聚合酶链反应检测血清钩端螺旋体DNA研究

聚合酶链反应检测血清钩端螺旋体ＤＮＡ研究张春兰冼超我们根据犬群犬型钩端螺旋体（以下简称钩体）１６ｓｒＲＮＡ基因区合成一对引物（Ａ：５′－ＧＧＣＧＧＣＧＣ－ＧＴＣＴＴＡＡＡＣＡＴＧ－３′及Ｂ：５′－ＴＴＣＣＣＣＣＣＡＴＴＧ－ＡＧＣＡＡＧＡＴＴ－３′），...     

复方红景天和参芪花粉合剂防治高原急性肺损伤的实验研究

目的：探索藏药复方红景天（ＲＣＯ）和复方参芪花粉合剂（ＡＣＯ）对高原急性肺损伤（ＡＬＩ）早期的防治作用。方法：２４只兔和１２０只小鼠随机分为生理盐水对照组（ＮＣＧ）、盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）致伤组（ＩＧ），ＡＣＯ防治组（ＡＣＯＧ）、ＲＣＯ防治组（ＲＣＯＧ）。致伤前后按时测定体、肺血流动力学，血气和血、组织匀浆中的血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６酮前列腺素Ｆ１α（６ｋｅｔｏＰＧＦ１α）各指标参数。结果：各组动脉血氧分压（ＰａＯ２）和平均肺动脉压（ＭＰＡＰ）在致伤前已出现差异，ＲＣＯＧ和ＮＣＧ及ＩＧ比较，Ｐ均＜０．０５。术后４小时、８小时各组ＰａＯ２、ＴＸＢ２、６ｋｅｔｏＰＧＦ１α变化更明显，ＡＣＯＧ、ＲＣＯＧ与ＮＣＧ及ＩＧ比较，Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１。术后１２小时，ＡＣＯＧ和ＲＣＯＧ的平均体动脉压（ＭＡＰ）仍保持ＮＣＧ水平，与ＩＧ比较，Ｐ均＜０．０１。结论：藏药ＲＣＯ和ＡＣＯ在防治高原ＡＬＩ中可能起到重要防护作用     

念球菌PCR检测技术的初步探讨

念珠菌 18ＳｒＲＮＡ基因区为念珠菌共有的保守区 ,我们在此基因区设计了一对寡核苷酸引物 ,建立了念珠菌的ＰＣＲ检测方法 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　菌种　热带念珠菌、白色念珠菌、罗伦念珠菌、新型隐球菌 (江苏省临床检验中心程梅老师惠赠 )。对照组为常见细菌、病毒及人染色体ＤＮＡ。1.2　引物　中科院上海生工生物技术服务公司合成并纯化。序列 :5′ ＧＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＧＣＧＡＡＡＣＧ 3′ ;5′ ＧＴＣ ＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＡＣＧＡ 3′。1.3　试剂　ＴａｑＤＮＡ聚合酶 ,ｄＮＴＰｓ(日本ＴａｋａＲａ产品 ) ;裂解液 :0…     

单链构象多态性银染技术检测结核菌katG基因变异

单链构象多态性 (ＳＳＣＰ)技术能分辨碱基不同的核酸片段 ,并应用于基因变异检测。我们根据对耐药结核菌的测序结果 ,设计了一对引物 ,建立ＳＳＣＰ检测ｋａｔＧ基因突变的方法。一、材料与方法1 菌株分离与药敏测定方法同文献 [1]。2 核酸提取 :痰液经碱消化 ,提取ＤＮＡ。方法同文献[1]。3 引物设计和ＰＣＲ扩增 :ＫＧ3:5′ ＴＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＣ 3′ ,ＫＧ4:5′ ＡＴＧＣＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＴＣＴＴＡ 3′。位于ｋａｔＧ的第 2 916～ 3371碱基位置 ,长度为 45 6ｂｐ。由大连宝生物技术公司合成并纯化。4 ＳＳ…     

用抗胎肝细胞抗原—1及抗系统分化抗原单克隆抗体分离纯化…

本实验中，首先测定了胎肝细胞抗原－１（ＦＨＣＡ－１）在小鼠低比重骨髓细胞（ＬＤＢＭＣ）上的表达，并依据ＦＨＣＡ－１的表达和麦胚凝集素（ＷＧＡ）亲和力将低比重骨髓细胞分成３个亚群：ＦＨＣＡ－１＾ｈｉｇｈＷＧＡ＾－，ＦＨＣＡ－１＾ｌｏｗＷＧＡ＾＋和ＦＨＣＡ－１＾－ＷＧＡ＾＋细胞。在抗ＦＨＣＡ－１抗体加补体处理后，ＦＨＣＡ－１＾ｈｉｇｈＷＧＡ＾－细胞被清除。以此特性，分离纯化了低比重、分化抗原阴性、ＦＨ     

用抗胎肝细胞抗原－1及抗系统分化抗原单克隆抗体分离纯化小鼠造血干细胞

本实验中，首先测定了胎肝细胞抗原－１（ＦＨＣＡ－１）在小鼠低比重骨髓细胞（ＬＤＢＭＣ）上的表达，并依据ＦＨＣＡ－１的表达和麦胚凝集素（ＷＧＡ）亲和力将低比重骨髓细胞分成３个亚群：ＦＨＣＡ－１￣（ｈｉｇｈ）ＷＧＡ￣－，ＦＨＣＡ－１￣（ｌｏｗ）ＷＧＡ￣＋和ＦＨＣＡ－１￣－ＷＧＡ￣＋细胞。在抗ＦＨＣＡ－１抗体加补体处理后，ＦＨＣＡ－１￣（ｈｉｇｈ）ＷＧＡ￣－细胞被清除。以此特性，分离纯化了低比重、分化抗原阴性、ＦＨＣＡ－１￣－细胞，该细胞群中ＷＧＡ￣＋细胞占９０％以上，且该细胞的第１２天脾结节数为全骨髓细胞的９５倍，表明该细胞为高度纯化的多能造血干细胞。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

应用SSCP及测序方法检出三种罕见的β地中海贫血突变型

为明确广西３例不能被多聚酶链反应－寡核苷酸探针斑点杂交法检出的β地中海贫血（β地贫）基因携带者的突变型，用银染法单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析和化学发光直接测序法对该３例β地贫基因携带者进行检测。结果发现３种中国人罕见的β地贫突变型，即ＣＤ３０（ＡＧＧ→ＧＧＧ），ＣＤ９５（＋Ａ）和ＣＤＳ２７－２８（＋Ｃ）。其中ＣＤ３０（ＡＧＧ→ＧＧＧ）为国内外首次报道，ＣＤ９５（＋Ａ）首次在中国人中发现     

冠状动脉造影剂应用的体会

本文行冠状动脉造影（ＣＡＧ）２７５例，选用三种造影剂，分别是７６％复方泛影葡胺、低渗显影葡胺钠３２０和优维显３７０。在ＣＡＧ过程中严密临床观察和心电生理监测，对ＣＡＧ的效果、不良反应和并发症等进行评估，供ＣＡＧ时对冠状动脉造影剂的选择。     

白血病患者白细胞糖皮质激素受体及其mRNA检测结果的比较

目的对非霍奇金淋巴瘤细胞性白血病（ＮＨＬＣＬ）与急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）进行鉴别诊断。方法采用放射配体结合分析法和以人糖皮质激素受体（ＧＲ）ｃＤＮＡ为探针的分子杂交技术对２２例ＮＨＬＣＬ、１８例ＡＬＬ、１０例慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）和６名健康人白细胞ＧＲ及ＧＲｍＲＮＡ进行了对比检测。结果ＮＨＬＣＬ和ＡＬＬ两类白血病患者的ＧＲ及ＧＲｍＲＮＡ水平比较,差异非常显著（Ｐ＜０．０１）;ＮＨＬＣＬ和ＣＬＬ两类白血病的ＧＲ及ＧＲｍＲＮＡ水平比较,差异不显著（Ｐ＞０．０５）。结论ＮＨＬＣＬ和ＡＬＬ两类白血病ＧＲ及ＧＲｍＲＮＡ水平的差异,对两者的鉴别诊断有重要的参考意义,两类白血病ＧＲｍＲＮＡ表达水平不同可能与细胞恶性增殖发生在不同分化阶段有关,确切机制有待进一步研究。     

Gastric stump carcinoma following Billroth II resection for peptic ulcer disease. Comparison with cancer in non-operated stomach

40 gastric stump carcinomas have been investigated. The results are compared with 72 gastric carcinomas without preceding Billroth II resection. The aim of this study was to contribute to our knowledge about the pathogenesis of gastric stump carcinoma. The mean age of patients with gastric stump carcinoma and with carcinoma without preceding Billroth II resection is identical. The age distribution, too, is similar in both groups. Furthermore the time of the Billroth II resection for benign peptic ulcer shows no correlation with the appearance of the gastric stump carcinoma, which suggests that there is no constant time lag between Billroth II resection and stump carcinoma. The histological investigation of the tumor-free gastric mucosa shows similar alterations in the two groups compared. Intestinal metaplasia and cystic dilatation seems to be more common in the gastric mucosa after Billroth II resection as compared with the non-tumorous mucosa of patients without preceding Billroth II resection. But the grade of nuclear atypia in non-tumorous mucosa is identical in both groups. Interestingly enough, the frequency of the main types of gastric cancer, intestinal carcinoma and diffusely infiltrating carcinoma is very similar. Thus, both the epidemiological and histological data seem to indicate that the pathogenesis of gastric carcinoma is very similar to that of gastric carcinoma without preceding gastric surgery. The Billroth II resection does not seem to be a main factor in pathogenesis, but may have co-factorial significance.     

Appraisal of gastric stump carcinoma and current state of affairs

Gastric stump carcinoma, also known as remnant gastric carcinoma, is a malignancy arising in the remnant stomach following gastrectomy for a benign or malignant condition. Enterogastric reflux and preexisting risk factors in a patient with gastric cancer are the major contributors to the development of gastric stump carcinoma. The occurrence of gastric stump carcinoma is time-dependent and seen earlier in patients operated on for malignant rather than benign diseases. The tumor location is predominantly at the anastomotic site towards the stomach. However, it can occur anywhere in the remnant stomach. The pattern of lymph node involvement and the type of surgery required is distinctly different compared to primary gastric cancer. Gastric stump carcinoma is traditionally considered a malignancy with a dismal outcome. However, recent advances in diagnostic and therapeutic strategies have improved outcomes. Recent advances in molecular profiling of gastric stump carcinoma have identified distinct molecular subtypes, thereby providing novel therapeutic targets. Also, reports of gastric stump carcinoma following pancreatoduodenectomy and bariatric surgery highlight the need for more research to standardize the diagnosis, staging, and treatment of these tumors. The present review aims to provide an overview of gastric stump carcinoma highlighting the differences in clinicopathological profile and management compared to primary gastric carcinoma.     

胃癌中CD44v6和nm23基因蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨CD44v6和nm23的表达与胃癌侵袭转移的关系，了解胃癌中CD44v6蛋白表达与nm23蛋白表达的相关性。方法：采用免疫组化S－P法检测CD44v6及nm23在胃癌中的表达情况。结果：CD44v6阳性表达率在进展期胃癌显著高于早期胃癌（P＜0．05），伴淋巴结转移组和肝转移组明显高于无转移组（P＜0．05），CD44v6表达与胃癌的侵袭转移倾向呈正相关（P＜0．05）;nm23阳性表达率在进展期胃癌明显低于早期胃癌（P＜0．05），伴淋巴结转移组和肝转移组显著低于无转移组，nm23蛋白表达与胃癌的侵袭转移倾向呈负相关（P＜0．05）。胃癌中CD44v6及nm23蛋白表达之间呈明显负相关关系（P＜0．01）。结论：胃癌组织中CD44v6和nm23蛋白的检测可用于胃癌转移的预测、恶性程度的评估和预后的判断。     

肝素裂合酶在胃癌中的表达及其生物学研究

目的本研究通过检测肝素裂合酶在胃癌组织中的表达含量,探讨肝素裂合酶表达与胃癌发展、浸润和转移的关系,为胃癌治疗提供理论依据。方法应用免疫组织化学法（IHC）检测了86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例正常组织中肝素裂合酶蛋白的表达。应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）的方法定量检测50例胃癌组织、25例癌旁组织和10例切缘正常组织中肝素裂合酶的含量。运用统计软件SPSS 11.0对数据进行统计分析。结果应用IHC法检测86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例切缘正常组织中肝素裂合酶阳性表达率分别为79.1%,65.2%和42.9%,三者之间差别有统计学意义（P〈0.05）。应用FCM法对50例胃癌组织,25例癌旁组织和10例切缘正常组织标本中的肝素裂合酶的含量进行检测,其荧光指数（fluorescence index,FI）分别为1.86±0.44,1.22±0.45,1.00±0.21。从胃癌→癌旁→正常组织,FI值明显下降,并且三者之间差别有统计学意义（P〈0.01）。结论肝素裂合酶在胃癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常胃组织,提示肝素裂合酶可能与胃癌的发展有关;肝素裂合酶表达与浸润程度、TNM分期、淋巴结转移相关,提示肝素裂合酶高表达与胃癌的分期、浸润和转移有关。     

采用组织芯片技术分析Ki-67抗原在胃癌中的表达及其意义

目的检测增殖细胞核抗原Ki-67抗原在胃癌中的表达情况，分析与胃癌病理特征之间的关系，探讨胃癌的发生、发展及相关淋巴结转移的关系。方法取胃癌标本共88例作为试验组，慢性浅表性胃炎标本16例作为对照组，通过组织芯片技术和免疫组织化学染色法确定检测部位。结果Ki-67抗原在胃癌中的表达明显高于慢性浅表性胃炎，二者的阳性率分别为89．4％和26．7％，P〈0．001，Ki-67抗原在有淋巴结转移的胃癌中的表达明显高于无淋巴结转移者，二者的阳性率分别为92．2％和62．5％，P=0．036。结论Ki-67抗原在胃癌中高表达，且与胃癌淋巴结转移相关，对胃癌预后有一定意义。     

P53、c-erbB - 2、Rb和PCNA的表达在胃癌起源中的意义

目的：检测针对胃癌基因蛋白产物（p63、c-erbB-2和Rb)和核增殖抗原（PCNA）的抗体，以间接了解不同基因蛋白产物的变化在胃癌起源过程中所处的不同阶段。方法：对15例正常黏膜，16例轻度肠化生、15例中度肠化生、13例重度肠化生和14例胃癌组织标本连续切片同步进行免疫组化ABC法染色。结果：4种蛋白产物过度表达均主要见于胃癌组织。p53基因蛋白产物的阳性率除重度肠化生组外非胃癌各组与胃癌组之间差别均有统计学意义（P＜0．05）。c-erbB-2基因蛋白产物的阳性率在非胃癌各组与胃癌组之间均有显著差别（P＜0．01）。PCNA免疫组化标记指数值在非胃癌各组与胃癌组之间差别显著（P＜0．05）。Rb基因蛋白产物的表达在非胃癌各组和胃癌组织间无明显差别（P＞0．05）。结论：p53蛋白可在胃癌的早期诊断中起作用，其改变在胃癌发生的早期即居于肠化生阶段的癌前变化过程中。c-erbB-2蛋白可用作胃癌肿瘤诊断的标记物，其改变在胃癌的起源过程中属一晚期变化，居于癌前变化的肠化生阶段之后。PCNA的变化在胃癌的起源过程中属一晚期改变，发生在胃癌前变化的肠化生阶段以后。Rb基因在胃癌起源中作用有限。     

胃癌组织中COX-2蛋白的表达研究

目的探讨胃癌组织中环氧化酶-2(COX-2)表达及其与胃癌浸润转移的关系。方法应用免疫组化S-P法测定57例胃癌组织中COX-2蛋白的表达。结果COX-2在胃癌组织中阳性表达率为85.2%,正常胃粘膜组织中阳性表达率为28.1%,两者有显著性异(P<0.01);COX-2阳性表达与胃癌分化程度无关(P>0.05);与TNM分期、淋巴结转移显著相关(P<0.01)。结论COX-2表达与胃癌的转移、浸润等有关,可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。     

Transpyloric extension of gastric carcinoma

Transpyloric extension of gastric carcinoma occurred in 17 (20%) of 88 patients with gastric carcinoma. In the majority of cases, this was a microscopic phenomenon, but in 7 patients with gastric carcinoma there were gross changes in the duodenum which were reflected in the upper-gastrointestinal series. Contrary to general opinion, transpyloric extension of gastric carcinoma is not a rare finding.     

P27kip1在胃癌中的表达与其临床生物学行为关系的研究

目的研究胃癌组织中P27kip1蛋白的表达及其与胃癌临床生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测胃癌组织和正常胃粘膜中P27kip1蛋白的表达。结果P27kip1蛋白阳性表达率在胃癌中(38%)显著低于正常胃粘膜(100%)(P<0.01);P27kip1蛋白表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤发生部位、大小及大体分型均无关(P>0.05)。P27kip1蛋白表达与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、PTNM分期及术后5年生存率相关(P<0.05或P<0.01)。结论P27kip1蛋白的异常表达参与了胃癌的发生、发展。     

60例胃癌的MDCT诊断研究

目的：探讨胃癌的CT诊断征象及其临床诊治价值。方法收集60例经胃镜、病理活检证实的胃癌患者CT资料,其中54例手术。胃对比剂用1.5%泛影葡胺或水。42例检查前10 min肌内注射山莨菪碱10-20 mg。60例行CT平扫,其中24例经肘静脉团注注入60%泛影葡胺80 mL增强。结果胃癌CT表现为病变区胃壁增厚,软组织肿块影,合并溃疡时表现为增厚胃壁及肿块内的腔内龛影。CT可同时发现胃癌的邻近侵犯及远处转移。结论CT可作为胃癌诊断方法之一,并有其独特的优势。胃癌CT检查的现阶段目的为疗前评估,指导临床制订合理的治疗方案。