股骨头软骨细胞（femoral chondrocytes,FCs）和继发性髁突软骨细胞（condylar chondrocytes,CCs）增殖、成熟和钙化的影响。方法　通过分离培养1周龄雌性SD仔鼠的FCs和CCs,体外分为6组：（1）空白对照组（不做处理）;（2）溶剂组（0.01%酒精处理）;（3）～（6）分别为0.1、1、10、100 nmol/L 1,25（OH）2D3处理组。各组按相应处理因素处理24 h后通过CCK8检测对2种软骨细胞增殖能力的影响,并对增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、Ⅱ型胶原（collagenⅡ,COLⅡ）以及X型胶原（collagen X,COL X）进行 qRT-PCR和Western blot检测。结果　（1）CCK8检测结果显示,1,25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制2种软骨细胞的增殖,且CCs的抑制率较FCs明显;PCNA的qRT-PCR和Western blot检测结果与之基本一致。（2）相对于空白对照组,体外生理浓度（0.1 nmol/L）的1,25（OH）2D3对2种软骨细胞COLⅡ的表达影响差异无统计学意义（P＞0.05）,药理浓度（1、10、100 nmol/L）的1,25（OH）2D3可上调2种软骨细胞COLⅡ的表达,其中FCs最佳浓度在10 nmol/L,而CCs呈浓度依赖性上升。（3）相对于空白对照组,1,25（OH）2D3对2种软骨细胞COL X的mRNA和蛋白水平表达均无统计学意义（P＞0.05）。结论　体外1,25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制软骨细胞增殖,药理浓度的1,25（OH）2D3可促进软骨细胞成熟,且其对CCs的影响较FCs显著;而其对2种软骨细胞的钙化无影响。     

维生素D3刺激髁突软骨细胞内钙释放及机械压力对其影响的研究

目的　探讨维生素D3(1,25(OH)2D3)刺激体外培养的兔髁突软骨细胞内钙离子的释放通道及机械压力对其影响。方法　消化法培养新西兰白兔髁突软骨细胞,分别进行肝素(20 g/L)、普鲁卡因(1 g/L)钙通道阻断处理, 及用自行设计制作的可控液压细胞加载装置分别进行90 kPa 60 min和90 kPa 360 min的加压处理,经钙荧光指示剂 Fluo-3负载后,用激光扫描共聚焦显微镜测定10-8mol/L1,25(OH)2D3100μL刺激前后髁突软骨细胞内钙随时间变化情况,同时设有对照组。结果　1,25(OH)2D3刺激后对照组细胞内荧光强度随时间明显升高;普鲁卡因处理组变化与其相似,而肝素处理组在刺激前后胞内荧光强度无明显变化;90 kPa加压60 min处理组在接受1,25(OH)2D3刺激后胞内荧光强度也随时间明显升高,且其升高幅度显著高于对照组,而90 kPa加压360 min处理组在刺激后胞内荧光强度虽也有升高,但与对照组无显著差异,且在记录末期出现下降趋势。结论　1,25(OH)2D3能刺激髁突软骨细胞内三磷酸肌醇受体(IP3R)钙释放通道开放,使细胞内钙离子水平显著升高;一定的机械压力预调可改变该细胞内IP3通道对刺激的敏感性。     

1,25二羟维生素D3缺乏对小鼠继发性牙本质生成、矿化和龋损的影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]对小鼠继发性牙本质生成和矿化的作用。方法利用苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色和碱性磷酸酶（ALP）组织化学染色方法,比较分析6周龄野生型和1α 羟化酶基因敲除小鼠[1α（OH）ase-/-小鼠]下颌骨矿化的差异。结果与野生型小鼠相比,1α（OH）ase-/-小鼠下颌第一磨牙龋损明显增加,面继发性牙本质面积明显减少,Ⅰ型胶原及OCN在继发性牙本质的阳性比例明显减少,Biglycan在继发性牙本质的阳性比例明显增加,ALP明显减少。结论1,25（OH）2D3缺乏会导致小鼠继发性牙本质生成、矿化减少和龋损增加。     

1，25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin—D28K表达和矿化能力的影响

目的：研究1,25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K（CaB）表达和矿化能力的影响。方法：用10^-8mol/L1,25(OH)2D3矿化液处理长期培养的第28天细胞24h,用放射免疫和免疫组化方法,观察CaB表达和碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OC）的变化。同位素示踪方法观察1,25(OH)2D3对胞外基质^45Ca^2 的影响。结果：加入1,25(OH)2D3后ALP活性约为对照组的4倍;OC含量约为对照组的1.5倍。CaB在培养28d牙乳头细胞及其胞外基质中表达,而在培养14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。1,25(OH)2D3可加强CaB表达,并使胞外基质对^45Ca^2 摄取量增加1.5倍。结论：1,25（OH）2D3有促进人牙乳头细胞矿化作用,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成,增加基质对Ca^2 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca^2 聚集和直接贮存的作用。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对大鼠正畸牙移动速度的影响

目的 研究牙周局部注射3种浓度的1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠正畸牙移动速度的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠96只,随机分为对照组、A组、B组和C组,每组24只.在大鼠上颌左侧第一磨牙与上颌中切牙之间安放加力装置,每隔3 d注射药物10 μL.对照组注射生理盐水,A组注射10-10 mol/L的1,25-(OH)2D3,B组注射10-8 mol/L的1,25-(OH)2D3,C组注射10-6 mol/L的1,25-(OH)2D3,分别于加力后的第1、 3、 7和14天各组处死6只大鼠.制取标本后测量第一磨牙移动距离.结果 对照组、A组和C组大鼠在正畸牙移动过程中均存在明显的正畸牙移动减慢时期,B组大鼠观察到持续的牙移动而没有移动减慢时期.结论 在大鼠正畸牙移动过程中,应用一定浓度的1,25-(OH)2D3能促进正畸牙的移动. 10-8 mol/L的1,25-(OH)2D3能更有效地促进大鼠正畸牙的移动,避免正畸牙移动过程中缓慢时相的发生.     

1，25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究

目的：探讨1,25二羟维生素D3（1,25（OH）2D3）在小鼠下颌骨矿化中的作用机制。方法：利用组织学、免疫组织化学和实时定量RT—PCR比较分析了6周龄野生型和1α羟化酶基因敲除（1α（OH）ase）小鼠下颌骨矿化的差异。结果：与野生型小鼠相比,1α（OH）ase小鼠的类骨质的比例明显增加,骨钙素（osteocalcin,OCN）在下颌骨沉积面积和在成骨细胞表达水平均明显降低,碱性磷酸酶（ALP）在下颌骨成骨细胞的活性和表达水平明显降低,而Biglycan在下颌骨的沉积面积和在成骨细胞表达水平则明显增加。结论：1,25（OH）：D,通过调节OCN、ALP和Biglycan的基因表达水平和蛋白质沉积水平促进小鼠下颌骨的矿化。     

1,25-二羟维生素D3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3)对成牙本质细胞系MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:细胞培养,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法.结果:1,25-(OH)2D3明显抑制MDPC-23细胞增殖,而促进MDPC-23细胞内碱性磷酸酶活性,呈一定的剂量和时间依赖性.结论:1,25-(OH)2D3可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用.     

1,25-(OH) 2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。     

活性维生素D与颞下颌关节病的研究进展

颞下颌关节是双侧联动关节,是人体内最复杂、最精密的骨关节之一。目前国内外学者认为有很多因素会导致颞下颌骨关节病的发生,如遗传、精神因素、老龄化、骨密度降低、关节损伤、某些营养因素缺乏等。活性维生素D[1,25?（OH）2D3]是细胞外钙磷平衡的重要调节者,同时对骨骼肌系统也有广泛的生物学作用。活性维生素D缺乏对颞下颌关节病影响重大,主要表现在对关节髁突结构、软骨细胞、软骨下骨及关节内炎症因子等方面,本文主要就活性维生素D对颞下颌关节病的发生、发展的研究进展进行综述。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞分化因子的影响

目的探讨牙周局部注射不同浓度的1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞分化因子表达的影响,以及相关的作用机制。方法96只成年健康雄性Wistar大鼠随机等量分为对照组、A组、B组和C组。在大鼠上颌左侧第一磨牙与上颌两切牙之间安放加力装置,每隔3d注射药物10μL;对照组注射生理盐水,A组注射10-10mol/L的1,25-(OH)2D3,B组注射10-8mol/L的1,25-(OH)2D3,C组注射10-6mol/L的1,25-(OH)2D3;分别于加力后第1、3、7、14天处死各组中6只大鼠。制取标本后,HE染色观察正畸牙移动牙周膜压力侧破骨细胞的数目、形态以及活性变化,同时运用免疫组织化学染色,检测正畸牙压力侧破骨细胞分化因子(ODF)的表达。结果4组大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞的变化趋势一致,但是B组大鼠压力侧ODF表达在第7、14天显著提高。结论10-8mol/L的1,25-(OH)2D3能更有效地促进大鼠正畸牙的移动过程中ODF的表达,促进破骨细胞的活化。     

白介素-6与1,25(OH)2维生素D3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响.方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24h后换液.试验分为4组,A组不加任何诱导因子;B组加入IL-6(10 U/ml);C组加入1,25(OH)2D3(1 ×10-8mol/L);D组加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L).每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数.结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P＜0.05).结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果.     

1,25(OH)2VD3诱导培养兔骨髓细胞FOS蛋白产生的实验研究

目的观察1,25二羟维生素D3[1,25( OH)2VD3]对培养兔骨髓细胞产生立即早期基因c-fos的蛋白产物(FOS蛋白)的诱导作用 .方法在原代培养至第六代的兔骨髓细胞中加入含5×10-5M /L 1,25(OH)2VD3的培养液,继续培养3小时后,固定标本,进行FOS免疫组化反应.结果大部分细胞形态正常,胞核呈棕黄色,椭圆形,胞浆不着色,细胞轮廓清晰,表现为FOS免疫组织化学反应阳性.结论 1,25(OH) 2VD3能够诱导兔骨髓细胞表达FOS蛋白,提示它可能通过c-fos这条信号转导途径在骨组织改建过程中发挥作用.     

白介素-6与1,25(OH)_2维生素D_3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响。方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24 h后换液。试验分为4组,A组:不加任何诱导因子;B组:加入IL-6(10 U/ml);C组:加入1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L);D组:加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)。每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数。结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P<0.05)。结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果。     

骨化三醇对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙周膜细胞IL-8、IL-6表达的影响研究

目的    观察活性形式的维生素D——骨化三醇（1,25D）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）诱导的人牙周膜细胞（hPDLCs）白细胞介素（IL）-8、IL-6表达的影响。方法    取3例患者因正畸需要拔除的前磨牙牙周膜,组织块法原代培养hPDLCs,分别用0.1%无水乙醇（对照组）、10 μg/mL Pg-LPS（单纯Pg-LPS组）、10-10 mol/L 1,25D（低浓度1,25D组）、10-8 mol/L 1,25D（高浓度1,25D组）、10-10mol/L 1,25D+ 10 μg/mL Pg-LPS（低浓度1,25D联合Pg-LPS组）、10-8mol/L 1,25D+ 10 μg/mL Pg-LPS（高浓度1,25D联合Pg-LPS组）处理第5代细胞。24和48 h后收集培养基上清液,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测hPDLCs IL-8和IL-6的表达水平。结果    （1）10 μg/mL Pg-LPS处理hPDLCs 48 h时,其IL-8表达水平最高,为对照组的38.86倍（P＜0.001）;处理hPDLCs 24 h时,其IL-6表达水平最高,为对照组的 6.19倍（P＜0.001）。（2）1,25D 以剂量和时间依赖方式抑制hPDLCs IL-8的内源性表达。10-8 mol/L 1,25D 处理hPDLCs 48 h时,其IL-8表达水平为对照组的49.94%（P＜0.001）。（3）1,25D 显著抑制Pg-LPS诱导的hPDLCs IL-8和IL-6的表达。处理48 h时,高浓度1,25D联合Pg-LPS组hPDLCs IL-8的表达水平为单纯Pg-LPS组的71.98%（P＜0.001）;处理24 h时,高浓度1,25D联合Pg-LPS组hPDLCs IL-6的表达水平为单纯Pg-LPS组的84.51%（P = 0.003）。结论    1,25D可以抑制hPDLCs IL-8的内源性表达,并抑制Pg-LPS诱导的hPDLCs IL-8和IL-6的表达,从而可能抑制牙周炎症反应。     

1,25（OH）2维生素D3矿化液对人牙髓干细胞成骨方向诱导作用的研究

目的研究维生素D3矿化液对人牙髓干细胞的成骨方向诱导是否有促进作用。方法从恒牙牙髓中分离培养成纤维样细胞并测试其间充质干细胞的特异性标记物Stro-1阳性率,用一定浓度的1,25（OH）2维生素D3、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的矿化液诱导牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、碱性磷酸酶染色、Vonkossa染色及骨钙素、Ⅰ型胶原基因表达观察和检测矿化液诱导后细胞形态变化及矿化基质分泌情况,以未诱导组为对照。结果维生素D3矿化液连续诱导21d后,诱导组的细胞碱性磷酸酶染色阳性、Ⅰ型胶原和骨钙素的基因表达阳性,并可见明显钙结节形成。结论维生素D3矿化液可以诱导人牙髓干细胞向成骨样细胞分化并促进其产生矿化基质。     

维生素D受体基因多态性与牙周炎易感性关系的研究进展

研究表明，牙周炎作为以菌斑微生物为始动因子的多因素慢性疾病，某些遗传因素可增加宿主对牙周疾病的易感性，甚至是某些早发性和（或）重度牙周炎的主要决定因素之一，它能影响和改变宿主对微生物的反应，并决定疾病的进展和严重程度。目前研究已发现多个基因序列的多态性与牙周炎易感性有关，维生素D受体（vitamin D recepfor，VDR）是其中之一。VDR通过介导维生素D的主要活性代谢产物1，25-二羟胆骨化醇（1，25-（OH）2D3），在调节机体钙磷平衡、骨代谢及组织生长分化等方面发挥重要作用。本文旨在论述VDR基因的生物学特征，及其多态性对牙周炎易感性和疾病进展的影响。     

人牙乳头细胞分化过程中胞内Ca^2＋浓度变化和1，25（OH）2D3对Ca^2＋影响

目的：探讨人牙乳头细胞不同分化阶段和1,25（OH）2D3作用下细胞内Ca^2 的变化。方法：体外培养人牙乳头细胞,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca^2 浓度的变化。结果：具有某些成牙本质细胞表型的细胞（21d)胞内Ca^2 浓度比无分化表型的细胞（14d)高约2倍;1,25（OH）2D3使21d组细胞胞内Ca^2 明显升高,而14d组则无明显变化。结论：人牙乳头细胞在分化过程中胞内Ca^2 浓度上调;1,25（OH）2D3能提高牙乳头细胞静息内Ca^2 水平以达新的Ca^2 稳态,促进牙乳头细胞分化。     

rhIL一1α与1，25一（OH）2D3联合作用对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响

目的：研究rhIL-1α与1,25-（OH）2D3联合作用对HPDLFs表达RANKL和OPG的影响,探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：10μg/L rhIL-1α与1×10-8 mol/L1,25-（OH）2D3联合作用于体外培养的HPDLFs,于48h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKL mRNA和OPG mRNA的表达,探讨RANKL/OPG比值的变化。结果：rhIL-1α和1,25-（OH）2D3都调节HPDLFs表达RANKL和OPG。rhIL-1α单独作用上调HPDLFs表达RANKL和OPG,增加RANKL/OPG比值（P〈0.05）;1,25-（OH）2D3单独作用则上调表达RANKL,下调表达OPG,增加RANKL/OPG比值（P〈0.05）。这2种调节因子联合作用对HPDLFs RANKL表达有协同作用,但对RANKL/OPG比值的影响无协同效应。结论：rhIL-1α和1,25-（OH）2D3都通过RANKL-OPG途径调节HPDLFs参与牙槽骨改建,2种调节因子联合作用对RANKL表达的影响明显优于单因素诱导效果,但对RANKL/OPG比值的影响并没有产生协同效应或累加效应。     

1,25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究

目的:探讨1,25二羟维生素D3(1,25(OH)ZD3)在小鼠下颌骨矿化中的作用机制.方法:利用组织学、免疫组织化学和实时定量RT-PCR比较分析了6周龄野生V和1a化酶基因敲除(1 a(OH)ase4-/-)小鼠下颌骨矿化的差异.结果:与野生型小鼠相比,1α(OH)ase-/-_小鼠的类骨质的比例明显增加,骨钙素(...