南京地区丙型肝炎病毒基因分型的研究

目的 了解南京地区丙型肝炎病毒(HCV) 基因型分布的特点.方法 采用针对HCV三种主要基因型1,2,3和1b亚型设计的型-特异性引物,通过RT-PCR和套式PCR扩增HCV基因组高度保守的5'端非编码区,检测55例HCV IgG阳性血清的HCV RNA,并对其中40例进行基因分型.结果 PCR检测的抗HCV IgG阳性血清标本55例中,50例为HCV RNA阳性,阳性率为90.91%;对40例HCV RNA阳性的血清进行分型,发现23例为1b型,15例为2,1 b混合型,HCV-1b亚型含有率为95%,其余两例分别为2型和1,2混合型.结论 该地区HCV流行优势株为1b亚型.     

血液透析患者丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型

目的 建立一种丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型方法。方法 对47份血液透析患者HCV RNA阳性的标本,用5’非编码区(5'-NCR)1、2、3、1b型特异性引物,进行逆转录巢式PCR扩增分型。结果 47份HCV RNA样本43例可以分型;优势株为1b亚型,1b及1b相关型占总样本数的87．23％(41／47);7例为混合感染,占可分型数的16．27％(7／43)。结论 本组血液透析患者感染的HCV基因型的分布可能与地区流行及医源性传播有关,其同源性有待核苷酸序列分析加以印证。     

丙型肝炎病毒型特异性聚合酶链反应基因分型的临床应用

目的 探索丙型肝炎病毒(HCV)基因型在不同人群中的分布规律及流行优势型。方法 分别对健康体检者、住院患者和血液透析患者抗HCV IgG阳性标本，用自行设计的5’非编码区(5’-NCR)1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型。结果　3组人群中血液透析患者HCV感染率最高，抗HCV IgG和HCV RNA阳性率分别为55.37%和38.84%。基因型以1b亚型为主，1b及1b的相关型占91.67%。结论　本地区HCV流行优势型为1b亚型。     

丙型肝炎病毒型特异性聚合酶链反应基因分型的临床应用

目的　探索丙型肝炎病毒 (HCV)基因型在不同人群中的分布规律及流行优势型。方法　分别对健康体检者、住院患者和血液透析患者抗HCVIgG阳性标本 ,用自行设计的 5’非编码区 (5’ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型。结果　 3组人群中血液透析患者HCV感染率最高 ,抗HCVIgG和HCVRNA阳性率分别为 5 5 .37%和 38.84%。基因型以 1b亚型为主 ,1b及 1b的相关型占 91.6 7%。结论　本地区HCV流行优势型为 1b亚型。     

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。     

山东烟台地区丙型病毒性肝炎患者的基因分型及临床意义

目的：探讨山东烟台地区丙型肝炎病毒常见的HCV基因型、HCV RNA含量,HCV不同基因型与转氨酶相关性及干扰素治疗的应答关系。方法：筛选HCV-Ab及HCV RNA阳性患者作为研究对象,采用特异性PCR引物对HCVRNA5’UTR区和／或NS5B区进行扩增,PCR产物进行序列分析,通过与GenBank中参考序列的比对,对样本予以分型。同时,对其使用干扰素治疗前后分别测定HCV RNA含量、谷丙转氨酶、谷草转氨酶。结果：70份HCV—RNA阳性标本有42例可明确分型,可分型率为60．0％;检出1b、2a、3a、6a五种基因亚型,分别为30（71．4％）、10（23．8％）、1（2．4％）、1（2．4％）例。1b亚型是烟台地区HCV携带者的优势流行基因亚型,2a型携带者的ALT、AST均值明显高于1h型,使用干扰素治疗HCV RNA含量明显降低,但转氨酶高的2a患者在丙肝病毒含量降低的同时转氨酶也明显降低,而转氨酶升高不明显的1b患者经干扰素治疗后其转氨酶也无明显变化。结论：山东烟台地区HCV常见基因型为1b、2a、3a、6a,以1b亚型为主。HCV基因型别与转氨酶指标相关,丙肝病毒含量与干扰素治疗相关。     

环介导等温扩增技术用于HCV基因分型的初步研究

目的建立适用于临床的常见HCV基因型的快速、敏感、有效的核酸逆转录环介导等温扩增技术(RTLAMP)。方法根据不同HCV亚型的标准序列设计HCV-1b、2a、3b和6a型特异性引物,建立及优化针对各HCV亚型的RT-LAMP试验方法;收集55例已确认为HCV RNA阳性的临床标本做检测及分型。结果本组HCV-RNA阳性标本,运用LAMP法的检出率为94.55%(52/55),其中HCV-1b型占40.38%(21/52)、2a型占9.62%(5/52)、3b型占23.08%(12/52)、6a型占26.92%(14/52)。结论建立了针对不同HCV基因型的LAMP检测方法,该法快速、敏感,适合于在临床应用。     

成都地区无偿献血者HCV基因型分布

目的研究成都地区献血者人群HCV感染的基因型分布。方法从血液筛查出的抗-HCV反应性血清标本中提取HCV RNA,RT-PCR获得HCV核酸C区及NS5B区序列片段,用MEGA软件构建序列进化树,分析HCV的亚型分布特征及可能的原因。结果对313例HCV RNA阳性标本分型结果如下,1b亚型283例,2a亚型14例,3b亚型7例,3a亚型3例,6a亚型5例,6u亚型1例;4和5基因型没有发现。结论在成都地区献血者人群感染的HCV中共有6个亚型分布。其中1b是绝对优势亚型,占90.41%(283/313);6u亚型在成都地区首次被检测到。     

HCV基因型与2′- 5′寡腺苷酸合成酶活性的相关性研究

目的 了解丙型肝炎病毒基因型在不同人群中的分布规律与流行优势型及其与2′—5′寡腺苷酸合成酶(2-5AS)的相关性。方法 分别对门诊体检、住院病人和血液透析患者抗-HCVIgG阳性标本,采用RT-nested-PCR方法检测HCV RNA;用5′端非编码区(5′NCR)1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型;用PEI-cellulose薄板层析法检测外周血单个核细胞的2-5AS。结果 三组人群HCV RNA感染率分别为1．21％、2．66％、38．84％;HCV基因型以1b亚型为主,1b及1b的相关型占91．67％。以ATP转化率表示2-5AS活性水平,1b型和1b相关的混合感染2-5AS活性显著升高。而其他基因型与健康对照组无明显差别。结论 2-5AS活性的基础水平显著升高可能是HCV1b亚型对干扰素反应低下的原因。     

HCV基因分型检测芯片的临床应用及意义

目的评价HCV基因分型检测芯片在HCV基因分型中的初步应用及意义。方法对117例抗HCV阳性和33例抗HCV阴性的血清标本同时进行基因芯片分型检测,并与测序结果进行比较。结果HCV基因分型芯片共检测出阳性92例,其中1b型71例(77.2％),2a型8例(8.7％),其它1a型3例(3.2％),3b型6例(6.5％),6型1例(1.1％),1a 1b型2例(2.2％),1b 2a型1例(1.1％)。结论HCV基因分型检测芯片可以用于血清HCVRNA的检测并进行基因分型,拥有较高的灵敏度和特异性,可以为临床诊断、治疗提供有效帮助。     

丙型肝炎病毒5′utr分型和C区基因分型结果的比较

目的比较丙型肝炎病毒(hepatitis C vims,HCV)不同基因分型方法的一致性。方法采用5′非编码区(NCR)型特异性引物分型法和核心区型特异性引物分型法分别对95例和其中的31例HCV RNA阳性患者的血清样本进行基因分型,分析不同分型方法的灵敏度和稳定性异同。结果两种分型方法的一致性达到93．5％,对于混合感染的发现能力C区分型较强,稳定性无差异。结论C区分型方法更加精确。     

血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及丙型肝炎的关系

目的探讨血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及不同临床分型的丙型肝炎的关系。方法收集256例抗HCV抗体阳性患者血清标本,用ELISA法检测血清抗F蛋白抗体,提取HCV RNA并进行逆转录反应,根据5’非编码区(5’NCR)1,2,3,1b型碱基序列,设计保守区通用引物及型特异性引物。用巢式PCR对HCV进行基因分型。结果抗F蛋白抗体阳性率为61.3%(157/256)。男性与女性抗F蛋白抗体率分别为64.3%(110/171)与55.3%(47/85),差异无统计学意义(χ2=1.953,P>0.05)。与急性丙型肝炎抗F蛋白抗体阳性率的36.6%(15/41)相比,慢性丙型肝炎为63.6%(112/176)、丙型肝炎合并肝硬化为76.9%(30/39),差异有统计学意义(χ2分别为10.02和13.21,P均<0.01)。HCV RNA阳性患者抗F蛋白抗体阳性率为62.5%(90/144)与阴性患者的59.8%(67/112)相比无显著性差异(χ2=0.187,P>0.05);基因分型结果表明,1b型抗F蛋白抗体阳性率为62.8%(81/129),2型为60.0%(6/10),1b/2型为60.0%(3/5),各型抗F蛋白抗体阳性率无明显差异(χ2分别为0.109和0.105,P均>0.05)。结论血清抗F蛋白抗体与HCV临床分型有关,与性别、HCV RNA以及HCV基因型分布无关。     

丙型肝炎病毒5'utr分型和C区基因分型结果的比较

目的比较丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）不同基因分型方法的一致性。方法采用5’非编码区（NCR）型特异性引物分型法和核心区型特异性引物分型法分别对95例和其中的31例HCV RNA阳性患者的血清样本进行基因分型,分析不同分型方法的灵敏度和稳定性异同。结果两种分型方法的一致性达到93．5％,对于混合感染的发现能力C区分型较强．稳定性无差异。结论C区分型方法更加精确。     

云南省丙型肝炎病毒基因型及3b型遗传进化树分析

目的了解云南省丙型肝炎患者HCV基因型分布,对3b型进行遗传进化树分析。方法应用丙型肝炎非编码区ABC程序酶切分型法对云南省46例HCVRNA阳性血清标本进行HCV基因分型研究。从根据5′端非编码区(5′NCR)ABC分型结果判断为3b基因型10例标本中随机选择2例(A18、A32)进行HCV5′NCRcDNA双向测序。结果通过46例HCV5′NCRRNA阳性标本分型研究,云南省HCV感染基因型依次为1b型、3b型、3a、1a和2b型、2a/2b等混合型,各型所占比例分别为34.78%、21.74%、10.88%、6.52%、17.39%。2例(A18、A32)3b型进行HCV5′NCRcDNA双向测序,根据测序结果进行基因进化树分析,云南省HCV3b型与GenBank号中国HCV5′NCR3b株的同源性为99%~100%。结论云南省HCV主要流行基因型为1b型,其次为3b型;应用5′NCRABC分型法可得到准确分型结果。     

慢性丙型肝炎患者血清基因型与HCV RNA的相关性研究

目的 研究丙型肝炎患者HCV基因型的分布,探讨基因型在性别上的分布以及基因型与HCV RNA病毒载量的相关性.方法 收集2010年5-12月来自40家医院的206例丙型肝炎患者的血清标本,采用瑞士罗氏公司生产的定量PCR试剂(罗氏试剂)对进行HCV RNA检测,应用雅培公司生产的Abbott RealTime HCV GenotypeⅡ试剂(雅培试剂)对206例丙型肝炎患者的血清标本进行基因分型,分析基因型在性别上的分布以及HCV基因型与HCV RNA病毒载量的相关性.结果 206份HCV RNA阳性血清标本中HCV1型(未具体分1a和1b型)占3.4%(7/206)、1a型占1.0%(2/206)、1b型占59.7%(123/206)、2型占15.5%(32/206)、3型占13.1%(27/206)、6型占2.9%(6/206)、1/6混合型占2.4%(5/206)、2/4混合型占0.5%(1/206),未分型占1.5%(3/206).132例基因1型和65例非基因1型(2型、3型和6型)患者HCV基因型在性别上的分布差异无统计学意义(x2=0.000,P＞0.05).188例患者不同基因型之间血清HCV RNA病毒载量差异有统计学意义(F=3.371,P＜0.05).将197例HCV单基因型患者按地区分为东、南、西、北、中5组,基因型1型与非基因1型在地区分布上差异无统计学意义(x2=5.840,P＞0.05).结论 丙型肝炎病毒感染以1b型为主,其次为基因2型.基因型在性别上的分布没有差异.基因1b型HCV RNA病毒载量高于基因3型,基因2型HCV RNA病毒载量高于基因3型,基因6型HCV RNA病毒载量高于基因3型.     

西北部分地区无偿献血人群HCV感染的分子流行病学的研究

目的探讨西北部分地区无偿献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)基因型(亚型)的分布。方法收集无偿献血人群中HCV RNA阳性标本,通过RT-PCR扩增NS5B基因,测定其核苷酸序列后,与Genebank中已知序列进行分子进化分析,确定HCV基因型(亚型)。结果对西北部分地区(新疆、陕西、青海)137例HCV RNA阳性血清进行NS5B基因扩增,扩增阳性128例,其中1b占43.00%(55/128),2a占35.16%(45/128),3a占9.38%(12/128),3b占10.16%(13/128),6a占2.34%(3/128)。1b亚型之间同源性最高为99%,最低为93%,2a亚型之间同源性最高为98%,最低为91%,3a亚型之间同源性最高为98%,最低为91%,3b亚型之间同源性最高为98%,最低为93%。结论西北部分地区无偿献血人群中HCV基因分型以1b和2a为主,3a,3b,6a亚型占的比例较低,和中国内陆地区的基因型分布相似。     

法国丙型肝炎病毒不同基因型的血清学反应

本文研究在丙型肝炎病毒(HCV)感染病人中.HCV基因型与HCV抗原血清学反应之间的关系。作者在1989年11月和1992年12月对92例非甲非乙型肝炎病人和12例无症状血清学HCV阳性供血者作了研究。酶免疫法抗HCV均为阳性和5’非编码区引物做PCR扩增HCC RNA阳性。样品基因分型为从200μl血清中提取HCV RNA,转至cD-NA,HCV cDNA扩增由网式PCR非结为区蛋白3(NS3)。HCVI型原型采用两步法合成。5’-AGACT-GTAATACGTGTGCACC-3’为外部引物(nt4571-     

引物特异性HCV基因分型检测方法的建立及应用

[目的]建立引物特异性HCVRNA基因分型的方法，并应用于临床诊断。[方法]采用型特异性引物建立单管逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和双管引物特异性套式聚合酶链反应（NEST-PCR）检测技术，1b和3a一管内扩增，1a、2a和2b一管内扩增，分别对147例HCV抗体阳性的标本，设计HCV的C区特异性引物，采用Trizol浓缩RNA进行双管巢式PCR分型。[结果]统计结果表明我国丙型肝炎流行主要以1b（Ⅱ）和2a（Ⅲ）2种基因型为主，但有部分1a、2b、3a的HCV感染者检出，其中1a为1．36％（2／147），1b为65．99％（97／147），2a为6．12％（9／147），3a为1．36％（2／147），1b／2a型混合占22．45％（33／147），1a／2b混合型为0．68％（1／147），未分出型或其它型者分别为2．04％（3／147）。[结论]本文建立的方法具有良好的特异性和敏感性，可同时区分5种HCV基因型，我国北方地区发现有1a和3a基因型感染病例。     

河南地区慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒基因型分布研究

目的调查河南地区慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因型的分布特点。方法 106例慢性丙型肝炎患者的血清标本,采用反转录PCR扩增HCV NS5B区,产物直接测序,并构建进化树进行HCV基因分型。结果 106例患者中HCV分型阳性95例(89.6%),共检出7种基因型:1a、1b、2a、2b、3a、3b、6a,其中1a亚型1例(1.1%)、1b亚型56例(58.9%)、2a亚型18例(18.9%)、2b亚型1例(1.1%)、3a亚型6例(6.3%)、3b亚型2例(2.1%)、6a亚型11例(11.6%)。结论河南地区慢性丙型肝炎患者HCV基因型以1b型为主,其次为2a和6a型,基因型的分布呈现多样化。     

武汉地区丙型肝炎病毒基因型分布及其少见基因亚型系统进化树分析

目的研究武汉地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况,构建HCV少见基因亚型系统进化树。方法收集武汉地区258例慢性丙型肝炎患者血浆样本,采用基于HCV非结构蛋白5B(NS5B)区的Sanger测序法对患者HCV进行基因分型,将HCV NS5B区测序结果与NCBI Genotyping tool中HCV基因型数据库进行比对,得到受检患者的HCV基因亚型,采用MEGA5.0软件对武汉地区HCV少见基因亚型进行系统进化树分析。结果 258例丙型肝炎患者样本均被成功分型,共检出6种基因亚型:1b型(71.32%)、2a型(20.16%)、6a型(3.49%)、3b型(2.71%)、3a型(1.16%)、1a型(1.16%)。武汉地区HCV少见基因亚型系统进化树被成功构建。结论武汉地区HCV优势基因亚型为1b型和2a型,6a型、3a型、3b型、1a型较少见。武汉地区3例3a型HCV可能由日本传入;大部分3b型HCV可能由越南传入,NO.379样本出现较大变异;6a型HCV可能由越南传入。