载脂蛋白M对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用

目的:研究人载脂蛋白M(apolipoprotein M,Apo M)对肾透明细胞癌细胞株(ACHN、769-P和786-O)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用装载人Apo M基因的慢病毒和阴性对照组慢病毒分别感染肾癌细胞株,建立Apo M过表达组(Apo M-OE组)和阴性对照组(NC组)细胞模型。应用CCK-8增殖实验和克隆形成实验观察细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:Apo M过表达后,ACHN和769-P过表达组细胞在72h增殖能力显著降低(分别P0.01,P0.05);786-O细胞在48 h表现出明显差异(P0.001)。克隆形成实验表明Apo M过表达后,3株细胞克隆形成能力明显减弱(分别P0.001,P0.01,P0.01)。细胞划痕实验证实ACHN和769-P过表达组细胞在12 h时出现明显差异(分别P0.05,P0.001);786-O细胞在24h时迁移能力明显受抑(P0.01)。细胞侵袭实验发现3株细胞过表达A po M后侵袭能力下降(分别P0.001,P0.001,P0.01)。结论:Apo M过表达后,肾癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱。     

SMTNL2基因在肾癌组织及细胞系中的表达特征研究

目的探讨SMTNL2基因在肾癌组织及肾癌细胞系中的表达特征和临床意义。方法采用RT-PCR方法检测SMTNL2 m RNA在肾癌患者肿瘤组织及配对癌旁正常组织的表达及在5种肾癌细胞系(ACHN、Caki、769-P、786-O、293)中的表达,实时荧光定量PCR方法检测SMTNL2 m RNA在36例肾癌组织及配对癌旁正常组织中的表达水平,Western blot和免疫组化方法检测SMTNL2蛋白在36例肾癌组织及配对癌旁正常组织中的表达水平,分析SMTNL2基因在肾癌组织中的表达特征和临床病理参数的相关性。结果 SMTNL2 m RNA在肾癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常肾组织(0.089±0.135 vs.0.325±0.165,P<0.05),SMTNL2 m RNA在肾癌细胞系(ACHN、Caki、769-P、786-O、293)中同样表现为低表达或无表达。SMTNL2在肾癌组织中的阳性蛋白表达率明显低于癌旁正常组织(13.9%vs.77.8%,P=0.021)。SMTNL2在肾癌组织中的SMTNL2阳性蛋白表达率与患者的性别(P=0.659)、年龄(P=0.462)、病理分级(P=0.391)和分期(P=0.696)无相关性。结论 SMTNL2基因在肾癌组织及肾癌细胞系中低表达,可能与肾癌的发生和进展有关。     

UCA1在肾癌中的表达分析及临床意义研究

目的检测长链非编码RNA UCA1在肾癌组织、肾癌细胞系中的表达水平,比较配对组织间、细胞系之间的表达差异,分析UCA1表达水平与患者临床特征之间的关系,探究其在肾癌中的临床意义。方法提取肾癌细胞系及46对配对组织中的总RNA,反转录获得c DNA后通过实时荧光定量PCR方法检测UCA1的表达量,使用统计学软件分析UCA1表达的差异性及其表达水平与患者临床特征之间的相关性。结果 UCA1在肾癌组织中表达水平明显高于配对癌旁正常组织(P<0.001),在肾癌细胞(786-O、ACHN、769P、Caki-2)中表达水平高于人胚肾细胞(293T)(P<0.001)。标本中共有38例(82.609%)肾癌标本UCA1表达上调,癌组织中UCA1表达量与患者临床特征无明显相关性(P>0.05)。结论 UCA1在肾癌组织及细胞系中表达明显上调,提示其和肾癌的发生发展有一定关系。     

MiR-15a-5p在肾癌中的表达分析及临床意义研究

目的检测肾癌及癌旁配对组织、肾癌及正常肾细胞系中mi R-15a-5p的表达水平,比较配对组织及细胞系之间的表达水平,分析表达水平与患者临床特征之间的关系,探究mi R-15a-5p作为肾癌标记物应用于临床的可能性。方法提取肾癌及正常肾细胞系、36对肾癌与配对癌旁组织标本中的总RNA,经反转录、q PCR检测mi R-15a-5p的表达,使用统计软件分析组织间、细胞系之间mi R-15a-5p的表达差异,分析mi R-15a-5p表达水平与患者临床特征间的关系。通过转染mi R-15a-5p干扰敲低肾癌细胞中mi R-15a-5p表达水平,利用流式细胞术评估其对肾癌细胞的凋亡影响。利用SPSS 19.0进行配对t检验及Fisher确切概率检验。结果 mi R-15a-5p在肾癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),癌组织中表达水平为癌旁组织的(9.95±0.92)倍。肾癌细胞系(786-O、ACHN)中mi R-15a-5p表达量分别是正常肾细胞系(HEK-293T)的(8.40±1.74)倍、(2.94±0.11)倍(P<0.05)。标本中共有26例(72.2%)肾癌标本mi R-15a-5p表达上调,癌组织中mi R-15a-5p表达水平与肾癌临床分期相关(P<0.05)。敲低mi R-15a-5p表达水平可诱导肾癌细胞凋亡,786-O细胞凋亡率为(14.01±0.81)%(敲低mi R-15a-5p)和(2.47±0.28)%(阴性对照)(P<0.05),ACHN细胞凋亡率为(20.30±0.47)%(敲低mi R-15a-5p)和(11.45±0.61)%(阴性对照)(P<0.05)。结论 mi R-15a-5p在肾癌组织及细胞系中表达明显上调,且和肾癌分期相关,mi R-15a-5p可调节肾癌细胞凋亡,提示其在肾癌的发生发展中起着一定的作用,有作为肾癌标记物应用于临床的可能。     

长链非编码RNA CCAT2在肾癌中的表达和肾癌临床分期的关系

目的检测并分析长链非编码RNA CCAT2在肾癌中的表达水平及其表达与患者临床特征之间的关系。方法通过实时荧光定量PCR检测肾癌及癌旁正常组织、肾癌细胞系(ACHN、786-O)及人胚肾细胞系(293T)中长链非编码RNA CCAT2的表达水平,通过配对t检验比较配对组织间表达差异;列出四格表,通过Fisher确切概率法探究CCAT2表达水平与患者临床特征之间的关系。结果 32例肾癌组织中26例(81.25%)表达升高,CCAT2在肾癌组织中表达水平明显升高(P<0.01),正常组织中CCAT2相对表达量为1±0.205 85,肾癌组织中CCAT2相对表达量为12.817 12±0.551 67;CCAT2在293T细胞中表达水平明显低于786-O、ACHN细胞(P<0.01),293T细胞中CCAT2相对表达量为1±0.004 88,786-O细胞中CCAT2相对表达量为15.670 72±1.075 72,ACHN细胞中CCAT2相对表达量为36.504 44±8.990 78;CCAT2在临床分期、分级较高的肾癌组织中升高更明显(P<0.05)。未发现CCAT2表达水平和患者年龄、性别、肾癌组织类型之间的相关性(P>0.05)。结论肾癌组织中CCAT2表达升高,提示CCAT2与肾癌发生相关。     

肾细胞癌患者血清miR-135b-5p表达变化的价值及功能

摘要:目的检测肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-135b-5p的表达水平变化，探究其临床应用价值及其参与RCC发生、发展的作用机制。方法采用 荧光定量逆转录PCR( qRT-PCR)检测2022年1月至 6月于东部战区总医院泌尿外科就诊且经病理学确诊的60例RCC患者及60例健康人对照血清miR-135b-5p的表达水平变化,评估其对于RCC患者的临床辅助筛查价值。体外培养RCC细胞系(ACHNCaki-1)和正常肾小管上皮细胞系(HK-2),qRT-PCR检测细胞及细胞分泌的细胞外囊泡( extracellular vesicles ,EVs)中miR-135b-5p 的表达水平;进一步应用生物信息学分析、EVs与细胞共培养、细胞功能等方法探究EVs miR-135b-5p 参与RCC的初步作用分子机制。结果RCC 患者血清miR-135b-5p水平[ 6.932(5.524, 9.964)]与健康人对照[5.534(4.373, 6.555)]比较显著升高(U= 1 042,P<0.01)。血清miR-135b-5p水平对于RCC筛查的ROC曲线下面积( AUCR0C)为0. 711( 95% CI:O. 619~ 0.802)。ACHN和Caki-1 细胞中miR-135b-5p水平较正常HK-2 细胞中的表达倍数显著明显升高(分别升高了7.821 倍和1.919倍。P值分别为0.000 3和0.000 1);同时,ACHN和Caki-1 EVs中miR-135b-5p 水平较HK-2 EVs中的表达倍数亦显著增高(分别升高了3.783 倍和2.627倍。P值分别为0.0001和0.0004)。生物信息学分析结合文献调研显示,miR-135b-5p可能通过调控潜在靶基因血管生成素样蛋白4( angiopoietin-like protein 4 ,ANGPTL4)的表达而参与血管生成。RCC EVs与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)共培养结果显示,RCC细胞分泌的富含miR-135b-5p EVs在与HUVEC温育的不同时间点(4h 6h和8 h)均可明显促进内皮细胞成环,差异具有统计学意义(P值分别为0.011 2 ,0.005 7,0.001 7)。Western blot结果显示，mimics 组ANGPTL4蛋白的表达水平为( 0.616+0.003) ,较NC组( 1.00+0.05)显著降低,差异具有统计学意义(t=12.44,P=0.000 2)。进一步分析发现与NC组相比, HUVEC中miR-135b-5p过表达组在连续观察时间内(2h、4h、6h和8 h)的成环数明显增加(P值分别为0.000 1 ,0.0001,0.0032,0.0095)。结论RCC患者血清、细胞系及细胞分泌的EVsmiR-135b-5p表达水平均显著升高，血清miR-135b-5p水平测定对于RCC具有较高的临床辅助筛查价值,RCC细胞分泌EVsmiR-135b-5p可通过调控ANGPTL4的表达,参与血管生成。     

miR-122在肾癌中的异常表达及其临床意义

目的探讨肾癌中miR-122的表达特点及临床意义。方法基于前期平行测序的工作基础,对51例肾癌及相应癌旁组织、15例肾癌患者血清及15例健康对照者血清中miR-122的表达水平进行RT-qPCR检测,分析miR-122的表达高低与肾癌患者临床病理特征之间的相关性;并通过在肾癌细胞系(786-O和ACHN)中转染miR-122inhibitors,观察转染后细胞的增殖改变,初步探讨miR-122的生物学功能。结果相对于癌旁组织,肾癌组织中miR-122表达水平明显升高,上调率为82.35%;相比于健康对照者血清,肾癌患者血清中的miR-122表达亦明显升高,上调率为100%。肾癌组织中miR-122的表达水平与肾癌患者的临床病理特征无显著相关性(P0.05)。在肾癌细胞系(786-O和ACHN)中转染miR-122inhibitors后,肿瘤细胞的增殖受到抑制。结论 miR-122可能参与到肾癌的病理过程,研究肾癌中miR-122的表达特点及生物学功能可能对早期诊断及治疗肾癌具有潜在的临床价值。     

SATB2基因增强槲皮素抑制肾癌细胞生长的机制

目的:探讨核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)基因及槲皮素对肾癌细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及机制。方法:人肾癌786-O细胞分为空白组、重组体pcDNA3.1-SATB2组、槲皮素组和pcDNA3.1-SATB2+槲皮素组,其中pcDNA3.1-SATB2转染参照Lipofectamine 2000说明。各组细胞处理48 h后,通过CCK-8,Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力和凋亡。Western印迹法检测SATB2,STAT3,p-STAT3,MMP-2和Bcl-2蛋白表达。结果:转染pcDNA3.1-SATB2的786-O细胞SATB2蛋白表达明显升高(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及不同浓度槲皮素均可抑制786-O细胞活力,且槲皮素可呈现浓度和时间依赖性抑制细胞活力(P0.05)。pcDNA3.1-SATB2及槲皮素均可抑制786-O细胞侵袭能力,诱导凋亡,下调p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达,而联合使用pcDNA3.1-SATB2和槲皮素对786-O细胞侵袭能力、凋亡及p-STAT3,MMP-2和Bcl-2表达影响更明显(P0.05)。结论:过表达SATB2可增强槲皮素对肾癌细胞活力和侵袭能力抑制及凋亡促进作用,机制与抑制STAT3信号通路有关。     

mRNA介导表达肿瘤坏死因子相关的凋亡在肾癌细胞抑制中的机制

目的观察mRNA介导表达肿瘤坏死因子相关的凋亡在肾癌细胞抑制中的作用机制。方法选取2014年1月至2016年6月医院诊治的经病理确诊肾癌患者12例,通过实时定量PCR比较肾细胞癌(RCC)细胞系与正常细胞系在miR-138和miR-199表达水平,并且在miR-138和miR-199控制下RCC细胞外基因的表达,根据Western blot和G0/G1细胞分析Ad-TRAIL-3MREs诱导人肾癌细胞(ACHN细胞)和L-02细胞凋亡的机制,利用MTT检测不同种重组腺病毒感染下RCC细胞和正常细胞活性。结果细胞PCR反应结束后标准曲线斜率为0.984,标准曲线线性关系良好。根据样本及标准品的PCR反应循环数计算样本的mRNA含量。利用mastercycler ep realplex sample anylysis软件获得miR-138、miR-199含量。12例肾细胞癌组织miR-138、miR-199含量,显著低于正常肾组织(P0.05)。在Ad-TRAIL-3MREs诱导ACHN细胞和L-02细胞中处理的ACHN细胞活化的caspase 3和PARP蛋白水平表达相对较高;与此相反,采用Ad-TRAIL-3MREs转染的L-02细胞caspase 3和PARP蛋白水平并没有活化。ATRAIL在降低癌细胞和正常细胞的生存率差异无统计学意义(P0.05);相反,在RCC细胞中AD-TRAIL-3MREs能诱导细胞毒性。结论在RCC细胞中miR-138和miR-199水平相对较低,且能抑制正常细胞外源基因表达,TRAIL通过选择性表达能诱导RCC凋亡,且mRNA反应元件(MRE)对正常细胞无毒性。     

白藜芦醇对人肾细胞癌786-0细胞PDCD5表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对人肾细胞癌786-0细胞中PDCD5蛋白表达的影响及PDCD5蛋白与白藜芦醇抑制人肾细胞癌786-0细胞生长的关系。方法分别采用12.5、25、50、100μmol/L的白藜芦醇(Res)作用于人肾细胞癌786-0细胞系24h.采用免疫细胞化学SP法检测PDCD5蛋白在肾细胞癌786-0细胞中的表达情况;采用流式细胞术检测肾细胞癌786-0细胞的增殖和凋亡情况。结果 Res呈剂量依赖性抑制人肾细胞癌786-0细胞的增殖;人肾细胞癌786-0细胞低水平表达PDCD5,经Res作用以后人肾细胞癌786-0细胞中PDCD5蛋白的表达明显升高,与对照组比较,差异有显著性(P均0.05)。Res各组间比较,12.5μmol/L与25、50及100mol/L比较,差异有显著性(P均0.05);但25μmol/L与50、100μmol/L比较,差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞术显示,Res通过阻滞人肾细胞癌786-0细胞于S期而抑制细胞分裂。结论白藜芦醇可以通过上调人肾癌786-0细胞PDCD5蛋白的表达,使786-0细胞阻滞在S期而诱导凋亡,并且这种作用具有浓度依赖性。     

miRNA-195靶向调控 CCND2和 MYB抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的机制研究

目的　研究 miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达，分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制。方法　检测 35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中 miRNA-195，通过 Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系；采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证 miRNA-195对宫颈癌 siHa，Hela细胞增殖、迁移的影响；通过 microRNA数据库预测 miRNA-195的靶基因，双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系； qRT-PCR验证 miRNA-195对靶基因的调控；分析宫颈癌中靶基因的表达作用及与 miRNA-195的相关性，通过细胞回补实验验证 miRNA-195是否通过靶向调控蛋白表达在宫颈癌中发挥功能。结果　宫颈癌组织中 miRNA-195相对表达低于癌旁正常组织（ 21.03±5.17 vs 40.67±7.92），差异有统计学意义（ t=12.285，P<0.001），且具有低表达预后差的临床特征（ Logrank P=0.032）。过表达 miRNA-195抑制了宫颈癌细胞的增殖（ t=6.725~21.433，均 P＜ 0.01）和迁移速率（ t=12.443，16.749，均 P<0.001）。CCND2和 MYB是 miRNA-195的靶基因，过表达 miRNA-195显著抑制了 CCND2和 MYB mRNA的蛋白表达（ P<0.01）。宫颈癌组织中 CCND2较癌旁正常组织显著高表达（ 52.67±4.79 vs 39.86±6.39），差异有统计学意义（ t=12.453，P<0.001）；MYB较癌旁正常组织显著高表达（ 43.06±6.43 vs 22.07±6.85），差异有统计学意义（t=13.217，P<0.001）；且分别与 miRNA-195表达呈负相关（ r=-0.726，-0.592，均 P<0.05）。过表达 CCND2和 MYB显著促进了宫颈癌细胞的增殖和迁移速率，敲低 CCND2和 MYB表达则得到与之相反的结果（ F=144.947，875.160，均 P<0.001）；在过表达 miRNA-195细胞中分别回补过表达 CCND2和 MYB后细胞增殖、迁移速率基本回归到正常水平。结论　miRNA-195可通过靶向调控 CCND2和 MYB表达抑制宫颈癌癌细胞的增殖和迁移，进而参与宫颈癌的发生发展。     

Effect of MicroRNA-218 on the viability,apoptosis and invasion of renal cell carcinoma cells under hypoxia by targeted downregulation of CXCR7 expression

ObjectiveTo investigate the effect of microRNA-218 on the viability, apoptosis and invasion of renal cell carcinoma cells under hypoxia by targeted regulation of expression of chemokine receptor 7 (CXCR7).MethodsThe expression of miR-218 in renal cell carcinoma cell lines under normal and hypoxia conditions, as well in normal renal tubular epithelial cells (HK2) was measured using RT-PCR. MiR-218 mimic and NC were transfected into renal cell carcinoma cell line ACHN using Lipofectamine™ 2000. The expression of miR-218 was analyzed using RT-PCR. The viability, apoptosis, migration and invasion of the transfected cells were assayed using the MTT assay, flow cytometry and transwell assays. The expression of CXCR7 was assayed using RT-PCR and Western blot. Luciferase reporter was used to verify the downstream target of miR-218.ResultsThe expression of miR-218 was lower than in renal cell carcinoma cell lines ACHN, 769-p and Caki-1 that in HK-2. The expression of miR-218 in the renal carcinoma cell lines was lower under hypoxia than under normal oxygen conditions. The expression of miR-218 in ACHN cells under normal and hypoxic conditions was significantly increased after transfection with miR-218 mimic. Compared with NC transfected cells under normal oxygen condition, the mimic-transfected cells had reduced viability, migration ability and invasion ability, and increased apoptosis, and mimic transfected-cells under hypoxia had significantly reduced viability, migration ability and invasion ability, and increased apoptosis. Overexpression of miR-218 mimic resulted in significant reduction in the expression of CXCR7 at protein and mRNA levels under normal and hypoxic conditions. Luciferase reporter assay confirmed that CXCR7 is the target protein of miR-218.ConclusionUp-regulation of miR-218 expression in renal cell carcinoma under hypoxia can result in significant and targeted down-regulation of CXCR7 expression, which could reduce cell viability, migration and invasion ability and induce apoptosis in the cancer cells.     

CCR3在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响

目的研究CCR类趋化因子受体3(CCR3)在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法回顾性选取2019年4月至2020年4月在湖南中医药高等专科学校附属第一医院就诊的肾透明细胞癌组织标本50例,选取50例癌旁组织为对照,进行免疫组化染色。选取人肾透明细胞癌细胞系786-0和人肾透明细胞癌细胞系A498,细胞培养,检测CCR3 mRNA表达水平。构建CCR3沉默慢病毒载体作为CCR3抑制组,对照组中加入一段无义序列,空白组只加生理盐水。细胞迁移、侵袭实验观察细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果CCR3在肾透明细胞癌组织中阳性表达比率(48.00%)低于癌旁组织阳性表达(12.00%),差异有统计学意义(P <0.05)。A498人肾透明细胞癌细胞系中CCR3 mRNA表达量高于786-0人肾透明细胞癌细胞系中表达量,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组癌细胞迁移、侵袭数量增加,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 CCR3在肾透明细胞癌细胞中显示高表达,抑制CCR3表达通过调控p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白,从而抑制肾透明细胞癌细胞侵袭和迁移。     

血浆miRNA-155和miRNA-625测定诊断非小细胞肺癌的临床评价

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)诊断中血浆miRNA-155、miRNA-625测定的临床价值。方法采用回顾性分析,研究对象为2018年1月至2020年1月首都医科大学附属北京世纪坛医院收治的98例NSCLC患者与110例肺部良性疾病患者,分别设定为研究组与对照组。比较2组血浆miRNA-155、miRNA-625表达水平与血清癌胚抗原水平,分析研究组患者血浆miRNA-155、miRNA-625表达与临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、分化程度、组织学类型、吸烟)相关性,并比较miRNA-155、miRNA-625、血清癌胚抗原诊断NSCLC的准确性、阴性预测值、阳性预测值、特异度及敏感度。结果研究组血浆miRNA-155、血清癌胚抗原水平为(5.76±3.81)、(6.62±5.41)μg/L,高于对照组[(1.98±1.71)、(3.94±1.53)μg/L],血浆miRNA-625(0.53±0.43)水平低于对照组(1.08±0.61),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组Ⅰ、Ⅱ期患者的血浆miRNA-155表达水平(4.87±3.46)显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者(8.52±3.70)(P<0.05);研究组男性患者的血浆miRNA-625表达水平(0.58±0.48)显著高于女性患者(0.34±0.20),且Ⅰ、Ⅱ期患者的血浆miRNA-625表达水平(0.83±0.40)显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者(0.45±0.47),差异均有统计学意义(P<0.05)。血浆miRNA-155、miRNA-625诊断NSCLC的敏感度(75.51%、73.47%)显著高于血清癌胚抗原(46.94%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论NSCLC诊断中血浆miRNA-155、miRNA-625测定具有较高的临床价值。     

lncRNA HCG11-201对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCG11-201在肾癌组织中的表达及影响癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法生物信息学方法预测HCG11-201表达与肾癌患者预后的相关性。实时荧光定量PCR(qPCR)检测肾癌组织和癌旁正常组织、肾癌细胞系和正常肾小管上皮细胞中HCG11-201的表达,选择表达最少的肾癌细胞系转染,分别将HCG11-201质粒(实验组)或阴性对照质粒(对照组)转至肾癌细胞。qPCR检测HCG11-201质粒转染效率。MTT法检测转染后细胞增殖活性,Transwell小室实验检测转染后细胞侵袭能力。生物信息学方法预测HCG11-201可吸附结合的微小RNA(miRNA)及miRNA下游基因。qPCR和Western blot检测miRNA和下游基因表达。结果GEPIA数据库显示,HCG11-201相对表达水平越高,患者总生存期越长(P<0.01)。肾癌组织HCG11-201相对表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。肾癌细胞HCG11-201相对表达水平显著低于正常肾小管上皮细胞(P<0.01),其中Caki-1细胞相对表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组Caki-1细胞HCG11-201相对表达水平显著升高(P<0.01),细胞增殖活性显著降低(P<0.05),细胞的侵袭能力显著降低(P<0.05)。HCG11-201可互补结合miR-522,miR-522可互补结合线粒体融合蛋白2(mitofusion-2)。与对照组比较,实验组Caki-1细胞miR-522的相对表达水平显著降低(P<0.01),mitofusion-2的mRNA相对表达水平和蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论lncRNA HCG11-201在肾癌组织和细胞系低表达,与肾癌患者预后相关。过表达HCG11-201可明显抑制肾癌细胞增殖和侵袭,其分子机制可能为HCG11-201吸附miR-522进而上调mitofusion-2基因的表达。     

肾癌细胞株786-O中CD133~＋细胞分选及基因表达谱研究

目的探讨应用免疫磁珠细胞分选方法分离肾癌细胞株786-O中CD133＋的可能性,并分析CD133＋细胞与CD133-细胞的基因表达谱差异。方法应用免疫磁珠细胞分选技术分选肾癌细胞株786-O中的CD133＋细胞,流式细胞仪分析CD133细胞含量,提取RNA用基因芯片技术分析其基因表达谱。结果 786-O细胞中CD133＋细胞占13.70%,磁珠分选收集的CD133＋细胞阳性率可达98.46%。免疫磁珠细胞分选技术可以有效分选肾癌CD133＋细胞,基因表达谱分析可见CD133＋细胞较CD133-细胞有8种基因表达上调2倍以上,23种基因下调2倍以上。结论免疫磁珠细胞分选技术可以有效分离肾癌CD133＋细胞,CD133＋细胞与CD133-细胞表达差异基因分析为后续研究提供了新的思路。     

miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。     

Biocompatible carbon-doped MoSe2 nanoparticles as a highly efficient targeted agent for human renal cell carcinoma

MoSe₂ is a typical transition-metal dichalcogenide material, and many researches have been focused on using its property of near infrared strong absorption for laser mediated photothermal cancer treatment. However, the anti-canter effect of MoSe₂ and its possible mechanism in renal cell carcinoma (RCC) is still unclear. RCC has high incidence of metastasis, which is known as one of the most lethal malignancies in the urological system. This study revealed that the carbon-doped MoSe₂ particles can obviously inhibit proliferation for 786-O and ACHN cells. Meanwhile, the carbon-doped MoSe₂ nanoparticles have little impact on the viability of KH-2 cells in vitro. The mechanism analysis revealed that the carbon-doped MoSe₂ particles have hydrogen bond effect in aqueous solution, and the particle aggregation effect caused the KH-2 cells to have high viability. The carbon-doped MoSe₂ nanoparticles with minimal toxicity may be a potential therapeutic candidate against RCC.

HK-2 cells have weak cellular uptake efficiency leading to high viability with carbon-doped MoSe₂ nanoparticles.     

肾癌摄取11C-乙酸的分子机制及相关研究

目的：11C-乙酸（11C-AC）PET/CT诊断肾细胞癌的灵敏度高于18F-脱氧葡萄糖（18F-FDG）,但其显像机制尚不明确。本研究探讨其被肾细胞癌摄取是否与细胞膜脂肪酸合成相关。方法①细胞抑制实验：培养3株肾癌细胞（786-0、ACNH和Caki-1）,分别以脂肪酸合酶（FAS）抑制剂C75、二甲基亚砜（DMSO）预处理后加入11C-AC,30 min后测细胞摄取放射性计数,并收集细胞提取液测定蛋白浓度,以蛋白免疫印迹检测FAS表达。②小动物PET/CT显像：对786-0荷瘤裸鼠行11C-AC显像,测得肿瘤与软组织的靶本比（T/B）,处死裸鼠,取肿瘤组织,免疫组织化学检测FAS表达。结果786-0细胞株实验组比对照组摄取11C-AC量明显降低,每微克蛋白的放射性摄取值分别为2.430±0.107和3.544±0.443（P=0.013）,降低率为31.42%。蛋白免疫印迹实验显示,实验组FAS表达明显低于对照组。ACNH和Caki-1细胞株实验组与对照组每微克蛋白的放射性摄取和FAS表达均无显著差异。小动物PET/CT显示,裸鼠皮下肿瘤11C-AC摄取明显增高,肿瘤免疫组织化学检测FAS表达强阳性。结论肾透明细胞癌原发灶的11C-AC摄取与FAS表达有关,但不同病理类型摄取乙酸的程度不同。     

MicroRNA-25在非小细胞肺癌患者中的异常表达及其临床意义

目的 探讨miRNA-25在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理因素和预后之间的关系.方法 用实时定量PCR检测60例非小细胞肺癌组织及其配对的癌旁组织中miRNA-25的相对表达水平,分析miRNA-25的表达与肺癌临床病理特征和预后的关系.结果 miRNA-25在肺癌及癌旁组织中表达的Ct值分别为28.35±1.78和31.60±3.28,其在肺癌组织中的相对表达量（2-△△Ct）为2.743,该结果表明miRNA-25在肺癌组织中的表达显著高于配对的癌旁组织（t=6.756,P＜0.05）.此外,miRNA-25在有淋巴结转移的肺癌组织中的相对表达量高于无淋巴结转移的肺癌组织（x2=13.436,P＜0.001）;miRNA-25在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期肺癌组织中的相对表达量高于I～Ⅱ期（x2=12.245,P＜0.001）,而其表达与年龄、性别、吸烟史、肿瘤病理类型、大小、分化程度均无相关性（x2=0.012～2.143,P＞0.05）;生存曲线显示,miRNA-25相对高表达组生存时间较低表达组明显缩短（P＜0.001）.结论 miRNA-25在肺癌组织中高表达,其与肺癌的临床病理分期、淋巴结转移及预后密切相关,可能成为肺癌诊断、预后判断标志及治疗的新的靶标.