利用国产IVIg分离纯化抗-Aβ初探

目的利用国产IVIg初步探讨抗-Aβ的分离纯化技术。方法首先,用人工合成的人源Aβ1-42进行聚合以制备Aβ寡聚体并通过SDS-PAGE对其进行鉴定。其次,通过偶联缓冲液(0.6 mol/L柠檬酸钠、0.2 mol/L碳酸钠,PH:10)将制备好的Aβ偶联到Ultra Link Biosupport凝胶上,然后将稀释后的IVIg加入到偶联好的凝胶上,经过平衡(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗涤(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗脱(0.1 mol/L甘氨酸缓冲液,PH:2.2),从而分离纯化出抗-Aβ。最后,通过ELISA和SDS-PAGE鉴定纯化出的抗-Aβ抗体。结果聚合的Aβ1-42除了含有少量尚未聚合的单体外,主要为不同分子量的寡聚体(如:三聚体、八聚体、十二聚体等)。所获得抗-Aβ回收率为21.1%、比活为9 671.9 ng/mg、提纯倍数为248。结论使用离心柱法亲和层析可从国产IVIg制品中分离纯化出抗-Aβ。     

一种新的电泳缓冲体系用于CK—MB的分离

本文用一种新的中性pH 缓冲液作为电泳缓冲液分离CK-MB,并利用琼脂糖凝胶缓冲液与电泳缓冲液的不连续,提高了CK-MB 测定的敏感度和分辨率.其测定敏感度较经典的巴比妥电泳系统可提高一倍左右.与固外通用的MOPS 电泳系统蛄果相近。8例急性心肌梗塞患者血清CK-MB 为15.3±3.2%.对急性心肌梗塞诊断的阳性率为100%,特异性为99.4%.     

测定血红蛋白A_2的简单标准化方法

作者介绍了一种诊断杂合子β-地中海贫血的标??准化方法.它以两种不同的缓冲液在醋酸纤维薄膜上进行血红蛋白(Hb)的电泳分离。将分离的含有Hb的纤维膜分别剪下,并完全溶解后再作比色测定,求出HbA_2的百分率。它比曾介绍的电泳、色谱和免疫学方法都更简单、快速和便宜,因     

毛细管电泳-激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

目的探讨毛细管电泳分离神经递质类氨基酸的影响因素。方法采用毛细管电泳法分离4种神经递质类氨基酸的荧光素异硫氰酸酯(FITC-AAs)衍生物,分析电泳缓冲液、表面活性剂以及衍生条件对分离的影响。结果电泳缓冲液的组成、浓度、pH值、表面活性剂以及衍生条件对4种FITC-AA衍生物分离有很大影响,在以75 mm ol/L,pH 9.42硼酸盐含100 mm ol/LSDS为电泳缓冲液,50 mmol/LpH 9.8硼酸盐为衍生缓冲液,4种FITC-AA衍生物20 min内得到很好分离。结论通过条件优化,毛细管电泳-激光诱导荧光技术分离神经递质类氨基酸的分离效果能得到很大提高。     

高效毛细管电泳分离氨基酸部分影响因素的探讨

目的探讨高效毛细管电泳分离氨基酸的有关影响因素。方法用毛细管电泳法对20种常见氨基酸的2,4—二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂对分离的影响。结果缓冲液浓度、pH值及有机溶剂对氨基酸的DNFB衍生物分离有很大的影响,而表面活性剂基本对其无影响。在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。结论以浓度为30 mmol/L、pH值9.9的硼砂溶液含15%异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果最佳,分离时间30 m in,出峰17个。     

高效毛细管电泳分离氨基酸部分影响因素的探讨

目的探讨高效毛细管电泳分离氨基酸的有关影响因素。方法用毛细管电泳法对20种常见氨基酸的2，4-二硝基氟苯（DNFB）衍生物进行了分离研究，分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂对分离的影响。结果缓冲液浓度、pH值及有机溶剂对氨基酸的DNFB衍生物分离有很大的影响，而表面活性剂基本对其无影响。在优化条件下，17种氨基酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。结论以浓度为30mmol／L、pH值9．9的硼砂溶液含15％异丙醇为运行缓冲液，分离氨基酸DNFB衍生物效果最佳，分离时间30min，出峰17个。     

醋酸纤维薄膜电泳测定淀粉酶同工酶

我们用醋酸纤维薄膜分离淀粉酶同工酶,并以灭活牛血清溶液浸膜,电泳分离效果满意.一、试剂1.0.02M 磷酸盐缓冲液(PH7.4,含氯化钠0.02g/dl).     

控制微流控芯片电泳中的蛋白质吸附

目的探讨抑制微流控芯片电泳中蛋白质的吸附,以提高芯片电泳蛋白质的分离效率及重现性。方法以蛋白质标准品、临床尿液标本为实验对象,通过提高缓冲液的pH值、在缓冲液中加入适当的添加剂等方法,进行芯片蛋白电泳,并与常规琼脂糖电泳结果进行比较。结果使用pH值10.5硼酸缓冲液,转铁蛋白连续进样出峰时间的变异系数(CV)为5.22%;在pH值10.5硼酸缓冲液中加入1%的乙胺,能提高芯片电泳检测尿液蛋白的分离度、重现性,电泳结果与REP全自动电泳仪结果一致。结论使用该方法可有效地抑制芯片泳道壁对蛋白质的吸附,分离效率大为提高。     

利用亲和层析纯化β_2微球蛋白的实验方法

自1968年Berggard 首先从肾小管病变中分离和纯化β_2微球蛋白(β_2M),β_2M 的结构相继搞清.提纯β_2M 对纯化HLA 抗原提供了有用的工具.这里主要介绍从肾移植病人排异期尿中,通过凝胶过滤及抗人β_2M 亲和层析等分离纯化β_2M 的过程.一、材料和方法1.尿样浓缩:收集肾移植排异期尿,经5%磺基水杨酸测定尿蛋白定性为“++”以上排异期尿     

控制微流控芯片电泳中的蛋白质吸附

目的 探讨抑制微流控芯片电泳中蛋白质的吸附，以提高芯片电泳蛋白质的分离效率及重现性。方法 以蛋白质标准品、临床尿液标本为实验对象，通过提高缓冲液的pH值、在缓冲液中加入适当的添加剂等方法，进行芯片蛋白电泳，并与常规琼脂糖电泳结果进行比较。结果 使用pH值10．5硼酸缓冲液，转铁蛋白连续进样出峰时间的变异系数（CV）为5．22％；在pH值10．5硼酸缓冲液中加入1％的乙胺，能提高芯片电泳检测尿液蛋白的分离度、重现性，电泳结果与REP全自动电泳仪结果一致。结论 使用该方法可有效地抑制芯片泳道壁对蛋白质的吸附，分离效率大为提高。     

两种缓冲液分离定量HbA_2的比较

HbA_2含量测定对地中海贫血病人,尤其是β-地中海贫血病人的诊断有重要意义.但电泳分离HbA_2的方法较多,使用的浸膜液及电泳缓冲液也不尽相同,测定结果互有差异,影响诊断.本文对31份标本采用pH8.5TEB-硼砂,硼酸不连续缓     

西藏山南地区健康成人血清蛋白醋纤膜电泳参考值

我们用快速、低压电泳法,分离测定138例健康成人参考值,结果如下.一、材料与方法1.WD-3微型多功能电泳仪,成都军区总医院研制.电泳槽只需10ml 缓冲液.2.电泳电压75V(电流会随膜的多少而自动升降),电泳时间30分钟.采用常法.     

毛细管区带电泳分离大肠埃希菌部分因素的探讨

目的探讨毛细管区带电泳分离大肠埃希菌的有关影响因素。方法用毛细管区带电泳法对大肠埃希菌ATC-C25922进行了分离研究,分析缓冲液pH值、添加剂PEO分子量及浓度、电压和毛细管长度对分离的影响。结果缓冲液pH值、添加剂PEO分子量及浓度、电压和毛细管长度对毛细管区带电泳分离大肠埃希菌有较大影响,在优化的条件下,大肠埃希菌ATCC25922能达到很好的分离。结论调节贮存缓冲液TBE(4.5 mmoL/L Tris,4.5 mmoL/L硼酸,0.1mmoL/L EDTA)pH值至9.0,添加剂0.0125 g/dl PEO(Mr600 000),毛细管总长度50.2 cm,电压25 KV,毛细管区带电泳分离大肠埃希菌ATCC25922,分离时间20 min,峰形尖锐,效果最佳。     

非竞争免疫酶法定量测定血浆及腹膜透析液中β_2m及Alb

长期血液透析的肾病患者血浆及组织中β_2m的蓄积是诱发淀粉样变性的重要原因.作者用灵敏的ELISA测定血液透析及持续不卧床腹膜透析(CAPD)病人血浆及透析液中β_2m及Alb.比较了腹膜对这两种蛋白的清除率.实验分为3组:血液透析组,11例肾病患者以醋酸盐缓冲液透析23±15月((?)±SD).CAPD组.11例肾病患者以15g/L葡萄糖透析22±13月.18名健康成人为对照组.透析液总蛋白测定用Lowry法.血浆及透析液中β_2m和Alb测定均采用改良非竞争ELISA法.     

转化生长因子-β1对肿瘤血管形成的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠主动脉血管生长的作用,研究TGF-β1对肿瘤血管形成的影响。方法无菌分离出大鼠的胸主动脉,显微镜下小心地将大鼠的胸主动脉分离,并将剔好的动脉剪成小段,每段长度1～2mm;将主动脉放入盛有青霉素、链霉素的冰磷酸盐缓冲液中,拿出预先用Matrigel胶包被的48孔板,将动脉环小心接种到48孔板的Matrigel胶上;再取出液态Matrigel胶,加在环上,形成夹心状;37℃培养箱中再放置30min,使其凝固。人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养基中给予3.125、6.250、12.500ng/mLTGF-β1分别加至Matrigel胶上层;培养箱中常规培养并进行拍照、统计。结果显微镜下观察比较发现,随着TGF-β1水平增加,大鼠主动脉环的血管生成速度、密度、直径及血管分支长度均增加。结论 TGF-β1能刺激乳腺癌细胞血管内皮细胞的血管形成。     

两种嗜血杆菌在呼吸道感染患者痰培养中的检出情况及耐药分析

目的:通过对呼吸道感染患者痰标本的培养,以建立一种简便、有效的分离嗜血杆菌的方法,为临床提供诊断及用药依据.方法:利用嗜血杆菌分离专用巧克力平板对痰标本进行嗜血杆菌的分离,用HTM平板作药敏试验,用β-内酰胺酶纸片测定β-内酰胺酶.结果:在分离出的236株嗜血杆菌中,流感嗜血杆菌有124株,占52.5%,副流感嗜血杆菌112株,占47.5%,其中流感嗜血杆菌生物型以Ⅰ型(50.8%)、Ⅲ型(29.8%)为主,Ⅳ、Ⅷ型各占9.7%;副流感嗜血杆菌以Ⅰ型(61.6%)、Ⅱ型(25.0%)为主,Ⅲ型占13.4%.β-内酰胺酶产酶率为2.7%,对β-内酰胺类抗生素的敏感率较高.结论:用嗜血杆菌专用巧克力平板分离嗜血杆菌,方法简便、实用,效果较好,能满足临床需要.     

β—G酶动力学的研究

本文研究人血清β-G葡萄糖醛酸甘酶(β-G)水介酚酞葡萄糖醛酸(PGA)的动力学特征。在56℃0.2mol/L醋酸缓冲液最适pH值为4．4。最适波长550nm和保温时间1小时。所需PGA浓度为2m mol／L，米氏常数Km＝2．35m mol。此外：探讨了影响血清β-G活性的其他因素并建立了血清β-G的微量测定法。     

用差示pH技术测定红细胞的乙酰胆硷酯酶和血浆的胆硷酯酶的活性

胆硷酯酶活性测定方法有滴定法、pH测定法和分光光度法.用差示pH技术,测定胆硷酯酶是一种快速的简单的方法.可用于血浆和红细胞胆硷酯酶活性测定:取20μl血浆或全血,加入820μl缓冲液(含有8.1mmol/L KH_2PO_4,10.0mmol/L Na_4P_2O_7, 130mmol/L KCl和0.5g/LBrij-35,并用NaOH调至pH7.9±0.05测定全血时缓冲液需加奎尼定抑制假胆碱的酶活性),分别加入275mmol/L或69mmol/L乙酰胆硷10μl,用差示pH装置检测.所有样品测定,要用试剂空白校正.胆硷酯酶活性用每分钟释放醋酸微摩尔数表示,则胆硷酯酶活性=d·β·△pH/分(d为稀释因素) (β为缓冲容量).     

多发性骨髓瘤患者特异骨代谢标志物检测及临床应用

目的 了解特异骨代谢标志物骨钙素N端中分子(OCN-Mid)、β-胶原特殊序列(β-CTx)在多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的含量变化,探讨OCN-Mid和β-CTx检测的临床应用价值.方法 用电化学发光法检测34例初次确诊为MM的患者及34名健康对照者血清OCN-Mid、β-CTx水平.同时分别采用2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)缓冲液法、偶氮胂Ⅲ法和钼酸铵法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、钙和磷水平.结果 MM组血清OCN-Mid水平明显低于对照组(P<0.05),β-CTx含量高于对照组(P<0.05),而血清ALP、钙、磷与对照组差异无统计学意义(P>0.05);不同分期MM患者分析结果表明,分期越晚,OCN-Mid水平越低,β-CTx水平越高.结论 OCN-Mid和β-CTx是反映骨形成和骨吸收的简便、快速、有效的特异指标,可以辅助临床了解MM骨损害程度和评价病情,具有重要的临床应用价值.     

毛细管区带电泳法拆分氨甲蝶呤手性对映体

目的建立一种快速拆分氨甲蝶呤手性对映体的方法。方法用毛细管区带电泳技术，以中性环糊精作为氨甲蝶呤拆分选择剂，对环糊精浓度、缓冲液浓度、pH值、电泳温度和改性剂浓度等分离条件进行优化。结果用含25mmol／L的羟丙基-8-环糊精、10％的异丙醇、80mmol／L(pH7．4)的磷酸盐缓冲液，在18kV分离电压，毛细管温度25℃时，可使氨甲蝶呤对映体在25min内达到基线分离，分离度为1．51。结论高效毛细管区带电泳法拆分氨甲蝶呤手性对映体简单、快速、经济。