ROCK抑制剂对TE13细胞生长及迁移能力的影响

目的通过在体外用Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)特异性抑制剂Y-27632处理人食管癌细胞株TE13,观察Y-27632对TE13的生长及迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养人食管癌株TE13,分别用不同浓度的Y-27632(2.5、5、10、20μmol/L)处理细胞24 h,对照组加等体积PBS,采用细胞计数、MTT检测细胞生长情况,采用划痕实验观察细胞的迁移能力,采用Western blot检测小窝蛋白(cav)-1的表达水平。结果 Y-27632可以促进细胞的生长与迁移能力,随着时间的增加促进效果越明显,与对照组比较存在明显差异(P<0.05)。Y-27632可以上调cav-1表达水平。结论 ROCK信号通路参与TE13细胞生长与迁移的调节,Y-27632可以增加TE13细胞的生长及迁移能力,其机制可能与上调cav-1的表达有关。     

环巴胺对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的研究环巴胺(cyclopamine)对人食管癌EC9706细胞生长抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法培养EC9706细胞,加入不同浓度环巴胺,作用不同时间,MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪、AO/EB双荧光染色观察药物作用于细胞后的细胞凋亡情况;Western blot观察不同浓度的药物作用于细胞后对Gli-1蛋白表达的影响。结果 MTT法显示,与空白对照组和DMSO对照组相比,环巴胺对EC9706细胞有明显的生长抑制作用,且环巴胺对EC9706细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;AO/EB双荧光染色显示,细胞体积缩小,皱缩变圆,边缘毛糙,形成不规则突起,细胞核凝集、固缩;环巴胺通过促进细胞凋亡而达到对细胞的生长抑制作用,其调亡率明显高于空白对照组及DMSO组,且呈剂量依赖性。Western blot显示,环巴胺可能是通过影响Gli-1蛋白的表达来调控细胞的生长。其表达率低于空白对照组及DMSO组,呈剂量依赖性。结论环巴胺对人食管癌细胞系EC9706的生长有明显抑制作用,提示食管鳞状细胞癌的发生和发展与Hedgehog信号转导通路的异常激活有关,且Gli-1对肿瘤的发生发展起重要作用,这对食管癌的诊断、治疗以及新药开发提供新的思路。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

siRNA对人食管鳞癌EC9706细胞中桩蛋白表达的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人食管鳞癌EC9706细胞中桩蛋白(paxillin)表达的抑制作用.方法:使用paxillin siRNA 转染人食管鳞癌EC9706细胞,以对照 siRNA 转染组和正常 EC9706 细胞组为对照,采用免疫细胞化学SP法、Westem blot和半定量RT-PCR技术分别检测转染前后上述各组细胞中paxillin蛋白和mRNA的表达.结果:转染paxillin siRNA后,免疫细胞化学结果显示,3组细胞中paxillin siRNA转染组中paxillin蛋白阳性表达细胞数最低,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot及RT-PCR结果显示,与正常EC9706细胞组及对照siRNA转染组相比,paxillin siRNA转染组中的paxillin蛋白及mRNA的表达量明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论:paxillin siRNA能有效抑制人食管鳞癌EC9706细胞中paxillin基因的表达.     

HIP1基因沉默对人食管癌EC109细胞迁移侵袭能力的影响

目的:研究亨廷顿蛋白相互作用蛋白1(Huntingtin interacting protein 1,HIP1)基因沉默对人食管癌EC109细胞迁移侵袭的影响。方法:构建慢病毒干扰HIP1的食管癌细胞系,定量PCR和蛋白质印迹法检测HIP1基因沉默效果。通过细胞划痕实验和Transwell迁移侵袭试验研究HIP1基因沉默对人食管癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:慢病毒转染EC109食管癌细胞后,HIP1基因沉默效率达到80%以上。qRT-PCR和蛋白质印迹法证实此次慢病毒干扰HIP1效果显著。细胞划痕试验和Transwell迁移侵袭试验显示HIP1基因沉默后可抑制EC109食管癌细胞的迁移和侵袭。结论:构建的HIP1干涉慢病毒表达载体可抑制HIP1基因和蛋白的表达,并可有效抑制EC109食管癌细胞迁移和侵袭,提示HIP1作为食管癌的差异蛋白,可能通过促进食管癌细胞的转移参与食管癌的发生发展。     

miR-9调控GOLPH3抑制食管癌EC109细胞的增殖和迁移

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-9在食管癌中的表达水平及其对食管癌细胞生物学功能的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测食管癌患者癌组织及其癌旁组织中miR-9及高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因的表达水平;miR-9模拟物转染食管癌细胞系EC109,qRT-PCR检测miR-9的表达水平;MTT试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验和流式细胞术检测过表达miR-9对EC109细胞生物学功能的影响。构建野生型和突变型GOLPH3双荧光素酶报告基因载体,并检测荧光素酶活性。qRT-PCR及western blot检测过表达miR-9后,GOLPH3 mRNA和蛋白质的表达水平。结果与癌旁组织相比,食管癌组织中miR-9的表达水平明显降低(P0.01),而GOLPH3基因表达水平明显升高(P0.01)。与阴性对照组相比,miR-9模拟物转染后,食管癌EC109细胞中miR-9的表达水平明显升高(P0.01),且细胞增殖和迁移能力明显降低(P0.01),其细胞周期阻滞于G_2/M期(P0.01)。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和western blot证实miR-9能与GOLPH3特异性结合(P0.01),并介导GOLPH3 mRNA的降解(P0.01),且GOLPH3蛋白的表达水平降低(P0.05)。结论 miR-9在食管癌中呈低表达,并可通过调控GOLPH3参与食管癌的发生、发展。     

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3（SGK3）过表达对乳腺癌细胞迁移的影响

目的探讨SGK3基因对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响。方法构建pEGFP-N1-SGK3重组质粒,用载体质粒pEGFP-N1和重组质粒pEGFP-N1-SGK3转染乳腺癌MCF7细胞;MTT法观察转染细胞的增殖情况,Tran-swell细胞迁移实验检测SGK3过表达对细胞迁移能力影响,RT-PCR检测相关基因表达,Western blot检测SGK3过表达对Wnt/β-catenin信号通路关键因子的影响。结果利用pEGFP-N1-SGK3质粒转染乳腺癌MCF7细胞,建立表达SGK3蛋白的细胞系;细胞增殖实验发现,SGK3的过表达使MCF7细胞生长速度加快;细胞迁移实验发现过表达SGK3的细胞运动迁移能力增强,其可使mmp9的表达增强,而brms1表达无明显变化;Western blot结果显示SGK3过表达可增加乳腺癌细胞磷酸化的GSK3β水平。结论 SGK3的过表达通过影响Wnt/β-catenin信号通路中的GSK3β磷酸化而增强细胞迁移能力。     

丁酸钠对食管癌细胞裸鼠移植瘤生长及NDRG1表达的影响

目的 观察丁酸钠对食管癌EC 9706细胞裸鼠移植瘤生长及NDRG1蛋白表达的影响.方法 构建食管癌细胞裸鼠移植瘤模型,采用丁酸钠溶液按1 g/(kg·d)于肿瘤周围皮下注射,观察移植瘤生长情况;采用免疫组化染色检测裸鼠移植瘤NDRG1蛋白表达情况.对照组同等条件下注射生理盐水.结果 丁酸钠可抑制裸鼠移植瘤生长,其抑瘤率为35.3%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);丁酸钠治疗组裸鼠移植瘤NDRG1蛋白表达较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丁酸钠可能通过上调NDRG1蛋白的表达而抑制食管癌EC 9706细胞裸鼠移植瘤增殖.     

下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响

目的 研究抑制miR-767-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 体外培养乳腺癌细胞，将miR-767-5p inhibitor和inhibitor-NC转染到乳腺癌细胞中。细胞分为3组：空白对照组（Control组），miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组，采用CCK-8法、Transwell法、划痕实验检测miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和胰岛素样生长因子-1(IGF1)的靶向结合作用。RT-qPCR和Western blot实验检测IGF1 mRNA和蛋白的表达水平。采用Western blot检测EMT相关蛋白的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示，与Control组和inhibitorNC组相比，miR-767-5p inhibitor组显著抑制MCF-7细胞的增殖（P <0.05）。Transwell实验结果表明，与Contr...     

Bcl-Xl基因反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的探讨BclXl基因反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞株EC9706增殖和凋亡的影响。方法用阳离子脂质体介导bclxL基因ASODN转染EC9706细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测EC9706细胞的增殖抑制率;逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹杂交检测BclXlmRNA和蛋白表达水平;吖啶橙荧光染色和流式细胞术定量检测EC9706细胞的凋亡率。结果MTT检测显示,BclXlASODN可显著抑制EC9706细胞的增殖(P<0.01),而且其对细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖性;BclXlASODN对BclXlmRNA表达抑制率为57.29%。用吖啶橙荧光染色法和流式细胞检测ASODN组凋亡率(分别为31.13%±5.75%和30.5%,与细胞对照组、空白对照组及无关序列寡核苷酸组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BclXl基因ASODN可有效抑制EC9706细胞的增殖,通过ASODN作用可下调BclXl基因表达,并显著促进EC9706细胞凋亡;BclXl基因有望成为食管癌基因治疗的新靶点。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

PAR-2基因沉默对食管癌EC109细胞增殖及侵袭转移的影响

目的:研究PAR-2基因沉默对食管癌EC109细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。方法:运用MTT及流式细胞术法检测sh RNA-PAR-2 EC109细胞增殖能力及细胞周期的变化;Transwell小室法检测sh RNAPAR-2 EC109细胞侵袭和迁移能力的变化。结果:sh RNA-PAR-2 EC109细胞增殖低于正常对照组,24、48、72 h的细胞抑制率分别为15.92%、24.89%、32.28%,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05),而转染试剂组和阴性质粒转染组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。sh RNA-PAR-2 EC109细胞发生S期阻滞,转染24、48、72 h S期细胞比例分别为(32.79±4.06)%、(26.54±1.37)%和(33.45±2.46)%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。在侵袭实验中,sh RNA-PAR-2 EC109细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为19.6±2.11,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。在迁移实验中,sh RNA-PAR-2 EC109细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数为24.2±2.82,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:sh RNA-PAR-2 EC109细胞的增殖减慢,侵袭及迁移能力降低。     

黄芩素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨黄芩素对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和迁移能力的影响及分子机制.方法 以不同浓度黄芩素处理MM细胞株RPMI 8226和U266细胞不同时间后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测黄芩素对MM细胞增殖的影响;用黄芩素和(或)IL-6处理RPMI 8226、U266细胞,激光共聚焦及Western blot检测处理前后细胞中β连环素(β-catenin)蛋白表达;Transwell小室实验检测不同浓度黄芩素处理前后RPMI 8226和U266细胞的迁移能力;RT-PCR检测不同浓度黄芩素处理前后细胞内β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞迁移相关基因整联蛋白β7(integrin β7)基因mRNA表达.结果 黄芩素呈浓度和时间依赖性抑制RPMI 8226和U266细胞的增殖;激光共聚焦及Westem blot结果显示黄芩素能够抑制β-catenin的表达从而抵抗IL-6对MM细胞的促增殖作用;RT-PCR检测显示黄芩素能够抑制β-catenin、c-myc、cyclin D1和integrin β7的mRNA表达;Transwell小室迁移实验表明,在基质细胞衍生因子(SDF-1)的趋化下,黄芩素以浓度依赖的方式降低MM细胞的迁移能力.结论 黄芩素具有抑制MM细胞增殖和迁移的作用,其分子机制与抑制增殖相关基因β-catenin、c-myc、cyclin D1和integrin β7的表达有关.     

白藜芦醇通过抑制Wnt通路对人卵巢癌细胞增殖、迁移影响的机制研究

目的探讨白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测对照组(二甲基亚砜)、20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇和阳性对照组(40μg/ml顺铂)作用于SKOV3细胞48 h后对细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞法迁移能力的影响; Transwell实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞侵袭能力的影响; Western blot和q-RT-PCR分别检测白藜芦醇对SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达的影响。结果白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的增殖抑制率,且在一定范围内呈浓度依赖性(P 0. 05);此外,白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的迁移距离(P 0. 05),抑制SKOV3细胞侵袭数(P 0. 05); Western blot和q-RT-PCR实验结果显示白藜芦醇可抑制SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达水平。结论白藜芦醇可抑制人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与抑制Wnt3a/β-catenin信号转导通路有关。     

MACC1对宫颈癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对宫颈癌细胞Hela侵袭转移能力的影响及机制。方法Western blot法检测我院10例宫颈癌组织标本和10例癌旁正常组织标本中MACC1的表达,通过脂质体将siRNAMACC1转入宫颈癌Hela细胞中,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞和迁移侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMPs)及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达量。结果宫颈癌组织中的MACC1表达量高于癌旁正常组织(P0.01),通过脂质体将siRNA-MACC1及阴性对照转染到宫颈癌Hela细胞后,与对照组比较,siRNA-MACC1组中细胞活力下降,细胞迁移和侵袭能力下降(P0.01),MMP2,MMP9及波形蛋白(vimentin)表达量下调(P0.01),E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达量上调(P0.01)。结论 MACC1表达下调能抑制宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力,与逆转MMPs,EMT相关蛋白表达有关。     

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因.目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制.方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用.结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P < 0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P < 0.05).刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑.相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P < 0.05).Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P < 0.05),同时JNK蛋白活化.进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制.结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移.     

利用CRISPR/Cas9系统敲除ITGB6基因对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响

目的 探讨整合素β6(ITGB6)基因敲除后对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响。方法 通过CRISPR/Cas9技术构建ITGB6敲除的HT-29细胞（ITGB6-KO）作为敲除组，选择空白转染细胞作为对照组。通过Western blot法检测ITGB6表达，通过MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测敲除ITGB6基因对HT-29细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果 Western blot和DNA测序结果显示CRISPR/Cas9技术有效敲除ITGB6基因。MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验显示敲除ITGB6基因能够抑制HT-29细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力（P <0.01）。结论 CRISPR/Cas9技术能够有效建立敲除ITGB6基因的结肠癌HT-29细胞系，ITGB6敲除后HT-29细胞恶性生物学行为受到抑制，ITGB6基因有望成为结肠癌治疗的潜在靶点。     

黄芩素对结肠癌细胞PTEN、Akt及p-Akt蛋白表达的影响

目的研究黄芩素对人结肠癌细胞生长及肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homologue,PTEN)、Akt及p-Akt表达的影响。方法以人结肠癌SW620细胞为研究对象,通过Ed U和MTT实验方法检测0、25、50、75μmol/L浓度的黄芩素对肿瘤细胞生长及侵袭力的影响;通过Western blot检测黄芩素对肿瘤细胞PTEN、Akt及p-Akt蛋白的表达。结果 Ed U实验结果显示,浓度为50、75μmol/L的黄芩素能够显著抑制SW620细胞的DN A复制活性(P0.05);MTT实验表明黄芩素能够抑制SW620的细胞增生,呈剂量、时间依赖性;Transwell小室迁移实验显示50、75μmol/L浓度的黄芩素能抑制SW620细胞的侵袭迁移能力(P0.05);WB实验结果显示,50、75μmol/L浓度的黄芩素能够上调PTEN的表达,下调p-Akt的表达(P0.05)。结论黄芩素能够经PTEN/Akt途径抑制结肠癌肿瘤细胞的生长和侵袭力。     

RNAi沉默ROCK-1基因抑制人视网膜母细胞瘤细胞株Y79的增殖、侵袭和转移

目的探讨利用RNA干扰技术(RNAi)沉默人视网膜母细胞瘤Y79细胞株ROCK-1基因对细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法实验设空白对照组、阴性脂质体组、实验组。转染后48 h,采用半定量RT-PCR检测ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA的相对表达变化,采用Western blot检测ROCK-1、MMP9和CXCR4蛋白的表达变化。采用MTT法在转染后24 h、48 h、72 h分别检测细胞的生长情况。采用Transwell小室检测转染后细胞的侵袭和迁移能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显下调;细胞生长活力显著下降、凋亡比率显著增加;基因沉默显著抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,差异均具有统计学意义。结论应用ROCK-1-siRNA转染人视网膜母细胞瘤Y79细胞株,可有效抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。小干扰RNA治疗有望成为人视网膜母细胞瘤靶向治疗的新手段。     

DACT1在结肠癌中的表达及其作用

目的 探讨DACT1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭的影响.方法 Western blot检测DACT1在结肠癌组织中的表达;CCK-8进行细胞增殖实验;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用Transwell小室法检测细胞转染前后侵袭力改变.结果 21例结肠癌组织中有14例DACT1表达增高,DACT1高表达的SW480增殖能力明显增强(P<0.05),细胞划痕后24 h,DACT1高表达的细胞划痕宽度恢复70%,而对照组划痕宽度恢复20%(P<0.05).实验组SW480细胞侵袭数量明显高于对照组(P<0.05).结论 DACT1在结肠癌中高表达并促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.