LncRNA FoxD2-AS1靶向miR-324-5p对结肠癌SW480细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) FoxD2-AS1是否通过靶向miR-324-5p影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭。方法 RT-qPCR检测人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株SW480、HCT116和HT29中FoxD2-AS1和miR-324-5p表达水平; MTT法检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞增殖活力的影响; Transwell小室实验检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因实验检测FoxD2-AS1是否靶向miR-324-5p。结果与NCM460细胞相比,结肠癌各细胞株中FoxD2-AS1表达明显上调(P 0. 05),miR-324-5p表达明显下调(P 0. 05);双荧光素酶报告基因实验证实FoxD2-AS1靶向抑制miR-324-5p的表达; MTT和Transwell小室实验结果表明,干扰FOXD2-AS1和过表达miR-324-5p后结肠癌SW480细胞增殖活力均明显降低,细胞迁移和侵袭能力均明显减弱;与干扰FOXD2-AS1相比,同时干扰FOXD2-AS1和miR-324-5p后细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P 0. 05)。结论 lncRNA FOXD2-AS1通过靶向负调控miR-324-5p的表达影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

circPRMT5在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响

目的探讨环状蛋白精氨酸甲基转移酶5(circPRMT5)在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响。方法选择2018年10月至2019年10月该院收治的93例结肠癌患者为研究对象,收集手术切除的结肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹法(Western blot)检测结肠癌组织及癌旁正常组织中circPRMT5蛋白表达量。将人结肠癌SW480细胞分为空白对照组、阴性对照组、试验组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染10μg pEGFP-N1质粒,试验组转染10μg pEGFP-N1-circPRMT5质粒,采用CCK-8法检测各组SW480细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭试验检测各组SW480细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,采用Western blot检测各组SW480细胞中circPRMT5蛋白表达量。结果结肠癌组织中circPRMT5蛋白表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);试验组SW480细胞增殖率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量显著高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);试验组SW480细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);阴性对照组SW480细胞增殖率、凋亡率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论circPRMT5在结肠癌患者中呈高表达,circPRMT5高表达能够促进结肠癌细胞增殖、侵袭,抑制结肠癌细胞凋亡。     

TAB3过表达促进结肠癌的上皮间质转化和侵袭迁移的研究

目的观察过表达TAB3对结肠癌细胞SW620的上皮间质转化(EMT)和侵袭迁移能力的影响,探究TAB3对NF-κB的影响以及NF-κB在TAB3调控结肠癌EMT和侵袭迁移中的作用,为阐明TAB3在结肠癌发生发展过程中的作用及其分子机制提供理论依据。方法通过qRT-PCR和Western blot检测结肠癌与癌旁组织中TAB3的表达情况。利用结肠癌细胞株SW620构建稳定过表达TAB3的细胞,应用Western blot检测EMT相关分子标记物Vimentin、E-cadherin的表达变化;利用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。结果与癌旁组织相比,TAB3在结肠癌组织中呈高表达;过表达TAB3后,结肠癌细胞SW620中Vimentin表达升高,E-cadherin表达下降;划痕实验和Transwell侵袭实验显示过表达TAB3能够上调SW620细胞的侵袭和迁移能力;此外,过表达TAB3使p65表达增加,核内分布增多;NF-κB抑制剂能够减弱过表达TAB3对结肠癌EMT和侵袭迁移的促进作用。结论 TAB3在结肠癌中高表达,其通过NF-κB信号通路调控结肠癌的EMT和侵袭迁移。     

TLR2通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨Toll样受体2(TLR2)通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭发生的机制。方法于陕西省咸阳市泾阳县医院普通外科采集20例配对的结肠癌组织及正常癌旁组织,其中男12例,女8例,采用免疫组化染色法检测人结肠癌组织及正常癌旁组织中TLR2表达。采用TLR2激动剂Pam3Cys(P3C)(0.1、1.0、10.0μg/mL)处理SW480及HCT116细胞作为观察组(P3C组),未作处理的细胞作为空白对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测人结肠癌细胞株HCT116、SW480增殖情况。采用划痕试验及Transwell小室检测细胞迁移能力及侵袭能力。采用蛋白免疫印迹法检测TLR2对结肠癌细胞PI3K/Akt和NF-κB通路的影响。结果免疫组化染色结果显示:结肠癌组织中TLR2蛋白表达阳性率为80%(16/20),明显高于正常癌旁组织的35%(7/20,P0.05)。划痕试验结果显示:HCT116经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05);SW480经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05)。Transwell试验结果显示:HCT116经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01);SW480经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01)。采用10.0μg/mL P3C刺激HCT116、SW480细胞,随着时间推移TLR2蛋白表达逐渐升高,磷酸化Akt及NF-κB表达显著升高。结论 TLR2高表达于结肠癌组织,可通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭。     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞侵袭的影响

目的:观察雌激素受体β(ERβ)过表达对侵袭转移相关基因E-钙黏蛋白和CXCR4表达的影响,研究其对大肠癌细胞侵袭能力的影响.方法:以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆(SW480-C1-ERβ).以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞(SW480-pEGFP-C1)作为对照,在有或无雌激素作用的条件下.利用Transwell小室法测定SW480、SW480-pEGFP-C1和SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力:采用Western blot法检测各组细胞中E-钙黏蛋白和CXCR4蛋白的表达.结果:在无雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力和CXCR4的表达显著低于另两株细胞(P<0.05).有雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞在三者中的侵袭能力最低,E-钙黏蛋白的表达最高(P<0.05),而CXCR4表达无明显变化.在SW480-C1-ERβ组细胞中,雌激素作用时肿瘤细胞的侵袭能力和E-钙黏蛋白的表达分别明显低于和高于无雌激素作用时的细胞(P<0.05),而CXCR4的表达无明显差异.结论:ERβ可以以配体非依赖性的方式和配体依赖性的方式抑制大肠癌细胞的侵袭转移,这种效应可能与调控E-钙黏蛋白和CXCR4的表达有关.     

Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

miR-29靶向MET蛋白对结肠癌细胞的增殖和侵袭影响

目的探究miR-29通过靶向酪氨酸激酶受体(MET蛋白)对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法将miR-29-mimic(miR-29-mimic组)、miR-29-inhibitor(miR-29-inhibitor组)和空白对照(NC组)转染至结肠癌细胞,检测miR-29在不同结肠癌细胞株(SW620、SW480、HCT-116和CT-26)中的表达情况,记录miR-29调控MET蛋白及结肠癌细胞迁移和侵袭能力,计算miR-29影响裸鼠成瘤的能力。结果实时定量PCR结果显示,SW620、SW480、HCT-116、CT-26的miR-29表达量分别为1.00±0.00、0.88±0.08、0.51±0.11、0.38±0.07,且SW620的miR-29表达量较SW480、HCT-116、CT-26显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,过表达miR-29后,MET蛋白表达相应上调,而抑制miR-29表达后,MET蛋白表达相应下调。Transwell实验显示,miR-29-inhibitor组、NC组迁移细胞数分别为31.08±4.76、216.61±12.36,侵袭细胞数分别为69.32±8.32、229.65±16.76,比较差异均有统计学意义(P0.05)。miR-29-inhibitor组、NC组裸鼠肺组织MET蛋白表达阳性率分别为72.3%、18.4%,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-29通过靶向MET蛋白以促进结肠癌细胞的增殖和侵袭行为。     

IL-8对人结肠癌细胞SW480迁移的影响及机制分析

使用MTT法悬挑合理的IL-8使用浓度,分别使用划痕实验及Transwell实验检测IL-8对结肠癌SW480细胞迁移的影响,Western-blot检测MMP-2蛋白的表达。对照组及不同浓度IL-8(25、50、100μg/L)组穿过小室的细胞数依次表示为16±2.0、50±7.4、120±16.4、62±10,与对照组比较,不同浓度IL-8穿过Transwell实验细胞数量明显增多,这一结果与划痕试验一致,再次验证IL-8能促进SW480细胞迁移。IL-2可提高MMP-2蛋白的表达水平。IL-8能有效促进人结肠癌SW480细胞的迁移,可能通过上调MMP-2的表达有关。     

长链非编码RNA肿瘤易感候选基因11在卵巢癌组织中的表达及意义

目的 观察长链非编码RNA (lncRNA)肿瘤易感候选基因ll(CASC11)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨抑制该基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭力的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测卵巢癌组织和癌旁组织中CASC11表达情况.将SKOV3细胞分为si-CASC11组、阴性对照组和空白组,分别转染CASC11的干扰物序列、阴性对照序列和加入转染试剂,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中CASC11表达情况,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 卵巢癌组织中CASC11相对表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移情况下,卵巢癌组织中CASC11相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).与阴性对照组和空白组比较,si-CASC11组细胞中CASC11相对表达量降低,细胞增殖活力、迁移能力、侵袭能力降低,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 卵巢癌组织中CASC11呈高表达,且与恶性进展临床病理指标相关,抑制CASC11表达能够显著抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力.     

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。