超声波抗小鼠早孕的动物实验研究Ⅰ．宫内胚胎心电图── 一种能反映胚胎急性损伤效应的动物模型

妊娠第９天到第１８天的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠被麻醉后，经腹正中切口外置子宫角。用一对插入羊膜囊的小电极，引导出一种电活动。这种电活动在小鼠妊娠第９天胚胎即可出现，妊娠第１０天表现出节律性。随着妊娠龄的增长，电活动的频率和电压均增加。在羊膜囊内注射异丙肾上腺素能使电活动的频率减慢，注射氯化钾后３０秒内电活动消失；而注射生理盐水后电活动没有改变。研究证实，该方法引导出来的电活动，就是胚胎的心电图。本研究建立了一种能定量反映胚胎急性损伤效应的动物模型。     

超声波抗小鼠早孕的动物实验研究Ⅱ．引起早孕期胚胎急性死亡的超声波剂量及温热机制研究

妊娠第１０～１１和第１４～１５天的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠被麻醉后，经腹正中切口将子宫角外置于腹壁上。右、左侧子宫角近卵巢的第一或第二个着床点分别定为辐照组或假照组。用０．８ＭＨｚ连续超声波分别以五种强度（Ｏｗ／ｃｍ~２一假照；８Ｗ／ｃｍ~２，１２Ｗ／ｃｍ２，１６Ｗ／ｃｍ~２，２０Ｗ／ｃｍ~２）辐照妊娠鼠的１５８个着床点，实时观察心电变化后，还纳子宫，关腹，于妊娠第１８天时检查。另有６０只妊娠鼠作超声热效应研究。结果：心电消失后未再出现组中，胚胎的死亡率为１００％，在妊娠第１０～１１天组中超声波致胚胎急性完全性死亡剂量为２０Ｗ／ｃｍ~２，６１秒；１６Ｗ／ｃｍ２，１０１秒；而妊娠第１４～１５天组的剂量则是：２０Ｗ／ｃｍ~２，６８秒。用１２Ｗ／ｃｍ２，１６Ｗ／ｃｍ~２和２０Ｗ／ｃｍ~２三组声强辐照妊娠第１４天胚胎着床点９０秒，胚胎体内温度平均升高６．８８℃，１１．７９℃和２６．５９℃。     

早孕小鼠子宫内膜中凋亡蛋白抑制因子Survivin表达及对胚胎着床的作用

背景:有研究表明Survivin作为一种凋亡蛋白抑制蛋白,在胚胎植入过程中可能起到抑制子宫内膜凋亡及诱导子宫内膜蜕膜化和促使滋养层细胞入侵的作用,但是目前关于Survivin在胚胎着床方面的报道较少.目的:观察凋亡蛋白抑制因子Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达及对胚胎着床的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,实验于2008-03/06在重庆医科大学医学检验中心完成.材料:6～8周龄清洁级NIH小鼠76只,体质量20～25 g;兔抗人Survivin多克隆抗体为美国Santa cruz公司产品.方法:①根据阴道涂片结果鉴别雌鼠的动情周期,动情后期雌鼠设为未孕组,记为妊娠第0天.雌雄鼠按2:1比例自然合笼,次晨7时检查雌鼠阴栓阳性者即为妊娠,定为妊娠第1天,依次计算妊娠天数.②取妊娠4d的小鼠20只随机抽签法分为2组,每组10只.对照组:双侧子宫角均注射5 μL正常兔血清IgG;实验组:左侧子宫角注射Survivin 1:80比例抗体5 μL,右侧子宫角正常兔血清IgG 5 μL对照.妊娠第8天剖腹取出子宫,大体观察并统计胚胎着床数.主要观察指标:①免疫组织化学检测Survivin在未孕及妊娠第2,3,4,5,6,7天各组小鼠子宫内膜的表达.②子宫角注入Survivin抗体,统计胚胎着床数.结果:①免疫组织化学检测妊娠组Survivin蛋白的表达明显高于未孕组(P＜0 05),且随着妊娠天数的增加,子宫内膜Survivin蛋白的表达逐渐增加,到孕第6天达到高峰,随后下降,但孕第7天仍明显高于未孕组(P＜0.05).②实验组左右侧子宫胚胎着床数分别为1.400 0±0.5164和6.400 0±1.075 0:对照组左右侧子宫胚胎着床数为6.500 0±1.0801和6.200 0±0.918 9;实验组注射抗体的左侧胚胎着床数较右侧明显下降(P＜0.05);对照组左右侧子宫胚胎着床数差异无显著性意义(P＞0.05).结论:Survivin在早孕小鼠子宫内膜持续表达,并参与胚胎的着床调控过程.     

外源性大麻素HU210缓解慢性神经病理性疼痛诱发的焦虑抑郁样行为机制研究

目的:探讨外源性大麻素HU210在小鼠神经病理性疼痛诱发的焦虑、抑郁样行为中的作用,以及对腹外侧眶皮层(ventrolateral orbital cortex, VLO)锥体神经元自发电活动的影响。方法:利用腓总神经(common peroneal nerve, CPN)结扎建立神经病理性疼痛模型,采用von Frey纤毛检测小鼠的触诱发痛,利用高架十字迷宫、强迫游泳等行为学实验来评估小鼠的焦虑和抑郁样行为;利用在体细胞外记录方法记录VLO中锥体神经元自发放电活动的变化。结果:CPN结扎小鼠在术后第7天的50%缩足阈值(paw withdrawal threshold, PWT)显著降低,并持续至术后第35天;CPN结扎后第13天,小鼠在高架十字迷宫中进入开臂次数百分比和开臂时间百分比显著减少,在强迫游泳测试中不动时间显著增加;CPN结扎后第13天,腹腔注射20μg/kg HU210或VLO定位注射200 ng HU210都能够显著增加小鼠在高架十字迷宫中进入开臂次数百分比和开臂时间百分比,并显著减少强迫游泳测试中的不动时间;CPN结扎后第13天,小鼠VLO中锥体神经元自发放电频率显著降低,腹腔注射20μg/kg HU210能够显著增加锥体神经元的自发放电频率。结论:外源性大麻素HU210可能通过增加VLO中锥体神经元的自发放电频率缓解神经病理性疼痛引起的焦虑和抑郁样行为。     

聚焦超声致早孕小鼠子宫平滑肌及胚胎损伤效应的观察

目的观察聚焦超声致早孕小鼠子宫平滑肌及胚胎的急性损伤和转归效应。方法将96只妊娠第7天的小鼠随机分为A、B、C三组,每组32只,分别采用声强为0W/cm2、19W/cm2、32W/cm2的超声辐照小鼠妊娠子宫右侧,经超声辐照后即刻和继续妊娠第14天分别选取16只小鼠,取子宫平滑肌及胚胎,进行光镜、电镜观察及甲胎蛋白酶活性测定。结果经超声辐照后即刻光镜、电镜下显示B、C组胚胎细胞溶解,子宫平滑肌见可逆性损伤;继续妊娠第14天,B、C组胚胎细胞变性坏死,B组子宫增生较好,C组可见肌细胞溶解等改变。超声辐照后即刻B、C组子宫平滑肌Na+-K+-ATP、Mg++-ATP、Ca++-ATP酶活性均有升高趋势,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论一定剂量的超声辐照早孕小鼠子宫,可致胚胎细胞变性坏死,而子宫平滑肌呈可逆性损伤。     

超声波致小鼠胚胎急性死亡的机理及剂量研究

妊娠第10~11和第14~15天的BALB/C小鼠被麻醉后,经腹正中切口将子宫角外置于腹壁上。右、左侧子宫角近卵巢的第一或第二个着床点分别定为辐照组或假照组。用0.8MHz连续超声波分别以五种强度(OW/cm~2-假照:8W/cm~2,12W/cm~2,16W/cm~2,20W/cm~2)辐照158只妊娠鼠着床点,实时观察心电变化后,还纳子宫,关腹,于妊娠第18天时检查60只妊娠鼠作超声热效应研究。结果:心电消失后未再出现组中,胚胎的死亡率为100%,在妊娠第10~11天组中超声波致胚胎急性完全性死亡剂量为20W/cm~2,61秒:16W/cm~2,101秒,而妊娠第14~15天组的剂量是:20W/cm~2,68秒。用12W/cm~2,16W/cm~2和20W/cm~2三组声强辐照妊娠第14天胚胎着床点90秒,胚胎体内温度平均升高6.88℃,11.7℃和20.59℃。     

人羊膜间充质干细胞移植骨髓抑制小鼠的造血功能

背景：大剂量化疗药物可造成严重的骨髓损伤,除药物治疗外,干细胞移植已越来越多的用于骨髓损伤的治疗。目的：观察人羊膜间充质干细胞移植对顺铂所致骨髓抑制小鼠造血功能恢复的影响。方法：体外培养人羊膜间充质干细胞,雌性ICR小鼠被随机分为3组,除空白组外,其余小鼠腹腔注射顺铂诱导ICR小鼠制备骨髓抑制模型,建模后人羊膜间充质干细胞移植组小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞3．0×10^5／g,空白组和模型组注射等量PBS。结果与结论：连续给予顺铂7d后,ICR小鼠体质量明显降低,但模型组与人羊膜间充质干细胞移植组之间差异无显著性意义。模型组小鼠外周血白细胞、淋巴细胞、单个核细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积和血小板等水平明显低于空白组（P〈0．01）,于首次给顺铂后第21天开始恢复。人羊膜间充质干细胞移植组外周血的上述指标较模型组提前7d开始恢复,第21天时,已接近或达到空白组水平;与空白组相比,人羊膜间充质干细胞移植后的一两天及移植后的2周出现了一过性的白细胞增高和血小板数增加。第24天,人羊膜间充质干细胞移植组小鼠股骨髓腔冲洗液有核细胞数明显高于模型组（P〈0．05）,骨髓组织病理学检查结果也显示,人羊膜间充质干细胞移植组小鼠股骨骨髓组织结构明显改善,与空白组相似,骨髓细胞数明显增多,可见较多的巨核细胞,且人羊膜间充质干细胞移植组后2周,骨髓组织可见分布较广的小鼠抗人核单克隆抗体-FITC阳性的移植细胞定植。以上结果表明,人羊膜间充质干细胞移植治疗较早地改善顺铂所致骨髓抑制小鼠的造血功能。     

多抗甲素促进骨髓移植小鼠免疫重建

本文报导了给予致死量照射的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠移植同系骨髓细胞后，应用多抗甲素，腹腔注射５００ｍｇ／ｋｇ．ｄ连续７天，结果在移植后３０天，该小鼠的免疫功能，比正常骨髓移植小鼠明显增强，提示该药能影响小鼠免疫功能的重建。     

丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响

目的分析丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响。方法40只孕鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。在胎鼠器官形成期即妊娠第7~16天通过腹腔注射方式给药,低、中、高剂量组丙酮酸乙酯注射剂量分别为25 mg·kg^-1·d^-1、50 mg·kg^-1·d^-1和100 mg·kg^-1·d^-1。对照组注射等量生理盐水。在孕鼠妊娠的第17天经眼球取血后处死,通过对孕鼠的行为能力、脏器系数、黄体数、着床率、雌二醇、胎盘组织结构、胎鼠体重及胎鼠畸形等进行分析、检测,探讨丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响。结果与对照组比较,胚胎发育期给孕鼠腹腔注射丙酮酸乙酯,中低剂量有助于促进卵巢、胎盘发育,提高胚胎着床率,促进雌二醇表达;过高浓度处理,则会造成卵巢和胎盘的功能的抑制作用。胚胎发育期给孕鼠腹腔注射丙酮酸乙酯,中低剂量有助于促进胚胎成活,降低胎鼠畸形率。结论合适剂量(50 mg·kg^-1·d^-1)的丙酮酸乙酯处理,有助于小鼠胎盘和胎鼠早期生长均有促进作用,过高剂量处理将发生一定的抑制作用。     

运用多普勒超声心动图技术对染色体三体异常小鼠胚胎心脏发育的研究

对２０个１６三体染色体异常小鼠胚胎进行了多普勒超声心动图研究。胎龄从１０天至１５天。９例发现流入道返流波型，６例发现流出道返流波型。１２０例染色体正常胚胎无一例发现返流波型。１６三体小鼠模型作为先天性心脏病研究的理想模型，本文首次提供了对此类模型胚胎血液动力学研究的非创伤性监测方法。