肝癌患者外周血清生存素检测的临床意义

目的建立血清生存素的测定方法,初步评价其在肝癌诊断中的价值。方法建立人血清生存素的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),对方法的精密度和线性范围等进行评价。用此方法检测80例肝癌患者和80名健康成人血清生存素蛋白,分析其与血清甲胎蛋白(AFP)之间的关系。结果以生存素单克隆抗体和抗血清建立了血清生存素的双抗体夹心ELISA测定方法。方法的批内变异系数(CV)为10.33%,批间CV为11.71%;稀释试验显示方法的线性范围为生存素蛋白原液～1∶32稀释液;对照组吸光度(A)值0.002～0.115(0.047±0.032);以x+3s作为方法的cutoff值(0.143)。80例肝癌患者血清生存素蛋白测定A值0.031～1.415,其中A值>cutoff值的有50例(62.5%)。肝癌组血清AFP测定有58例阳性,阳性率为72.5%。血清生存素和AFP联合检测对肝癌的检出率为90%,二项结果不一致的有36例(45.0%)。结论外周血生存素蛋白含量在肝癌患者中显著升高,提示该基因参与了肝癌的发生过程;生存素测定结果与AFP无关,提示其可能成为肝癌的辅助诊断指标。     

基于抗体-适配子建立的高尔基体蛋白73检测方法的研究

目的建立基于抗体-适配子双夹心的高尔基体蛋白73(GP73)ELISA检测方法,并用于血清GP73的检测。方法以抗体-适配子双夹心的模式,通过正交试验和方阵滴定试验确定GP73特异性抗体和适配子最佳工作水平、反应的温度和时间等。以GP73重组蛋白建立标准曲线并评价该方法灵敏度、精确度、线性及准确度等。利用该方法对59例对照组患者及77例肝癌患者血清进行GP73水平检测,并同步进行电化学发光定量测定甲胎蛋白(AFP)水平。结果该方法标准曲线的批内变异系数(CV)为3.87%,批间CV平均为4.44%;平均回收率为95.8%,灵敏度达12.0ng/mL。肝癌患者血清GP73水平均明显高于对照组、肝炎组和肝硬化组(P0.05)。GP73对原发性肝癌诊断灵敏度为85.7%,而AFP为62.3%;而早期肝癌中GP73和AFP灵敏度分别为76.7%、36.7%。结论成功建立基于抗体-适配子夹心的GP73ELISA检测方法,该方法可用于临床检测GP73水平。     

检测抗烟曲霉分泌蛋白抗体的ELISA法及其诊断价值

目的建立检测人血清中抗烟曲霉特异性抗体的ELISA法,评估该法在侵袭性烟曲霉病(IA)诊断中的价值。方法用沙氏液体培养基震荡培养烟曲霉,TCA/丙酮沉淀法分离菌体蛋白和培养上清中的分泌蛋白。用烟曲霉播散感染的家兔血清及确诊IA患者血清,分别与菌体蛋白和分泌蛋白进行免疫印迹分析,选择反应强的分泌蛋白作为包被抗原,建立测定抗烟曲霉特异抗体的ELISA,并对方法的精密度和特异性进行考察、确定cut off值。对实验动物模型血清以及5例确诊、24例临床诊断为IA的患者血清样本进行测定,并与血清半乳甘露聚糖(GM)测定结果进行比较。结果免疫印迹结果显示培养获得的烟曲霉分泌蛋白与感染动物和病人血清均呈现强反应,以其作为包被抗原建立的ELISA法精密度良好,批内CV=12.0%,批间CV=8.1%;阻断试验证实此法对烟曲霉抗体具特异性。依据200份健康人血清测定结果,取吸光度(A)值1.03作为cut-off值。健康人抗体阳性率为2.0%(4/200),IA患者阳性率41.4%(12/29),二者差异显著(P<0.01)。2例临床诊断病人血清GM试验阴性,但抗体阳性,占8.3%(2/24)。实验感染的家兔均在感染后1周内测...     

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。     

支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测对非免疫功能低下患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值

目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)半乳甘露聚糖(GM)检测对非免疫功能低下患者侵袭性肺曲霉病(IPA)的诊断价值,并探索其最佳诊断cut off值。方法收集95例非免疫功能低下患者的血清及BALF标本,分为IPA组42例(确诊19例、临床诊断17例、拟诊6例)和非IPA组53例;采用双抗体夹心ELISA法测定血清及BALF样本GM浓度;统计分析诊断cut off值分别为0.5、1、1.5和2时BALF-GM和血清GM检测对IPA的诊断价值;通过ROC曲线分析,确定最佳cut off值。结果IPA组BALF-GM检测结果[1.53(0.48,4.72)]高于非IPA组[0.33(0.23,0.47)],差异有统计学意义(Z=5.022,P0.05);IPA组血清GM测定结果[0.38(0.16,0.66)]高于非IPA组[0.2(0.17,0.39)],差异有统计学意义(Z=2.231,P0.05)。cut off值分别为0.5、1、1.5和2时,BALF-GM测定的敏感性均高于血清GM,差异有统计学意义。χ2值分别为23、25、20和15,P均0.05);BALF-GM检测特异性除诊断cut off值为2时与血清GM检测相同,其他3个诊断cut off值的特异性结果均低于血清GM;随着cut off值的增加,BALF-GM测定的特异性增加,相应地敏感性降低。BALF-GM检测的最佳cut off值为0.65,其敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为71.4%、84.9%、78.9%和78.9%;血清GM最佳cut off值为0.425,其敏感性、特异性、PPV和NPV分别为47.6%、86.8%、80.0%和68.6%。结论 BALF-GM试验在诊断非免疫功能低下的IPA的敏感性明显高于血清标本GM试验,其最佳诊断cut off值为0.65。     

血清抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ肽段IgG类抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测人血清中抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ(dipeptidyl peptidasesⅤ,DPPⅤ)肽段IgG类抗体(抗DPPⅤ)的ELISA法,评估其对侵袭性曲霉病(IA)的早期诊断价值。方法用重组烟曲霉DPPⅤ肽段作为包被抗原,建立检测血清中抗DPPⅤ的ELISA法,检测105例IA患者、200例非IA患者及200例健康人血清中抗DPPⅤ水平,确定cut off值,考查方法的精密度和特异性。部分IA患者抗DPPⅤ结果与抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)抗体(抗TR)检测和曲霉半乳甘露聚糖(GM)检测结果对比,评价其临床应用价值。结果以建立的ELISA法检测吸光度(A)值为6.688、0.709的2份抗DPPⅤ抗体阳性血清,批内变异系数(CV)为4.1%和8.0%,批间CV为7.1%和10.7%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率90%。以A值0.542为cut off值,对IA诊断的敏感性为66.7%,特异性为90.7%。非中性粒细胞缺乏的IA患者抗DPPⅤ阳性率(75.3%,55/73)高于中性粒细胞缺乏的IA患者(46.9%,15/32),差异有统计学意义(χ2=8.11,P0.05);92例IA患者血清抗DPPⅤ、抗TR和GM测定总阳性率分别为63.0%、60.9%和73.9%,差异无统计学意义(P0.05);中性粒细胞缺乏的IA患者GM阳性率(89.7%)显著高于抗DPPⅤ、抗TR的阳性率(41.4%和34.5%),χ2分别为14.96、18.75,P均0.01。抗DPPⅤ与抗TR联合检测阳性率达到82.6%,抗DPPⅤ、抗TR和GM试验三者联合检测的阳性率可提高到96.7%。结论检测抗DPPⅤ抗体的ELISA法精密度和特异性较好,对侵袭性曲霉感染具有潜在的辅助诊断价值,联合多个指标检测可提高诊断的敏感性。     

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值

目的 利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值.方法 收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醉化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方...     

ELISA双抗体夹心法检测嗜铬蛋白A的性能评价及临床应用

目的验证酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测嗜铬蛋白A(Cg A)的性能,评价其初步的临床应用价值。方法方法学验证参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A、EP6-A和EP17-A文件,对项目的精密度、线性和定量检测下限进行验证。采用厂商提供的质控品验证正确度。检测66例神经内分泌肿瘤患者、41名健康对照者和65例疾病对照患者的Cg A水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Cg A对神经内分泌肿瘤患者的诊断能力。结果 ELISA双抗体夹心法检测血清Cg A的批内变异系数(CV)14.00%、批间CV8.00%;正确度验证测定值的均值在标示浓度范围内,相对偏移为4.51%;在8~740 ng/m L的范围内线性良好(Y=0.793X-3.791,r2=0.988);定量检测下限为7.93 ng/m L。神经内分泌肿瘤组、健康对照组和疾病对照组之间血清Cg A水平差异均有统计学意义(P0.000 1);Cg A鉴别正常人与神经内分泌肿瘤患者的ROC曲线下面积(AUC)为0.741,最佳诊断界值为47.18 ng/m L,诊断敏感性为78.8%,特异性为68.3%。结论 ELISA双抗体夹心法检测Cg A试剂盒具有良好的精密度、正确度、线性范围和定量检测下限,检测性能符合临床要求。血清Cg A水平在神经内分泌肿瘤患者中显著升高,因此可用于鉴别健康人和神经内分泌肿瘤患者。     

原发性肝癌患者外周血生存素检测的意义

目的 评价原发性肝癌患者外周血生存素检测对于疾病诊断的价值,与甲胎蛋白(AFP)、肿瘤临床分期的关系.方法 将研究对象分为原发性肝癌组(n=56)、肝硬化对照组(n=22)和正常对照组(n=28).原发性肝癌组患者按照AFP浓度分为AFP正常、升高2个亚组或按照肿瘤临床分期分为3个亚组.各组空腹采集静脉血3 ml,通过双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测生存素浓度.结果 原发性肝癌组外周血生存素浓度高于肝硬化对照组和正常对照组,(87.6±26.1)ng、L VS(51.25±31.3)ng、L、(60.2±32.9)ng、L(P＜0.01);肝硬化对照组与正常对照组外周血生存素浓度差异无统计学意义.原发性肝癌组中AFP正常亚组与升高亚组外周血生存素浓度差异无统计学意义,不同临床分期3个亚组外周血生存素浓度差异亦无统计学意义.根据试验结果绘制受试者工作特征(ROC)曲线.曲线下面积为0.797(P＜0.01).结论 外周血生存素可能是一种有价值的原发性肝癌血清学非特异性辅助诊断指标,对于初次诊断及复发监测具有一定的价值,并有助于血清AFP水平正常的原发性肝癌及早期原发性肝癌诊断.     

DcR3双抗体夹心ELISA法的建立及其在原发性肝癌中的应用前景

目的:建立一种新的双抗体夹心ELISA法,以检测血清中DcR3抗原的浓度.辅助诊断原发性肝癌.方法:探索建立DcR3双抗体夹心ELISA法最适反应务件.结果:所建立方法线性范围广、灵敏度较高、精密度较好、回收率较高,批间和批内变异系数均＜10%.对50例正常对照组的检测结果进行统计学分析,确定参考值范围为1.59～60.71 ng/mL((x)±2s).原发性肝癌组同正常对照组血清DcR3抗原水平差异有显著性(P＜0.01).结论:该法是一种较好的定量测定血清DcR3抗原的ELISA法,它可以为原发性肝癌患者的诊断提供一种新的辅助指标.