鞘内注射醋酸泼尼松龙对背根节压迫大鼠的镇痛作用及其机制的探讨

目的：研究鞘内注射醋酸泼尼松龙（PA）对背根节慢性压迫（CCD）大鼠痛阈和脊髓背角nNOS表达的影响及其镇痛机制.方法：鞘内置管手术成功雄性SD大鼠100只,随机分为7天组和15天组两组,每组再随机分为假手术（Sham）组,人工脑脊液（ACSF）组,鞘内注射PA 0.5、1.0、2.0mg/kg组（n=10）.分别于CCD术前（0）及术后1,3,5,7,9,11,13,15天采用von Frey纤毛机械刺激法和热辐射刺激法评定大鼠机械刺激缩足反射阈值（PWMT）和热刺激缩足反射潜伏期（PWTL）;术后第7天和第15天运用免疫组织化学法和Western blot法观察脊髓背角nNOS表达的变化.结果：与术前基础阈值相比,除假手术组外,CCD术后各组的PWMT和PWTL均出现明显地下降（P＜0.01）,各组间无明显差异（P＞0.05）.术后第5天开始,PA 2.0 mg/kg组与ACSF组相比,PWMT和PWTL显著升高（P＜0.05）.免疫组织化学方面,背根节压迫后第7和第15天,ACSF组与PA 0.5、1.0 mg/kg组脊髓背角阳性神经元数量明显增多,三组之间比较无显著差异（P＞0.05）.PA 2.0 mg/kg组和ACSF相比,第7天和第15天均显著降低（P＜0.01）.脊髓背角Westernblot检测与免疫组织化学的结果基本一致.结论：鞘内注射PA有镇痛作用,其作用机制可能与抑制脊髓背角nNOS的表达有关.     

重复经颅磁刺激对神经病理性疼痛大鼠脊髓内星形胶质细胞的抑制作用

目的观察低频和高频重复经颅磁刺激（rTMS）对大鼠神经病理性疼痛的疗效及其对大鼠脊髓内星形胶质细胞标志物胶质酸性纤维蛋白（GFAP）的影响,探讨rTMS治疗神经病理性疼痛的机制。 方法28只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、假治疗组、低频rTMS组(1Hz)、高频rTMS组(20Hz),每组7只。假手术组仅暴露游离大鼠坐骨神经,不予结扎;其余3组经手术结扎坐骨神经制作神经病理性疼痛模型。术后第3天开始进行rTMS治疗,连续10d,刺激疼痛对侧大脑初级运动皮质。并于造模前、rTMS治疗前和治疗后测定疼痛行为学表现、机械痛觉和热痛觉,并于治疗结束后测定腰段脊髓内GFAP的表达。 结果造模后3d,假治疗组、低频rTMS组、高频rTMS组大鼠均出现明显的疼痛行为学表现,热痛潜伏时较假手术组均明显降低(P<0.05)。rTMS治疗后,高频rTMS组热痛潜伏时较假治疗组升高(P<0.05),而低频rTMS组无明显变化。与假手术组比较,假治疗组和低频rTMS组损伤侧脊髓背角内GFAP阳性表达细胞数量和染色强度均明显增加(P<0.05)。与假治疗组比较,高频rTMS组脊髓背角GFAP的表达显著下调（P<0.05）,而低频rTMS无此改变。高频rTMS组大鼠疼痛改善程度与脊髓背角中GFAP的表达呈负相关。 结论坐骨神经结扎导致的神经病理性疼痛伴有脊髓背角内星形胶质细胞增殖;高频rTMS可以通过抑制脊髓内星形胶质细胞的增殖和活性而缓解疼痛,低频rTMS则无明显效果。     

鞘内注射胶质细胞抑制剂对CCD大鼠脊髓星形胶质细胞的影响

[目的]研究鞘内注射氟代柠檬酸(fluorocirrate FC)和米诺四环素(minocychine MC)对背根节慢性压迫模型(the experiment model for chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化增殖的影响.[方法]采用大鼠脊髓背根节慢性压迫实验模型,96只鞘内1管SD大鼠分为第7天组(A组)和第14天组(B组),每组随机分为六个亚组组,每小组(n=8)包括:假手术(sham)组,CCD组,溶荆磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)组(0.01mmol/L PBS20μL i.t.),FC组(lμmol/LFC 20μL i.t.),MC组(5g/LMC20μL i.t.),MC FC组(lμmol/L FC和5g/L MC混合演20μL i.t.).术后每天给药一次.分别于术后d7和d14运用免疫荧光化学方法观察脊缱背角胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.[结果]脊髓背角GFAP阳性表达CCD、PBS、FC组在Ⅰ～Ⅳ层都表达明显.在数目上没有差异性,而MC、MC FC组主要集中在Ⅰ～Ⅱ层,Ⅲ、Ⅳ层在数目上有明显减少.CCD组和PBS组胞体比其余各组明显肥大.[结论]鞘内给药后,慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达减少,提示小胶质细胞抑制刑MC能很好的抑制星形胶质细胞的活化,小肢质细胞在星形胶质细胞活化的形成和维持中可能起重要作用.     

脊神经结扎神经病理痛模型大鼠脊髓星形胶质细胞激活与痛行为的关系

目的：研究L5脊神经结扎模型大鼠脊髓星形胶质细胞的激活与痛行为之间的关系。方法：44只雄性SD大鼠180—220g，随机分成4组，分别为假手术组、脊神经结扎1天、3天和7天组。行为学上使用von Frey Hair测定大鼠在上述各时间点50％缩足阈的变化（n=8），星形胶质细胞的激活使用免疫组织化学方法观察其特异性标志物GFAP的染色情况（n=3）。结果：（1）脊神经结扎后1天动物出现机械性痛超敏，3天和7天痛行为稳定并持续存在；假手术组未见显著变化。（2）结扎侧脊髓背角星形胶质细胞在术后1天发生激活，3天和7天可见星形胶质细胞强烈的激活反应，假手术组亦可见轻微的激活。（3）脊神经结扎后，星形胶质细胞发生了激活，其激活程度和痛行为的产生和维持紧密相关。结论：脊髓背角星形胶质细胞的激活可能在神经病理痛中发挥作用。     

鞘内注射氟代柠檬酸和米诺四环素对CCD大鼠脊髓突触重塑的影响

目的研究鞘内注射（i．t．）氟代柠檬酸（FC）和米诺四环素（MC）对背根节慢性压迫模型（CCD）大鼠脊髓背角突触重塑的影响。方法采用大鼠CCD模型，48只鞘内置管SD大鼠随机分为六组：sham组（假手术组），CCD组，PBS（溶剂磷酸盐缓冲生理盐水）组（molmmol／L PBS20μl，i．t．），Fc组（1μmol／LFC20μl，i．t．），MC组（5g／LM C20μl，i．t．），FC＋MC组（1μmol／L FC和5μ/L，MC混合液20μl，i．t．）。术后每天给药1次，第14天处死，采用免疫组织化学方法和电镜技术观察大鼠脊髓背角突触数目和突触后致密物厚度的变化。结果鞘内注射氟代柠檬酸和米诺四环素第14天，大鼠脊髓背角P38阳性表达FC＋MC组明显抑制（P〈0．01），sham组次之（P〈0．05），余下四组差异无显著性；电子显微镜观察结果显示CCD组、PBS组、FC组、MC组脊髓背角突触结构明显增厚，sham组有增厚不明显（P〈0．05），FC＋MC组增厚不明显（P〈0．01）。结论鞘内给药后，在本实验剂量下，小胶质细胞抑制剂米诺四环素比星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸更好地抑制了大鼠的慢性疼痛。鞘内同时注射氟代柠檬酸和米诺四环素可抑制大鼠脊髓背角突触结构的增厚。     

脊髓背角细胞外信号调节激酶磷酸化参与调控2,4-二硝基氟苯诱导的小鼠慢性痒

目的：探讨脊髓背角细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）磷酸化对2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB）诱导的小鼠慢性痒的调控作用。方法：8～12周ICR雄性小鼠随机分为DNFB诱导组和丙酮对照组。DNFB组小鼠分别于面颊部和背部反复涂抹1.5% DNFB溶液,建立类似特异性皮炎的慢性痒模型。分别观察慢性痒模型建立后小鼠的自发性行为,以及鞘内注射MEK抑制剂U0126后小鼠自发性慢性痒行为的变化。免疫组织化学染色法分析小鼠脊髓组织磷酸化ERK（phosphrylated ERK,pERK）的表达情况。结果：面颊部诱导模型中,DNFB组小鼠的搔抓次数明显高于丙酮对照组（P<0.05）,而擦涂行为无差异,证实DNFB诱发的是痒觉;颈背部诱导模型中,DNFB组小鼠表现出剧烈的搔抓行为,而丙酮对照组的搔抓行为不明显。背部慢性痒模型建立后,分别在第1、3、7和14天鞘内注射MEK抑制剂U0126,小鼠的搔抓行为受到明显抑制（P<0.05）,且脊髓背角pERK的表达水平也明显降低（P<0.05）。pERK活化主要表达于小鼠脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层,且与神经元标志物NeuN共标,与星形胶质细胞标志物GFAP和小胶质细胞标志物Iba1不共标。结论：脊髓背角浅层神经元ERK磷酸化可能参与调控DNFB诱导的慢性痒。     

吗啡联合加巴喷丁对术后持续性痛大鼠脊髓小胶质细胞的影响

目的:观察鞘内注射吗啡联合加巴喷丁对皮肤/肌肉切口和牵拉(skin/muscle incision and retraction,SMIR)术后持续性痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化的影响。方法:选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠120只,随机分为5组(n=24):假手术组、术后持续性痛组、吗啡组、加巴喷丁组和吗啡联合加巴喷丁组。按Flatters法制作大鼠SMIR术后持续性痛模型;应用机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)评定大鼠的疼痛行为学;应用免疫荧光技术检测脊髓背角活化的小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium bindingadaptor molecule-1,Iba-1)的表达。结果:与假手术组比较,术后持续性痛组的MWT在术后第3 d、7 d、12 d、22 d明显下降(P<0.05),脊髓背角Iba-1表达在术后第3 d、7 d明显增加(P<0.05);与术后持续性痛组比较,吗啡组和加巴喷丁组的MWT和脊髓背角Iba-1的表达无明显变化;与术后持续性痛,吗啡组和加巴喷丁组比较,吗啡联合加巴喷丁组的MWT在术后第3 d、7 d、12 d、22 d明显增加(P<0.05),脊髓背角Iba-1表达在术后第3 d、7 d明显减少(P<0.05)。结论:吗啡联合加巴喷丁对大鼠SMIR术后持续性痛有镇痛作用,可能与抑制脊髓背角小胶质细胞的活化有关。     

鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠脊髓背角NMDAR、CGRP表达的影响

目的：观察鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体（NMDAR）、降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠36只,体重220～280g。随机分为4组（n=9）：对照组（C组）、假手术组（Sham组）、坐骨神经分支选择结扎切断模型组（SNI组）和PKC抑制剂组（P组）。SNI组和P组制备SNI模型,P组在SNI术后14d内每天鞘内注射PKC抑制剂11μg,其余各组给予等容量生理盐水。在SNI术前1d（基础值）及术后14d每次注射药物后测定机械痛阈和热缩足潜伏期,分别于SNI术后2、7、14d注射药物后各处死大鼠3只,采用免疫组化法测定L5节段脊髓背角NMDAR和CGRP表达水平。结果：与C组和Sham组比较,SNI组机械痛阈降低,NMDAR和CGRP表达上调（P〈0.01）,热缩足潜伏期差异无统计学意义（P〉0.05）。与SNI组比较,P组机械痛阈升提高,热缩足潜伏期延长,NMDAR和CGRP表达下调（P〈0.01）。结论：鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,并抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。     

α-硫辛酸对紫杉醇诱发的大鼠外周神经病的治疗作用

目的:建立紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病的模型,研究α-硫辛酸对紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病的治疗作用。方法:40只SD大鼠随机平均分为紫杉醇组(P组)、对照组(C组)、预治疗组(AP组)和后治疗组(PA组)。四组分别隔日给予紫杉醇2mg/kg(P组、AP组和PA组)或等量生理盐水(C组)ip,共4次。AP组和PA组分别于D0-D6和D21-D27给予α-硫辛酸25 mg/kg(ip,qd)。D0、D7、D14、D21和D28分别测量大鼠的机械痛阈和热痛阈、脊髓背角NF-κB的表达及星型胶质细胞的数量、脊髓背角和背根神经节中NF-κB的含量。结果:P组D14和D21的热痛阈显著低于C组,4g和15 g von Frey纤维刺激缩足反应显著高于C组。AP组D14和D21的热痛阈显著高于P组,4 g和15 g von Frey纤维刺激缩足反应显著低于P组。P组脊髓背角中星型胶质细胞的数量显著低于C组。AP组脊髓背角中星型胶质细胞的数量显著高于P组。C组和AP组NF-κB主要在脊髓背角星型胶质细胞的细胞浆中表达。P组和PA组NF-κB在脊髓背角星型胶质细胞的细胞核和细胞浆内同时表达。四组NF-κB在脊髓和背根神经节内的表达差异无显著意义。结论:预防性给予α-硫辛酸对紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病模型中的热痛阈下降、痛觉过敏、痛觉超敏的减少,脊髓背角星型胶质细胞数量增加和NF-κB异常激活的抑制。     

ERK-TRPV4途径参与大鼠背根神经节持续受压后痛觉敏感的脊髓中枢敏化机制的研究

摘要 目的：探讨ERK-TRPV4途径参与大鼠背根神经节持续受压(CCD)后痛觉敏感的脊髓中枢敏化的机制。 方法：选取SPF级雄性Wistar大鼠共42只,随机分为空白对照组6只,CCD手术组36只（包括术后2d、4d、7d、10d和14d,每组6只,以及免疫荧光组6只）。利用免疫共沉淀检测正常大鼠脊髓背角中ERK与TRPV4的相互联系。利用免疫组织化学染色法,观察ERK与TRPV4的分布情况。制备CCD模型,利用western blot技术检测空白对照组及术后2d,4d,7d,10d及14d,手术侧及对侧脊髓背角ERK和TRPV4蛋白表达的变化。利用免疫荧光技术观察术后4d脊髓背角中ERK和TRPV4阳性细胞数目、神经元的形态及阳性神经元比率的变化。 结果：CCD术后第2天至第10天,手术侧脊髓背角中ERK及TRPV4表达明显升高（P<0.01）。同时,手术侧脊髓背角中ERK和TRPV4阳性细胞数目、共同阳性表达细胞数及阳性神经元细胞比率均高于非手术侧（P<0.01）。脊髓背角阳性神经元分布于灰质第Ⅰ至Ⅳ层,手术侧的神经元树突棘生成增加,胞体增大。 结论：ERK-TRPV4通路参与了CCD后痛觉敏感的脊髓中枢敏化机制。     

神经病理性疼痛大鼠脊髓中星形胶质细胞GFAP及FGFRs不同表达的观察

目的:观察神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠脊髓成星形胶质细胞(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)以及纤维生长因子受体家族成员1~4(fibroblast growth factor receptor 1~4,FGFR1~4)的表达变化。方法:体重180~200g的SD雄性大鼠40只随机分为2组(n=20),分别制作模型:假手术组(sham)和模型组(SNI)。术后1,3,5,7天使用von Frey纤维针测量大鼠术侧机械痛域值(mechanical pain threshold,MPT),并在相应的时间点取各组大鼠L4~L6脊髓,使用激光共聚焦检测脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达水平以及激活状态,实时荧光定量PCR检测GFAP mRNA、FGFRs mRNA表达水平的变化情况。结果:与sham组相比,SNI组大鼠痛域值随时间下降明显,脊髓星形胶质细胞GFAP阳性细胞数和GFAP mRNA表达从术后3天起逐渐升高。FGFRs家族成员间mRNA变化存在差异:与sham组相比SNI大鼠FGFR1 mRNA表达术后第1天高。SNI组和sham组大鼠FGFR2~4 mRNA在术后5天之内维持在低水平,而SNI组大鼠在第7天显著升高,两组之间差异显著。结论:NP中脊髓星形胶质细胞GFAP的改变以及不同FGFRs mRNA的变化可能对于NP的发生与维持有重要意义。     

鞘内注射TLR3反义寡聚核苷酸对脊神经结扎大鼠的镇痛作用

目的:探讨脊髓星形胶质细胞TLR3在神经病理性疼痛中的作用.方法:雄性SD大鼠,体重180～250 g.实验一:72只鞘内置管大鼠随机分为:生理盐水(Ns)20 μl脊神经结扎(SNL)(A 组),错义寡聚核苷酸(MM-ODN)20μg/d+SNL(B组),反义寡聚核苷酸(AS.ODN)20μg/d+SNL (C组).实验二:72只SNL后7天大鼠随机分为:SNL+NS 20μl(D组),SNL+MM-ODN 20μg/d(E组),SNL+AS-ODN 20μg/d(F组).实验一和实验二分别于SNL前1天和后7天开始鞘注,每天一次,共7天;于术后-1、1、3、5、7、10、14天和-1、7、10、12、14天行行为学实验.实验一和实验二分别于术后7天和14天每组各随机取6只大鼠利用免疫组织化学法观察脊髓背角GFAP的表达,并于术后-1、3、7、14天和术后7、10、14天每组各随机取6只大鼠断头处死,取L4～5脊髓节段采用RT-PCR法测定TLR3和IL-6 mRNA的表达.结果:实验一:与A组比较,C组PWPT升高并持续至术后14天(P<0.05),C组各时间点PWL无明显变化(P>0.05);与A组和B组比较,C组脊髓背角GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积分别下降46.4%(P<0.01)和45.7%(P<0.01);与A组和B组比较,C组鞘内注射AS-ODN抑制了TLR3受体和IL-6 mRNA的表达.实验二D组、E组和F组在PWPT、PWL、GFAP表达和TLR3及IL-6 mRNA表达方面的差异无统计学意义(P>0.05).结论:脊髓背角星形胶质细胞TLR3可能参与了神经病理性疼痛的发生与发展.     

神经病理性疼痛脊髓背角GLT-1及GLAST表达的变化

目的:观察神经病理性疼痛大鼠脊髓背角GLT-1及GLAST表达变化对疼痛的影响。方法:选取雄性SD大鼠80只随机分为4组,A组(n=10)为L5背根切断假手术组,B组(n=30)为L5背根切断组,C组(n=10)为坐骨神经周围植管与药物溶剂组,D组(n=30)为坐骨神经周围植管与给药组。通过机械刺激的行为学观察确立病理性神经痛形成过程,采用免疫组化进行细胞定量。结果:A及C组胶质细胞GLT-1及GLAST表达无变化。B、D组痛敏形成后脊髓背角胶质细胞GLT-1及GLAST的胞内外表达未发生改变;B及D组小胶质细胞GLAST术后4 d表达增加至7 d后逐渐下降,而星型胶质细胞GLT-1术后6 d表达明显增加,直至14 d仍持续增高。结论:脊髓背角胶质细胞GLT-1及GLAST不存在胞吞现象,小胶质细胞参与启动病理性神经痛但不维持其发展,星型胶质细胞主要维持病理性神经痛发展,TNF-α介导病理性神经痛大鼠脊髓背角GLT-1及GLAST表达并诱导胶质细胞参与和维持病理性神经痛。     

鞘内注射氟柠檬酸对福尔马林致痛大鼠脊髓c-Fos和GFAP、OX42表达变化的影响

目的:通过鞘内注射氟柠檬酸(fluorocitrate,FCA)抑制脊髓胶质细胞功能后,对比观察足底注射福尔马林(formalin)模型大鼠热痛敏行为及脊髓后角c-Fos和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)、OX42表达的变化,以探讨脊髓胶质细胞在痛觉过敏中的作用。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为空白对照组(Blank组)、足底皮下注射生理盐水组(NS组)、足底皮下注射formalin组(F组)、鞘内注射生理盐水后皮下注射formalin组(NS+F组)、鞘内注射FCA后皮下注射formalin组(FCA+F组),每组8只。采用向大鼠右侧后肢足底皮下注射2.5%formalin(120μl)造成动物的伤害性刺激模型。造模后先测量记录各组大鼠的热刺激潜伏期(pawwithdrawalthermal latency,PWTL),然后灌注取脊髓组织切片进行抗c-Fos、抗GFAP和抗OX42标记的免疫组织化学染色。结果:足底注射formalin后,大鼠PWTL明显缩短,自发缩足反射次数明显增加,且在脊髓后角浅层有大量c-Fos、GFAP和OX42免疫产物表达;与blank照组和NS组比较,差异有统计学意义。而预先鞘内注射FCA再注射formalin后,大鼠PWTL明显延长,自发缩足反射次数明显减少(P<0.01),同时c-Fos、GFAP和OX42免疫产物表达亦明显降低(P<0.01),与F组和NS+F组比较差异有统计学意义。结论:抑制脊髓胶质细胞功能可明显减轻大鼠足底皮下注射formalin的痛觉过敏作用,脊髓胶质细胞主动参与了疼痛信息的调节作用。     

氯胺酮对脊神经结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响

目的：观察腹腔注射氯胺酮（KET）对脊神经结扎（SNL）大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响.方法：雄性SD大鼠42只随机分为五组：SHAM组;KET0组和NS0组结扎后分别腹腔注射KET 10mg/kg和生理盐水（NS）10 ml/kg;KET7组和NS7组,结扎7天后分别腹腔注射KET 10 mg/kg和NS.每组（除SHAM组）给药,每天两次,共7天.结扎后第4、7、14、21、28天行机械性痛敏实验,并用组化方法测定右侧脊髓背角胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞的变化.结果：与SHAM比较,KET0、NS0组机械痛敏试验的压力阈值（PWPT）下降,二者GFAP阳性细胞染色较SHAM深,GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积分别增加45.0%（P＜0.01）和86.7%（P＜0.01）;与NS7比较,KET7组PWPT升高,KET7组GFAP阳性细胞染色较NS7组浅,相对面积（不同时段）分别下降40.3%（P＜0.01）和24.6%（P＜0.01）.结论：低剂量的KET能抑制星形胶质细胞的激活,从而起到治疗神经病理性疼痛的作用.     

BMP7对脊髓损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响

目的:探讨局部过表达骨形态发生蛋白7 (bone morphogenetic protein 7, BMP7)对大鼠脊髓损伤后期神经病理性疼痛的影响及可能的机制。方法:采用成年雄性SD大鼠建立脊髓损伤模型,使用von Frey纤维丝测定大鼠50%机械缩足阈的变化,应用Western blot方法检测大鼠脊髓腰膨大BMP7和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein, GFAP)的表达水平。此外,在脊髓损伤后立即在损伤局部分别注入腺相关病毒载体、BMP7腺相关病毒,以脊髓损伤模型组为对照,以BMP7成功过表达作为判断病毒转染成功的指标,并观察后肢机械痛阈和腰膨大GFAP表达的变化。结果:与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠术后3～28天,后肢机械痛阈明显下降(P <0.001),BMP7表达在术后7天明显减少(P <0.01),28天后表达增加(P <0.01),GFAP表达随时间增多,21天达到峰值(P <0.001);局部注射BMP7腺相关病毒后28天,BMP7显著过表达(P <0.01),提示病毒转染成功,与载体组相比较,病毒组50%机械缩足阈在损伤后14天、21天、28天显著升高(P <0.001),并且术后28天脊髓背角GFAP表达减少。结论:局部过表达BMP7可缓解大鼠脊髓损伤后期的机械痛觉过敏现象,这可能是通过抑制脊髓背角星形胶质细胞的持续激活实现的。     

右美托咪定预处理对谷氨酸体外激活的星型胶质细胞和炎症因子分泌的影响

目的:研究右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)预处理对致痛物质谷氨酸体外激活的星型胶质细胞和炎症因子分泌的影响。方法:取新生SD大鼠大脑皮层星型胶质细胞进行原代纯化培养。用25~100 nmol/L Dex预处理原代培养的星型胶质细胞15 min后,再加入有效刺激浓度的谷氨酸共同孵育,24 h后用Western blotting检测星型胶质细胞GFAP蛋白表达水平变化,酶联免疫吸附法检测各组上清液T N F-α、IL-1β含量的变化。结果:纯化培养的星型胶质细胞经10-1000μmol/L谷氨酸刺激24h后,100、1000μmol/L谷氨酸组的星型胶质细胞GFAP的蛋白表达量均比对照组明显增加(P0.05)。与1000μmol/L谷氨酸组相比,100 nmol/L Dex预处理组星型胶质细胞GFAP蛋白表达和上清液TNF-α、IL-1β含量均明显下降(P0.05)。结论:一定剂量范围内,Dex预处理可抑制谷氨酸诱导的星型胶质细胞的活性增强和炎症因子释放。     

大鼠脊髓背角TRPV4在背根神经节持续受压致神经病理性疼痛中的作用

目的:探讨大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)持续受压(chronic compression of right side dorsal root ganglion,CCD)后脊髓背角瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)基因及蛋白变化,明确脊髓背角TRPV4在CCD致神经病理性疼痛中的作用。方法:采用健康成年雄性Wistar大鼠,共36只,随机分为3组,分别为空白对照组、CCD手术组、CCD+钌红组。制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术前1天、术后第7天、给药前及给药2h后,测量大鼠机械刺激缩爪反应阈值,观察机械痛阈的变化;利用RT-PCR及Western Blot技术检测各组大鼠手术侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达的变化。结果:与空白对照组相比,术后第7天,CCD组大鼠术侧机械痛阈值明显下降(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高(P0.05);与给药前相比,给予钌红2h后,术侧机械痛阈值明显升高(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论:CCD后大鼠术侧机械痛阈下降,脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高;钌红可部分逆转CCD后痛觉过敏,部分降低脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达。脊髓背角TRPV4参与CCD后大鼠神经病理性疼痛形成。     

单关节炎诱导胶质细胞在大鼠颈、胸、腰、骶段脊髓背角的活化

目的:探讨小胶质细胞和星形胶质细胞在单关节炎大鼠颈、胸、腰、骶段脊髓背角的活化.方法:16只SD雄性大鼠随机均分为正常对照组和单关节炎组(n=8).左侧踝关节腔注射完全弗氏佐剂(complete Freund' s adjuvant,CFA)建立单关节炎模型.分别采用Hargreaves’法和von Frey纤毛测定单关节炎大鼠双侧后爪致炎前及致炎后3d的热刺激缩爪反应潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)、机械刺激抬腿反应阈值(paw withdrawal threshold,PWT).行为学测定结束后,每组取4只大鼠,灌注后取脊髓颈、胸、腰、骶段,采用免疫荧光组织化学法检测Iba-1(小胶质细胞标记物)和GFAP(星形胶质细胞标记物)在大鼠脊髓背角的表达情况.结果:单关节炎组大鼠致炎侧后爪的PWL和PWT值在致炎3d后均显著低于对照组(P＜0.01),对侧后爪差异无显著性(P＜0.05).单关节炎组大鼠致炎3d后,Iba-1和GFAP的荧光强度在颈、胸、腰段脊髓的双侧背角相较于对照组均明显增高,差异有显著性(P＜ 0.05或P＜0.01),而在骶段无统计学差异(P＜0.05),但有明显增加趋势.致炎侧和对侧脊髓背角Iba-1和GFAP的荧光强度在颈、胸、腰、骶各节段差异均无统计学意义(P＜0.05).结论:单关节致炎导致大鼠患侧后爪出现触诱发痛和热痛觉过敏,并诱导小胶质细胞和星形胶质细胞在大鼠颈、胸、腰段双侧脊髓背角的活化.     

低能量激光对大鼠背根神经节持续受压后痛觉敏感及TRPV4表达的影响

目的:观察低能量激光对大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后痛觉敏感及脊髓背角内TRPV4表达及分布的影响。方法:选取健康雄性Wistar大鼠36只,分为空白组、CCD组、激光组各12只,各组均给予常规饲养。激光组在CCD后第4天经皮肤给予L4/L5脊髓节段处810nm低能量激光治疗7天,输出功率150mw,10min/次。并于术前,术后第4、7、11天,分别测量各组大鼠机械刺激缩爪反应阈值和热缩爪潜伏期,观察机械痛阈和热痛阈的变化。同时,利用Western Blot检测各组术后11天TRPV4在脊髓背角中蛋白表达的变化,利用免疫荧光技术检测各组术后11天TRPV4阳性细胞分布。结果:与空白组相比,CCD组在术后第4、7、11天,机械痛阈和热痛阈均降低(P<0.01),与CCD组相比,激光组在术后第7、11天时,机械痛阈和热痛阈明显增高(P<0.01)。与空白组相比较,CCD组大鼠脊髓背角中TRPV4表达显著上调(P<0.01),TRPV4阳性细胞数目升高;给予低能量激光治疗后,激光组脊髓背角TRPV4的蛋白表达较CCD组显著下调(P<0.01),TRPV4阳性细胞数目低于CCD组(P<0.01)。结论:低能量激光治疗可降低CCD后大鼠脊髓背角中TRPV4蛋白表达,减少阳性细胞数目,影响TRPV4对神经病理性疼痛的中枢敏化的作用,缓解CCD后所致的痛觉敏感。