重组pEGFP-C1-Smad4表达载体的构建及在SGC7901细胞中的表达

目的：构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,并观察其在人胃癌SGC7901细胞中的表达。方法： 应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白与Smad4的融合表达载体,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析,用基因转染技术将其转入人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜、Western blot检测其表达。结果： 酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,在转染的人胃癌SGC7901细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到Smad4在蛋白水平的表达。结论：pEGFP-C1-Smad4表达载体便于观察转染细胞中EGFP-C1-Smad4融合蛋白的表达情况,为进一步研究Smad4在胃癌发生中的作用奠定基础。     

血管内皮生长因子C靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测

目的:构建针对人血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果。方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成。①实验材料:小干扰RNA表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGC7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子C基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152bp)由上海生工生物公司合成。②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子C基因的两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒。经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGC-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株。③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Westernblot法检测血管内皮生长因子CmRNA和蛋白水平的表达。结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,建立了稳定转染细胞株。②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子CmRNA和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子C表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-C1尤为明显,抑制血管内皮生长因子C表达,不影响细胞的生长。结论:成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体及稳定转染的胃癌细胞株。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的探讨生存素反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌细胞SGC7901凋亡的诱导作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。胃癌细胞株SGC7901分为4组:空白对照组(Sham)、单纯脂质体对照组(Lip)、正义链转染对照组(Lip-SODN)、ASODN转染组(Lip-ASODN)。作用12、24、48 h后收获各组细胞。Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,倒置显微镜观察细胞生长形态变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫组化SP法检测细胞中Ki67表达。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞出现survivin蛋白表达明显下降;形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、凋亡小体形成;细胞凋亡率明显高于各对照组(P<0.05);细胞中Ki67表达水平明显降低。结论survivin反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有明显的抗癌作用。     

NORE1基因调控胃癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究Ras相关区域家族5(NORE1)基因过表达对胃癌细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用前瞻性研究将胃癌细胞分为NORE1过表达组和对照组,分别转染人的胃癌AGS细胞和SGC7901细胞,Westren blot检测细胞转染效率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力;Westren blot检测胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中NORE1表达量显著高于对照组(P0.05)。胃癌细胞AGS、SGC7901的迁移、侵袭能力减弱,与对照组具有显著差异(P0.05)。与对照组相比,NORE1过表达组胃癌细胞AGS、SGC7901中AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量显著下降(P0.05)。结论胃癌细胞中NORE1基因可以通过调节AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量影响其迁移和侵袭能力。     

人胃癌组织中PLK1基因的表达及其生物学特性分析

目的探讨胃癌患者丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶polo样激酶1基因(PLK1)的表达水平及其对胃癌细胞增殖和抗凋亡能力的作用机制。方法用荧光定量PCR及免疫组织化学染色法检测PLK1基因及蛋白质在胃癌组织中的表达水平;用pc DNA3.1-PLK1及其对应空质粒载体转染胃癌细胞系SGC7901及MKN45,用annexin V-PI共染法及Brd U法检测其对细胞增殖及凋亡的影响;用western blot检测联蛋白(β-catenin)及STAT3通路激活情况。结果与正常胃黏膜组织(0.06±0.01)相比,PLK1基因在人胃癌组织中的表达水平(0.19±0.05)增高,差异有统计学意义(t=19.08,P0.01);免疫组织化学染色法结果表明,PLK1蛋白在胃癌组织中的阳性率为90.0%(54/60),显著高于癌旁组织的51.7%(31/60),差异有统计学意义(χ2=21.34,P0.05);Brd U法结果表明,加入抑制剂BI2536可抑制SGC7901和MKN45细胞PLK1酶活性(P均0.05);annexin V-PI共染法结果表明,转染PLK1的SGC7901和MKN45的细胞凋亡率分别为21.1%和19.6%,与未转染SGC7901和MKN45的细胞凋亡率(分别为32.5%和29.8%)比较,显著降低(P均0.01);western blot结果表明,加入抑制剂BI2536可降低细胞中β-catenin和STAT3通路各蛋白质的表达水平(P均0.05)。结论 PLK1在胃癌组织中过量表达,并通过β-catenin及STAT3通路促进胃癌细胞的增殖。     

S100A4基因载体的构建及其在人胃癌细胞系中的表达

目的 克隆S100A4 cDNA,构建pcDNA3.1-S100A4重组表达载体,转染胃癌细胞系MKN1,观察S100A4在胃癌细胞中的表达情况。方法 Trizol法提取人胃上皮细胞GES-1的总RNA,逆转录反应获得含S100A4基因的cDNA。聚合酶链反应GenBank获得S100A4基因序列,并设计引物,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出分子量为327 bp的产物。构建pMD18-T simple-S100A4重组质粒,转化JM109菌。菌液测序成功后,提取质粒,进行BamHⅠ/HindⅢ双酶切,酶切产物回收纯化,连接表达载体pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-S100A4真核表达载体。利用脂质体介导转染方法将纯化的表达载体转染到胃癌细胞系MKN1中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后MKN1细胞中S100A4 mRNA表达水平。结果 PCR产物连接克隆载体的测序结果与GenBank公布的无突变序列一致,HindⅢ/BamHⅠ双酶切可以成功构建真核表达载体pcDNA3.1-S100A4;在胃癌细胞系MKN1中转染pcDNA3.1-S100A4表达载体,以转染pcD...     

肌腱愈合及粘连形成机制的研究:胰岛素样生长因子1基因真核表达载体的构建及表达

目的:探讨真核表达载体介导外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染肌腱细胞的可能性。方法:组织块法培养原代肌腱细胞,体外重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-IGF-1,并以脂多胺DOGS为介导转染培养的肌腱细胞,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IGF-1mRNA的表达,ELISA法检测IGF-1活性蛋白表达。结果:成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-IGF-1;RT-PCR检测显示转染后的肌腱细胞成功表达IGF-1mRNA;ELISA结果显示转染组IGF-1蛋白表达较对照组明显增高(t=-2.873,P<0.05)。结论:重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-IGF-1能够将IGF-1cDNA成功导入肌腱细胞并表达。     

RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的：探讨 MBP-1（c-myc promter binding protein 1,MBP-1）基因表达沉默对胃癌细胞株 SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列）和干扰组（转染 MBP-1 shRNA）。设计2条针对MBP-1基因的小干扰 RNA 片段及1条阴性对照 siRNA,并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组 pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌 SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR 和 Western blot 分别检测MBP-1表达。MTT 法对 MBP-1干扰后 SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过 PCR 扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过 Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌 SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建 MBP-1干扰及对照 SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR 检测,干扰组 MBP-1 mRNA 相对表达量与空白对照组相比显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达,干扰组 MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT 法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120 h 增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。结论下调 MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞 SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。     

人胰岛素样生长因子1真核细胞表达质粒的构建及其稳定表达细胞株的建立

目的构建胰岛素样生长因子1(insulin growth factor1,IGF-1)的真核细胞表达质粒,转染神经胶质瘤细胞(C6细胞),建立hIGF-1稳定表达细胞株,为进一步观察胰岛素样生长因子1基因体内转染后对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响打下基础。方法实验于2004-05/09在吉林大学公共卫生学院放射生物实验室进行。用聚合酶链反应方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出IGF-1cDNA,然后定向插入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,酶切电泳和基因测序鉴定插入质粒的hIGF-1基因序列;使用C6细胞株,用脂质体方法转染C6细胞。经G418筛选,形成阳性细胞克隆。继续培养4周,进行W estern blot检测。结果重组的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-hIGF-1所含的IGF-1cDNA序列和插入方向均正确。W estern blot检测结果证实转染的hIGF-1基因在C6细胞内成功表达。结论实验所构建的重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-hIGF-1能够稳定表达有活性的hIGF-1,实验结果对进一步观察脊髓损伤后胰岛素样生长因子1抑制神经细胞凋亡的作用有一定意义。     

紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的杀伤作用及机制分析

目的探讨紫杉醇作用人胃癌细胞株SGC7901后,对细胞的杀伤作用和杀伤机制。方法通过MTT观察不同浓度紫杉醇对SGC7901细胞凋亡的影响,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化的方法检测bax和c-myc基因的表达情况。结果紫杉醇诱导胃癌细胞株的凋亡增加,其中凋亡基因bax的表达增高,bax的蛋白表达也增高;而促进细胞无限增殖的c-myc基因表达降低,同时c-myc蛋白表达降低。结论紫杉醇对胃癌细胞株生长有明显的抑制作用,紫杉醇通过bax和c-myc基因的表达变化诱导胃癌细胞株的凋亡。     

外源性子宫珠蛋白基因对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨人子宫珠蛋白（UG）基因对宫颈癌Hela细胞系细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核细胞表达载体pcDNA3．1-UG（＋），以脂质体介导法稳定转染体外培养的人宫颈癌Hela细胞，同时转染空载体pcDNA3．1质粒，以未转染细胞为对照，转染成功后分别命名为pcDNA3．1-UG（＋）／Hela组、pcDNA3．1／Hela组、Hela组。应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、Western blot方法分析目的基因表达，并采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡。结果pcDNA3，1-UG（＋）／Hela组UGmRNA及UG蛋白出现明显的高表达，与对照组细胞相比差异有统计学意义（P〈0．05）；pcDNA3．1UG（＋）／Hela组细胞生长速度明显慢于未转染Hela细胞，其细胞凋亡率与未转染Hela细胞相比差异也有统计学意义；然而pcDNA3．1／Hela组细胞生长速度和凋亡率均无明显变化。结论转染UG基因能诱导Hela细胞凋亡及抑制Hela细胞生长。     

RASSFlA基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSFIA基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSFlA基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组（A组）、空载组（B组）、转染突变型RASSFlA组（c组）与转染野生型RASSFlA组（D组）,B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡。Westernblot测定Caspase-3蛋白的表达水平。结果成功建立稳定表达野生型和突变型RASSFlA基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,C组与A,B组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论野生型RASSFIA的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性。     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）可抑制血管内皮细胞凋亡。目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组（转染pcDNA3.1）、过氧化氢组（转染pcDNA3.1＋H2O2）和bFGF转染＋过氧化氢组（转染pcDNA3.1-bFGF-GFP＋H2O2）,流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加（P〈0.01）,而bFGF转染＋过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低（P〈0.01）。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化

背景：骨形态发生蛋白2具有很强的诱导干细胞成骨活性。目的：构建人骨形态发生蛋白2基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果。方法：通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2。利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4代脂肪干细胞,并经G418进行筛选。结果与结论：酶切鉴定及DNA测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建成功。经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为（18.0±0.42）%,并经过G418筛选后获得了稳定转染的细胞。细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响。ELISA检测发现人骨形态发生蛋白2组的人骨形态发生蛋白2因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达。经人骨形态发生蛋白2基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高。     

As2O3对人胃癌多药耐药细胞模型的逆转耐药作用

目的体外建立人胃癌细胞多药耐药模型,研究多药耐药机制及三氧化二砷（As2O3）对其逆转耐药作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADM,MTT法检测SGC7901/ADM细胞对ADM、长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）的敏感性及As2O3对其逆转耐药倍数,免疫细胞化学法（PV法）检测细胞P-糖蛋白（P-gp）、Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SGC7901/ADM细胞对ADM、VCR和TAX均耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33。在As2O3作用48h后,3种抗癌药物对SGC7901/ADM细胞生长抑制50%时的浓度（IC50）明显降低,差异有显著性（F=169.766-1 199.812,q=6.86-70.40,P〈0.01）;耐药细胞经As2O3及环孢素A（CsA）作用后,P-gp表达明显下调,差异有显著性（F=42.870,q=7.70-21.50,P〈0.01）;As2O3高浓度组细胞中Caspase3表达上调,差异有显著性（F=7.220,q=6.63,P〈0.05）。As2O3作用组SGC7901/ADM细胞凋亡率随As2O3浓度增加而增加（F=1 986.63,q=21.23-95.08,P〈0.05）。结论 SGC7901/ADM细胞具有多药耐药性,As2O3可逆转其耐药,并呈剂量依赖性。     

人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达

背景：骨髓间充质干细胞是最好的组织工程种子细胞来源,含有血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor 165,VEGF165）不仅对血管再生和启动成骨修复有重要意义,其持续稳定的释放还能够提高新生骨的矿化程度,增强修复组织的力学性能。目的：观察hVEG F165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子的蛋白功能。方法：体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后的骨髓间充质干细胞以pcDNA3.1-VEGF165质粒和脂质体1：3比例的混合液转染,并分为3组：转染组应用pcDNA3.1-VEGF165转染细胞,空载体转染组应用pcDNA3.1-空载体转染,未转染组不处理。通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性血管内皮生长因子的表达。结果与结论：转染组与其他两组比较,VEGF165蛋白含量显著增高,差异有显著性意义（P〈0.05）,但空载体转染组与未转染组之间差异无显著性意义（P〉0.05）,转染组不同时间点之间VEGF165蛋白含量差异均有显著性意义（P〈0.05）,hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF165蛋白。提示采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF165。     

SOX-9和胰岛素样生长因子1共同转染大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景:单基因诱导虽能对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化产生积极影响,但作用有限,多种基因共同作用才符合机体真实内环境的需求,并有助于发挥多基因产物之间的协同作用,提高分化效果.目的:验证应用SOX-9和胰岛素样生长因子1基因转染大鼠骨髓间充质干细胞后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果.设计、时间及地点:两样本观察,实验于2008-04/2009-02在中国医科大学细胞生物实验室完成.对象:6周龄健康雄性Wistar大鼠2只用于骨髓间充质干细胞提取.方法:扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-SOX-9.分离、纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞.按转染情况分为5组:①未转染组:仅加入双无(无血清无双抗)L-DMEM.②转染窄载体组:双无L-DMEM+pcDNA3.1空载体和脂质体.③转染SOX-9组:双无L-DMEM+pcDNA3.1-SOX-9质粒和脂质体.④转染胰岛素样生长因子1组:双无L-DMEM分别+pcDNA3.1-IGF-1质粒和脂质体.⑤共转染组:双无L-DMEM分别+pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-SOX-9质粒和脂质体,混合.主要观察指标:对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测筛选后细胞目的基因和蛋白的表达.结果:MTT法检测转染SOX-9组、转染胰岛素样生长因子1组和共转染组骨髓间充质干细胞增殖活性A值显著高于未转染组、转染空载体组(P<0.01).反转录-聚合酶链反应和Westem blot检测目结果显示,SOX-9表达以转染SOX-9组最多;胰岛素样生长因子1表达以共转染组最多:软骨细胞特异性基质Ⅱ型胶原表达以共转染组最多.结论:双基因转染在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化的能力和细胞外基质分泌的能力上更明显高于单基质转染;另外结果间接说明胰岛素样生长因子1具有诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用,但能力弱于SOX-9.     

RASSF1A基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSF1A基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组(A组)、空载组(B组)、转染突变型RASSF1A组(C组)与转染野生型RASSF1A组(D组),B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡。Western blot测定Caspase-3蛋白的表达水平。结果成功建立稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义(P<0.05),C组与A,B组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论野生型RASSF1A的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性。     

c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响

目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.