HOXC6同型蛋白2对根尖牙乳头干细胞成骨/成牙分化功能的影响

目的 探讨同源盒基因C6同型蛋白2对牙源性间充质细胞成骨/成牙分化的影响.方法 成骨诱导培养基诱导人根尖牙乳头干细胞体外成骨/成牙分化;逆转录病毒转染构建过表达HOXC6-ISO2稳定转染牙乳头干细胞进行HOXC6-ISO2获得性功能研究;碱性磷酸酶活性实验检测成骨/成牙早期分化指标-碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析检测干细胞体外矿化能力;实时荧光定量反转录PCR检测成骨/成牙分化相关基因-Sp7转录因子、Runt相关转录因子2和骨钙素及同源盒基因C6下游基因胰岛素结合蛋白5的表达.结果 结果显示过表达同源盒基因C6同型蛋白2明显抑制牙乳头干细胞的碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示过表达同源盒基因C6同型蛋白2明显抑制牙乳头干细胞体外矿化能力;实时荧光定量反转录PCR显示过表达同源盒基因C6同型蛋白明显抑制骨钙素的表达,并且抑制下游基因胰岛素结合蛋白5的表达.结论 同源盒基因C6同型蛋白2通过抑制下游基因胰岛素结合蛋白5抑制牙乳头干细胞体外成骨/成牙分化的功能.     

组蛋白去甲基化酶KDM6A促进骨髓间充质干细胞成骨分化研究

目的研究组蛋白去甲基化酶KDM6A对骨髓间充质干细胞成骨定向分化能力的影响。方法构建Flag-KDM6A慢病毒表达质粒。利用慢病毒转染构建稳定过表达KDM6A的骨髓间充质干细胞。碱性磷酸酶活性实验检测成骨分化早期指标-碱性磷酸酶活性。茜素红染色及钙离子定量分析检测干细胞体外矿化能力。实时：毫量RT-PCR检测成骨分化相关基因．骨桥蛋白和骨钙素的表达。结果过表达KDM6A促进骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性、骨髓间充质干细胞体外矿化能力以及骨桥蛋白和骨钙素的表达。结论组蛋白去甲基化酶KDM6A具有促进骨髓间充质干细胞成骨分化的潜能,可以作为一个候选的靶基因用于骨组织工程技术,促进骨组织再生。．     

CD24基因调控根尖牙乳头干细胞的成骨分化功能

目的 研究干细胞表面标记CD24基因对根尖牙乳头干细胞成骨分化能力的影响。方法 利用CD24 shRNA基因敲除CD24进行丧失性功能研究;实时定量RT-PCR检测CD24的基因敲除效果;通过ALP活性检测、茜素红染色及钙离子定量分析明确根尖牙乳头干细胞体外成骨分化能力的变化;实时荧光定量RT-PCR检测成骨分化相关基因-I型胶原蛋白1A、I型胶原蛋白1B、骨涎蛋白、骨桥蛋白和成骨相关转录因子RUNX2的表达分析研究根尖牙乳头干细胞基因表达改变。结果 实时定量RT-PCR结果显示CD24可以在根尖牙乳头干细胞有效的被敲除;碱性磷酸酶活性结果显示敲除CD24抑制根尖牙乳头干细胞碱性磷酸酶活性;茜素红染色及钙离子定量分析结果显示敲除CD24明显抑制根尖牙乳头干细胞体外矿化能力;实时定量RT-PCR结果显示敲除CD24明显抑制I型胶原蛋白A、型胶原蛋白B、骨涎蛋白、骨桥蛋白和RUNX2的表达。结论 基因沉默CD24可以通过抑制转录因子RUNX2及成骨分化基因的表达,从而抑制根尖牙乳头干细胞体外成骨分化功能。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

BCOR基因敲除促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

目的研究BCL6共抑制因子-BCOR对骨髓间充质干细胞成骨定向分化能力的影响。方法利用慢病毒载体的BCORshRNA基因敲除BCOR,进行丧失性功能研究。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨分化相关基因的表达,观察骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力。结果BCOR在牙源性间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的表达无明显差异。基因敲除BCOR促进了骨髓间充质干细胞ALP活性、体外矿化能力及成骨分化相关基因骨涎蛋白、骨钙素的表达。结论BCOR基因表达降低能促进骨髓间充质干细胞成骨分化,证实BCOR是骨髓间充质干细胞成骨分化的抑制基因。     

Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用

目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1 向成骨方向分化的影响.方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证.体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达.应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响.以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析.结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确.体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组.在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深.Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05).结论:Dlx2过表达上调AIP、OCN等成骨相关基因的表达.促进MC3T3-E1细胞的成骨分化.     

组蛋白甲基化促进AP2a基因表达及骨髓间充质干细胞成骨分化

目的研究转录因子AP2a的组蛋白甲基化状态对骨髓间充质干细胞成骨分化功能的影响。方法利用染色质免疫沉淀技术检测AP2a启动子甲基化状态。利用慢病毒载体的AP2ashRNA基因敲除AP2a进行丧失性功能研究。通过ALP活性、茜素红染色及钙离子定量分析研究骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力。结果与牙源性间充质干细胞相比,AP2a在骨髓间充质干细胞中表达明显升高,AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2明显增强。基因敲除AP2a能抑制骨髓间充质干细胞ALP活性及体外矿化能力。结论AP2a启动子区域H3K4me3和H3K36me2升高可以促进AP2a的表达和骨髓间充质干细胞成骨分化能力。     

Nell-1蛋白通过Wnt/β-catenin通路调控人上颌窦黏膜来源间充质干细胞成骨分化

目的:研究不同浓度Nell-1(Nel-like type 1 molecule)蛋白对人上颌窦黏膜来源间充质干细胞(maxillary sinus membrane-derived mesenchymal stem cells, MSMSCs)成骨分化的影响。方法:体外分离培养并鉴定人MSMSCs。使用Nell-1蛋白(10、100、1000 ng/mL)诱导MSMSCs,利用CCK-8法和细胞活死染色法检测细胞活性变化;碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力改变;实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨相关因子mRNA表达情况;免疫荧光染色和Western blot法检测成骨蛋白表达情况。结果:Nell-1蛋白对MSMSCs有一定的促增殖作用;碱性磷酸酶活性检测显示各实验组成骨效果优于对照组;qRT-PCR、免疫荧光染色和Western blot结果显示,100 ng/mL的Nell-1显著促进β-catenin、Runx-2、OCN等mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。结论:Nell-1蛋白可通过上调Wnt/β-catenin信号通路的表达提高MSMSCs体外成骨分化能...     

活化转录调控因子2(ATF-2)在下颌骨髁突软骨细胞中调控bcl-2机制的研究

目的:研究ATF-2通过bcl-2影响髁突软骨生长发育的机制.方法:应用体外培养原代小鼠髁突软骨细胞,原代细胞基因转染,蛋白印迹杂交等技术,阐明ATF-2调控bcl-2表达的机制.结果:外源性的ATF-2在髁突软骨细胞中,与bcl-2的调控子中CRE结合,增强bcl-2调控子的活性;当CRE位点的序列改变,ATF-2不能在髁突软骨细胞中对bcl-2调控子的活性产生影响.结论:ATF-2在软骨细胞中,通过影响有凋亡抑制作用的bcl-2的活性和表达,参与下颌骨髁突软骨的生长发育.     

纳米氧化铝-氧化锆全瓷材料微波烧结的实验研究

目的 利用微波烧结新技术烧结4组不同比例纳米Al2O3－ZrO2全瓷材料,比较烧结前后物质晶相、晶粒度及微观形貌变化。方法 将100％Al2O3,60％Al2O3和40％ZrO2,40％Al2O3和60％ZrO2,100％ZrO2 4组粉料分别加压制成素坯,每组5件,自制微波炉配合助热保温结构1 600 °C烧结试件,升温速度为5 min内升温至 1 600 °C,保温10 min, X射线衍射仪测定烧结前后试件物相组成和晶粒大小;扫描电镜观察试件断裂面特征。结果 微波烧结前后试件中Al2O3晶相无变化,ZrO2中 m-ZrO2转变为 t-ZrO2;烧结后平均晶粒度Al2O3 51.8 nm（烧结前为24.1nm）,ZrO2 29.7 nm （烧结前为25.3 nm）;扫描电镜观察烧结后的Al2O3－ZrO2晶粒排列致密细小,分布均匀,颗粒间无明显界限,相互融合。结论 微波烧结致密Al2O3－ZrO2全瓷材料,升温快,晶粒细,材料显微结构及均匀性有较大改善。     

2种纳米粉体对牙科ZrO2陶瓷掺杂增强效果的比较

目的观察不同纳米粉体填充到微米尺度的ZrO2造粒粉中对陶瓷ZrO2纳米复合材料性能的影响。方法利用超声波．共沉淀法制备纳米α-Al2O3粉体;利用反向沉淀法制备氧化钇稳定的纳米锆粉体;作为第二相,以不同的量（体积百分比,vol％）填充到基质微米ZrO2造粒粉中,高温煅烧后,测试了纳米粉体掺杂ZrO2陶瓷复合材料的弯曲强度、断裂韧性和维氏硬度等力学性能。结果纳米α—Al2O3的最佳填充量为5vol％,此时ZrO2复相陶瓷的弯曲强度和断裂韧性分别为（659．17±46．54）MPa和（8．55±0．89）MPam^1/2;纳米ZrO2的最佳填充量为10vol％,此时ZrO2复相陶瓷的弯曲强度和断裂韧性分别为（673．17±47．19）MPa和（9．01±0．82）MPam^1/2。结论当填充纳米ZrO2和纳米α-Al2O3的量〉5vol％（如10vol％）时．前者增强效果优于后者;但当填充量≤5vol％时,后者的增强效果优于前者。     

PITX2在牙齿早期发育中的作用

PITX2作为转录因子,在生物的早期发育中有很重要的作用.它与多个器官的发生发育都有着密切的联系,如心脏、血管、脑、肌肉、骨骼、眼睛等.而Pitx2对牙齿的影响则是通过Axenfeld-Rieger综合征发现的.本文就Pitx2与牙齿早期发育的某些相关基因之间相互作用进行综述.     

Notch-2在大鼠牙髓炎中的时空分布及其意义

目的:研究单纯开髓导致大鼠牙髓炎进程中Notch-2在牙髓损伤修复中的作用.方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学染色方法研究Notch-2的时空表达变化及其意义.结果:牙髓损伤早期(3 d),牙髓间充质细胞和牙髓成纤维细胞中Notch-2均呈弱阳性表达,成牙本质细胞为阴性表达.牙髓损伤中期(5 d),靠近损伤区的成牙本质细胞深层细胞Notch-2阳性表达达到高峰;同时,新生毛细血管内皮细胞呈强阳性表达.牙髓损伤晚期(7 d),Notch-2在牙髓间充质细胞、血管内皮细胞中表达均减弱,而在成牙本质细胞阳性表达达到高峰.牙髓损伤末期(14 d),Notch-2仅在成牙本质细胞下层细胞中尚有微弱表达,而其余牙髓细胞均为阴性表达.对照组正常牙髓组织Notch-2表达为阴性.结论:Notch-2在牙髓损伤应激情况下在牙髓间充质细胞和成牙本质细胞中上调表达,对于启动牙髓自我修复、诱导牙髓间充质细胞功能性分化以及抑制受损成牙本质细胞凋亡、维系和调动其相对正常的生理功能可能具有重要作用.     

Sjgren综合征的白细胞介素2及其受体系统的初步研究

目的 探讨白细胞介素2（IL-2）及其受体系统检测在Sjogren综合征发生发展中的作用。方法 采用放射免疫法（RIA）检测Sjogren综合征患者外周血的IL-2含量,双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）表达水平。结果 患者的IL-2含量明显低下,血清sIL-2R表达水平显著增高,与对照组相比有非常显著性差异;治疗后IL-2的水平有明显的上升,sIL-2R的表达水平有显著的下降,但与正常人相比还是有统计学上的差异;停药后症状复又加重者,其血清IL-2含量再趋下降,而sIL-2R水平又见回升,说明Sjogren综合征患者存在着明显的IL-2/sIL-2R系统紊乱,治疗后得以部分或完全纠正,患者的自觉症状明显好转。结论 对患者外周血IL-2及sIL-2R水平的研究有助于进一步探索Sjogren综合征免疫调节紊乱的发生机制,两者的检测有助于评价其免疫功能状态,动态观察对监察病情的发展及评价治疗效果有重要的临床意义。     

KH550在金属翼板粘接技术中应用的研究

金属翼板粘接桥虽有不少优点,但脱落率仍明显高于常规修复方法,脱落位置在釉质—树脂界面或树脂—金属界面。尤其是树脂—金属界面的断裂。本文采用KH550为主的综合措施,经过X射线能谱仪检测证明除物理固位外尚有化学固位,化学理论分析无毒,经渗漏试验和急性毒性试验证实,KH550可以用在临床,而粘接强度测定和临床验证进一步证明它们的价值,可以认为已基本上解决了树脂—金属界面的断裂问题     

rhBMP-2/HA/Co复合材料异位诱导成骨中钙含量的检测

目的 确定rhBMP-2/HA/Co的生物活性。方法 用原子吸收分光光度法测定rhBMP-2/HA/Co复合材料异位诱导成骨区样本单位湿重的钙含量,并与HA/Co组对照。结果 实验组样本的单位湿重钙含量的平均值高于对照组。结论 rhBMP-2/HA/Co复合材料具有良好的生物活性。     

岩黄连总碱对Tca8113中Bcl-2表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中Bcl-2表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western印迹法检测经YHL-TA作用后的Tca8113细胞中Bcl-2核酸水平以及蛋白水平的表达活性。结果:YHL-TA能促进Tca8113细胞凋亡,并在核酸水平和蛋白水平抑制Bcl-2的表达活性,且随作用时间的延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA可以明显促进Tca8113细胞的凋亡,并显著降低其Bcl-2的表达,这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。     

rhBMP-2复合制剂用于犬牙根尖诱导成形术的实验研究

目的观察使用基因重组人骨形成蛋白-2、Ⅰ型胶原和羟基磷灰石（rhBMP-2/Co/HA）的复合制剂作为根尖诱导剂,用于犬牙牙根未发育完成的年轻恒牙的慢性根尖周炎的根管充填,观察其根尖诱导效果。方法制备杂种家犬牙根未发育完成的年轻恒牙慢性根尖周炎的动物实验模型。用rhBMP-2/Co/HA复合制剂作为根尖诱导剂充填到犬牙的根管内,对照组用氢氧化钙糊剂。12周后用X线片及组织学方法观察2种不同的根尖诱导剂根管充填后牙根延长、根尖封闭的效果。结果实验组全部牙根延长,根尖形成并闭合,闭合率100%;对照组45个牙根延长,根尖形成并闭合,闭合率93.75%;实验组和对照组的根尖闭合率无显著差异（P〉0.05）,且根尖均有不同程度的硬组织形成。结论 rhBMP-2/Co/HA复合制剂具有良好的生物活性和根尖诱导作用。