血管内皮生长因子对佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:观察血管内皮生长因子对佐剂性关节炎滑膜细胞质金属蛋白酶3及质金属蛋白酶9表达的影响,并探讨其意义。方法:实验于2006-02/12在桂林医学院实验中心完成。①实验材料:清洁级8周龄雄性Wistar大鼠6只,血管内皮生长因子为Peprotech EC LTD公司产品,基质金属蛋白酶3(扩增369bp)上游引物、下游引物,基质金属蛋白酶9(扩增405bp)上游引物、下游引物均购自晶美公司。②实验干预:先用弗氏完全佐剂造Wistar大鼠模型;造模20d后取Wistar大鼠右后足滑膜细胞进行原代培养。③实验分组:实验分为血管内皮生长因子组:取P2代细胞接种于6孔培养板,分别加入终浓度为5,25,50μg/L血管内皮生长因子;对照组:不加血管内皮生长因子。④实验评估:取病理切片观察滑膜细胞形态学改变;采用半定量反转录聚合酶链反应检测Wistar大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的m-RNA表达。结果:①培养细胞的形态学观察:原代培养14d滑膜细胞从组织块边缘逸出,21d密集生长开始传代;传代细胞48h可明显分辨出树突样细胞、巨噬细胞样细胞和成纤维细胞样细胞;传至21代,细胞生长及特性稳定。②病理切片:滑膜组织有中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润,滑膜细胞增生、排列紊乱,纤维素渗出,胶原纤维沉着,纤维素样坏死,呈滑膜炎表现。③基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9的mRNA表达:对照组基质金属蛋白酶3mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50μg/L组比较,差异有显著性意义(0.32±0.03,0.77±0.06,1.12±0.12,1.59±0.02,P<0.05);对照组基质金属蛋白酶9mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50μg/L组比较,差异有显著性意义(0.47±0.07,0.50±0.10,0.91±0.10,1.31±0.06,P<0.05);基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9mRNA表达随血管内皮生长因子浓度的加大表达增加。结论:血管内皮生长因子以剂量递增的方式对体外培养的佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的表达有促进作用。     

基质金属蛋白酶-9及血管内皮生长因子在卵巢癌中表达及其关系研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-9及血管内皮生长因子与肿瘤侵袭发展的关系及二者相关性.方法:80例卵巢癌及30例卵巢良性肿瘤患者,采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶-9及血管内皮生长因子的表达情况.结果:卵巢癌组基质金属蛋白酶-9及血管内皮生长因子mRNA的表达(1.128±0.061,0.878±0.034)明显高于卵巢良性肿瘤组(0.426±O.085,0.178±O.050)(P<0.05).卵巢癌组中基质金属蛋白酶-9与血管内皮生长因子蛋白的阳性表达(93.8%,97.5%)明显高于卵巢良性肿瘤组(43.3%,53.3%)(P<0.05),卵巢癌组中基质金属蛋白酶-9与血管内皮生长因子蛋白的表达与临床分期、有无淋巴结转移有关,二者阳性表达率成正相关(r=0.74,P<0.05).结论:基质金属蛋白酶-9及血管内皮生长因子高表达与卵巢癌侵袭性密切相关,可作为检测卵巢癌侵袭性的有效指标.在肿瘤侵袭过程中基质金属蛋白酶-9与血管内皮生长因子的产生关系密切.     

反义寡核苷酸对前列腺癌细胞株PC-3血管内皮生长因子表达的抑制作用及意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对人类前列腺癌细胞PC-3生长及VEGF表达的影响。方法采用流式细胞术检测反义及正义寡核苷酸作用下前列腺癌细胞株PC-3 VEGF表达情况,MTT法检测VEGF反义及正义寡核苷酸对PC-3细胞生长抑制作用。结果在浓度为5～20μmol/L的反义寡核苷酸作用48 h后,肿瘤细胞VEGF表达量为0.102±0.008～0.037±0.006(P<0.05),细胞的生长抑制率为25.2%～43.9%(P<0.05),且存在浓度依赖性。结论 VEGF反义寡核苷酸可能通过抑制前列腺癌细胞PC-3 VEGF的表达而抑制肿瘤细胞的生长。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的：探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法：于2001-05／2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL／6小鼠皮下肺癌模型30只，分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内，用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗，对照组只注射生理盐水，观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达，强阳性为卅，弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达，计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果：30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量：对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7．83&;#177;0．78)，(4．49&;#177;0．43)和(7．73&;#177;0．69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内，在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性，而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120／β-actin：血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0．1594&;#177;0．025)低于对照组[(0．4020&;#177;0．032)，P&;lt;0．01]，低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组【(0．3805&;#177;0．030)，P&;lt;．01】。④血管内皮生长因子164／β-actin：血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0．3073&;#177;0．021)低于对照组[(0．878O&;#177;0．029)，P&;lt;0．01]，低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0．8481&;#177;0．020)，P&;lt;0．01]。结论：血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。     

系统性硬皮病皮损血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-1的检测及意义

目的研究系统性硬皮病(SSc)发病与血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的关系,探讨硬皮病可能的发病机制。方法采用免疫组化SP法检测53例SSc患者皮损中VEGF及MMP-1的表达,21例正常人皮肤组织作为正常对照组。结果 (1)VEGF在SSc患者皮损的表达明显强于对照组(P<0.001)。(2)MMP-1在SSc患者皮损的表达明显强于对照组(P<0.001)。结论 VEGF和MMP-1在SSc患者皮损中表达明显增强,VEGF参与了SSc的病理纤维化过程,其可能与SSc皮肤的硬化密切相关。     

乳腺癌中血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9的表达与淋巴结转移的关系

目的 检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在乳腺癌中的表达情况,研究两者与淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组化SP法检测92例乳腺浸润癌中VEGF、MMP-9的表达情况.结果 VEGF蛋白在对照组和乳腺癌组中的阳性表达率分别为5.7％ (3/45)和90.2％(83/92),且VEGF在淋巴结转移组中的阳性表达率(53/55)明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05).MMP-9蛋白在正常乳腺组织及乳腺癌中的阳性表达率分别为0(0/45)和92.4％ (85/92),而且MMP-9在淋巴结转移组中的阳性表达率(54/55)明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论 VEGF、MMP-9蛋白在乳腺癌组织中高表达,且均与淋巴结转移有关(P＜0.05),两者可能在乳腺癌的远处转移中起协同作用.     

血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-9和E-钙粘素在甲状腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及E-钙粘素在甲状腺癌组织中的表达情况与甲状腺癌的组织类型、临床分期和淋巴结转移的关系。方法 采用免疫组化SP法检测50例甲状腺癌患者癌组织标本及20例甲状腺癌患者癌旁正常甲状腺组织中VEGF、MMP-9及E-钙粘素的表达情况，观察其与患者临床病理及预后的关系。结果 甲状腺癌组织中VEGF的表达显著高于癌旁组织，且与甲状腺癌的组织类型、临床分期和淋巴结转移密切相关；MMP-9的表达亦显著高于癌旁组织，与甲状腺癌的组织类型无关，但与临床分期和淋巴结转移密切相关。分化型甲状腺癌组织中E-钙粘素的表达显著低于癌旁组织，与甲状腺癌的组织类型无关；未分化癌中E-钙粘素呈阴性表达，E-钙粘素的表达与临床分期和淋巴结转移呈负相关。结论 甲状腺癌组织VEGF、MMP-9及E-钙粘素的表达与甲状腺癌的侵袭及转移有关，可作为甲状腺癌患者的预后指标。     

反义寡核苷酸对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞血管内皮生长因子表达影响的体外研究

为了研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞VEGF表达的影响,将终浓度分别为5、10、20μmol/L的VEGFASODN和错义序列与人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞分别孵育24、48小时,采用RT-PCR检测VEGFmRNA的表达,采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组织化学法（streptavidin/peroxidase,SP法）检测VEGF的表达。结果表明：VEGFASODN3个浓度组（5、10和20μmol/L）处理的Namalwa细胞VEGFmRNA的表达分别为1.38、0.96、0.57,错义序列组和对照组分别为1.79、1.84。当加入20μmol/LVEGFASODN作用48小时后,细胞内VEGF蛋白水平显著减少,而错义序列组Namalwa细胞VEGF蛋白水平未见明显改变。结论：VEGFASODN在体外能够抑制Namalwa细胞VEGF的表达。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对小鼠在体肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子反义寡核苷酸基因治疗方法对模型小鼠在体肺癌细胞的抑制作用。方法:于2001-05/2002-01在哈尔滨医科大学第一临床医学院实验动物中心制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,用反义寡核苷酸及正义寡核苷酸皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况。用免疫组化方法检测血管内皮生长因子蛋白表达,强阳性为,弱阳性为+。通过反转录多聚酶链反应检测血管内皮生长因子mRNA的表达,计算血管内皮生长因子与β-actin比值作为血管内皮生长因子表达水平参数。结果:30只模型鼠均进入结果分析。①平均瘤质量:对照组、血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗组、血管内皮生长因子正义寡核苷酸治疗组分别为(7.83±0.78),(4.49±0.43)和(7.73±0.69)g。②血管内皮生长因子在癌周表达强度高于癌内,在对照组及血管内皮生长因子正义寡核苷酸组多呈强阳性,而血管内皮生长因子反义寡核苷酸组多呈弱阳性。③血管内皮生长因子120/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.1594±0.025)低于对照组[(0.4020±0.032),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.3805±0.030),P<0.01]。④血管内皮生长因子164/β-actin:血管内皮生长因子反义寡核苷酸组(0.3073±0.021)低于对照组[(0.8780±0.029),P<0.01],低于血管内皮生长因子正义寡核苷酸组[(0.8481±0.020),P<0.01]。结论:血管内皮生长因子反义寡核苷酸与肿瘤血管的生成密切相关。原位注射血管内皮生长因子反义寡核苷酸能抑制小鼠在体肺癌细胞的生长。     

基质金属蛋白酶-9与血管内皮细胞生长因子在肺腺癌中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肺腺癌表达的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(SP)法检测MMP-9、VEGF在30例肺腺癌组织和12例癌旁正常组织中的表达。Western blot检测MMP-9单克隆抗体阻断MMP-9后肺腺癌A549细胞VEGF蛋白表达水平的变化,以及VEGF克隆抗体阻断VEGF后肺腺癌A549细胞MMP-9蛋白表达水平的变化。结果MMP-9在腺癌组织表达率为63.3%,正常组织表达率为16.7%,差异有统计学意义(P0.05);VEGF在腺癌组织表达率为70%,正常组织表达率为25%,差异有统计学意义(P0.05);肺腺癌组织MMP-9水平与VEGF表达率存在正相关关系(r=0.709 4,P0.01),并与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况相关(P0.05)。VEGF高表达率与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况相关(P0.05)。用MMP-9单克隆抗体阻断MMP-9可降低VEGF蛋白表达水平,用VEGF单克隆抗体阻断VEGF可降低MMP-9蛋白表达水平。结论 VEGF、MMP-9在肺腺癌高表达,在促进腺癌侵袭转移中具有协同作用。     

上调NDRG1基因表达对人胰腺癌细胞MMP-9、VEGF表达及侵袭和迁移的影响

目的：建立稳定转染含N-myc下游调节基因-1（NDRG1）的SW1990细胞株,探讨NDRG1对 SW1990细胞侵袭与迁移能力的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有 NDRG1重组表达质粒转染人胰腺癌细胞株 SW1990,用 G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot鉴定阳性细胞克隆;采用RT-PCR及Western blot检测阳性细胞克隆MMP-9及VEGF mRNA与蛋白表达;采用Transwell小室侵袭实验与划痕实验分别检测细胞侵袭及迁移能力。结果 N17克隆组、转空载体组及未转染组NDRG1 mRNA表达量分别为0.53±0.25、0.26±0.11、0.25±0.13;相应的MMP-9 mRNA表达量分别为0.33±0.18、0.71±0.45、0.76±0.42;相应的VEGF mRNA表达量分别为0.27±0.16、0.68±0.36、0.69±0.38;相应的NDRG1蛋白表达量分别为0.27±0.13、0.11±0.04、0.12±0.06;相应的MMP-9蛋白表达量分别为0.12±0.04、0.38±0.15、0.36±0.14;相应的VEGF蛋白表达量分别为0.15±0.08、0.39±0.21、0.40±0.25。较其他组,N17克隆组NDRG1 mRNA及蛋白表达量显著增加（P〈0.01）,而MMP-9、VEGF mRNA及蛋白表达量显著降低（P〈0.01）。N17克隆组、转空载体组及未转染组微孔滤膜外侧细胞数分别为31.27±11.54、58.93±17.23、60.26±19.38,N17克隆组较其他组微孔滤膜外侧细胞数显著减少（P〈0.01）。N17克隆组、转空载体组及未转染组细胞迁移距离分别为51.35±18.24、120.68±42.97、124.54±51.66,N17克隆组较其他组细胞迁移距离显著减少（P〈0.01）。结论 SW1990细胞NDRG1表达上调后,细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制,其作用机制可能与MMP-9及VEGF表达降低有关。     

三氧化二砷对K562细胞血管内皮生长因子及受体和MMP-2、9的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对K562细胞的血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）表达水平和基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）活性的影响。方法用MTT法测定As2O3对K562细胞的毒性，酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，流式细胞术检测细胞的VEGFR表达率，明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP-2、9的活性。结果①Mar法检测K562细胞的，IC50为（2．12±0．11）μmol／L，0．4～6．4μmol／LAs2O3可显著抑制K562细胞的增殖（P＜0．05）。②0．05μmol／L As2O3对VEGF无明显影响（P＞0．05）；0．4和3．2μmol／LAs2O3可明显下调VEGF表达（P＜0．05）；As2O3对VEGFR的表达无明显影响（P＞0．05）。③MMP-2、9经0．05μmol／L As2O3处理72h、0．4和3．2μmol／L As2O3处理24、48和72h均可显著抑制K562细胞MMP-2、9的活性（P＜0．05），这种抑制作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。结论As2O3可下调K562细胞VEGF的表达和抑制MMP-2、9的活性。     

hTERT反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖及端粒酶活性的抑制作用,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用。方法应用ASODN封闭瘢痕疙瘩成纤维细胞hTERT基因的表达,不同浓度不同时间以ASODN作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,细胞计数和MTT法检测成纤维细胞生长增殖情况,端粒酶PCR-ELISA法检测不同处理浓度和时间成纤维细胞端粒酶活性。结果 ASODN作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞72h后,成纤维细胞生长受抑,增殖能力减弱,并具有浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示:ASODN0.5、1.0和1.5μmol/L作用组OD450-690值分别为0.612±0.038、0.535±0.027、0.423±0.023,与空白对照组(0.898±0.058)比较,差异有统计学意义(P<0.05);正义寡核苷酸1.0μmol/L作用组(OD450-690值为0.893±0.042)与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hTERT基因ASODN能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖,降低成纤维细胞端粒酶活性是其重要作用机制之一。通过抑制端粒酶活性进行抗瘢痕疙瘩治疗可能是一个新途径。     

急性脑梗死患者MMP-9和VEGF的动态变化及其意义

目的 探讨急性脑梗死患者血清基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）浓度的动态变化及其临床意义.方法 选取2009年6月至2012年6月河北大学附属医院神经内科收住院的首次发病48 h内的急性脑梗死患者106例（脑梗死组）及同期健康体检者50例（正常对照组）.分别于脑梗死发病后1、3、7、14 d时抽取静脉血测定脑梗死组血清MMP-9和VEGF浓度,并于7d测量梗死面积和评估预后,分析MMP-9和VEGF浓度与脑梗死面积大小及预后的关系.结果 两组比较,脑梗死组各时间点血清MMP-9和VEGF浓度显著增高（P＜0.01）,并呈现一定的动态变化规律.脑梗死组各时间点MMP-9和VEGF的浓度间无相关性（P＞0.05）.脑梗死发病7d时MMP-9和VEGF浓度均与脑梗死面积有一定相关性.脑梗死组中预后不良组血清MMP-9和VEGF浓度各时间点均显著高于预后良好组（P＜0.01）.结论 急性脑梗死患者血清MMP-9和VEGF浓度均显著增高,且血清MMP-9和VEGF的浓度与脑梗死面积大小及预后关系密切.     

替吉奥联合奥沙利铂治疗进展期胃癌的疗效及对癌组织中MMP-9和VEGF表达的影响

目的观察替吉奥联合奥沙利铂治疗进展期胃癌的疗效,并探讨其对癌组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 85例进展期胃癌患者分为观察组(n=45)和对照组(n=40),均接受新辅助化疗方案:观察组给予替吉奥胶囊联合奥沙利铂;对照组给予5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙联合奥沙利铂。观察2组近期疗效、不良反应及化疗前后癌组织中MMP-9和VEGF表达的变化。结果 2组客观缓解率无显著差异(P0.05),观察组临床受益率显著高于对照组(P0.05);观察组重度骨髓抑制和胃肠道发生率低于对照组(P0.05);2组化疗后MMP-9及VEGF表达阳性区灰度值均较治疗前均显著下降(P0.01),组间比较差异显著(P0.01)。结论替吉奥胶囊联合奥沙利铂可提高进展期胃癌患者的临床受益率,且能有低癌组织中MMP-9和VEGF的表达。     

急性冠脉综合征伴高同型半胱氨酸血症患者血清VEGF与MMP-9水平检测及临床意义

目的通过检测急性冠脉综合征(ACS)伴高同型半胱氨酸血症患者血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP-9)的血清水平值,探讨VEGF、MMP-9在ACS伴高同型半胱氨酸血症中的发病机制和作用。方法实验分为高同型半胱氨酸血症ACS组与非高同型半胱氨酸血症ACS组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ACS患者血清VEGF、MMP-9水平。结果 MMP-9在高同型半胱氨酸血症ACS组明显高于非高同型半胱氨酸血症ACS组(P0.05),VEGF在高同型半胱氨酸血症ACS组明显低于非高同型半胱氨酸血症ACS组(P0.05)。VEGF与同型半胱氨酸、MMP-9呈负相关,差异有统计学意义(P0.05),MMP-9与同型半胱氨酸呈正相关性。结论高同型半胱氨酸血症可以通过降低ACS患者血管修复功能及MMPs动态平衡加速冠状动脉粥样硬化,参与ACS的病理生理机制。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的作用探讨

目的:探讨特异性生存素(survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对急性早幼粒细胞系HL-60细胞增殖、凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,原位末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡指数(AI),RT-PCR半定量测定细胞中survivinmRNA的表达。结果:(1)survivinASODN各浓度组对HL-60细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。(2)survivinASODN处理组HL-60细胞的凋亡率与空白对照组、正义对照组和空转染组相比,差异有显著性(P<0.01)。(3)survivinASODN处理组HL-60细胞的survivinmRNA表达水平明显下调。结论:survivinASODN能明显抑制HL-60细胞中survivinmRNA的表达,诱导细胞凋亡。     

反义血管内皮生长因子对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的　构建表达反义血管内皮生长因子165(VEGF165)的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法　应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果　成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞增殖能力降低。结论　VEGF165反义RNA能够明显减少人乳腺癌细胞株MCF- 7内VEGF165的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,证明了反义基因干预治疗的有效性,为乳腺癌的基因治疗进行了有益探索。     

二烯丙基二硫对HL-60细胞血管内皮生长因子表达及分泌的影响

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对白血病细胞株 HL-60的生长抑制作用和对 HL-60细胞血管内皮生长因子(VFGF)mRNA 的表达及 VEGF 蛋白分泌的影响。方法采用 MTT 法观察DADS 对体外培养的 HL-60细胞的生长抑制;应用 ELISA 法检测药物作用前后 HL-60细胞培养上清液中 VEGF 蛋白的含量;半定量 RT-PCR 法检测药物作用前后 HL-60细胞 VEGF mRNA 表达水平。结果DADS 对 HL-60细胞具有明显的生长抑制效应,0.625,1.250和2.500μg/ml DADS 作用 HL-60细胞24 h 的细胞生长抑制率分别为(8.19±3.34)%,(16.79±2.07)%,(21.30±2.72)%;作用48 h 的细胞生长抑制率分别为(11.93±3.93)%.(22.81±2.31)%,(30.74±2.03)%;作用72 h 的细胞生长抑制率分别为(16.68±2.37)%,(28.54±3.26)%,(36.59±2.37)%,其对 HL-60细胞的生长抑制率与药物浓度有明显依赖关系(r>0.9,P<0.01),各实验组随作用时间增加抑制率明显增加(r>0.7,P<0.01);0.625,1.250,2.500 μg/ml DADS 作用 HL-60细胞48 h 和72 h 与空白对照相比均能下调HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白的分泌(P<0.01),三个不同浓度 DADS 组间差异均有统计学意义(P<0.01),其下调 HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白的分泌效果与药物浓度呈相关性(r>0.9,P<0.01)。结论 DADS 能明显抑制 HL-60细胞的增殖;DADS 可能通过抑制 HL-60细胞 VEGF mRNA 的表达及 VEGF 蛋白分泌发挥抗白血病的效应。     

瑞舒伐他汀干预ox-LDL诱导的THP-1细胞株中MMP-2、MMP-9的表达研究

目的 瑞舒伐他汀是目前经临床试验证实能够稳定并逆转动脉粥样硬化病变进展的他汀类药物,本实验主要探讨药物干预后基质金属蛋白酶(MMP)-2,9在动脉粥样硬化斑块稳定中的机制.方法 人单核细胞株(THP-1)经佛波酯(PMA)诱导贴壁为巨噬细胞后,利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)80 mg/L与巨噬细胞共同孵育,分别给予不同药量(0,2,4,7和10 ng/ml)的瑞舒伐他汀进行干预,应用RT-PCR法检测上述组细胞中MMP-2,MMP-9 mRNA表达结果;应用ELISA的方法检测各实验组的上清液中MMP-2、MMP-9的表达.结果 7、10 ng/ml瑞舒伐他汀可以使MMP-2和MMP-9的蛋白表达量和mRNA的表达与其对照组相比均有显著性差异(P<0.01),无论是蛋白表达还是mRNA的表达均具有随药物浓度的增加而降低的趋势.结论 瑞舒伐他汀可以降低MMP-2和MMP-9在THP-1源性巨噬细胞中的表达,这有利于动脉粥样硬化斑块的稳定.