核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用。方法构建动静力失衡性颈椎病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,PDTC低、中、高剂量组,另外设立假手术组(仅切开颈部皮肤),每组大鼠10只,PDTC低、中、高剂量组大鼠每天分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg PDTC,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续28 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及IL-6含量,Realtime PCR检测TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA表达,Western blot检测各组大鼠椎间盘组织中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。结果与假手术组比较,模型组中大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量提高(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量上调(P <0. 05)。与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量降低(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量下调(P <0. 05),并呈剂量依赖性。结论 PDTC能显著地抑制颈椎病大鼠椎间盘炎症反应,并其作用呈剂量依赖性。     

HIF-1α通过TLR4/NF-κB信号通路对 心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤的保护机制分析

目的分析缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通过TLR4/NF-κB信号通路保护心肌缺血-再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、MIRI组和HIF-MIRI组各10只,HIF-MIRI组于造模前24 h腹腔注射二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG,20μg/g),MIRI组和HIF-MIRI组大鼠采用手术结扎法制备MIRI模型,对照组只打开心包,不结扎。造模成功后,HE染色检测各组大鼠心肌组织损伤;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平; ELISA法测定心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和IL-6水平;实时荧光定量(RT)-PCR测定HIF-1αmRNA的表达; Western Blot检测HIF-1α、Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达。结果与对照组相比,MIRI组和HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA的表达显著上调(P 0. 01),HIF-1α、TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与MIRI组相比,HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH水平、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著下降(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著上调(P 0. 01),TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著下调(P 0. 01),HE染色显示心肌组织的病理变化明显减轻。结论 HIF-1α可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放,降低机体炎症因子水平,改善MIRI心肌损伤。     

痰热清注射液对内毒素所致全身炎症反应综合征大鼠核转录因子-κB的调控作用

目的 观察痰热清注射液对内毒素致全身炎症反应综合征(SIRS)大鼠核转录因子-κB(NF-κB)的调控作用.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、SIRS组和痰热清组,每组20只.腹腔注射内毒素复制SIRS大鼠模型.制模成功后2 h,痰热清组腹腔注射痰热清注射液4.5 ml/kg.各组于实验后6 h开胸取心脏血,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测NF-κB活性以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达.结果 与正常对照组[(31.06±16.34)、(76.26±16.88)、(45.37±9.64)ng/L]比较,SIRS组大鼠NF-κB活性[(87.52±36.72)ng/L]以及TNF-α[(321.52±56.74)ng/L]和IL-1β[(136.76±19.68)ng/L]表达明显升高(P均<0.01);与SIRS组比较,痰热清组大鼠NF-κB活性[(49.51±20.51)ng/L]以及TNF-α[(183.46±30.64)ng/L]和IL-1β[(90.62±16.29)ng/L]表达明显降低(P均<0.01).SIRS组大鼠NF-κB活性与TNF-α和IL-1β表达均呈明显正相关(r1＝0.67,r2=0.43,P均<0.01).结论 痰热清注射液可明显抑制SIRS大鼠的炎症反应,其作用机制可能是抑制NF-κB的活化.     

甲胺鸢尾素对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤后相关炎性因子的影响

目的探究中药葛花提取物甲胺鸢尾素对大鼠心肌缺血损伤后相关炎性因子的影响机制。方法将大鼠分为4组,实验1、2组采用不同剂量甲胺鸢尾素灌胃,模型组及空白组等量生理盐水灌胃,10d各组(空白组除外)均皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素0.4mg/100g,制备异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤模型。造模后,取各组大鼠相应部位材质,检测并对比分析各组大鼠的TNF-α、IL-1β、Bcl-2及NF-κB蛋白的变化情况。结果与空白组对比,模型组大鼠及实验组血清TNF-α、IL-1β、Bcl-2、NF-κB明显升高(P0.05);与模型组对比,实验1、2组血清TNF-α、IL-1β、NF-κB明显降低(P0.05),Bcl-2明显升高(P0.05),其中实验1组比实验2组降低/升高更加明显(P0.01)。结论甲胺鸢尾素对异丙肾上腺素致大鼠缺血再灌注损伤能起到保护作用,能够有效抑制TNF-α、IL-1β炎症因子的释放,上调Bcl-2,抑制NF-κB蛋白表达。     

超短波调控NF-κB/TLR4信号通路抑制大鼠急性肺损伤炎症反应的研究

目的:观察超短波对大鼠急性肺损伤炎症反应的作用及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Toll样受体4(Tolllike receptors 4,TLR4)表达的影响。方法:将24只雄性SD大鼠随机分成3组:对照组,急性肺损伤组,超短波组,每组8只。气管内滴注脂多糖建立急性肺损伤模型。造模后的即刻、4h、8h分别给予干预组大鼠超短波治疗,电极板胸背对置,间距11cm,每次干预15min。采用HE染色观察肺组织病理学表现,肺损伤评分评估损伤程度,湿/干重比值(W/D)评估肺水肿,ELISA检测血清炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的水平,RTPCR及Western-blot分别检测NF-κB、TLR4 m RNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,HE染色见急性肺损伤组大鼠肺组织结构受损,肺损伤评分及肺组织湿/干重比值(W/D)增高(P0.01);血清炎症因子IL-6、TNF-α的水平上升(P0.01);NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量明显升高(P0.01)。与急性肺损伤组比较,超短波组大鼠肺组织结构受损程度明显减轻,肺损伤评分降低(P0.01);肺组织湿/干重比值(W/D)下降,但尚不具备显著性意义(P0.05);血清炎症因子IL-6、TNF-α水平下降(P0.05,P0.01);NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.01,P0.01)。结论:超短波通过抑制NF-κB/TLR4信号通路,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,抑制急性肺损伤炎症反应。     

消退素D1对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节炎症的作用

目的:研究消退素D1(Resolvin D1,Rv D1)对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)炎症的影响及内在机制。方法:选取30只雄性大鼠建立非压迫性腰椎间盘突出症模型。随机分为假手术组、模型组、Rv D1组(100 ng)。术后连续3天模型组和Rv D1组分别鞘内注射10μl磷酸盐缓冲液、Rv D1。于术前1天及术后连续7天检测各组大鼠术侧50%缩足阈值(50%paw withdrawal threshold,PWT)。术后第7天,酶联免疫吸附测定术侧L5 DRG中TNF-α和IL-1β的蛋白表达量,免疫组化法检测DRG中p-ERK及NF-κB/p65的阳性表达。结果:术后各时间点,模型组大鼠50%PWT较假手术组明显降低(P<0.01);TNF-α和IL-1β表达明显升高(P<0.01);p-ERK、NF-κB/p65蛋白水平明显升高(P<0.01)。术后第2~7天,Rv D1组与模型组相比,50%PWT显著升高(P<0.05);TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显降低(P<0.01);p-ERK及NF-κB/p65蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:Rv D1促进背根神经节炎症的消退,可能与调节炎症介质TNF-α和IL-1β的表达及ERK和NF-κB/p65通路活性有关。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

泰山磐石散对流产模型大鼠母胎界面NF-κB、IL-1β、TNF-α表达情况的影响

目的:观察泰山磐石散对流产模型大鼠母胎界面中核因子κB(NF-κB)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平的影响,探讨泰山磐石散防治自然流产的机制.方法:将30只雌性SD大鼠按1∶1比例和雄性SD大鼠合笼过夜配种,随机平均分为正常组、模型组和治疗组,于妊娠的第12天取各组孕鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测3组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κ B、IL-1 β、TNF-α的蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1 β、TNF-α的表达水平均显著升高(P＜0.01);治疗组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1 β、TNF-α的表达水平显著低于模型组(P＜0.01),差异均有统计学意义.结论:与模型组相比,经泰山磐石散治疗后母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1β和TNF-α的表达水平显著降低.提示泰山磐石散能够有效防治自然流产(spontaneous abortion,SA),可能是通过抑制NF-K B的活化、降低促炎细胞因子的合成和释放实现的.     

丹参酮ⅡA对TLR4/NF-κB信号通路下游炎症因子的影响及其临床意义

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠IRI肾脏TLR4/NF-κB信号通路以及下游炎症因子的影响,分析其对肾脏保护的可能机制。方法建立大鼠肾脏缺血再灌注(IRI)模型,将60只SD大鼠随机均分为空白组、对照组、丹参酮ⅡA组、ST2825组及Bay11-7082组,行对应处理,24 h后取肾脏标本,行HE法观察组织病理学形态,以PT-PCR法、Western Blotting法检测TLR4、NF-κB mRNA及蛋白水平,行酶联免疫吸附试验检测组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果与空白组相比,对照组肾组织病理学明显改变,且TLR4、NF-κB mRNA及蛋白水平,组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显上升;丹参酮ⅡA、ST2825及Bay11-7082均可有效保护肾组织,表现为细胞肿胀、坏死和脱落程度较轻,同时炎症反应更轻,表现为TLR4、NF-κB mRNA及蛋白水平,组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,与对照组相比,上述指标差异均有统计学意义(P0.05)。结论丹参酮ⅡA对缺血再灌注肾脏组织有保护作用,其机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路、减少下游炎症因子有关。     

糖尿病肾病大鼠血清miR-146a表达及其与炎症指标和氧化应激指标的相关性

目的探讨糖尿病肾病(DKD)大鼠血清miR-146a表达及其与炎症指标和氧化应激指标的相关性。方法 100只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组和模型组,每组50只,模型组大鼠高糖高脂饲料喂养+链脲佐菌素(40mg/kg)腹腔注射,对照组大鼠基础饲料喂养+等量生理盐水腹腔注射。采用RT-PCR法检测血清miR-146a表达,酶联免疫吸附试验检测核转录因子-κB (NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、高级氧化蛋白产物(AOPPs)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平。分析血清miR-146a与炎症指标和氧化应激指标的相关性。结果模型组大鼠血清miR-146a表达、SOD水平低于对照组,血清NF-κB、TNF-α、IL-1β、MDA和AOPPs水平高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。血清miR-146a与NF-κB、TNF-α、IL-1β、MDA和AOPPs呈负相关(P0.05),与SOD呈正相关(P0.05)。结论 DKD大鼠血清miR-146a表达降低,且与炎症指标和氧化应激指标相关,miR-146a有望成为DKD的潜在分子标志物,从而指导疾病的诊断和治疗。     

雷公藤内酯醇对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠的保护作用及其可能机制.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组和雷公藤内酯醇处理组(Tri组)3组,每组6只.sham组仅行剖腹术;Tri组和模型组采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法复制SAP肺损伤模型,然后分别腹腔注射雷公藤内酯醇0.2 mg/kg或等量生理盐水.制模后6 h处死动物,取肺组织测定肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达、蛋白含量及核转录因子-κB(NF-κB)活性.结果 与sham组比较,模型组肺组织TNF-α mRNA与IL-1β mRNA表达及蛋白含量、NF-κB活性均显著升高;与模型组比较,Tri组上述指标均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 雷公藤内酯醇对SAP肺损伤大鼠具有一定保护作用,与抑制NF-κB活性进而下调TNF-α、IL-1β等炎症因子表达有关.     

芍药苷对大鼠急性胰腺炎的保护作用及相关机制研究

目的探讨芍药苷(Paeoniflorin,PAE)对大鼠急性胰腺炎的作用及相关分子机制研究。方法建立大鼠急性胰腺炎模型,60只SD大鼠随机分为5组,A组(空白对照组)、B组(急性胰腺炎模型组)、C组(PAE 20 mg/kg)、D组(PAE 40 mg/kg)、E组(PAE 80 mg/kg),每组12只,灌胃处理。48 h后干湿法检测胰腺水肿指数;血生化仪测定血清淀粉酶水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL-1β)以及白细胞介素6(IL-6)表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测核转录因子κB(NF-κB)、凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达。结果造模后,B组水肿指数和血清淀粉酶明显高于A组,而PAE治疗48 h后C、D、E组水肿指数和血清淀粉酶明显低于B组(P0.05);ELISA显示,造模后,B组TNF-α,IL-1β以及IL-6表达显著高于A组,而C、D、E组TNF-α,IL-1β以及IL-6表达明显低于B组,差异有统计学意义(P0.05);Western blot法显示,造模后,B组NF-κB和Bax蛋白表达显著高于A组,而Bcl-2表达明显低于A组,PAE治疗后,C、D、E组NF-κB和Bax蛋白表达显著低于B组,Bcl-2表达明显高于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PAE可通过抑制炎症反应和胰腺腺泡细胞凋亡减轻大鼠的急性胰腺炎。     

Nrf2/ARE信号通路激活对偏头痛大鼠神经源性炎症的影响

目的探讨核因子E2相关因子2/抗反应元件(Nrf2/ARE)通路激活对硝酸甘油(NTG)诱导的偏头痛模型大鼠神经源性炎症的影响。方法将大鼠随机分为NS组、莱菔硫烷(SFN)+NS组、NTG组、H₂O+NTG组及SFN+NTG组,6只/组。拍摄大鼠挠头视频,应用ELISA检测颈静脉血CGRP浓度,应用Western Blot检测大鼠硬脑膜Nrf2、HO1、NQO1、NF-κB、TNF-α及IL-1β的表达。结果SFN+NTG组各时间段大鼠挠头次数少于H₂O+NTG组(P<0.01)。SFN+NTG组的核Nrf2及下游HO1、NQO1蛋白的表达均高于NTG组与H₂O+NTG组,颈静脉血CGRP浓度低于H₂O+NTG组,硬脑膜NF-κB及TNF-α、IL-1β表达均低于NTG组与H₂O+NTG组(P<0.01)。结论Nrf2/ARE信号通路的激活可减少NTG诱导的偏头痛大鼠挠头次数,降低颈静脉CGRP的浓度,抑制硬脑膜炎症因子的表达,发挥神经保护作用。     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

吗替麦考酚酯对重症急性胰腺炎大鼠脑损伤的保护作用研究

目的 探讨炎症因子TNF-α、IL-1β和sICAM-1在重症急性胰腺炎(SAP)并发脑损伤过程中的作用及NF-κB对炎症损伤的调控机制,并观察吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil,MMF)的干预性作用.方法 将104只雄性Wistar大鼠分为正常组、假手术组、SAP组、MMF组,正常组仅开腹后缝合即可(n=8),假手术组开腹后仅翻动胰腺并以钝器轻划胰腺组织5次(n=32),SAP组采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠法建立SAP模型(n=32),MMF组在完成SAP模型后1 h经尾静脉注射MMF 250 mg/kg(n=32).于造模后3、6、12、24 h半麻醉状态下分批处死大鼠,采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP),ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β和sICAM-1水平,并常规HE染色进行脑组织病理学评分,荧光定量PCR法检测脑组织NF-κB mRNA表达.结果 与正常组、假手术组比较,SAP组脑组织病理评分和血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β、sICAM-1水平及脑组织NF-κB mRNA表达在各时间点均显著升高(P＜0.05);与SAP组比较,MMF组使用MMF干预后脑组织病理学评分和血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β、sICAM-1水平及脑组织NF-κB mRNA表达均显著降低(P＜0.05).结论 SAP早期阶段细胞因子的变化与脑损伤进展密切相关,MMF可通过抑制细胞免疫及炎症细胞因子的产生、减轻炎症损伤反应发挥保护作用.     

基于TLR4/NF-κB通路探讨藏红花素对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用CSCD

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路研究藏红花素对局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIR)大鼠的神经元保护作用,探讨藏红花素防治FCIR损伤可能的作用机制。方法:将128只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、藏红花素组、藏红花素+脂多糖组,每组32只。造模前7 d开始,藏红花素组通过腹腔注射藏红花素溶液;藏红花素+脂多糖组通过腹腔注射藏红花素溶液、脂多糖溶液;假手术组和模型组通过腹腔注射生理盐水。4组注射剂量均为5 mL/(kg·d),1次/d,连续干预7 d。采用线栓法复制FCIR大鼠模型。再灌注24 h后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价大鼠神经功能缺损状况;采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、干湿重法分别计算脑梗死率和脑组织含水量;采用苏木精-伊红(HE)染色法、TUNEL染色法观察皮质神经元病理学改变和凋亡状况;采用ELISA法检测脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子水平;采用Western blot法检测TLR4、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、IκBα、p-IκBα、Cleved Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:(1)神经功能、脑梗死率及脑含水量:与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死率、脑含水量明显升高(P<0.05);与模型组比较,藏红花素组和藏红花素+脂多糖组mNSS评分、脑梗死率、脑含水量均明显降低(P<0.05);与藏红花素组比较,藏红花素+脂多糖组mNSS评分、脑梗死率、脑含水量均明显升高(P<0.05)。(2)皮质神经元病理学改变及凋亡状况:假手术组皮质神经元形态正常、结构完整;模型组皮质神经元可见排列紊乱、数量减少、空泡变性、胞浆固缩深染、核膜边界不清、炎细胞浸润等病理学改变;藏红花素组皮质神经元病理学改变明显改善。与假手术组比较,模型组皮质神经元凋亡指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,藏红花素组和藏红花素+脂多糖组凋亡指数明显降低(P<0.05);与藏红花素组比较,藏红花素+脂多糖组凋亡指数明显升高(P<0.05)。(3)炎症因子水平:与假手术组比较,模型组TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,藏红花素组和藏红花素+脂多糖组TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05);与藏红花素组比较,藏红花素+脂多糖组TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05)。(4)蛋白表达:与假手术组比较,模型组TLR4、Cleved Caspase-3相对表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα、Bax/Bcl-2表达比值均明显升高(P<0.05);与模型组比较,藏红花素组和藏红花素+脂多糖组TLR4、Cleved Caspase-3相对表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα、Bax/Bcl-2表达比值均明显降低(P<0.05);与藏红花素组比较,藏红花素+脂多糖组TLR4、p-NF-κB、p-IκBα相对表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα表达比值明显升高(P<0.05)。结论:藏红花素能够抑制FCIR大鼠炎症反应和皮质神经元凋亡,减轻皮质神经元损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路活化有关。     

第二代蛋白酶体抑制剂对类风湿性关节炎模型大鼠的干预效果及作用机制研究

目的探究第二代蛋白酶体抑制剂对类风湿性关节炎模型大鼠的干预效果及作用机制。方法选取30只健康SD大鼠,正常组10只SD大鼠不予处理,对剩余20只大鼠进行建模,按照随机数字表法分为模型组和抑制剂组,各10只。在建模成功第1天起每隔2天对抑制剂组SD大鼠腹腔内注射第二代蛋白酶体抑制剂。比较模型组和抑制剂组大鼠建模后不同时间点关节炎评分,采用透射比浊法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用Western blot法检测核因子-κB(NF-κB)/p65、核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)表达情况,采用酶联免疫吸附试验检测IgA、IgM水平。结果与正常组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6、ALT、AST、NF-κB/p65、IgA、IgM水平上升,IL-10、IκBα水平下降,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,抑制剂组大鼠TNF-α、IL-6、ALT、AST、NF-κB/p65、IgA、IgM下降,IL-10、IκBα水平上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论使用第二代蛋白酶体抑制剂对类风湿性关节炎模型大鼠进行治疗,能够通过激活IκBα,抑制NF-κB/p65通路,调节大鼠体内的炎症因子,降低关节炎的严重程度,效果显著。     

利拉鲁肽对链脲霉素致糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用机制分析

目的探究利拉鲁肽对链脲霉素致糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用机制。方法 60只SD大鼠中随机取12只作为空白对照组,其余48只大鼠随机分为模型组和低、中、高剂量利拉鲁肽组。采用一次性腹腔注射链脲霉素(55 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模前7 d皮下注射低、中、高剂量的利拉鲁肽(35μg/kg、70μg/kg、140μg/kg),1次/d,连续注射7 d。空白对照组和模型组以等量生理盐水替代。处理结束后,检测大鼠心功能指标[左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、射血分数(EF),短轴缩短率(FS)]和空腹血糖水平。HE染色和Masson染色观察大鼠心肌损伤和纤维化程度;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量; Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MyD88)及核因子κB P65(NF-κB P65)表达。结果与空白对照组相比,模型组大鼠LVESD、LVEDD、空腹血糖、CVF、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88及NF-κB P65磷酸化水平明显升高,EF、FS明显降低(P 0. 05),心肌病理损伤显著增加。与模型组相比,利拉鲁肽处理组LVESD、LVEDD、空腹血糖、CVF、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88及NF-κB P65磷酸化水平明显降低,EF、FS明显升高(P 0. 05),心肌病理损伤明显减轻。结论利拉鲁肽可呈剂量依赖性地降低大鼠血糖水平,保护糖尿病大鼠心肌损伤,抑制TLR4/MyD88/NF-κB活化后介导的炎症反应可能是其作用机制。     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P0.05)。结论雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。     

红景天苷对脂多糖诱导的急性肺损伤的保护机制研究

目的:研究红景天苷(SDS)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的抗炎作用及调节机制。方法:运用Western blot及Real-time PCR检测SDS对LPS诱导的大鼠肺组织及人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1表达的影响;Western blot、Real-time PCR、免疫组织化学筛选SDS可能参与的细胞信号通路;MTT检测SDS对HPAEpiC存活率的影响;利用RNA干扰阻断NF-κB通路后,采用Western blot及Real-time PCR检测SDS对促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1表达的影响。结果:SDS可有效抑制LPS诱导的大鼠肺组织及HPAEpiC促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1的表达;SDS降低细胞通路相关因子NF-κB和p38的表达;SDS可增强HPAEpiC存活率;阻断NF-κB通路后,SDS抑制IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1的表达效果减弱。结论:SDS可以抑制LPS诱导的炎症反应,减轻ALI的症状。