三氧化二砷治疗恶性血液病的临床研究

三氧化二砷（ATO）是20世纪90年代中期我国学者最先证明的治疗急性早幼粒细胞白血病的有效药物，其机制与诱导细胞凋亡有关。近年来，随着对ATO研究的深入 ，其临床治疗谱也不断扩大，本文就其在恶性血液病临床治疗方面的研究进展进行综述。     

亚砷酸治疗急性早幼粒细胞白血病的研究进展

急性早幼粒细胞白血病(APL)曾经是各型白血病中病情最为凶险的一型,患者常因严重出血等原因在治疗前或治疗早期死亡,必须早期诊断、紧急治疗.我国学者在世界上最早应用亚砷酸(ATO)治疗APL,取得了非凡的效果,使APL已经成为目前治疗效果最好的一型白血病.早期合理的应用ATO,对于抢救初治危重APL患者以及提高治愈率具有重要意义.近年来,在应用ATO治疗APL过程中也逐步扩大了其应用范围,从复发难治APL到应用于初治APL,尝试将其作为一线治疗用药,并且对ATO治疗机制及临床应用的研究有很大的进展.     

急性早幼粒细胞白血病亚砷酸治疗剂量与复发关系的初步研究

目的:探讨亚砷酸(ATO)的治疗剂量与急性早幼粒细胞白血病(APL)复发的相关性以及ATO的最佳剂量与疗程。方法:回顾分析西安交通大学第一附属医院及榆林市第一人民医院血液内科2008-2015年收治APL患者102例临床资料,比较复发组与持续缓解组的临床特征。通过统计治疗达2年时ATO的使用剂量,以指南推荐剂量作为分组标准,将患者分为ATO高剂量组和低剂量组以比较2组的复发率。采用ROC曲线分析ATO剂量的界值。结果:单因素分析发现,治疗2年时ATO的低剂量组及高剂量组的复发率分别为17.7%和2.5%(P0.05);进一步多因素分析发现,治疗2年时ATO剂量22.4 mg/kg为疾病复发的独立防止因素(OR=0.119,P0.05)。ROC曲线结果显示,治疗达2年时ATO的剂量的界值为8.765 mg/kg,ATO剂量大于8.765 mg/kg组的复发率明显低于小于8.765 mg/kg组。结论:APL的复发与ATO的使用剂量相关,足量使用ATO可降低疾病的复发率。     

三氧化二砷治疗恶性血液病的作用机制及临床应用进展

砷剂的应用历史悠久，《本草纲目》中有记载砷剂用于治疗皮肤病，梅毒等。19世纪砷剂在西方曾被用于治疗慢性粒细胞性白血病。20世纪90年代中期我国学者用三氧化二砷(ATO)通过诱导凋亡机制成功治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)。近年来．通过干预细胞凋亡，ATO在恶性血液病的临床治疗谱不断扩大．包括治疗白血病在内的多种恶性血液病。本文就ATO治疗恶性血液病的作用机制及临床应用进展综述如下。     

三氧化二砷对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的作用及机制研究

目的研究三氧化二砷(arsenictrioxide,ATO)对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖及凋亡的影响并探讨其机制.方法采用CCK-8法检测ATO作用后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;ELISA法检测RPMI8226细胞分泌VEGF的水平;Westernblot检测ATO作用后Bcl-2蛋白、ERK1/2及其磷酸化蛋白水平变化.结果 ATO对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制呈剂量-时间依赖性.选取不同浓度ATO作用于RPMI8226细胞24h及48h,ATO诱导RPMI8226细胞凋亡,呈时间依赖性和浓度依赖性(P<0.05).随着ATO浓度的增加,G1期细胞数逐渐增多,提示ATO将RPMI8226细胞阻滞在G1期.此外,与空白对照组相比,ATO作用于细胞后,VEGF表达及分泌量越少,细胞内Bcl-2蛋白表达下降,ERK1/2及其磷酸化蛋白在RPMI8226细胞内稳定表达,其表达水平无变化.结论 ATO对RPMI8226细胞具有明显的抑制增殖及诱导凋亡作用;ATO将RPMI8226细胞阻滞在G1期;ATO作用后,细胞的VEGF表达及分泌量越少,Bcl-2蛋白表达下降,而对ERK1/2及其磷酸化蛋白表达无影响.     

全反式维甲酸联合三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的疗效观察

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)联合三氧化二砷(ATO)治疗早幼粒细胞白血病(APL)的疗效.方法 对35例APL患者应用ATRA联合ATO治疗,观察PML-RARα融合基因转阴率、达到血液学完全缓解(CR)所需时间和不良反应情况,并与18例单独使用ATO和19例单独使用ATRA患者的上述指标进行比较.结果 联合用药患者PML-RARα融合基因转阴率为94.3%,单独使用ATO患者转阴率为88.9%,单独使用ATRA患者转阴率为94.7%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);联合用药组达到CR时间为(24.2±5.7)d,ATO组为(36.0±7.1d),ATRA组为(40.9±8.5)d,三者比较差异有统计学意义(P<0.05);3组比较,联合用药患者转氨酶升高(P<0.05),ATO组心肌损伤标志物升高(P<0.05),ATRA组血脂高(P<0.05).结论 ATRA联合ATO治疗APL完全缓解率高,所需时间短,对血脂和心脏影响较小,但肝脏毒性较大.     

砷剂联合康力隆治疗MDS-RA

目的观察三氧化二砷（Arsenic trioxide ATO）联合康力隆治疗骨髓增生异常综合征（MDS）的临床疗效。方法25例原发性难治性贫血（MDS-RA）患者，其中男15例，女10例，中位年龄39．5岁。治疗方案为ATO10mg/d（儿童酌量），静脉点滴给药，连用30d，继以每月给药15d，总疗程4个月，同时服用康力隆4～6mg／d。结果基本缓解8例（32％），部分缓解5例（20％），进步或稳定者5例（20％），无效者7例（28％）。结论ATO联合康力隆治疗原发性MDS—RA是有效的，且副作用轻微，总有效率达72％，值得进一步应用总结。     

亚砷酸联合抗坏血酸诱导多发性骨髓瘤细胞株凋亡机制的研究

目的研究砷剂联合抗坏血酸协同诱导多发性骨髓瘤细胞株凋亡的机制。方法将培养的MM细胞株KM3分为:①对照组;②ATO单药组;③ATO AA组;④AA单药组;⑤ATO α生育酚组;⑥α生育酚单药组。分别检测细胞活力、细胞凋亡率、线粒体膜电位和细胞内GSH、H2O2水平。结果①ATO诱导MM细胞凋亡,AA增强其作用,α生育酚减弱其作用;②AA降低细胞内GSH水平,α生育酚升高细胞内GSH;③AA和α生育酚均升高细胞内H2O2水平;④ATO降低细胞线粒体膜电位,AA增强ATO的作用,α生育酚减弱其作用。结论砷剂诱导肿瘤细胞凋亡敏感性与细胞内GSH水平呈负相关,砷剂通过降低细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡。AA通过降低细胞内的GSH水平,增加细胞对砷剂的敏感性。选择其他的还原剂无此作用。     

伊达比星为主的分层治疗方案对急性早幼粒细胞白血病的疗效分析

目的:探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)联合亚砷酸(arsenious acid,ATO)双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的缓解率和伊达比星、全反式维甲酸、亚砷酸/复方黄黛片分层序贯巩固治疗的疗效。方法:收集2010年至2016年接受双诱导方案患者22例,分析双诱导的CR率、早期死亡率、并发症发生率和获得完全缓解的时间长短。完全缓解后低、中危患者接受1-2个疗程IDA单药化疗,ATRA和复方黄黛片/ATO交替治疗4个周期;高危患者接受IA化疗4疗程,ATRA和复方黄黛片/ATO交替治疗共4个周期。结果:双诱导完全缓解率100%,诱导治疗平均时间28.23±1.6 d,诱导期间50%发生感染,36.4%出现分化综合征,27.3%有不同部位出血。完全缓解后分层巩固治疗组5年总生存率100%,无复发生存95.4%;结论:APL患者接受ATRA和ATO双诱导治疗能够达到较高缓解率,诱导缓解时间短,并发症可控。采用IDA、ATRA和ATO分层序贯治疗作为缓解后巩固方案,能够降低复发率,延长患者的生存期,获得极高的治愈率。     

南瓜蛋白联合常用化疗药对NB4细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨南瓜蛋白（CUS）与全反式维甲酸（ATRA）或亚砷酸（ATO）联用对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响。以MTF比色法检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞凋亡的影响,用金氏公式判断两药联用的协同效果。结果表明,CUS与ATRA或ATO联合应用的抑制率均大于各药相应浓度单用的抑制率,其协同指数q值均〉0．85,并且两药均在低浓度范围内联用的协同效果明显。CUS与ATRA或ATO联合应用时NB4细胞的凋亡率均大于各药相应浓度单用时的凋亡率,其协同指数q值均〉1．15。结论：CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞增殖和诱导凋亡均有较好的协同作用。     

维A酸联合亚砷酸并化疗的序贯疗法治疗急性早幼粒细胞白血病疗效分析

目的研究全反式维A酸(ATRA)联合三氧化二砷(ATO)双诱导缓解方案与单用ATRA诱导缓解方案治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)疗效及副作用的差异,并探讨缓解后采用联合ATRA,ATO和化疗的序贯疗法对患者长期生存的影响。方法回顾性分析2000~2003年采用ATRA单诱导方案和缓解后ATRA/化疗的APL患者和2003~2006年采用双诱导和缓解后序贯治疗的APL患者,统计分析各方案的疗效及副作用。结果ATO和ATRA双诱导与ATRA单诱导方案相比,2者完全缓解(CR)率相似,但双诱导方案明显缩短达到CR所需时间,并缩短患者血小板及凝血参数恢复所需时间,而副作用未增加。CR后采用序贯治疗较ATRA/化疗可明显延长患者无病生存期。结论ATO与ATRA双诱导缓解及缓解后序贯治疗方案较ATRA单诱导及缓解后ATRA/化疗方案治疗APL更为有效。     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病患者骨髓间质干细胞整合素-β_1表达的影响研究

目的体外观察不同浓度三氧化二砷(ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间质干细胞(BM-SCs)整合素-β1表达水平及生长的影响,探讨ATO对CML患者BMSCs可能发生的作用及相关机制。方法抽取慢性期CML患者骨髓液,分离单个核细胞行BMSCs体外培养,取第3、4代BMSCs,用不同浓度ATO处理,48h后提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应法检测整合素-β1 mRNA表达水平,72h后观察BMSCs形态。结果 ATO可抑制CML患者BMSCs体外生长,并呈浓度依赖性;对照组BMSCs整合素-β1基因表达水平为0.123±0.041,BM-SCs在1.0μmol/L及2.5μmol/L浓度ATO作用下整合素-β1表达升高,分别为0.658±0.129和0.426±0.090,5.0μmol/L浓度ATO可明显抑制整合素-β1表达(0.041±0.020)。结论不同浓度ATO对BMSCs整合素-β1表达存在不同影响,对整合素-β1表达变化的干预有可能成为该类疾病新的治疗靶向。     

三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用的研究

目的 观察三氧化二砷(ATO)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)凋亡的作用.方法 将HFLS-RA分为单纯培养基空白对照组和0.5、2、8 μmol/L ATO实验组.ATO作用72 h后,电镜下观察细胞的病理改变,采用四唑氮法(MTT)检测ATO对HFLS-RA生长的影响.结果 ATO可以诱导HFLS-RA的凋亡,ATO呈现时间和剂量依赖性抑制HFLS-RA生长的作用.结论 ATO可以抑制HFLS-RA的生长,促进HFLS-RA的凋亡.     

三氧化二砷对K562细胞基质金属蛋白酶-2、9活性的影响

目的探讨三氧化二砷(ATO)对白血病K562细胞株基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)活性的影响。方法用0、0.05、0.40和3.20μmol/L的ATO分别处理K562细胞,培养24、48、72 h后收获细胞,对细胞上清进行明胶酶谱分析。结果①MMP-2、9在K562细胞均有表达,其活性条带在对照组以MMP-2(72 kd)最宽,MMP-9次之,MMP-2(62 kd)最窄。②MMP-2、9经0.05μmol/L ATO处理72 h后差异具有显著性(P<0.05);经0.4、3.2μmol/L的ATO处理后随作用时间延长而抑制现象也逐渐增强,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论ATO可以有效抑制K562细胞MMP-2、MMP-9的活性,但其作用的强度与剂量及作用时间有关。ATO对MMP-2、MMP-9的活性的抑制可能是其抗白血病细胞血管新生的机制之一。     

三氧化二砷对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(ATO)抑制K562细胞增殖的机制,探索慢性髓系白血病(CML)治疗的新靶点。方法:体外培养人CML细胞株K562细胞,采用不同浓度ATO处理K562细胞;MTT法检测经ATO处理24、48和72 h后细胞的增殖状况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期变化、K562细胞表面分子CD44的表达水平;RT-PCR分析K562细胞β-catenin和cyclinD1基因的改变。结果:2μmol/L ATO处理的细胞即出现显著的细胞增殖抑制效应,且抑制率呈时间和剂量依赖性(r=0.997,r=0.813),随着药物浓度的增加及作用时间的延长,CD44的表达率逐渐下降。AnnexinV/PI双染FCM显示,2.5-10μmol/L的ATO作用48 h均可诱导K562细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.985)。不同浓度ATO作用细胞48 h后,G_0/G_1期的细胞比例随药物浓度的增加逐渐增高(r=0.813),S期细胞比例逐渐降低(r=-0.800)。RT-PCR结果显示,随着ATO浓度的增加K562细胞β-catenin及CylinD1的表达水平逐渐下降(r=-0.924)。结论:在一定的浓度范围内ATO能够抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调CD44影响Wnt/β-catenin通路的传导,使细胞周期停滞在G0/G1期,影响基因转录,从而抑制K562细胞的增殖。     

三氧化二砷对MRL／lpr狼疮鼠基因甲基化的影响

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是最常见、最严重的自身免疫性疾病之一，重症狼疮的治疗效果目前仍不理想，因此，国内外学者都在寻求新的有效药物和新的治疗方法。三氧化二砷在临床上应用于白血病治疗已有多年，并有明显疗效。近年来有将三氧化二砷（ATO）用于狼疮鼠的治疗，取得了一定的疗效。     

mTOR信号转导通路与三氧化二砷反应关联的研究

本研究探讨三氧化二砷(ATO)作用与mTOR信号通路的联系。应用Western blot方法检测K562/DNR细胞经ATO处理不同时间后细胞中pmTOR、pAKT及pP70S6K的表达;应用流式细胞术检测K562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理120小时后细胞的凋亡率。结果表明:K562/DNR细胞经ATO处理60分钟及120分钟时pmTOR表达高于对照组(p0.01);经ATO处理30分钟及60分钟时pAKT表达高于对照组(p0.01);经ATO处理60分钟时pP70S6K表达高于对照组(p0.01)。K562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理后细胞凋亡率高于对照组(p0.01)。结论:K562/DNR细胞经一定浓度的ATO处理后细胞中mTOR信号通路被激活;mTOR信号通路抑制剂可增强ATO触发K562/DNR细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷联合沙利度胺及维生素C治疗复发难治性多发性骨髓瘤疗效观察

多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞克隆性恶性肿瘤,传统化疗和自体造血干细胞移植虽可取得一定疗效,但平均总生存期并没有得到明显提高,大多数患者将进展为难治性MM或疾病复发,目前仍被认为是不可治愈的疾病。近来研究表明[1-3]:三氧化二砷(ATO)、沙利度胺(T)药或与化疗联合治疗复发难治性MM均有一定疗效。我们采用ATO联合沙利度胺及维生素C(VitC)治疗难治性或复发性MM患者14例,取得了较好疗效,现报告如下。1临床资料14例患者中男10例,女4例,年龄53~72岁。病程7~28个月。全部病例均经临床、血清M蛋白、骨髓涂片及活检、X线检查等确诊。诊断…     

阿托伐他汀对异丙肾上腺素诱导的心力衰竭小鼠胞浆内钙火花影响的研究

目的研究阿托伐他汀对心力衰竭(心衰)小鼠心功能的影响,探索阿托伐他汀介导的心脏保护作用的潜在机制。方法将60只C57 BL小鼠用随机数字表随机分为三组:心衰模型组(HF组),心衰基础上给予阿托伐他汀治疗组(ATO组),正常对照组(WT组)。小鼠心衰模型通过应用微渗泵每天给予200 mg/(kg·d)的异丙肾上腺素建立,HF组基础上同时给予20 mg/(kg·d)阿托伐他汀治疗制备ATO组。应用超声心动图评估模型建立成功与否及不同组别心功能情况。每组动物的心室肌细胞分离及应用荧光染料Fluo4/AM标记后即可进行共聚焦显微镜扫描,观察指标为钙火花及钙瞬变。结果 ATO组在给药1周后与HF组相比明显改善了小鼠心功能(ejection fraction=51%vs.39%,P0.001),共聚焦扫描发现WT组和ATO组之间自发钙火花的发生频率(Ca SF)无统计学差异[5.20±0.91 vs.6.06±0.53 sparks/(100μm·s)],P=0.336),但此两组均表现出明显低于HF组的Ca SF(HF组12.41±1.46,WT组5.20±0.91;P=0.002,12.41±1.46 for HF vs.6.06±0.53 for ATO;P=0.001)。在钙火花的描述参数方面,半最大全宽度(FWHM)和半最大全时程(FDHM)在ATO组较HF组都有所下降。结论阿托伐他汀能改善心衰小鼠的心功能,其潜在机制可能与部分重塑心衰细胞的钙火花有关。     

蛋白磷酸酶2A在三氧化二砷诱导NB4、MR2细胞株凋亡过程中的变化

本研究探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中蛋白磷酸酶2A（PP2A）活性与表达的变化．不同浓度ATO单用或与冈田酸（OKA）联合作用于NB4、MR2细胞，然后采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响，用瑞氏染色法观察细胞形态学变化，流式细胞术测定细胞凋亡率，丝／苏氨酸磷酸化酶检测试剂盒分析药物对细胞内PP2A活性的影响，Western blot检测细胞内PP2A各亚基表达。结果表明：蛋白磷酸酶抑制剂OKA能明显增强ATO对NB4、MR2细胞的增殖抑制；OKA能促进ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡；ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中PP2A活性均下降，且随ATO浓度的增加PP2A活性下降越明显；与OKA连用后PP2A活性下降更加明显；在ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中，PP2A／A表达较对照组均明显减少，而B和C亚基表达与对照组比较变化不明显。结论：在ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡过程中，细胞内PP2A／A表达减少，PP2A活性降低．且随ATO浓度增加PP2A活性下降越明显，抑制PP2A活性有助于ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡，