低剂量辐射对荷S180肉瘤小鼠肿瘤组织MMP-2和TIMP-2表达影响

目的探讨低剂量辐射对荷S180肉瘤小鼠肿瘤组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2）表达的影响。方法昆明种小鼠皮下接种S180肉瘤细胞,待肿瘤形成后将小鼠随机分为假照组（N组,40只）和低剂量辐射组（LDR组,40只）,N组予以无射线假照射,LDR组给予一次性75 mGy的60Co射线全身照射。N组于假照射后12 h处死,LDR组分别于照射后12、24、48、72 h处死。分别取肿瘤称质量,免疫组化染色检测肿瘤组织中MMP-2、TIMP-2表达情况。结果与N组相比,75 mGy射线全身照射后小鼠肿瘤生长缓慢（t=2.19,P〈0.05）。LDR组小鼠低剂量照射后不同时间TIMP-2表达与N组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;MMP-2的表达在照射后24、48 h较N组明显下降,差异均有显著性（u=2.15、2.04,P〈0.05）。结论低剂量全身照射可以明显抑制肿瘤生长,降低MMP-2的表达,从而抑制肿瘤的浸润和转移。     

低剂量照射对小鼠S180肉瘤组织CyclinE和PCNA表达影响

目的探讨低剂量照射对小鼠S180肉瘤组织细胞周期蛋白E（CyclinE）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法昆明种雄性小鼠右后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞,随机分成对照组（假照组）、照射组。接种后1周以75mGy的γ射线全身照射照射组小鼠,于照射后12、24、48及72h处死两组小鼠,直接测量肿瘤直径,取瘤组织用PV二步法半定量检测CyclinE、PCNA表达情况。结果与假照组相比,75mGy的7射线全身照射后小鼠肿瘤生长缓慢（t=2．19,P〈0．05）。低剂量照射后各组小鼠CyctinE表达与假照组比较差异无显著性（P〉0．05）;照射后48h小鼠瘤组织PCNA表达较假照组明显下降（u=2．34,P〈0．05）。结论低剂量照射可降低CyclinE、PCNA的表达,从而抑制肿瘤生长,对低剂量照射抗肿瘤机制的研究有一定的指导意义。     

低剂量辐射联合环磷酰胺对肿瘤细胞凋亡、细胞周期及骨髓增殖影响

目的探讨低剂量辐射联合环磷酰胺对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及骨髓增殖的影响。方法昆明种雄性小鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组（假照组）、低剂量照射组（LDR组）、CTX化疗组（CTX组）和低剂量照射联合化疗组（LDR＋CTX组）,小鼠左后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞（空白组除外）,接种后第5、8天LDR组和LDR＋CTX组小鼠给予γ射线全身照射75 mGy,照射36 h后CTX组和LDR＋CTX组小鼠采用环磷酰胺（CTX）化疗,测量肿瘤大小变化,并取肿瘤组织采用流式细胞仪分析凋亡、细胞周期,取冲洗骨髓组织分析骨髓增殖情况。结果与假照组相比,各处理组肿瘤生长缓慢;LDR组肿瘤细胞凋亡增加;CTX组、LDR＋CTX组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,后者较前者为著（t=2.52,P〈0.05）。与空白对照组相比,假照组、LDR组骨髓细胞浓度未见明显变化,化疗组（CTX组、LDR＋CTX组）明显减少,后者较前者有明显提高（t=4.71,P〈0.05）;CTX组、LDR＋CTX组的增殖指数（PI）明显增加,LDR＋CTX组较CTX组进一步升高（t=3.41,P〈0.05）。结论低剂量辐射联合环磷酰胺可使机体肿瘤细胞G1期阻滞加剧,对肿瘤增殖细胞杀伤作用增强,明显提高机体抗肿瘤的作用,同时保护机体的骨髓造血机能,具有辅助肿瘤化疗的实际临床意义。     

低氧对小鼠缺氧诱导因子-1α、P53和血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究低氧时小鼠肺组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、P53及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化,探讨三者之间的关系,以及低氧与血管新生的关系.方法：实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组与对照组,低氧仓浓度分别为10%、7%、5%.低氧时间分别为3天、6天、9天.用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度（MVD）.结果：低氧组HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强,而对照组HIF-1α无表达,P53和VEGF有少量表达（P＜0.05）;低氧组的MVD也高于对照组;P53,VEGF表达与MVD均与HIF-1α表达呈正相关（r分别为0.609、0.730与0.691）.结论：HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用,P53基因的失活可能经HIF-1α/VEGF通路促进血管新生.     

缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1α的影响

目的 观察缺血后处理对缺血再灌注损伤（IRI）大鼠肾脏缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法 将72只成年SD大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血后处理组（IPO组），每组24只。S组结扎右肾动脉，暴露左肾45min后关闭腹腔；IR组结扎右肾动脉并完全阻断左侧肾动脉45min后恢复血流；IPO组在IR模型的基础上，恢复血流前给予反复10次20s供血20s缺血处理。每组分别在造模后0．5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h留取血和肾组织标本，检测血肌酐和血尿素氮，并对肾组织行免疫组化染色和单言评分；Western blot检测HIF-1α的表达强度。结果 HIF-1α主要在小管上皮细胞中表达，肾小球中未发现阳性染色。各组HIF-1α表达情况：与S组相比IR组HIF-1α在1h表达开始显著升高，6h达到高峰，12h开始下降。而IPO组HIF-1α在3h表达开始升高，6h达到高峰，且高峰水平显著高于IR组，24h后HIF-1α开始下降，48h其表达水平与IR组差异无显著性。结论 缺血后处理能增加缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1α表达并延长其表达高峰时间，从而减轻缺血缺氧对肾脏的损伤。     

乏氧诱导因子预测肺鳞癌放疗敏感性研究

目的 探讨乏氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,H1F-1α)预测肺鳞癌放疗敏感性的价值.方法 对数期人肺鳞癌细胞,按放疗照射时间分为24 h组和48 h组,2组分别采用0、2、10 Gy照射剂量单次X线照射24 h和48 h.照射后采用Western blot检测肺鳞癌细胞HIF-1α蛋白表达情况,采用逆转录PCR检测肺鳞癌细胞HIF-1α基因表达情况,比较2组肺鳞癌细胞放疗前、后HIF-1α阳性表达率、微血管密度和细胞凋亡率.结果 48 h组肺鳞癌细胞在照射0、2、10 Gy剂量时HIF-1α mRNA((14±2)％、(37±2)％、(69±3)％)和蛋白表达量((16±1)％、(70±5)％、(97±13)％)均明显高于24h组((10±1)％、(29±5)％、(41±6)％,(13±2)％、(65±4)％、(89±10)％),且10 Gy剂量时高于0、2 Gy剂量,2 Gy剂量高于0 Gy剂量(P＜0.05);放疗前24h组肺鳞癌细胞HIF-1α阳性表达率(12.5％)、微血管密度(40.78±5.25)和细胞凋亡率((2.10±0.43)％)与48 h组(12.5％、42.90±7.54、(2.08±0.39)％)比较差异均无统计学意义(P＞0.05),放疗后48 h组肺鳞癌细胞HIF-1α阳性表达率(87.5％)、微血管密度(83.31±4.67)和细胞凋亡率((4.04±1.22)％)均高于24 h组(62.5％、61.22±9.48、(2.23±0.57)％)(P＜0.05),2组放疗后均较放疗前明显增高(P＜0.05).结论 放射剂量越大、放射时间越长,肺鳞癌中HIF-1α阳性表达量越高,对放疗越不敏感;HIF-1α与微血管密度、细胞凋亡密切相关.     

^60Co γ射线半身照射对小鼠非照射区域骨髓造血功能的影响

目的：观察局部电离辐射对小鼠非照射区域骨髓造血功能相关指标的影响。 方法：实验于2003—10／2004—03在解放军第兰军医大学辐照中心和全军复合伤研究所完成，选择雄性昆明小鼠180只，采用次序随机分组法分4组，即正常对照组、全身照射组、左半身照射组及全身屏蔽照射组。每组45只。正常对照组不作其他处理；全身照射组固定于照射架内；左半身照射组麻醉固定体位，用铅砖屏蔽右半身；全身屏蔽照射组麻醉固定，用铅砖屏蔽全身。应用8.0Gy ^60Coγ射线照射，剂量率68.46cGy／min。照射后不同时相检测各组小鼠血清超氧化物歧化酶活性及丙二醛、肿瘤坏死因子α含量变化，观察骨髓细胞凋亡情况和骨髓有核细胞数、粒细胞巨细胞集落形成单位等骨髓造血功能的变化。 结果：全身照射组照射后第8天死亡2只，第9天死亡4只，其余各组无脱失。①非照射区域骨髓细胞有核细胞数照射后24h和48h显著低于正常对照组（P〈0．01），但显著高于半身照射组照射侧（左侧）（P〈0．01）。②非照射区域骨髓细胞凋亡率照射后2d和9d均显著高于正常对照组（P〈0．01），但显著低于半身照射组照射侧（左侧）（P〈0．01）。③非照射区域照射后24h和48h粒细胞巨细胞集落形成单位数均显著低于正常对照组（P〈0．01），但显著高于半身照射组照射侧（左侧）（P〈0．01）。④照射后12h和24h左半身照射组小鼠血清肿瘤坏死因子α含量显著高于正常对照组（P〈0．01），但显著低于全身照射组（P〈0.01）。⑤照射后2d和9d左半身照射组小鼠血清丙二醛含量显著高于正常对照组（P〈0．01）。但显著低于全身照射组（P〈0．01）；血清超氧化物支化酶活性显著低于正常对照组（P〈0．01），但显著高于全身照射组（P〈0．01）。 结论：局部电离辐射作用后，可导致     

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的：探讨磷酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol—3 kinase，P13K）途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子（HIF-1α）表达的影响。方法：将磷酰肌醇-3激酶（P13K）特异抑制剂Wortmannin（WT）注入大鼠玻璃体内，抑制P13K活性为A组，玻璃体内注射等量林格液作为B组，空白对照组为C组，采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mmHg（1kPa=7．5mmHg）持续1h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型，于再灌注后0、2、6、8、12、24、48h取材，行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达；并应用RT—PCR来检测HIF—1α mRNA的表达。结果：视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48h，视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加，12h达到高峰，然后逐渐降低，预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin（WT）的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱，亦在12h达到高峰，然后逐渐降低。结论：缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过P13K途径来实现，阻断P13K途径，可以明显减少HIF-1α的表达，但从实验结果来看P13K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达，由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。     

异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤的影响

目的探讨不同剂量的异臭椿烷治疗S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤效果。方法建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为空白对照组、阳性对照组、异臭椿烷高、中、低剂量组,每组9只。异臭椿烷高、中、低剂量组分别给予1.0、0.5、0.1mg/L异臭椿烷0.1mL,灌胃给药,每天1次;阳性对照组采用环磷酰胺腹腔注射给药,25mg/（kg·d）;空白对照组每只给予0.1mL纯食用油灌胃。5组均连续给药5d后间隔2d再次连续给药5d。停药后24h处死小鼠,称取小鼠体质量,比较小鼠实验前后体质量变化;称取瘤质量,计算抑瘤率。结果异臭椿烷各剂量组和阳性对照组小鼠状态总体表现明显强于空白对照组,体质量增加幅度明显高于空白对照组,肿瘤生长速度明显慢于空白对照组,差异均有显著意义（F=34.786、16.407,q=3.059～16.077,P〈0.05）。结论异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤生长具有一定的抑制作用。     

磁共振弥散成像活体检测rAd/p53治疗人类结肠癌荷瘤裸鼠早期疗效

目的：运用磁共振弥散成像（DWI）研究rAd/p53治疗人类结肠癌荷瘤裸鼠的早期改变,探索MR-DWI活体无创评价rAd/p53早期抗癌疗效的标记物。方法：52只人类结肠癌SW480荷瘤BALB/c裸小鼠随机分成2组：对照组,rAd/p53治疗组。于假治疗或治疗后24 h、48 h、72 h、120 h、168 h各组分别随机取5只荷瘤鼠行MR-DWI。随后处死荷瘤鼠,即切下肿瘤,检测肿瘤的p53蛋白表达（western blot）、凋亡（TUNNEL）。结果：rAd/p53治疗组在观察时间点肿瘤ADC值较对照组增加、EADC值较对照组降低。治疗组在观察时间点肿瘤凋亡较对照组增加,p53蛋白表达均较对照组增高。ADC值与肿瘤细胞凋亡范围呈正相关（0.205 3,0.000 0）、与肿瘤p53表达呈正相关（0.203 8,0.000 0）;EADC值与肿瘤细胞凋亡范围呈负相关（-0.318 4,0.000 0）、与肿瘤p53表达呈负相关（-0.328 0,0.000 0）。结论：ADC值和EADC值在治疗后24 h即可出现有统计意义的改变,可作为rAd/p53治疗肿瘤早期疗效评价的生物标记物。     

p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞成骨分化中的作用

目的探讨p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞（PDLCs）成骨分化中的作用。 方法体外正常氧（20% O2）和低氧（1% O2）中培养PDLCs细胞48 h,Western免疫印迹检测12、24与48 h时p53与HIF-1α的表达水平;小干扰RNA（Si-HIF1α）转染PDLCs,验证敲低HIF-1α表达后p53水平变化;进一步通过小干扰RNA（Si-p53）转染PDLCs,检测低氧下PDLCs中p53表达水平,比较碱性磷酸酶（ALP）活性,成骨标志物ALP、I型胶原（COL1）、成骨特异性转录因子（RUNX2）的mRNA表达量变化。采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析。 结果相比正常氧培养后HIF-1α/GAPDH蛋白比值0.309±0.052,PDLCs在低氧培养12、24、48 h后HIF-1α/GAPDH蛋白水平显著升高为0.801±0.049、0.881±0.037与0.936±0.039,差异具有统计学意义（t=6.901、9.041、9.704,P=0.002、0.0008、0.0006）;同时p53/GAPDH蛋白比值分别为0.463±0.036、0.612±0.040与0.858±0.034,相较常氧的0.233±0.035显著上调,差异具有统计学意义（t=4.595、7.140、12.84,P=0.010、0.002、0.0002）。Si-HIF1α转染PDLCs并在低氧培养后,HIF1α-Si1、Si2转染组比阴性NC-Si组的HIF-1α在蛋白水平分别下降64.57%与59.94%,在mRNA水平分别下降66.67%、63.67%,差异具有统计学意义（t蛋白=9.326、6.985,P蛋白=0.0007、0.002;tRNA=5.319、5.015,PRNA=0.006、0.008）;同时p53在蛋白水平分别下降36.47%与38.41%,在mRNA水平分别下降33.43%、30.67%,差异具有统计学意义（t蛋白=4.645、4.135,P蛋白=0.011、0.029;tRNA=4.373、3.912,PRNA=0.012、0.017）。PDLCs经p53-Si1、Si2转染后p53蛋白表达较NC-Si阴性组分别下降56.41%与51.24%,差异具有统计学意义（t=8.194、6.621,P=0.0012、0.0027）,但HIF-1α蛋白水平无明显变化,差异无统计学意义（t=1.167、1.391,P=0.308、0.237）。将PDLCs转染p53-siRNA后继续在低氧培养48 h,p53-Si1、Si2组中PDLCs的ALP活性较NC-Si组升高2.05倍与2.17倍,差异具有统计学意义（t=4.889、4.346,P=0.008、0.012）;成骨标志物ALP的mRNA水平分别升高2.14倍与2.05倍,差异具有统计学意义（t=5.423、4.078,P=0.006、0.015）;COL1的mRNA水平分别升高2.86倍与3.03倍,差异具有统计学意义（t=7.56、6.89,P=0.002、0.002）;RUNX2的mRNA水平分别升高3.41倍与3.71倍,差异具有统计学意义（t=8.15、12.21,P=0.001、0.0003）。 结论低氧可上调HIF-1α与p53表达,进而抑制PDLCs成骨分化。     

血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α及其靶基因诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 104只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,血必净组于CLP后2、12、24、36、48、60 h经阴茎背静脉注射血必净注射液4 ml/kg,其余各组注射等量生理盐水.各组分别于CLP后6、12、24、72 h分别活杀大鼠取肝脏,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HIF-1α和iNOS的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和iNOS的mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组CLP后6 h HIF-1α和iNOS蛋白表达均迅速升高,其中HIF-1α蛋白表达24 h升高幅度最明显,iNOS蛋白表达12 h达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组HIF-1α、iNOS 蛋白表达受到明显抑制,CLP后12、24、72 h HIF-1α、iNOS蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).模型组CLP后6 h HIF-1α、iNOS mRNA表达开始升高,12 h均达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h仍明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);血必净注射液能显著抑制肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达升高,CLP后6、12、24、72 h肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达均明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能抑制脓毒症大鼠HIF-1α及其靶基因iNOS的表达.     

大鼠脑出血后低氧诱导因子表达及中药干预的作用

目的：利用大鼠脑出血模型探讨脑出血期间脑组织中低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的时程和分布特征及中药干预对脑出血后HIF-1α表达的影响。方法： 39只体重250—300g的健康成年雄性SD大鼠,采用Nath改良法建立脑出血模型,随机分为脑出血组、中药（脑血通）干预组,另设生理盐水和正常组作为对照。分别于造模后第6h、24h、72h、第7天,利用Bederson等的3级标准评定动物的神经系统功能,然后分别处死取脑用免疫组织化学法检测HIF-1α的表达。结果：正常脑组织和生理盐水组无HIF-1α的表达。脑出血后第6小时同侧基底核血肿区周围出现HIF-1α表达增加,至第72小时达高峰,第7天明显下降。与单纯脑出血组比较,中药干预后可以使上述各时间点HIF-1α表达较脑出血组减少,在第24h、72h、7d有显著性意义(P<0.01),神经功能障碍体征改善在第72h、第5天时间点有显著性意义（P<0.05）。结论：脑出血后血肿周围HIF-1α的表达明显上调,并可能参与了脑出血后血肿周围神经细胞的继发性损伤过程;中药具有神经保护作用,能有效地抑制脑出血后HIF-1α表达。     

脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α的表达及其与肝脏损伤的关系

目的 分析脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平的表达、血清乳酸水平、转氨酶水平及肝脏病理损伤的变化;探讨HIF-1α与乳酸、肝脏转氨酶及病理损伤是否存在相关性.方法 将清洁SD大鼠150只分为正常组50只,假手术组50只,盲肠结扎术(CLP)手术组50只.CLP组于手术成功后的第6、12、24、48及72小时分别取10只处死,并于每个时间点取10只正常组大鼠和10只假手术组大鼠作为相应时间点的对照.在各时间点取肝脏组织进行病理学分析,测定血HIF-1 α、乳酸及转氨酶水平.比较各时间点血乳酸、转氨酶及HIF-1α水平的表达是否存在差异,并探讨HIF-1α与肝脏损伤指标及病理变化间的联系.结果 CLP组大鼠肝细胞6h组开始出现损伤,12 h、24h和48 h损伤逐渐加重,损伤在CLP后48 h最重;CLP组6h、12 h和24 h HIF-1α水平的表达与正常组和假手术组相比明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);CLP 12 h和24h乳酸、ALT及AST水平均明显升高,与正常组和假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α水平与乳酸水平、血清ALT水平均存在正相关性(r值分别为0.631、0.436,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠血HIF-1α与乳酸及谷丙转氨酶水平存在相关性,与肝脏病理损伤时间基本相同,HIF-1α可作为预测脓毒症肝脏损伤的主要指标.     

膀胱癌中缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子与P53基因表达相关性的初探

目的探讨膀胱癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)与P53基因表达及其与临床的关系。方法采用免疫组织化学SABC法对196例膀胱癌患者的组织标本分别进行VEGF,HIF-1α及P53免疫组化染色,分析这三种标志物与临床分期和细胞分级的关系及VEGF/HIF-1α在瘤细胞中的共表达情况,并就P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性进行对比分析。结果膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53的阳性表达率分别为70.5%,57.2%和49.3%。同时提示非肌层浸润和分化好的低级别膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53表达水平低于肌层浸润和分化差的高级别患者,两者相比,差异具有统计学意义(P0.05),VEGF/HIF-1α间表达呈正相关(P0.05),其中共表达率为48.6%(92/196),P53与VEGF和HIF-1α阳性表达也呈正相关(P53vs VEGF P0.01,P53vs HIF-1αP0.05)。结论 VEGF/HIF-1α共表达提示在肿瘤组织细胞中存在VEGF/HIF-1α信号转录现象,P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性,表明突变型P53基因可能参与了肿瘤组织的新生血管形成。重视三者的相互影响,有助于提高膀胱癌患者的预后判断及复发风险预测,对分子靶向用药的基因治疗也可能具有一定指导意义。     

实时定量PCR检测低剂量X射线对小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的影响

目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量（0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy）照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间（0、3、6、12和24 h）,应用实时定量PCR（real time quantitative PCR）检测小鼠睾丸中C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）和胱天蛋白酶-12（caspase-12）mRNA表达剂量与时程效应关系。结果 0-0.200 Gy X射线照射后12 h,小鼠睾丸中CHOP mRNA表达随剂量逐渐增高并一直维持较高水平,其中0.050和0.100 Gy组较0 Gy显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达随剂量逐渐增高,0.075和0.100 Gy组较0 Gy组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。0.075 Gy照射后0-24 h CHOP mRNA表达随时间延长逐渐增高,在24 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达在3和6 h稍有降低后,12 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）,24 h时回降。结论低剂量X线照射诱导小鼠睾丸CHOP和caspase-12 mRNA表达具有剂量-时程-效应规律性,二者可能参与低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的调控。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

小干扰RNA抑制缺氧诱导因子1α表达对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的初步探讨在乏氧培养条件下重组腺相关病毒（rAAV）介导的靶向缺氧诱导因子1α（HIF-1α）小干扰核糖核酸（siRNA）对KYSE150人食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法首先构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF-hrGFP。将rAAV-siHIF-hrGFP及rAAV-hrGFP分别转染对数生长的KYSE150细胞,在乏氧培养条件下模拟肿瘤细胞的乏氧环境进行培养,应用荧光定量聚合酶链反应（Real-TimePCR）、蛋白质印迹法（Western Blot）、3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法和Transwell侵袭实验法,观察KYSE150细胞HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达及KYSE150细胞增殖和迁移的影响。本实验共分3组：①对照组（Wt）组;②rAAV-hrGFP组,即空载病毒组（Cv组）;③rAAV-siHIF-hrGFP组,即干扰病毒组（Si组）。结果在乏氧培养条件下,rAAV-siHIF-hrGFP能够抑制KYSE150细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达,HIF-1α蛋白测定（灰度比）：Wt组1.121±0.038、Cv组1.098±0.023、Si组0.426±0.020,与Si组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;同时能够抑制KYSE150细胞增殖和迁移,细胞增殖（A值）：Wt组1.276±0.077、Cv组1.312±0.073、Si组0.621±0.053,与Si组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;但rAAV-hrGFP对KYSE150细胞增殖、迁移及HIF-1α的表达未见有明显影响。结论在乏氧培养条件下,利用rAAV介导的siRNA技术抑制HIF-1α的表达,可有效抑制KYSE150细胞体外增殖和迁移。     

缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIE-1α的影响

目的 观察缺血后处理对缺血再灌注损伤(IRI)大鼠肾脏缺氧诱导冈子-I α(HIF-1α)表达的影响.方法 将72只成年SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组),每组24只.S组结扎右肾动脉,暴露左肾45min后关闭腹腔;IR组结扎右肾动脉并完全阻断左侧肾动脉45min后恢复血流;IPO组在IR模型的基础上,恢复血流前给予反复10次20s供血-20s缺血处理.每组分别在造模后0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h留取血和肾组织标本,检测血肌酐和血尿素氮,并对肾组织行免疫组化染色和单盲评分;Western blot检测HIF-Iα的表达强度.结果 HIF-1α主要在小管上皮细胞中表达,肾小球中末发现阳性染色.各组HIF-1 α表达情况:与S组相比IR组HIF-1 α在1h表达开始显著升高,6h达到高峰,12h开始下降.而IPO组HIF-1α在3h表达开始升高,6h达到高峰,儿高峰水甲显著高于IR组,24h后HIF-1α开始下降,48h其表达水平与IR组差异无显著性.结论 缺血后处理能增加缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1 α表达并延长其表达高峰时间,从而减轻缺血缺氧对肾脏的损伤.     

p27及HIF-1α在二甲双胍调节下咽癌细胞增殖与凋亡中的作用研究

目的探讨二甲双胍在下咽癌细胞增殖与凋亡中的作用,以及p27和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)蛋白在该调节机制中的作用,为临床治疗下咽癌提供进一步的理论基础。方法以0、5、10 mmol/L二甲双胍干预体外培养人下咽癌Fadu细胞24 h,5 mmol/L组再干预至48 h,应用免疫细胞化学法检测p27和HIF-1α蛋白的表达。下咽癌移植瘤裸鼠随机分为对照组(不予二甲双胍干预),低剂量二甲双胍治疗组(met 40组,每日40 mg/kg),高剂量二甲双胍治疗组(met 200组,每日200 mg/kg),各5只,腹腔注射给药28 d后,取移植瘤测量肿瘤体积,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态,免疫组织化学染色法检测p27和HIF-1α蛋白表达水平的变化。结果体外培养的Fadu细胞p27蛋白表达随二甲双胍干预浓度的增加及干预时间的延长而增加(P均0.05),而HIF-1α蛋白表达随二甲双胍干预浓度的增加及干预时间的延长而降低(P均0.05)。下咽癌移植瘤裸鼠药物干预后,met 40组和met 200组移植瘤体积均较对照组缩小(P均0.05);移植瘤标本p27蛋白表达随给药浓度的增加而增加,HIF-1α蛋白表达随给药浓度增加而降低(P均0.05)。结论二甲双胍可有效抑制下咽癌细胞体内、体外的增殖并促进其凋亡,为临床治疗下咽癌提供进一步的理论依据。