丝裂素活化蛋白激酶通路在甲异靛诱导U937细胞凋亡中的作用

以往实验研究表明,细胞信号转导过程中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)家族的活化除与细胞的生长增殖有关外,也参与细胞凋亡的调节.我们观察了甲异靛在诱导U937细胞凋亡过程中MAPK的三种信号分子ERK1/2、JNK及p38活性的变化,并分析其与细胞凋亡的关系,旨在进一步阐明甲异靛诱导白血病细胞凋亡的分子机制.     

丝裂素活化蛋白激酶通路在甲异靛诱导U937细胞凋亡中的作用

以往实验研究表明,细胞信号转导过程中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)家族的活化除与细胞的生长增殖有关外,也参与细胞凋亡的调节.我们观察了甲异靛在诱导U937细胞凋亡过程中MAPK的三种信号分子ERK1/2、JNK及p38活性的变化,并分析其与细胞凋亡的关系,旨在进一步阐明甲异靛诱导白血病细胞凋亡的分子机制.     

甲异靛诱导NB4细胞凋亡的分子机制研究

甲异靛对多种肿瘤细胞生长具有抑制作用~([1-2]),对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞有显著的诱导细胞凋亡作用,但其具体机制尚不明确~([3]).我们通过研究半胱天冬酶(caspase)、蛋白激酶C(PKC)以及促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在甲异靛诱导细胞凋亡过程中的变化,对甲异靛诱导NB4细胞凋亡的机制进行了初步探讨.     

甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及诱导细胞凋亡机制研究

目的 探讨甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制.方法 应用流式细胞术检测甲异靛诱导K562细胞凋亡的情况以及线粒体膜电位稳定性.应用Western blot技术检测bcr-abl信号通路相关蛋白、caspase以及Bcl-2家族成员在甲异靛作用前后的表达情况.RT-PCR技术检测甲异靛作用前后bcr-abl mRNA表达水平,用电泳移动迁移速度分析检测STAT3、STATS的DNA结合能力.结果 20 μmol/L甲异靛町降低ber-abl融合蛋白的表达及其磷酸化水平,但并不改变其mRNA表达水平,甲异靛可降低STATS以及CRKL的磷酸化水平,抑制STAT3、STATS的DNA结合能力.5-20μmoL/L甲异靛可诱导K562细胞凋亡并且具有浓度依赖性.甲异靛诱导K562细胞凋亡中伴随caspase 3、8、9活化以及细胞线粒体膜电位降低,caspase 3、8、9特异抑制剂z-DEVD-fmk、z-IETD-cho和z-LETD-fmk可阻断甲异靛诱导的K562细胞凋亡.甲异靛诱导K562细胞凋亡前后不伴有Bcl-2、Bax、Bid蛋白表达水平的改变.结论 甲异靛通过降低bcr-abl融合蛋白的表达并抑制bcr-abl信号通路中相关蛋白活性从而抑制K562细胞的增殖.甲异靛诱导K562细胞凋亡依赖于caspase活化以及线粒体途径,但Bcl-2家族成员不参与凋亡的调控.     

利用定量蛋白组学的方法研究甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制

目的:利用串联质谱标签系统(tandem mass tag,TMT)标记定量蛋白组学的方法,检测白血病细胞系K562细胞经甲异靛(meisoindigo)处理后蛋白表达的改变,探讨甲异靛诱导白血病细胞凋亡的作用机制。方法:用CCK8法检测甲异靛对K562细胞的半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50),流式细胞术检测不同浓度甲异靛诱导K562细胞的凋亡水平。K562细胞经终浓度为0. 2%DMSO(对照组)和20μmol/L甲异靛(实验组)处理2 h后,提取总蛋白,TMT标记,高效液相色谱分级和质谱定量蛋白组学技术鉴定肽段和丰度信息,并进行3次技术重复。用Mascot软件鉴定蛋白,用GO(gene ontology)注释、富集和聚类分析方法分析差异表达蛋白。结果:在K562细胞系中,甲异靛以剂量依赖的方式诱导K562细胞凋亡(r=0. 98);蛋白质组学分析结果显示,共鉴定出蛋白质5 544个,其中有定量数据的蛋白质4 792个。与对照组相比,在实验组中表达差异1. 5倍以上的蛋白有8个,其中4个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调,差异变化的蛋白主要与活性氧代谢相关。结论:应用定量蛋白质组学分析表明,包括DDIT4等蛋白的表达在甲异靛处理K562细胞系早期发生明显改变,提示活性氧代谢过程的改变可能在甲异靛促进凋亡的机制中发挥了重要作用。     

p38MAPK对甲胎蛋白诱导的树突细胞凋亡的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在甲胎蛋白（AFP）诱导树突状细胞凋亡过程中的作用。方法联合细胞因子体外诱导培养人外周血来源树突状细胞。Western Blot检测树突状细胞caspase-3及p38MAPK的表达情况。结果AFP诱导树突状细胞凋亡的过程中伴随caspase-3及p38MAPK的表达增加,SB203580能够明显抑制Cas-pase-3及p38MAPK的表达,DEVD-fmk未能阻断p38MAPK的高表达。结论p38MAPK信号转导通路可能是AFP诱导树突状细胞凋亡的上游信号,并起到促进树突状细胞凋亡的作用。     

甲异靛对慢性粒细胞白血病抗血管新生作用的体外研究

远期疗效分析结果证实 ,甲异靛与目前国际上治疗慢性粒细胞白血病 (CML)的首选化疗药物羟基脲疗效相当 ,甲异靛联合羟基脲或干扰素较单用甲异靛、羟基脲、干扰素能明显延长总生存率 ,降低 5年恶变率[1 ,2 ] 。以前我们的研究结果表明 ,其主要疗效机制是抑制白血病细胞增殖、诱导凋亡。最近研究表明 ,CML患者骨髓微血管密度 (MVD)较正常人明显增高[3] 。为探讨抗血管新生是否为甲异靛治疗CML的疗效机制之一 ,我们研究了甲异靛对K5 6 2细胞系和CML原代细胞分泌血管内皮生长因子 (VEGF)的影响及其对内皮细胞的作用。材料和方法1　主要…     

3''-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景:靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用.可用于自身免疫性疾病的治疗,但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道.目的:观察3'-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节.设计、时间及地点:随机对照实验,于2007-07/2008-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成.材料:清洁级BAL,B/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠,均雄性,6～8周龄,体质量(20±2)g,由第一军医大学实验动物中心提供.3'-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供.方法:取BALB/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液,以5、10、15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞,以未处理的为空白对照,以刀豆蛋白A处理组为阳性对照.主要观察指标:MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况:ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化;RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平;荧光显微检镜测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率.结果:MTT检测显示,15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖(P＜0.05),此效应呈量效、时效依赖性.将25 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理72 h后的细胞离心后撤除3'-甲异靛玉红干预继续培养,椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖.ELISA检测显示,各浓度3'-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12,各种系间差异不显著.RT-PCR检测显示,15 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理12 h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低.流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明,15 μ mol/L,的3'-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl-2水平,升高Bax蛋白水平,下调Bcl-2/Bax比例,降低CDK2表达.不同种系小鼠脾细胞均有部分凋亡现象,但死亡率无明显升高.各种系小鼠脾淋巴细胞阻遏于G2/M期,细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高,种系间差异不显著.结论:15-25μmolR3'-甲异靛玉红可逆性抑制不同种系小鼠脾细胞的增殖及分泌功能,此效应呈量效、时效依赖性,并启动细胞凋亡程序.     

甲异靛对K562和HL-60细胞Wnt信号通路的影响

本研究探讨甲异靛对K562细胞和HL-60细胞Wnt信号通路的影响。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测甲异靛处理的K562和HL-60细胞中GSK-3β及其下游相关基因及蛋白的表达水平。结果表明:甲异靛可使HL-60细胞中β-catenin和c-myc基因表达下降,但对K562细胞的这两种基因表达无明显影响;甲异靛略能增加HL-60细胞中GSK-3β蛋白表达,但明显降低K562细胞和HL-60细胞中p-GSK-3β和c-MYC蛋白表达水平;甲异靛对K562细胞中β-catenin表达没有明显影响,但能使HL-60细胞中β-catenin表达下降。结论甲异靛可抑制K562细胞和HL-60细胞中Wnt信号通路的传导,降低癌基因和相关蛋白的表达,从而发挥治疗白血病的作用。     

肿瘤坏死因子α诱导人髓核细胞凋亡的作用途径

背景:在与细胞凋亡有关的众多因素中,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员发挥了重要的作用.但TNF是通过何种途径诱导椎间盘髓核细胞凋亡的机制尚未阐明.目的:探讨TNF-α激活后,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路中P38MAPK和应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(stress-activated protein kinase/c-Jun NH2-terminal kinase,JNK/SAPK)两条途径对人髓核细胞凋亡的作用.方法:体外培养人髓核细胞,将细胞随机分成4组:TNF-α刺激组,P38MAPK阻断组,P-JNK/SAPK阻断组和对照组.采用TUNEL法检测髓核细胞凋亡情况,免疫荧光法检测P-P38MAPK和P-JNK/SAPK的表达及定位:Western Blot法检测P38MAPK,JNK/SAPK及其磷酸化形式的表达.结果与结论:TUNEL法检测凋亡结果中,TNF-α刺激组较其他各组的凋亡细胞密度大(P＜0.01);免疫荧光结果显示TNF-α刺激组P-P38MAPK和JNK/SAPK在细胞质和细胞核的表达高于各阻断组和对照组(P＜0.01);Western Blot结果显示P38MAPK,P-JNK/SAPK在各组髓核细胞内均有表达,但无活化形式,TNF-α刺激组可见P-P38MAPK,P-JNK/SAPK表达,但相应阻断组无表达.结果表明,外源性TNF-α可通过P38MAPK和P-JNK/SAPK途径导致人髓核细胞凋亡.     

3''-甲异靛玉红对C57BL/6小鼠脾细胞和胸腺细胞功能的作用

背景:中药3'-甲异靛玉红及,靛玉红衍生物在抗肿瘤的同时对机体正常免疫细胞影响的报道查及较少.目的:观察3'-甲异靛玉红对C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖的影响.设计、时间及地点:随机分组细胞病理学观察实验,于2007-08/2008-01在南方医科大学珠江医院完成.材料:实验动物为C57BL/6小鼠,雄性,6～8周龄,体质量(20±2)g.方法:取C57BL/6小鼠胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液,应用5,10,15,20,25 μmol/L甲异靛玉红处理C57BL/6小鼠胸腺和脾细胞.以未经仟何药物处理的C57BL/6小鼠作为空白对照,以给予刀豆蛋白A处理的C57BL/6小鼠为阳性对照.主要观察指标:①MTT法测定C57BL/6小鼠脾和胸腺淋巴细胞的增殖.②ELISA法测定培养上清『{I白细胞介素12活性.⑨流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率,细胞内活性氧浓度.④RT.PCR法检测细胞bcl-2和cdk2 mRNA水平.⑤荧光显微镜检测细胞Bcl.2、Bax和CDK2蛋白表达率.结果:15,20,25 μmol/L甲异靛玉红作用24h均町明显抑制C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖(P<0.05),J{:呈量效、时效依赖性.各浓度的甲异靛玉红对C57BI.J6小鼠胸腺和脾细胞各时间点分泌[J细胞介素12的功能较对照组明显减低(P<0.05).15 la mol/L的3'一甲异靛玉红可导致C57BL拍小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡相关蛋白bcl-2和细胞周期蛋白cdk2 mRNA表达水平均减低,Bcl-2的蛋白表达水平降低,CDK蛋白表达减低,Bax表达水平升高,Bcl-2/Bax比例明显下降,肩动细胞凋亡.15 μmol/L的3'-甲异靛玉红将C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞阻遏于G2/M期,细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高.结论:一定浓度范围甲异靛玉红可逆性抑制C57BL/6小鼠体外培养的脾及胸腺淋巴细胞增殖,同时抑制白细胞介素12的分泌,并启动细胞凋亡.     

p38 MAPK信号转导通路与椎间盘退变

p38 MAPK信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)介导的信号转导通路的重要分支,它在炎症、细胞应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用.既往在骨关节炎的研究中发现,p38参与炎性因子的激活、软骨细胞的凋亡等,与骨关节炎的病理过程密切相关.椎间盘退变也存在炎性反应、细胞凋亡等病理变化,这其中p38 MAPK信号转导通路发挥的作用尚不明确.现将既往此类文献加以综述.     

硝普钠诱导K562细胞凋亡过程中STAT3/P38MAPK活化及端粒酶hTERT-mRNA表达的研究

为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠（SNP）诱导K562细胞凋亡过程中STAT3及P38MAPK活化及端粒酶hTERT—mRNA表达的变化，探讨硝普钠诱导K562细胞凋亡机制，用Annexin—V／PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法检测细胞凋亡。用流式细胞术测定经硝普钠干预后瞄62细胞磷酸化P38MAPK和磷酸化STAT3的表达，同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT—mRNA表达的变化。结果表明：K562细胞经硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变，DNA片段化，显现亚G1峰Ⅱ并显著增加。Annexin—V／PJ和DNA片段原位末端标记表达增加。这些均证实NO能诱导瞄62细胞凋亡，大部分细胞阻滞于G0／G1期。SNP诱导K562细胞凋亡过程中，磷酸化P38MAPK和磷酸化STAT3的表达随SNP浓度的增加而表现为先增强后下降；瞄62细胞与2．0mmol／LSNP孵育不同的时间内，磷酸化P38MAPK的表达在12小时时达到高峰并持续至48小时，72小时后表达下降；磷酸化STAT3的表达在24小时时达高峰，48小时后表达即显著下降；端粒酶hTERT—mRNA的表达随SNP作用的浓度增加和时间延长而显著下调。结论：SNP能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与P38MAPK的活化、抑制端粒酶逆转录酶和STAT3的活化有关。     

甲异靛对K562细胞的作用及其机制的初步研究

体内外研究表明 ,BCR ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病 (CML)发病的原发因素。BCR ABL可通过持续活化多条信号传导通路传递其恶性信号 ,其中包括RAS Erk2、JAK STAT、PI3 K Akt等。降低BCR ABL的酪氨酸激酶活性或阻止其下游信号的传递就可以收到治疗白血病的效果。甲异靛治疗CML疗效较靛玉红强而不良反应较轻[1 ] ,但其抗白血病机制尚不清楚。我们以CML细胞株K5 6 2为研究对象 ,观察了甲异靛对BCR ABL及其相关信号分子的影响。材料和方法1　试剂　甲异靛为中国医学科学院药物研究所提供 ,溶解于二甲基亚砜 (DMSO)中。E…     

3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景：靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用，可用于自身免疫性疾病的治疗，但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道。目的：观察3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节。设计、时间及地点：随机对照实验，于2007-07，2008—02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。材料：清洁级BALB/c，C57BL/6以及F1代杂交鼠，均雄性，6～8周龄，体质量（20±2）g，由第一军医大学实验动物中心提供。3’-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供。方法：取BALB＆，C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液，以5、10、15、20和25μmol／L3’-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞，以未处理的为空白对照，以刀豆蛋白A处理组为阳性对照。主要观察指标：MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况；ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性；流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化；RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平；荧光显微镜检测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果：MTT检测显示，15、20和25μmol／L3’．甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖俨〈0．05），此效应呈量效、时效依赖性。将25μmol／L3’-甲异靛玉红处理72h后的细胞离心后撤除3’-甲异靛玉红干预继续培养，椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖。ELISA检测显示，各浓度3’-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12，各种系间差异不显著。RT-PCR检测显示，15μmol／L3’-甲异靛玉红处理12h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低。流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明，15umol／L的3’-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl，2水平，升高Bax蛋白水平，下调Bcl-2／Bax比例，降低CDK2表达，不同种系     

阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导U937细胞株凋亡的初步研究

目的:探讨阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导白血病细胞株U937凋亡的作用。方法:用阿糖胞苷和冬凌草甲素单药或两药联合处理U937细胞后,采用细胞计数检测细胞增殖,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术分析细胞磷脂酰丝氨酸外翻情况和线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测凋亡相关分子表达情况。结果:阿糖胞苷和冬凌草甲素单药均能抑制U937细胞增殖,而两药联合抑制作用更加明显,两者能协同诱导U937细胞凋亡,并明显促进细胞磷脂酰丝氨酸外翻和线粒体跨膜电位下降;两药联合较单药组还能明显诱导Caspase-9、Caspase-3活化及PARP的剪切。结论:阿糖胞苷与冬凌草甲素能够协同抑制U937细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能是主要通过线粒体途径介导。     

地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义

目的观察地塞米松诱导胸腺细胞caspase-3蛋白与p38MAPK的表达变化,探讨地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义。方法采取体外细胞培养Balb/c小鼠(体质量20g左右的Balb/c小鼠,雌雄不限)胸腺细胞的方法,制备地塞米松诱导的细胞凋亡模型,通过流式细胞仪观察凋亡细胞数量的变化情况。运用Westernblotting技术检测地塞米松处理的Balb/c小鼠胸腺细胞0,30,60,180min时相点caspase-3蛋白与p38MAPK的表达变化。结果地塞米松可以诱导Balb/c小鼠胸腺细胞发生凋亡,发生的比例是21.75%。随后的westernblot检测显示,伤后即刻p38MAPK开始表达,并在60min达到高峰,随后有所减弱。而caspase-3蛋白的表达开始较弱呈逐渐升高的趋势,一直持续至伤后180min。结论p38MAPK信号通路在地塞米松诱导的Balb/c小鼠胸腺细胞凋亡过程中起重要作用。     

3’-甲异靛玉红对057BL／6小鼠脾细胞和胸腺细胞功能的作用

背景：中药3’-甲异靛玉红及，靛玉红衍生物在抗肿瘤的同时对机体正常免疫细胞影响的报道查及较少。 目的：观察3’-甲异靛玉红对C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖的影响。 设计、时间及地点：随机分组细胞病理学观察实验，于2007-08／2008-01在南方医科大学珠江医院完成。 材料：实验动物为C57BL／6小鼠，雄性，6-8周龄，体质量（204-2）g。 方法：取C57BL／6小鼠胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液，应用5，10，15，20，25μmol／L甲异靛玉红处理C57BL托小鼠胸腺和脾细胞。以未经任何药物处理的C57BL／6小鼠作为空白对照，以给予刀豆蛋白A处理的C57BL／6小鼠为阳性对照。 主要观察指标：①MTT法测定C57BL／6小鼠脾和胸腺淋巴细胞的增殖。②ELISA法测定培养上清中自细胞介素12活性。③流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率，细胞内活性氧浓度。④RT-PCR法检测细胞bcl-2和cdk2 mRNA水平。⑤荧光显微镜检测细胞Bcl．2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果：15，20，25μmol／L甲异靛玉红作用24h均可明显抑制C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖（P〈0．05），并呈量效、时效依赖性。各浓度的甲异靛玉红对C57BL／6小鼠胸腺和脾细胞各时间点分泌白细胞介素12的功能较对照组明显减低（P〈0．05）。15μmol／L的3’-甲异靛玉红可导致C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡相关蛋白bcl-2和细胞周期蛋白cdk2 mRNA表达水平均减低，Bcl-2的蛋白表达水平降低，CDK蛋白表达减低，Bax表达水平升高，Bcl-2／Bax比例明显下降，启动细胞凋亡。15μmol／L的3’-甲异靛玉红将C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞阻遏于G2／M期，细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高。 结论：一定浓度范围甲异靛玉红可逆性抑制C57BL／6小鼠体外培养的脾及胸腺淋巴细胞增殖，同时抑制白细胞介素12的分泌，并启动细胞凋亡。     

组织因子在移植物抗宿主病患者内皮损伤中的作用机制研究

8MAPK和JNK磷酸化增强,而磷酸化ERK无变化.p38MAPK和JNK阻滞剂可显著降低异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞诱导HUVEC的TF表达.抗TF抗体和p38MAPK、JNK阻滞剂均可下调异基因T淋巴细胞诱导的HUVEC中VCAM-1、TNF-α、IFN-γ和IL-6的表达.结论 TF通过细胞内信号通路p38MAPK和JNK参与了GVHD导致的血管内皮细胞损伤和活化.     

葛根总黄酮诱导人早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡的实验研究

本研究探讨葛根有效成分对恶性白血病可能的凋亡诱导作用及其分子机制。采用葛根总黄酮(flavonoids of puerarin,PR)处理人早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4,用MTT法检测细胞增殖抑制率;FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;实时定量PCR检测pml/rarα、bcl-2、survivin基因表达;Western blot检测JNK、p38MAPK、FasL及caspase相关酶的变化。结果发现,PR能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。随着PR浓度的增加,pml/rarα、bcl-2及survivin基因在mRNA水平表达下调,JNK、FasL、caspase3及caspase8蛋白表达增加,与PR浓度呈正相关;PR联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)处理后上述作用更为明显。结论:PR诱导NB4细胞凋亡的机制可能与JNK相关信号分子的活化有关;PR联合ATO具有协同诱导NB4细胞凋亡的作用。