PCT荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价

目的建立一种荧光定量降钙素原(PCT)检测方法。方法利用双抗体夹心法原理,建立PCT免疫检测方法,并对本方法进行了精密度、灵敏度、线性、相关性等性能指标的测定。结果本检测方法的灵敏度为0.04ng/mL,精密度CV10%,线性范围为0.04~51.14ng/mL,与罗氏Cobas E601PCT相关系数r为0.996。结论本研究建立了PCT荧光免疫检测方法,各项性能指标均达到临床检测要求,可用于临床血清PCT浓度的检测。     

基于荧光免疫技术检测降钙素原的方法建立和性能评估

目的研发一种应用荧光免疫层析法检测降钙素原的试剂盒,并对其进行性能评估。方法以羧基荧光微球标记鼠抗人PCT单克隆抗体及羊抗兔IgG抗体,PCT多克隆抗体和兔IgG分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。用VIDAS公司的降钙素原检测试剂盒与本研究的降钙素原检测试剂盒同时对125例临床样本进行检测,并通过线性实验、精密度实验、准确度等实验对降钙素原检测试剂盒进行性能评价。结果两种检测试剂的相关系数为0.9951,两者差异无统计学意义(P0.05);准确度实验中平均回收率是104%;精密度实验中批内和日间的变异系数均小于7%;PCT浓度在0.05～53.21ng/ml内呈良好线性。结论本研究的降钙素原检测试剂盒具有较好的精密度且结果准确可靠。     

TRFIA全血降钙素原检测试剂盒的性能评价

目的评价时间分辨免疫荧光法(TRFIA)全血降钙素原(PCT)检测试剂盒的分析性能。方法采用AQT90FLEX免疫分析仪,以TRFIA检测全血PCT,评价该方法精密度、检测下限、功能敏感度、线性范围、干扰试验、携带污染率、方法比对和参考区间等性能指标;将其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒进行比较。结果 TRFIA批内变异系数(CV)小于5.5%,批间CV小于6.0%,检测下限为0.03ng/mL,功能敏感度为0.11ng/mL,线性范围0.072~100.000ng/mL,干扰物对PCT检测无明显影响(干扰小于或等于±10%),携带污染小于0.25ng/mL,参考区间为0.081~0.120ng/mL。其与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性(R2=0.995 3)。结论采用TRFIA的AQT90FLEX免疫分析仪PCT检测试剂盒敏感度高,精密度好,线性范围宽,与罗氏cobas 6000电化学发光分析仪PCT检测试剂盒有良好的相关性,快速便捷,能更好地适用临床即时检验。     

两种降钙素原检测系统比较实验研究

目的在临床应用中比较分析电化学发光法和新型的基于纳米微球的荧光免疫层析法测定血清降钙素原(PCT)结果。方法以罗氏cobas e601电化学发光系统作为参比系统,上海奥普生物医药有限公司的荧光免疫定量分析系统作为待评估系统,测定2015年11月期间141例临床样本,对测得数据进行相关性分析,并在两个医学决定水平处(PCT=0.5ng/m l和PCT=2.0 ng/ml)进行卡方检验。结果两种检测方法具有很好的相关性(回归方程Y=1.008X-0.032,r=0.995,P0.001)和较小的偏差(t=-0.230,P=0.8190.05);在两个医学决定水平处(PCT=0.5 ng/ml和PCT=2.Ong/ml)的kappa值分别为0.944和0.943。结论基于微球的荧光免疫层析定量检测方法与电化学发光法测定PCT结果具有高度的相关性和一致性,各项指标均能达到临床检测需求,可用于临床PCT浓度的快速检测,在实时性方面优于电化学发光法。     

Roche Cobas E601电化学发光分析仪检测降钙素原的方法学评价

目的:对Roche Cobas E601电化学发光分析仪检测降钙素原(PCT)进行方法学评价.方法:通过Roche Cobas E601测定PCT的精密度、准确度、分析测量范围和携带污染率来评价其性能.结果:低、高值批内精密度的变异系数(CV)分别为1.16％、0.51％,批间精密度的CV为2.98％、1.96％;测定4份定值校准品的检测结果与靶值的偏倚为-5.26％ ～ 3.16％;线性为0.039 ng/mL ～ 86.325 ng/mL;携带污染率为0.019％.结论:该系统检测性能能够满足PCT的测定要求.     

免疫透射比浊法在AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价

目的在AU5800全自动生化分析仪上用免疫透射比浊法检测降钙素原(PCT)的方法学评价。方法通过AU5800全自动生化分析仪来检测PCT的精密度、线性、参考区间等指标,并与酶免疫荧光法试剂盒进行相关性比较,从而评价其性能。结果该方法批内和批间精密度分别小于8%和15%;0~80ng/mL范围内线性良好(Y=0.994 1 X+0.124 5,R2=0.999);正常人群的参考范围为小于0.5ng/mL;与酶免疫荧光法的相关性良好(Y=0.357 4 X+0.284 2,R2=0.960 7)。结论本检测方法不仅实现了PCT检测的快速、全自动化,而且化学性能优良、操作简单,降低了临床试剂成本,适合临床推广使用。     

近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌ESAT-6蛋白

目的建立定量检测结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)的近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法。方法以近红外荧光染料(Dylight 800)标记靶向ESAT-6的单克隆抗体,靶向ESAT-6的多克隆抗体包被在纳米磁珠表面。采用双抗体夹心法,磁性分离结合物和游离物,采用便携式高灵敏度低噪声激发式荧光检测仪检测磁性结合物的荧光强度,从而检测待检样品中ESAT-6水平。结果该方法的检测线性范围为2.4~750.0ng/mL,最低检测限为0.48ng/mL;10ng/mL水平加样回收率为96%,50ng/mL水平加样回收率为95%;批间变异系数(CV)为5.8%,批内CV为4.3%。该方法检测胸腔积液标本ESAT-6的特异度为80%,灵敏度为95%。结论该方法检测ESAT-6的线性范围广、灵敏度高、稳定性好。     

血清降钙素原检测对新生儿败血症的临床诊断价值及分析

目的 探索血清降钙素原检测对新生儿败血症的临床诊断价值.方法 半定量固相免疫层析测定法检测46例新生儿败血症及两个对照组,组一:20例足月健康新生儿,组二:20例非细菌感染性疾病新生儿血清降钙素原水平(PCT).结果 46例新生儿败血症组血清PCT水平有26例＞0.5 ng/ml,10例＞2.0 ng/ml,7例＞10 ng/ml阳性率达93.49%.其它两对照组各仅1例PCT水平＞0.5 ng/m1,阳性率为0.05%,相对比有显著性差异.结论 血清降钙素原可作为一项快速有效诊断和评估病情的检测指标.     

上海地区儿童快速免疫层析法cTnⅠ参考区间的建立

目的采用快速免疫层析法检测上海地区儿童末梢血心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)水平,初步建立儿童末梢血cTnⅠ的参考区间,为临床诊断儿童心肌损伤提供实验室依据。方法选取7个月～12岁儿童240名,采用快速免疫层析法检测其末梢血cTnⅠ。先进行方法学评估(准确性、精密度、最低检测限、线性范围验证、方法比对),然后采用百分位数法确定cTnⅠ的参考区间。结果快速免疫层析法检测高、低值质控品的结果分别为4.73和0.49 ng/mL,均在质控品标示的预期范围内;低值质控品日间和日内精密度[变异系数(CV)]分别为5.97%和5.36%,高值质控品日间和日内精密度(CV)分别为6.35%和7.14%,均符合要求(CV10%);最低检测限为0.02 ng/mL;线性范围为0.028～26.400 ng/mL;与化学发光法的相关性良好(r=0.988),检测cTnⅠ的第99百位数值为0.1 ng/mL,第99百位数值的不精密度为18.5%。采用百分位数法计算99%参考区间上限值为0.5 ng/mL,同时结合试剂说明书中标示的参考区间(0.3 ng/mL),确定基于快速免疫层析技术的儿童末梢血cTnⅠ参考区间:0.3 ng/mL为阴性、0.5 ng/mL为阳性。cTnⅠ为0.3～0.5 ng/mL时需进一步检查,以判断是否有心肌损伤。结论初步建立了基于快速免疫层析法的上海地区儿童末梢血cTnⅠ的参考区间。     

人降钙素原定量检测方法学评价

目的评价深圳市晋百慧生物有限公司生产的人降钙素原(PCT)定量检测系统(简称晋百慧PCT定量检测系统)的检测性能。方法以罗氏PCT检测系统为参比系统,晋百慧PCT定量检测系统为待评系统。在待评系统连续测定两浓度质控品(0.5 ng/ml,10 ng/ml)20次计算其变异系数(CV)评价其重复性,连续测定20个工作日计算其CV评价其天间不精密度;根据EP6-A文件配置不同标本浓度(0,0.5,1,2,5,10,20,50 ng/ml)计算其线性范围。收集200例患者血清标本,根据EP9-A3文件在待评系统与参比系统进行比对试验判断两者的可比性。结果待评系统重复性为不同浓度质控品的CV分别为3.59%,1.57%,天间不精密度分别为7.02%,3.82%;在0～50 ng/ml范围为线性。比对试验线性决定系数R2=0.968 6(Pearson相关分析α=0.05,P<0.001),在有医学意义浓度0.5 ng/ml处相对偏差为9%。结论晋百慧PCT定量检测系统精密度好,检测范围宽,与参比系统具有可比性,能满足临床检测要求。     

液体芯片技术定量测定人体血清CEA、AFP、NSE和tPSA

目的 应用液体芯片技术,联合定量测定人体血清癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和前列腺特异性抗原（tPSA）,并对其临床应用进行评价.方法 制备交联微球以及生物素标记抗体,利用双抗体夹心法对60个血清样本进行测定,并将其结果与化学发光免疫分析法（CLIA）作比较.结果 同时检测CEA、AFP、tPSA、NSE的线性范围分别为0.078～200 ng/mL、0.030～30.3 ng/mL、0.007～7.5 ng/mL、0.146～75 ng/mL;最低检测限为26.0 pg/mL、19.7 pg/mL、4.9 pg/mL、73.2 pg/mL;批内精密度CV〈9.0%,批间精密度CV〈13.2%;检测结果与CLIA测值的相关系数r分别为0.986、0.979、0.964、0.958（P〈0.001）.结论 液体芯片技术是一种具有极大优势的新型检测技术.该技术打破传统测定技术每次只能测定一个指标的限制,并且具有高通量、高灵敏度、检测时间短、样本用量少等特点.     

乳胶增强免疫比浊PCT试剂在ADVIA 2400系统应用的性能评估及与电化学发光系统一致性研究

目的评价国产乳胶增强免疫比浊法降钙素原(PCT)诊断试剂在西门子ADVIA 2400系统上应用的性能。方法参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)指南对乳胶增强免疫比浊法PCT诊断试剂在西门子ADVIA 2400系统检测的精密度、准确度及线性范围进行性能验证,同时与参考方法(电化学发光法)进行一致性比较。结果乳胶增强免疫比浊法在西门子ADVIA 2400系统上测定PCT低值和高值质控品的批内精密度分别为5.5%、2.3%,批间精密度分别为6.6%、3.1%,总精密度分别为6.6%、3.9%。PCT浓度在0.19～49ng/mL范围的线性良好(r=0.995 7)。乳胶增强比浊法与电化学发光法的Passing-Bablok回归方程为Y=0.846 X+0.0772(r=0.989 4)。两种方法在cut-off值分别为0.5、2.0、10.0ng/mL时的Kappa值分别为0.742、0.893、0.921,西格玛(σ)值为3.5,两方法在低、高PCT浓度处的质量目标指数(QGI)分别为0.68、2.41。结论国产乳胶增强免疫比浊PCT试剂在ADVIA-2400系统上应用符合性能验证标准,但采用六西格玛标准,该方法在精密度和准确度方面尚需进一步改进。     

免疫定量分析仪MD-QMT001检测降钙素原的方法学性能评价

目的对免疫定量分析仪MD-QMT001检测降钙素原（PCT）的主要方法学性能进行验证与评价。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件,结合实际工作设计验证方案,对免疫定量分析仪检测全血PCT的精密度、线性、可比性、抗干扰能力等4项分析性能进行验证和评价。结果该定量方法操作简便、快速,整个检测过程约17min;PCT定量时,批内、批间精密度为1.26%-3.96%;检测线性良好,相关系数r大于0.99,回归方程检验有意义（P〈0.05）,与厂商承诺范围接近;该定量法与半定量法检测结果一致性达92%;三酰甘油、胆红素对检测结果无明显影响,溶血可使检测结果显著偏高（P〈0.05）。结论该科室引进的降钙素原免疫定量分析仪操作简便、主要性能评价良好,可满足临床指导抗菌药物的应用等需要。     

血清降钙素原在感染性疾病诊治中的临床应用

目的探讨血清降钙素原(PCT)检测在感染性疾病诊断及治疗中的应用价值。方法对500例住院患者采用荧光免疫法检测患者血清PCT水平,检测结果分4个等级,正常值小于0.5ng/mL,超过0.5ng/mL为阳性阈值,10.0ng/mL考虑重度感染。结果在非细菌感染性疾病组中阳性率为11.3%、其浓度较低,以0.5~2.0ng/mL为主;细菌性感染组阳性率为83.5%,其浓度较高,多超过2.0ng/mL,且升高的程度与感染严重度密切相关。非细菌感染性疾病组及细菌感染组血清PCT水平差异有统计学意义(P0.01)。结论非细菌感染性疾病患者血清中PCT水平不升高或轻度升高,而细菌性感染患者血清中PCT水平则明显升高,且升高的程度与感染性疾病的严重度及预后密切相关。     

流式荧光技术检测血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ方法学性能评价与应用评估

目的对基于流式荧光技术检测血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ/Ⅱ的方法学进行性能评价与临床评估。方法评价PGⅠ/Ⅱ定量测定试剂盒(流式荧光发光法)最低检测限、线性范围、精密度、回收率、抗干扰能力、Hook效应出现浓度、特异性,通过临床血清样本与Abbott公司化学发光法试剂盒进行方法比对,初步建立健康人群PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ比值的参考值范围。结果基于流式荧光技术的PGⅠ、PGⅡ定量检测试剂盒检测PGⅠ、PGⅡ检测低限分别为0.62 ng/mL、0.21 ng/mL。PGⅠ、PGⅡ线性范围上限分别可达到180 ng/mL、100 ng/mL。PGⅠ检测批内变异系数(CV)为2.72%~3.20%,室内CV为5.19%~5.74%。PGⅡ检测批内CV为3.47%~4.57%,室内CV为5.71%~7.43%。PGⅠ、PGⅡ的平均回收率分别为98.5%、91.7%。200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素、10 mg/mL Hb对各指标检测无显著影响。PGⅠ与PGⅡ分别在16 414ng/mL、7 281 ng/mL以下浓度未出现Hook效应。PGⅠ与PGⅡ检测间不存在彼此交叉的情况。与化学发光法进行方法学比对,存在线性关系。线性方程分别为PGⅠ:Y=0.968 4X+2.049 4,相关系数(r)=0.985 4;PGⅡ:Y=0.9736X+0.656,r=0.982 0。确定的健康人群PGⅠ与PGⅠ/PGⅡ比值第5百分位数分别为71.93 ng/mL和3.57;第1百分位数分别为54.04ng/mL和2.57。结论流式荧光技术可以实现PGⅠ、PGⅡ并行测试,方法学性能良好,能应用于临床检验并可有效提高检测效率。     

降钙素原在感染性发热诊断中的意义

目的分析感染性发热患者中细菌感染和病毒感染血清降钙素原(PCT)水平的差别,探讨血清PCT在感染性发热诊断中的意义。方法采用半定量固相免疫测定法测定48例细菌感染性发热患者、40例病毒感染性发热患者以及30例健康对照组血清中的PCT,将检测结果分成4个水平,PCT<0.5 ng/mL,0.5 ng/mL≤PCT<2.0 ng/mL,2.0 ng/mL≤PCT<10.0 ng/mL和PCT≥10.0 ng/mL,分析PCT水平与细菌病毒感染之间的关系。以PCT≥0.5 ng/mL为阳性诊断标准。结果细菌感染组患者血清PCT水平高于病毒感染组和对照组,差异有统计学意义(P≤0.05),病毒感染组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测PCT能有效地鉴别细菌性和非细菌性感染性发热,有利于早期正确治疗。     

血清层粘连蛋白荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价

建立一种荧光定量层粘连蛋白(LN)检测方法,定量检测人血清LN水平。将鼠抗LN抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线(T),将链霉素亲和素用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为质控线(C);用生物素荧光微球标记鼠抗LN抗体作为缓冲液。利用双抗体夹心法原理定量检测LN水平,对方法的线性、精密度、空白限、回收率、相关性等性能指标进行验证,并使用市售化学发光LN试剂盒比对。荧光免疫分辨检测LN方法的回收率为86.03%~97.50%,空白限为4.22 ng/mL,线性范围为20~800 ng/mL,相关系数(r)为0.9989;批内精密度为6.51%,批间精密度为6.23%。与市售LN试剂平行检测100份血清标本,有良好的相关性(Y=1.0219X-1.1720,r=0.9871)。本研究建立了LN荧光免疫检测方法,各项性能指标均达到临床检验要求,操作便捷、结果准确,可用于临床血清LN水平的检测。     

降钙素原在感染性疾病中的临床应用价值

目的探讨血清降钙素原(PCT)检测在感染性疾病诊断中的应用价值。方法采用半定量固相免疫测定法检测血清PCT水平,统计分析213例感染性疾病患者血培养结果和血清PCT水平。结果若以PCT≥0.5ng/mL为阳性阈值,对照血培养结果,血清PCT检测对细菌性感染的敏感性为76.5%,特异性为96.3%。而病毒感染或非细菌感染性炎症患者血清PCT均小于0.5ng/mL。结论 PCT是快速诊断细菌感染性疾病较为特异的指标,可了解细菌感染的严重程度及指导抗菌治疗。     

血流感染诊断中降钙素原定量检测与血培养的应用

目的分析血流感染诊断中降钙素原定量(PCT)检测与血培养的应用效果。方法抽取本院(2017年9月-2018年9月)收治的60例血流感染患者及无血流感染者60例作为研究对象,前者定为观察组,后者定为对照组,两组研究对象均实施降钙素原定量检测与血培养检测,分析降钙素原定量检测与血培养在血流感染疾病诊断中的效果。结果观察组经血培养检测,阳性患者48例、阴性患者12例;对照组经血培养检测均为阴性。观察组经PCT浓度检测在2.1-10.0 ng/mL者50例、超过10.0 ng/mL者10例;对照组经PCT浓度检测<0.5 ng/mL者37例、在0.5-2.0 ng/mL者23例。对观察组阳性检出率进行分析,PCT阳性检出率高于血培养相比,差异具统计学意义,P<0.05。结论血流感染患者早期,PCT会明显上升,可将其作为诊断血流感染的主要手段,值得临床推广。     

FinecareⅡPOCT法检测降钙素原的临床应用评价

目的：评价POCT法检测血清降钙素原（PCT）的应用价值。方法采用化学发光法（罗氏Cobas e601分析仪,电化学发光法）为参考方法,以荧光免疫法（万孚FinecareⅡ分析仪,POCT法）为实验方法,检测98例住院患者的血清PCT,2种方法结果应用EP evaluator软件中的半定量方法学比较（AMC）模块进行比对分析。结果统计分析结果表明,2种方法的符合率为86.7%;对称性试验（McNemar Test）P=0.166,ChiSq=1.923,1df（P＞0.05）;Cohen＆#39;s Kappa系数为81.1%,性能指标良好。结论荧光免疫法检测PCT与化学发光法比较,结果一致性良好;因使用POCT法,万孚FinecareⅡ分析仪更具简便、灵活的特点。但因灵敏度（最小检出限）低于化学发光法,故PCT在0.05-0.5 ng/mL浓度区间,荧光免疫法尚不能精确定量,在实际应用于中要加以注意。