TUBA1C促进人肺腺癌细胞系增殖和迁移的机制研究

目的　探究TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征及其对人肺腺癌细胞系增殖、迁移的影响和相关潜在分子机制。方法　通过临床数据库GEPIA 检索TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征以及与临床预后相关性;通过30 组临床组织样本探究TUBA1C 在肺腺癌及其临近正常组织中的表达特征;通过siRNA 介导敲低TUBA1C 表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别检测TUBA1C 对肺腺癌细胞生物学行为的影响;通过分析与TUBA1C 共表达基因参与的信号通路,探索TUBA1C 在肺腺癌发展进程中的潜在分子机制,并进一步通过回补实验进行验证。结果　GEPIA 数据库检索显示肺腺癌中TUBA1C 显著高表达（P<0.05）,且高表达的病人具有不良预后（logrankP=9.3E-5）。30 组肺腺癌临床样本中TUBA1C 表达水平（6.4±1.3）显著高于癌旁正常组织（5.2±0.9）,差异有统计学意义（t=4.157,P ＜ 0.001）,且随着癌症的不断恶化,TUBA1C 表达逐渐升高（P=0.003 49）。转染培养3,4 和5天时siTUBA1CA#1 组和siTUBA1CA#2 组细胞增殖A 值明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=7.000~27.780,P＜ 0.05）。siTUBA1CA#1 组（41.2±1.5）和siTUBA1CA#2 组（40.3±1.3）细胞克隆形成率明显低于对照组（72.4±2.2）,差异有统计学意义（F=342.482,P ＜ 0.001）;两实验组细胞迁移率为73.4±3.2 和72.1±2.8,明显低于对照组（98.6±1.7）,差异有统计学意义（F=95.778,P ＜ 0.001）;细胞周期较对照组相比显著阻滞在G1 期。siTUBA1CA#1 组（0.21±0.02,0.33±0.03）和siTUBA1CA#2 组（0.20±0.03,0.36±0.02）细胞中E2F1 和MYC mRNA 表达水平较对照组（1.01±0.03,1.00±0.02）明显降低,差异有统计学意义（F=883.773,758.294,均P ＜ 0.001）。在敲低TUBA1C 表达的细胞中分别回补E2F1,MYC 以及共回补E2F1 和MYC 后,细胞增殖速率、迁移速率及细胞周期较单纯敲低TUBA1C 组相比均逐渐恢复正常（P<0.01）,接近正常水平。结论 　肺腺癌中TUBA1C 高表达,通过激活促癌基因E2F1 和MYC 的表达促进肺腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移,诱导细胞凋亡,参与促进肺腺癌的发展进程。     

肝癌组织中lncRNA-PRR34-AS1的表达特性及其对肝癌细胞增殖、迁移的影响和潜在分子机制

目的　分析长链非编码RNA-PRR34-AS1在肝癌组织中的表达特性，探究其对肝癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子作用机制。方法　收集2020年6月～12月于榆林市第二医院行手术治疗的30例肝癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织标本，采用实时荧光定量PCR实验（RT-qPCR）检测组织中LncRNA-PRR34-AS1相对表达水平。通过转染siRNA介导敲低PRR34-AS1基因表达，利用细胞增殖实验和细胞迁移实验验证PRR34-AS1对肝癌细胞增殖、迁移的影响；通过生物信息学数据库网站预测PRR34-AS1与JAK1结合的基因位点，双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系，探究其在肝癌发生发展中的调控作用。结果　30例临床肝癌组织中PRR34-AS1表达显著高于癌旁正常组织（5.714±0.612 vs 2.981±0.572)，差异有统计学意义(t=17.870，P=0.000），PRR34-AS1具有高表达预后差的临床特征。敲低PRR34-AS1后，转染24，48和72 h时siRNA-PRR34-AS1#1组和siRNA-PRR34-AS1#2组细胞增殖率较对照组明显降低，差异均有统计学意义（F=83.440～89.297，均P<0.001）；siRNA-PRR34-AS1#1组（38.451±4.263）和siRNA-PRR34-AS1#2组（42.106±3.512）细胞愈合迁移速率较对照组（83.247±6.205）显著减慢，差异均有统计学意义（F=83.357，P＜0.001）。JAK1是PRR34-AS1的靶基因，siRNA-PRR34-AS1#1组（0.453±0.019）和siRNA-PRR34-AS1#2组（0.476±0.022）细胞中JAK1相对表达较对照组相比（1.002±0.003）明显降低，差异均有统计学意义（F=716.287，P＜0.001）。转染敲低JAK1表达后，各转染时间点siRNA-JAK1#1组和siRNA-JAK1#2组细胞增殖速率较对照组明显减缓，差异均有统计学意义（F=45.465~76.548，均P<0.05）。30组临床肝癌组织中JAK1表达显著高于癌旁正常组织（5.963±1.214 vs 4.052±0.876)，差异有统计学意义(t=6.992，P=0.000），PRR34-AS1与JAK1表达呈显著正相关（r=0.907，P<0.05）。在敲低PRR34-AS1表达的肝癌细胞中回补JAK1后，肝癌细胞增殖、迁移速率又回归到正常水平。结论　肝癌中PRR34-AS1显著高表达，其可能通过正向调控JAK1表达影响JAK/STAT信号通路，进而调控促进肝癌细胞的增殖和迁移。     

miRNA-181c对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-181c(miR-181c)在人肺腺癌组织中的表达及其对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响。方法收集37例肺腺癌患者组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌组织及相应癌旁组织中miR-181c的表达水平。脂质体法将miR-181c模拟物和miR-181c抑制剂分别转染至SPC-A1细胞中,CCK-8增殖实验检测转染后SPC-A1细胞的增殖能力,Transwell法检测转染后SPC-A1细胞的侵袭能力。结果肺腺癌组织中miR-181c的表达水平[3.259(1.637,4.920)×10-3]高于癌旁组织[2.008(1.200,3.292)×10-3],差异有统计学意义(U=-641.0,P0.05)。miR-181c的表达水平与淋巴结转移密切相关(P0.05)。转染SPC-A1细胞120 h后,miR-181c模拟物转染组的细胞增殖能力高于于阴性对照组,差异有统计学意义(2.029±0.034 vs 1.476±0.071;t=7.044,P0.01);而miR-181c抑制剂转染组细胞的增殖能力弱于阴性对照组,差异有统计学意义(0.998±0.050 vs 1.414±0.058;t=5.461,P0.01)。Transwell结果显示,转染miR-181c模拟物后SPC-A1侵袭能力显著增强(432.00±12.22 vs 219.50±9.31;t=14.11,P0.01),转染抑制剂后侵袭能力显著减弱(73.60±5.32 vs 227.30±11.27;t=11.52,P0.01)。结论 miR-181c在肺腺癌组织中高表达,并能促进SPC-A1细胞的增殖与侵袭。     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检测OIP5-AS1和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常细胞肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2170中OIP5-AS1表达显著增加,miR-511-3表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);敲低OIP5-AS1或者过表达miR-511-3p显著抑制了肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭;OIP5-AS1可以靶向负调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以部分回复敲低OIP5-AS1对肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 LncRNA OIP5-AS1通过靶向调控miR-511-3p的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

人肺腺癌细胞系中SIRT1表达与奈达铂敏感性的关系

目的探讨5株人肺腺癌细胞系HCC827、H1650、H1975、A549和H1299中沉默信息调节因子1(Sirtuin 1,SIRT1)与奈达铂(Nedaplatin,NDP)药物敏感性的关系。方法采用实时定量PCR及western blot检测5株人肺腺癌细胞系SIRT1 m RNA及蛋白质表达水平;NDP作用于细胞后,用CCK-8法检测细胞活力并计算半数生长抑制浓度值(the half growth inhibition concentration,IC50);通过si RNA干扰技术下调A549、H1299、H1650和H1975细胞系中SIRT1的表达,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测NDP对细胞存活率和细胞凋亡的影响。结果与HCC827细胞(m RNA和蛋白质相对表达量分别为1.00和0.11±0.02)相比,H1650、H1975、A549和H1299细胞中SIRT1 m RNA(分别为4.53±0.74、3.11±0.64、15.76±2.28和18.09±1.17)和蛋白质表达水平(分别为0.23±0.03、0.21±0.02、0.52±0.11和0.56±0.08)均明显上调,差异有统计学意义(F分别为122.10和26.50,P0.01);A549和H1299细胞对NDP的敏感性[IC50值分别为(7.38±1.59)μmol/L和(8.14±1.43)μmol/L]明显高于HCC827、H1650和H1975细胞[IC50值分别为(26.16±4.35)μmol/L、(22.29±3.26)μmol/L和(24.41±2.58)μmol/L],差异有统计学意义(F=30.86,P0.01)。A549和H1299细胞转染并经NDP处理后,si SIRT1组细胞存活率明显高于NC组(F分别为235.10和39.20,P0.01),细胞凋亡率明显低于NC组(t分别为7.29和6.68,P0.05);而在H1650和H1975细胞中,si SIRT1组细胞存活率明显低于NC组(F分别为185.40和60.09,P0.01),细胞凋亡率明显高于NC组(t分别为6.15和31.36,P0.01)。结论在SIRT1高表达的A549和H1299细胞中SIRT1表达增加了细胞对NDP敏感性,而SIRT1中表达的H1650和H1975细胞中SIRT1表达降低了细胞对NDP的敏感性,提示在人肺腺癌细胞中SIRT1可能在铂类耐药发挥双重作用。     

LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响

目的　检测 LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织及细胞中的表达，探究其对细胞增殖和迁移的影响。方法　收集 2015年 1 月 ~2018 年 6 月在汉中市人民医院行手术治疗并经病理确诊的 36 例甲状腺癌患者癌组织标本及其相对应的正常癌旁甲状腺组织进行研究。采用 qRT-PCR 法检测甲状腺癌组织及 SW1736，FTC-133 细胞株中 LncRNA TUG1 表达水平。将shRNA 插入慢病毒质粒中构建 LncRNA TUG1 低表达质粒（LV-shTUG1）。采用 MTT 法、集落形成实验及 Transwell 实验检测敲降 LncRNA TUG1 表达对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响；采用蛋白印迹分析实验检测 LncRNA TUG1 对 EMT 相关蛋白E-cadherin和N-cadherin表达的影响。结果　与正常癌旁甲状腺组织相比，甲状腺癌组织中LncRNA TUG1高表达，差异有统计学意义（6.90±1.19 vs 1.51±1.02，t=20.634，P ＜ 0.000）。与 Nthy-ori 3-1 细胞相比，FTC-133 细胞（1.00±0.09vs 4.61±0.15）和 SW1736 细胞（1.00±0.09 vs 2.59±0.23）中 LncRNA TUG1 水平明显升高，差异有统计学意义（t=35.744，P ＜ 0.000；t=11.150，P ＜ 0.000）。敲降 LncRNA TUG1 表达后， SW1736 细胞（1.31±0.19 vs 0.89±0.16）和 FTC-133细胞（2.17±0.09 vs 1.68±0.05）增殖能力较对照组明显降低，克隆形成数目明显减少，差异有统计学意义（t=2.929，P=0.021；t=8.243，P=0.001）。敲降 LncRNA TUG1 表达后，FTC-133 细胞迁移能力（1 675.2±64.2 vs 898.1±156.4）较对照组显著降低，差异有统计学意义（t=7.961，P=0.001）。敲降 LncRNA TUG1 表达后，与对照组相比，E-cadherin 表达量（0.74±0.06 vs 1.66±0.17）显著升高，N-cadherin表达量（1.27±0.18 vs 0.39±0. 07）显著降低，差异有统计学意义（t=8.839，P ＜ 0.000；t=7.892，P=0.001）。结论　LncRNA TUG1 在甲状腺癌组织及细胞中高表达，促进甲状腺癌细胞增殖和迁移，可能通过促进 EMT 的形成进而促进甲状腺癌细胞的生物学行为。     

前列腺癌患者内皮素-1 mRNA表达变化的研究

目的 探讨内皮素-1（EOA-1）mRNA表达与前列腺癌发生的关系.方法 住院前列腺癌患者80例,经手术切除的癌组织及相应的癌旁组织Trizo-l法提取总RNA,逆转录cDNA,实时定量PCR检测EDN-1 mRNA表达量,并进行统计学分析.结果 EDN-1 mRNA在80例前列腺癌组织中表达为（3.58±0.15）×10 6,而在癌旁组织中表达为（2.62±0.11）×104,两组相比差异有统计学意义（t=13.27,P＜0.01）.在肿瘤大小上pT1.与pT4xEDN-1 mRNA表达量差异有统计学意义（t=22.52,P＜0.01）.淋巴结转移情况看pN03与pNxxEDN-1 mRNA表达量差异也有统计学意义（t=36.31,P＜0.01）.病理学分级上G1-G2的EDN-1 mRNA表达量比G3 NA的高,两者相比差异有统计学意义（t=33.64,P＜0.01）.结论 EDN-1 mRNA表达与前列腺癌细胞增殖与转移有关.     

结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系

目的探讨结肠癌组织中长链非编码RNA（lncRNA）肿瘤蛋白翻译调节因子1（TPT1）-反义RNA1（AS1）、微小RNA（miR）-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系。 方法选取2015年1月至2017年12月深圳大学附属第一医院收治的117例接受根治性或姑息性手术切除结肠癌患者,均行手术切除结肠癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平,分析lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平与结肠癌病理特征的关系,采用Pearson相关性检验分析结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平的相关性,Kaplan-Meier曲线绘制不同lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平结肠癌患者3年累积生存率,Cox回归分析结肠癌患者预后影响因素。 结果结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达水平明显高于癌旁组织（3.405±0.555 vs 1.766±0.096）,miR-30c-5p表达水平（0.306±0.146 vs 0.872±0.267）明显低于癌旁组织（P＜0.05）。结肠癌lncRNA TPT1-AS1表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期（3.651±0.579 vs 3.257±0.486）,浸润深度T₃~T₄明显高于T₁~T₂（3.523±0.601 vs 3.301±0.491）,有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移（3.614±0.585 vs 3.220±0.456）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-30c-5p表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显低于Ⅰ~Ⅱ期（0.251±0.126 vs 0.346±0.145）,浸润深度T₃~T₄明显低于T₁~T₂（0.270±0.119 vs 0.338±0.162）,有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移（0.255±0.125 vs 0.351±0.151）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平呈负相关（r=-0.572,P＜0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示,lncRNA TPT1-AS1高表达水平组3年累积生存率明显低于低表达水平组（59.32% vs 87.93%）,miR-30c-5p高表达水平组3年累积生存率明显高于低表达水平组（85.00% vs 61.40%）（P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期（HR=2.387,95%CI：1.004~5.671）、淋巴结转移（HR=2.667,95%CI：1.021~6.969）、lncRNA TPT1-AS1≥3.405（HR=2.023,95%CI：1.076~3.803）为结肠癌患者预后独立风险因素,miR-30c-5p≥0.306（HR=0.175,95%CI：0.012~0.423）为独立保护因素（P＜0.05）。 结论结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达显著上调,miR-30c-5p表达显著下调,两者与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关,为患者预后独立影响因素,可能成为结肠癌预后评估的标志物。     

脂多糖刺激对miR-155调节B淋巴细胞肿瘤样变的影响

目的研究脂多糖刺激后对微小RNA（miR-155）诱导B淋巴细胞肿瘤样变的影响。方法实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测脂多糖刺激后0 h、4 h、12 h、24 h、48 h B淋巴母细胞中miR-155的表达量，同时检测转录因子PU1mRNA和蛋白水平的表达，流式细胞技术检测B细胞表面分子CD10表达变化。结果脂多糖刺激B淋巴细胞后，随着时间的增加，miR-155表达呈递增趋势，增至正常水平3.6倍，刺激前后B淋巴母细胞miR-155表达差异有统计学意义（t=6.76，P＜0.05）。而转录因子PU1表达水平呈降低趋势，刺激前后B淋巴母细胞PU1表达差异有统计学意义（t=4.22，P＜0.05）。脂多糖刺激B淋巴细胞24 h后CD10数量由（32.10±2.82）%上升到（80.60±3.14）%，差异有统计学意义（t=2.13，P＜0.05），B淋巴细胞增殖能力增强，细胞克隆数增加近4倍，差异有统计学意义（t=2.56，P＜0.05）。结论 miR-155通过转录因子PU1间接调控CD10分子的表达，诱导B细胞的肿瘤样变，推断miR-155在B淋巴细胞的成瘤过程中发挥重要作用。     

探讨大肠腺癌中SDF-1、CXCR4 mRNA的表达及相关性

目的 探讨基质细胞来源因子1 （stromal cell-derived factor 1,SDF-1）及其受体C-X-C家族趋化因子受体（C-X-C chemokine receptor,CXCR4） mRNA的表达与大肠腺癌发生及浸润转移的关系.方法 应用逆转录聚合酶链法检测50例大肠腺癌、30例正常肠黏膜组织中SDF-1和CXCR4的mRNA表达情况,并进行统计学分析.结果 SDF-1mRNA、CXCR4mRNA在大肠腺癌组织中的表达量显著高于正常肠黏膜组织,且差异均有统计学意义（P均＜ 0.01）;SDF-1 mRNA、CXCR4 mRNA的表达量与患者的性别、年龄、分化程度无关（P均＞ 0.05）,与癌组织浸润深度和淋巴结转移有关（P均＜0.05）;大肠腺癌组织中SDF-1mRNA和CXCR4mRNA的表达呈正相关（r=0.847,P＜ 0.01）.结论 SDF-1及其受体CXCR4在大肠腺癌发生及浸润转移中发挥着重要作用.     

Genetic polymorphism of cytochrome P450 1A1 (Cyp1A1) and glutathione transferases (M1, T1 and P1) among Africans.

The co-ordinate expression and regulation of the drug metabolising enzymes, cytochrome P4501A1 (CYPlAl) and glutathione transferases (GSTM1, GSTT1 and GSTP1), and their metabolic balance in the cells of target organs may determine whether exposure to carcinogens results in cancer. Besides showing variability in activity due to induction and inhibition, these enzymes also exhibit genetic polymorphism that alter enzyme levels and activity. We determined frequencies of common allelic variants of CYP1A1 and glutathione (M1, T1 and P1) among Tanzanians, South African Venda and Zimbabweans using PCR/restriction fragment length polymorphism techniques. The CYP1A1 Val462 mutant variant was found at a frequency of 1.3% among 114 subjects. The GSTM1*0 genotype was found at a frequency of 29% and 33% among Tanzanian psychiatric patients and healthy volunteers, respectively. Similarly, the GSTT1*0 polymorphism was present with a frequency of 25% in both the psychiatric patients and healthy controls. The frequency of GSTP1 Val105 variant was 16%, 12% and 21% among Tanzanians, South African Venda and Zimbabweans, respectively. We conclude here that CYP1A1 Val462 polymorphism is very rare among Africans. This is the first report of the GSTP1 Val105 variant frequency in African populations. We show here that there are no differences in frequencies of the variant alleles for CYP1A1, GSTM1, GSTT1 and GSTP1 in the three African populations.     

鼻咽癌CT与MRI诊断及其对比分析

ＣＴ和ＭＲＩ的广泛应用对诊断鼻咽癌成为可能。本文旨在找出ＣＴ与ＭＲＩ对显示鼻咽癌向周围侵犯的特点。１材料及方法从１９９４到１９９７年,对６４例鼻咽癌病人进行了ＣＴ与ＭＲＩ检查。男４８例,女１６例;年龄１８～７１岁（平均４６岁）,所有病例活检证实为鳞状...     

心肌运动能量技术在显像困难病人中的初步应用

本文采用心肌运动能量技术对３１例临床上显像困难病人进行观察．现将结果报告如下。１资料与方法本组３１例病人,年龄４３～７４岁,男１８例,女１３例。其中肺气肿病人７例,肥胖病人１０例,冠心病陈旧性心肌梗塞病人１０例,高血压病人４例。采用美国ＡＴＬ公司生产...     

椎基底动脉供血不足的经颅多普勒检测分析

本文通过对本院５２５例临床诊断为椎基底动脉供血不足（简称ＶＢＩ）的病人行颈内动脉系统及椎基底动脉系统的ＴＣＤ血流检测,结果分析如下。１资料与方法临床诊断为ＶＢＩ患者５２５人,平均年龄６０５岁,主要症状为眩晕、头痛、耳鸣、共济失调等。采用美国ＭＥＤＡ...     

应用彩色超声评定下肢深静脉血栓的不同疗法

资料与方法选择１９９５年２月至１９９８年４月我院住院病人,２８例股静脉血栓完全阻塞的病例,其中１７例经静脉点滴输液溶栓,１１例经介入直接溶栓;２１例静脉血栓完全阻塞的病例,１２例经静脉点滴输液溶栓,９例经介入法溶栓。男：女为２：１,年龄３０～５６岁...     

甲状腺扫描冷凉结节与病理结果对照研究

我院从１９９３年１０月～１９９７年１０月有２４０例甲状腺扫描为冷凉结节的患者,均有手术病理结果对照,现报道如下。１资料和方法本文２４０例,男５３例,女１８７例,年龄１９～７１岁,平均４５６岁。仪器为德国ＳＩＥＭＥＮＳ公司ＤＩＡＣＡＭ型ＳＰＥＣＴ仪,...