鞘内注射维生素B_6对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG神经元p-ERK表达的影响

目的:观察维生素B_6(VitB_6)对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏及L4～L5背根神经节(DRG)磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)表达的影响.方法:选择6只正常SD大鼠作为对照组(control),另选择鞘内置管3天后无神经损伤症状的SD雄性大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组(sham):只分离坐骨神经;CCI组:结扎坐骨神经;CCI+Vit B6组:坐骨神经结扎后鞘内注射VitB_610mg/kg/d,连续两周.各组术前2天和术后1、3、5、7、10、14天测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT).除control组外其余各组分别在术后3d、7d和14d处死大鼠,采用免疫组织化学法观察L4～5 DRG和p-ERK的表达.结果:与sham组比较,CCI组术后各天TWL、MWT明显降低(P＜0.01);与CCI组比较,CCI+VitB_6组术后3、5、7、10、14天TWL明显增高(3天P＜0.05,5、7、10、14天P＜0.01),而术后各天MWT无明显差别.术后3、7、14天,CCI组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显高于sham组(P＜0.01),CCI+Vit B_6组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显低于CCI组(P＜0.01).结论:背根神经节ERK活化参与神经病理性疼痛信号传递,鞘内注射Vit B_6抑制CCI大鼠热痛敏,其机制可能包括通过上游机制抑制ERK激活.     

尼氟灭酸对CCI模型鼠DRG神经元TMEM16A表达的抑制作用

目的:观察尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)干预后,TMEM16A在坐骨神经压榨性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上的表达,研究TMEM16A是否参与神经病理性疼痛。方法:制备CCI模型,热板实验检测热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。在模型制备后第1 d开始以腹腔注射形式给予不同浓度的NFA干预14 d,取大鼠L4~6 DRG神经元进行实验。免疫荧光实验明确TMEM16A在DRG神经元中的分布;运用RTPCR技术和Western Blot技术在给予不同浓度NFA干预后,检测CCI模型DRG神经元上TMEM16A的mRNA水平和蛋白的表达。结果:(1)CCI组的TWL较正常组明显缩短,给予10μM、50μM和300μM的NFA干预后,各组TWL较CCI组均明显延长(P<0.01,n=6);50μM的NFA干预组较10μM的NFA干预组TWL也明显延长(P<0.05,n=6);但300μM的NFA干预组与50μM的NFA干预组相比,TWL时间差异无统计学意义。(2)免疫荧光显示TMEM16A主要存在于DRG神经元上;(3)CCI组mRNA水平较正常组明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元TMEM16A的mRNA水平较CCI组逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.01,n=6)。(4)CCI组TMEM16A蛋白表达较正常组的明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元上TMEM16A蛋白表达较CCI组逐渐减低,差异具有统计学意义(P<0.01,n=6)。结论:尼氟灭酸能抑制神经病理性疼痛大鼠DRG神经元TMEM16A的表达,而且与尼氟灭酸的剂量相关,提示钙激活氯通道可能参与或调控神经病理性疼痛的发生。     

氯离子转运体在神经病理性疼痛大鼠背根神经节上表达的研究

目的:为了探讨氯离子转运体的表达及其功能在神经病理性疼痛的产生和维持中的作用。方法:建立大鼠坐骨神经压迫模型(chronic constriction injury,CCI);检测大鼠热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);应用免疫组化、Western Blot技术检测钠-钾-氯共转运体1(sodium-potassium-chloride co-transorter 1,NKCC1)和钾-氯共转运体2(potassium-chloride co-transorter2,KCC2)在CCI模型背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上表达的改变;应用氯离子荧光探针MQAE(N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide)检测DRG神经元氯离子浓度的变化。结果:(1)CCI组大鼠TWL较正常对照组明显缩短(P<0.01,n=10),至术后21天测试结束仍较明显(P<0.05,n=10)。假手术组与正常组差异无统计学意义。(2)正常情况下,NKCC1微弱表达于DRG大、中、小型神经元,KCC2未见表达。CCI模型术后第7天、14天、21天,NKCC1表达增加,KCC2未见表达。(3)CCI组大鼠术后第7天DRG、NKCC1阳性细胞计数、中型神经元显著增加(P<0.01,n=1000);术后第14天,中、小型神经元增加(P<0.01,n=1000);术后第21天,中型神经元增加(P<0.01,n=1000)。(4)CCI术后14、21天DRG神经元NKCC1蛋白表达显著增加。(5)CCI术后7、14天DRG神经元中氯离子浓度明显升高(P<0.05,n=1000)。结论:神经病理性疼痛发生时,NKCC1在DRG神经元表达异常增加,引起细胞内Cl-浓度升高,继而可能参与了介导初极感觉外周末梢去极化(primary afferent depolarization,PAD)或/和诱发初极感觉中枢末梢端的背根反射(dorsal root reflexes,DRRs)引发痛觉过敏和异常疼痛产生。     

P2X_3受体的上调参与大鼠吗啡耐受的发生

目的:观察鞘内注射吗啡对背根神经节(DRG)神经元中P2X3受体的激活和表达的影响,同时探讨合并应用P2X3受体特异性抑制剂A-317491对大鼠鞘内吗啡耐受的影响。方法:鞘内置管成功的SD大鼠随机分为六组,每组7只:M3组,吗啡3天,每天单次鞘内给15μg/10μl吗啡,继而用10μl生理盐水冲管;M5组,吗啡5天(剂量及给药方式同前);M7组,吗啡7天(剂量及给药方式同前);M+A组,A-317491合并吗啡7天,每天单次鞘内注射抑制剂A-317491(15μg/10μl),30 min后给吗啡(15μg/10μl),每次给药后用10μl生理盐水冲管;A组,A-317491 7天,每天单次鞘内给抑制剂A-317491(15μg/10μl),继而用10μl生理盐水冲管,连续7天;S组,每天单次鞘内给20μl生理盐水。每次给药前及给药后30 min动态检测大鼠后肢50%缩爪阈值,以及热痛阈甩尾潜伏期,以评估吗啡耐受的发生。于给药后第8天测定痛阈后将大鼠处死,取L3~5节段背根神经节(DRG)进行蛋白印记和免疫荧光化学染色,观察DRG中P2X3的蛋白及免疫阳性细胞表达。结果:(1)鞘内给予P2X3受体特异性拮抗剂A-317491可明显延缓大鼠吗啡耐受的发展;(2)鞘内给予吗啡可致大鼠脊髓背根神经节中P2X3受体的表达呈时间依赖性的增加;3、慢性鞘内吗啡处理可激活DRG神经元中P2X3受体的表达,而给予A-317491后可以抑制这种表达的增加。结论:鞘内慢性吗啡处理可激活大鼠DRG神经元中的P2X3受体的表达,而选择性抑制P2X3受体可一定程度上抑制吗啡耐受的发生。     

cAMP-PKA信号通路介导大鼠骨癌痛的产生和维持

目的:探讨c AMP-PKA信号通路在大鼠骨癌痛发生发展中的作用。方法:雌性SD大鼠52只,随机分为5组:正常组(n=8),假手术组(n=8),骨癌痛组(n=12),骨癌痛+生理盐水组(n=8)和骨癌痛+PKA抑制剂组(n=16)。各组于造模前3天、1天以及造模后1、3、5、7、10、14天分别测定热缩足阈值和机械缩足阈值。PKA抑制剂Rp-c AMPS(1 mmol/20μl)分别于造模后早期(3、4、5天)和造模后后期(7、8、9天)经鞘内注射(每天1次)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠背根神经节(DRG)和脊髓中c AMP的浓度和PKA的活性。结果:造模后,大鼠DRG和脊髓中c AMP的浓度显著增高,PKA的活性明显增强,与假手术组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。早期和后期给予PKA抑制剂Rp-c AMPS治疗,均能显著延迟或抑制骨癌诱发的热痛敏和机械痛敏(P<0.01)。结论:骨癌显著增强DRG和脊髓中c AMP-PKA信号通路的活性,该信号通路的异常活动在骨癌痛的产生和维持中起着重要作用,抑制该信号通路的激活能有效减轻骨癌痛。     

术前给予巴氯酚延迟坐骨神经松结扎神经病理痛的形成

目的研究术前鞘内注射GABAB受体激动剂巴氯酚(Bac)对慢性神经病理痛大鼠痛阈的影响,探讨脊髓GABA能系统在神经病理痛调节中的作用。方法建立慢性坐骨神经结扎损伤模型(CCI),SD大鼠32只随机分成4组:假手术组,大鼠左侧坐骨神经分离,但不结扎,术前鞘内注射生理盐水10μL;神经结扎组,大鼠左侧坐骨神经松结扎,术前鞘内注射生理盐水10μL;Bac 1组,大鼠左侧坐骨神经松结扎前10 min,鞘内注射Bac 0.03μg;Bac 2组,大鼠左侧坐骨神经松结扎前10min,鞘内注射Bac 0.3μg。术后第1、3、5、7、10、14天测大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL)以及运动功能。结果术后第1~14天神经结扎组大鼠MWT和TWL较假手术组大鼠明显降低(P<0.05);术前给Bac 0.3μg的坐骨神经结扎大鼠与术前给生理盐水的坐骨神经结扎大鼠比较,术后第1~5天MWT和TWL明显升高(P<0.05)。结论坐骨神经结扎前鞘内注射Bac 0.3μg可延缓大鼠神经病理性疼痛的形成。     

鞘内注射右美托咪定对神经病理性疼痛大鼠DRG神经元GABA_A受体激活电流的影响

目的:观察鞘内注射右美托咪定对神经病理性疼痛大鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元GABA_A受体激活电流的影响。方法 :鞘内置管成功的雄性SD大鼠36只,体重180～220g,采用随机数字表法随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(CCI组)、右美托咪定+神经病理性疼痛组(D组)。S组和CCI组鞘内注射生理盐水每日10μl/次,D组鞘内注射右美托咪定2μg/kg,生理盐水稀释至10μl,每日1次,持续至术后14 d。各组于术前1 d (T0),术后3、5、7、10、14 d(T1-5)时测试热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL)。于术后T5时测试完TWL后处死大鼠,在急性分离的DRG细胞上,运用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度药物作用下各组背根神经节细胞GABA_A受体激活电流的变化。结果 :(1)与S组比较,CCI组和D组T1-5时TWL均缩短(P <0.05);与D组比较,CCI组T1-5时TWL均缩短(P <0.05)。(2)GABA (0.1～1000.0μmol/L)可以使85.7%(102/119)的DRG神经元产生浓度依赖性的内向电流,而且这种内向电流能被GABA_A受体选择性拮抗剂荷包牡丹碱(100μmol/L)所阻断。(3)CCI组在不同浓度(0.1～1000.0μmol/L) GABA激活电流幅值均小于S组和D组(P <0.05);D组在不同浓度(0.1～1000.0μmol/L) GABA激活电流幅度小于S组(P <0.05)。结论:右美托咪定通过增强GABA_A受体介导的突触前抑制作用,可能是其缓解神经病理性疼痛的机制之一。     

巴氯芬抑制CCI神经病理性疼痛模型大鼠DRG神经元上GABA_A受体功能

目的:观察巴氯芬干预前后GABAA受体γ2亚基在坐骨神经压榨性损伤(Chronic Constriction Injury,CCI)模型大鼠背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)神经元上的功能和表达变化。方法:制备CCI模型,热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期(Thermal Withdrawal Latency,TWL);以灌胃的方式给予CCI模型鼠巴氯芬干预14天,取大鼠L4^L6 DRG神经元进行膜片钳实验,观测巴氯芬干预前后CCI模型鼠DRG神经元GABA介导的内向电流变化;应用Western blot技术检测巴氯芬干预前后CCI模型鼠GABAA受体γ2亚基的表达变化。结果:(1)CCI模型大鼠的TWL比正常组明显缩短,巴氯芬干预组模型大鼠的TWL较CCI模型组明显延长(P<0.05);(2)巴氯芬抑制CCI模型大鼠DRG神经元GABA介导的内向电流(P<0.05);(3)CCI手术侧和手术对侧DRG神经元上GABAA受体γ2亚基的表达量下调(P<0.05),但是磷酸化γ2亚基表达量上调(P<0.05);巴氯芬干预后的GABAA受体γ2亚基表达量较CCI组下调,磷酸化的γ2亚基表达量较CCI组上调。结论:神经病理性痛状态下,GABAA受体γ2亚基发生磷酸化可能是GABA介导的突触前抑制作用减弱的原因之一,而巴氯芬可能通过磷酸化GABAA受体γ2亚基抑制GABAA受体功能。     

脊髓背角P2Y_(12)受体/P38MAPK参与MRS2395对CCI大鼠的镇痛作用

目的:观察鞘内注射P2Y12受体拮抗剂MRS2395对慢性坐骨神经结扎(chronic constriction injury,CCI)大鼠机械痛阈及脊髓背角P2Y12受体、P2X4受体和P38MAPK表达变化的影响,探讨P2Y12受体参与神经病理性疼痛的相关机制。方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):假手术组、CCI模型vehicle组(鞘内注射0.005%DMSO生理盐水)、MRS2395处理组(CCI+鞘内注射MRS2395 100 pmol/L)。CCI及MRS2395处理组大鼠均于鞘内置管7天之后行坐骨神经结扎,连续14天鞘内注射0.005%DMSO生理盐水、MRS2395(100 pmol/L),每天2次,在术前1天、术后第1、3、5、7、10、14天测定给药1 h后机械缩足反射阈值(mechanical withdraw threshold,MWT);在第7、14天处死大鼠,取脊髓背角,免疫印迹观察P2Y12受体、P2X4受体和P38 MAPK表达变化。结果:大鼠CCI术后1天即可出现机械痛敏;与假手术组相比,CCI组第1、3、5、7、10、14天MWT明显降低(P<0.01);与CCI组相比,MRS2395处理组术后第1,3,5,7天MWT明显升高(P<0.01);术后10天和14天MWT升高较缓(P<0.05)。与假手术组相比,CCI组第7、14天背角P2X4受体、P2Y12受体和P38 MAPK表达明显上调(P<0.05);与CCI组相比,MRS2395处理组第7、14天P2Y12受体和P38MAPK表达上调均明显减弱(P<0.05);MRS2395处理组不影响CCI组第7天P2X4受体表达,但可以明显抑制CCI组第14天P2X4受体表达上调(P<0.05)。各组大鼠脊髓背角P2Y12受体和P2X4受体表达之间存在正相关。结论:鞘内注射P2Y12拮抗剂MRS2211可以明显抑制CCI大鼠机械痛敏症状;而且脊髓背角P2X4受体和P38 MAPK表达下调。这提示P2Y12受体拮抗剂可能通过影响脊髓背角小胶质细胞P2X4受体和P38 MAPK表达,在脊髓水平发挥镇痛作用。     

miR-146a激动剂对大鼠神经病理性疼痛行为学和IRAK1、TRAF6表达的影响

目的:探讨mi R-146a激动剂(agomi R-146a)经鞘内给药对大鼠神经病理性疼痛的影响。方法:雌性SD大鼠16只,体重200~250g,采用随机数字表法随机分为对照组(n=8)和agomi R-146a组(n=8),两组均行双侧坐骨神经结扎手术,于手术当天及术后第3、5、7、10天分别经鞘内注射体积为15μl的agomi R-对照组或agomi R-146a(5nmol溶于生理盐水),于术前及术后第1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应。实时定量PCR法检测术后第14天大鼠L4~6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中mi R-146a、白介素1受体相关激酶(interleukin-1receptor-associated kinase 1,IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor-associated factor 6,TRAF6)的m RNA表达水平;Western-blot法检测IRAK1及TRAF6蛋白表达水平变化。结果:agomi R-146a组大鼠缩足反射热辐射潜伏期自建模后3天显著增加,而缩足反射机械刺激阈值在建模后7和14天比对照组明显升高(P<0.05)。与对照组相比,术后14天agomi R-146a组mi R-146a表达显著上调(P<0.05),IRAK1、TRAF6的m RNA表达水平下降(P<0.05);agomi R-146a组IRAK1、TRAF6蛋白水平亦明显降低(P<0.05)。结论:mi R-146a激动剂agomi R-146a经鞘内给药可以减轻大鼠神经病理性疼痛,可能为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点。     

慢性手术后疼痛的类型及伴随症状分析

目的:慢性手术后疼痛患者临床上并非罕见,主要是人们缺乏认识和经验,本文通过临床调查、分析疼痛的性质、特征和伴随症状,以期引起临床外科医师的关注和重视.方法:通过收集门诊和住院共计70例慢性手术后疼痛患者统计资料.分别记录疼痛种类、程度、性质、住院次数、手术次数、心理和行为变化、失望和无助感、工作质量、生活质量、睡眠状态、体能状态等指标进行分析.结果:70例慢性手术后疼痛患者的平均病程为18个月;疼痛性质以紧束样疼痛为主(50/70,71.44%);其次为烧灼样疼痛(11/70,15.71%),闪电样疼痛(5/70,7.14%)牵拉样疼痛(4/70,5.71%);平均住院次数为3.5次,平均就诊科室为5.8个,平均VAS评分为4.6分～7.8,大多数患者有不同程度的求医失望或无助感(65/70,92.8%)、睡眠障碍(64/70,91.4%)、体能和生活质量降低(53/70,75.71%).结论:本组慢性手术后疼痛患者疼痛性质以紧束样疼痛为主,盆腔手术以烧灼疼痛为主,大多数患者有不止一次的住院经历和不同程度的心理异常、睡眠障碍、无助感或求医无门的感觉.临床医师应该逐步关注慢性手术后疼痛患者.     

中国人对20种常见疼痛的体验和描述的调查

目的:了解国人对20种常见疼痛的体验和描述特点.方法:对503名汉语(普通话)志愿者进行关于20种常见的急、慢性疼痛的问卷调查.请受访者根据自己的经历,用视觉模拟评分法(VAS)对曾经历过的疼痛症状进行评分,并用简单词汇对每项疼痛的症状给予描述.将回收的问卷资料进行以下方面的统计分析:逐项分别计算每种疼痛的发生率、VAS平均分、涉及的描述词汇的数量及每个描述词的认同率,选出认同率≥10%的描述词汇作为每种疼痛的常用描述词汇. 结果:分别得出了20种常见疼痛在受访者中的发生率、VAS平均分、涉及的描述词汇数量及每个描述词的认同率,列出了各种疼痛的常用描述词汇及其认同率. 结论:国人对20种常见疼痛的体验不同,对各种疼痛症状的描述具有一定特点和规律.