辛伐他汀干预对大鼠动脉粥样硬化斑块内高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 观察辛伐他汀对动脉粥样硬化(AS)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达及斑块形态学的影响,以期揭示其抗AS的作用机制.方法 60只Wistar大鼠按随机数字表法均分为对照组、AS模型组、辛伐他汀干预组.给予高脂饮食同时灌胃维生素D3建立AS模型;干预组于第8周开始给予辛伐他汀2.5 mg·kg-1·d-1灌胃;各组分别于10周、12周用免疫组化法检测主动脉粥样硬化斑块内HMGB1蛋白表达,实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HMGB1 mRNA表达,并观察主动脉斑块形态学变化.结果 模型组主动脉斑块内HMGB1蛋白表达呈强阳性,辛伐他汀干预组HMGB1表达较模型组明显减少,12周时更为显著.与对照组比较,模型组10周、12周时HMGB1 mRNA表达均明显升高(10周:19.695±1.418、比2.981±0.753,12周:20.542±1.132比3.219±0.332,均P<0.01);辛伐他汀干预组10周、12周HMGB1mRNA表达(15.798±0.891,12.641±0.734)明显低于模型组相应时间点,且12周时表达低于10周时(P<0.05或P<0.01).模型组主动脉内有明显钙化斑块,呈环状,斑块遍及整条动脉;辛伐他汀干预后可明显抑制斑块形成,12周斑块面积较10周时进一步减小.结论 辛伐他汀能减轻AS大鼠主动脉粥样斑块形成,降低斑块组织中HMGB1的蛋白及mRNA表达,通过减轻炎症反应起到血管保护作用.     

心复康口服液对慢性压力负荷性心力衰竭大鼠心肌腺苷酸转位酶的影响

目的 探讨益气温阳活血化瘀方药心复康口服液对慢性压力负荷性心力衰竭大鼠心肌线粒体腺苷酸转位酶(ANT)的影响.方法 将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、治疗组,每组30只.采用腹主动脉缩窄法制作慢性压力负荷性心力衰竭大鼠模型;假手术组仅穿线、不结扎.治疗组于术后1周灌胃心复康口服液(10ml·kg-1·d-1)4ml;模型组及假手术组灌胃等量生理盐水.于治疗4、8、12周取大鼠心肌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌线粒体ANT1和ANT2的mRNA表达.结果 与假手术组比较,模型组4、8、12周心肌线粒体ANT1 mRNA表达逐渐升高,ANT2mRNA表达逐渐降低,分别于12周达峰值和谷值,差异有统计学意义(ANT1mRNA:28.44±0.04比27.32±0.49;ANT2mRNA:21.40±0.12比23.97±0.05,均P<0.05);与模型组比较,治疗组ANT1和ANT2的mRNA表达均逐渐升高,并于12周达峰值(ANT1mRNA:29.39±0.15;ANT2mRNA:23.83±0.20),差异有统计学意义(均P<0.05).结论 心复康口服液能通过改善慢性压力负荷性心力衰竭心肌ANT1、ANT2的表达,从而抑制细胞凋亡、改善能量代谢.     

干扰表皮生长因子受体表达对脑出血后星形胶质细胞活化的影响及其机制

目的观察干扰表皮生长因子受体(EGFR)表达对脑出血后星形胶质细胞活化的影响。方法注射Ⅶ型胶原酶制备脑出血模型大鼠,同时设置假手术组作为对照。术后7 d,行神经功能评分判断造模成功与否。取脑出血模型大鼠和假手术大鼠,行SP免疫组化法检测脑组织EGFR和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。分离新生大鼠皮层星形胶质细胞,体外培养。观察干扰EGFR表达对细胞的影响,实验分4组:(1)对照组:不处理;(2)重组大鼠睫状神经营养因子(CNTF)组:加入20μg/L CNTF;(3)阴性组:加入20μg/L CNTF,并转染EGFR siRNA阴性对照;(4)EGFR组:加入20μg/L CNTF,并转染EGFR siRNA。采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测各组细胞EGFR、GFAP、磷酸化酪胺酸激酶JAK1(p-JAK1)、磷酸化信号传导与转录激活因子3(p-STAT3)的表达。结果脑出血模型大鼠造模成功率89.5%(17/19)。脑出血模型大鼠脑组织EGFR和GFAP表达显著高于假手术组(P0.05)。EGFR组EGFR mRNA和蛋白相对表达量显著低于对照组、CNTF组和阴性组(P0.05)。CNTF组和阴性组GFAP mRNA和蛋白相对表达量显著高于对照组和EGFR组(P0.05),而对照组和EGFR组比较无显著差异(P0.05)。CNTF组和阴性组p-JAK1和p-STAT3蛋白相对表达量显著高于对照组和EGFR组(P0.05),而对照组和EGFR组比较无显著差异(P0.05)。结论脑出血大鼠EGFR和GFAP表达升高,星形胶质细胞活化。干扰EGFR表达可抑制大鼠星形胶质细胞活化,其机制可能与阻滞JAK1和STAT3磷酸化有关。     

电针对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元睫状神经营养因子水平的影响

目的探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元睫状神经营养因子 (ciliary neurotrophic factor,CNTF)的影响.方法取 Wistar 大鼠 56只 ,行左侧坐骨神经切断外膜缝合.电针组每天穴位电针 20 min,模型组不作任何处理.分别于术后 7,14,21和 28 d测定脊髓前角 CNTF阳性神经元计数、神经元平均积分光密度及 4周时损伤神经电生理.结果坐骨神经损伤后损伤脊髓前角 CNTF阳性神经元数量明显少于正常对照组,电针组损伤侧脊髓前角内 CNTF阳性神经元数量在各时间点明显高于模型组(P< 0.05),14 d时电针组伤侧脊髓前角内 CNTF阳性神经元数量为 (53± 11)个,模型组为 (29± 9)个.同时模型组神经元内 CNTF阳性神经元平均积分光密度在各时间点与正常组比较明显降低,在 14 d最低为 273.2± 33.7.而电针组 CNTF在各个时间点明显高于模型组(P< 0.05); 28 d康复组神经肌肉动作电位、运动神经传导速度均优于模型组 (P< 0.01).结论电针可提高损伤神经神经元内源性 CNTF水平,减少神经元变性、死亡,促进神经电生理的恢复.     

筋脉通对糖尿病大鼠背根神经节氧化应激的影响

  目的  探讨中药复方筋脉通对糖尿病大鼠背根神经节尼氏染色及NADPH氧化酶、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的影响。  方法  70只雄性Sprague Dawley大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型后, 随机分为模型组、筋脉通大、中、小剂量组和维生素C对照组, 每组14只, 同时设正常对照组(n=10);筋脉通大、中、小剂量组分别按成人剂量20倍、10倍、5倍、维生素C组按成人剂量10倍灌胃给药, 模型组和正常对照组予等量蒸馏水灌胃; 16周后对各组背根神经节切片行尼氏染色, 免疫组化法检测NADPH氧化酶p22 phox亚基和iNOS的表达。  结果  模型组神经元胞体中尼氏体缺失, 筋脉通大、中剂量组尼氏体改变明显轻于模型组; 筋脉通各剂量组NADPH氧化酶p22 phox亚基、iNOS表达均明显低于模型组(P < 0.05)。  结论  糖尿病大鼠周围感觉神经节存在氧化应激反应, 筋脉通可减轻氧化应激损伤, 保护神经元。     

黄芪对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨黄芪对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Fas-L蛋白表达的影响.方法:采用Longa报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型.将36只SD大鼠随机分为假手术组(生理盐水10 ml·kg-1·d-1灌胃)、模型组(生理盐水10 ml·kg-1·d-1灌胃)和黄芪干预组(黄芪煎剂6 g·kg-1·d-1灌胃),每组12只.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡,免疫组化与医学图像分析结合的方法检测Bcl-2、Fas-L蛋白的表达.结果:与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Bcl-2、FasL阳性细胞表达增多(P均<0.01).与模型组相比,黄芪干预组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达减少,Bcl-2阳性细胞表达增多(P<0.01).结论:黄芪可增强Bcl-2蛋白表达,下调Fas-L蛋白表达,从而抑制脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡,这可能是黄芪对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用机制之一.     

温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的观察温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响。方法将链脲佐菌素诱导的30只糖尿病肾病模型大鼠分为五组,每组各6只,即模型对照组(等渗NaCl溶液10 mL·kg~(-1)·d~(-1))、阳性对照组(缬沙坦25 mg·kg~(-1)·d~(-1))及低剂量组(温肾健脾方7.5 g·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量组(温肾健脾方15 g·kg~(-1)·d~(-1))和高剂量组(温肾健脾方30 g·kg~(-1)·d~(-1)),并以6只正常大鼠作正常对照组(等渗NaCl溶液10 mL·kg~(-1)·d~(-1))。各组大鼠连续灌胃8周后,分别采用免疫组织化学法和荧光定量PCR检测各组大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin蛋白及mRNA的表达。结果免疫组织化学结果显示,六组大鼠肾脏组织足细胞nephrin和podocin蛋白表达比较,差异均有统计学意义(F=6.656、8.667,P=0.016、0.007)。进一步两两比较发现,模型对照组足细胞nephrin和podocin蛋白表达量均较正常对照组降低(P均0.05);与模型对照组比较,中、高剂量组nephrin和podocin蛋白表达量均升高(P均0.05),而低剂量组仅podocin蛋白表达量较模型对照组有所升高(P0.05);与阳性对照组相比,低、中、高剂量组仅podocin蛋白表达量均较阳性对照组升高(P均0.05)。荧光定量PCR结果显示,六组大鼠肾脏组织足细胞nephrin和podocin mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(F=5.412、3.308,P=0.034、0.015);进一步两两比较发现,模型对照组足细胞nephrin和podocin mRNA相对表达量较正常对照组均显著降低(P均0.05);与模型对照组比较,中、高剂量组及阳性对照组nephrin和podocin mRNA的相对表达量均显著升高(P均0.05),而低剂量组仅podocin mRNA相对表达量有所升高(P0.05);与阳性对照组相比,仅低剂量组nephrin mRNA相对表达量有所降低(P0.05)。结论温肾健脾方对肾小球足细胞nephrin和podocin有不同程度的保护作用,从而维持肾小球的正常滤过功能,减轻尿蛋白排泄率,以达到防治糖尿病肾病的目的。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏病理改变的影响

目的 观察罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏组织病理改变的影响并探讨其作用机制.方法 24只SD大鼠随机分成3组,糖尿病组:腹腔注射含链酶佐菌素(STZ)60 mg/kg;罗格列酮治疗组:先腹腔注射STZ 60 mg/kg,第4天起给予0.9%氯化钠溶液溶解的罗格列酮1 mg/(kg·d)灌胃.8周后,观察3组肾脏组织在光镜、电镜下的病理表现,用免疫组化法和逆转录-聚合酶链式反应法观察环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达和COX-2mRNA的表达.结果 正常对照组大鼠肾脏无明显病理变化.糖尿病组大鼠肾脏在光镜下显示肾小球细胞外基质增多,基底膜增厚,肾小管有炎症细胞浸润;在电镜下显示肾小球细胞基底膜不均匀,相邻足突大部分融合或缺失.罗格列酮治疗组病理改变较糖尿病组减轻.糖尿病组大鼠COX-2蛋白表达较正常对照组明显上调,罗格列酮组较糖尿病组明显下调.糖尿病组大鼠COX-2mRNA(0.474±0.012)在肾脏的表达较正常对照组(0.342±0.016)显著上调(P＜0.01),罗格列酮组(0.369±0.025)较糖尿病组显著下调(P＜0.01).结论 STZ诱导的糖尿病大鼠的肾脏具有COX-2介导的病理改变,罗格列酮可以抑制COX-2的表达,改善糖尿病大鼠肾脏的病理改变.     

神经妥乐平联合神经阻滞治疗腰椎间盘突出致根性坐骨神经痛

目的 :神经妥乐平 (neurotropin ,NTP)是家兔皮肤接种牛痘病毒后局部炎症皮肤中提取的生物活性物质 ,本研究旨在观察该药及与神经阻滞疗法联合应用治疗腰椎间盘突出致根性坐骨神经痛的临床效果。方法 :CT或MRI证实的腰椎间盘突出、并有单侧坐骨神经痛的患者 10 2例 ,分 (1)神经阻滞组 (NB ,n =4 5 ) :骶管注射 +L2～ 5椎旁注射 ,每周 1次 ,连续 5周 ;(2 )神经阻滞 +神经妥乐平组 (NB +NTP组 ,n =35 ) :骶管注射 +L2～ 5椎旁注射同NB组 ,每周 1次 ,2周后骶管内追加NTP 6ml,其余同以往治疗 ,在行神经阻滞治疗间隙每天肌肉注射 3ml神经妥乐平。 5周治疗结束后进行疗效评价 ,并观察其中 16例患者治疗前后肌电图的变化 ;(3)神经妥乐平组 (NTP ,n =2 2 ) :前 2周仅给予口服非甾体类消炎止痛药物 (如莫比可、英太青 ) ,2周后开始予神经妥乐平 6ml/d肌肉注射共 2周 ,最后 1周改为 3ml/d肌注 ,比较治疗前后的疼痛缓解情况。结果 :(1)单独使用神经妥乐平可以明显缓解腰椎间盘突出引起的坐骨神经痛 (P <0 .0 5 ) ;(2 )神经妥乐平不仅能明显提高神经阻滞疗法缓解根性坐骨神经痛的作用 ,两者联合应用 ,还可明显缓解神经根受压所致的下肢麻木 (P <0 .0 1) ;(3)除极少数病例出现皮肤过敏反应 ,NTP用于治疗坐骨神经痛无     

枸杞多糖对糖尿病肾病兔足细胞形态结构和nephrin蛋白的影响研究

目的观察枸杞多糖(LBP)对糖尿病肾病(DN)兔足细胞形态结构和nephrin蛋白的表达的影响。方法雄性日本大耳白兔,随机分为正常组(4只)和DN模型组(16只),后者糖尿病(DM)造模成功后随机分为阴性组(4只)、预防组(4只)、治疗组(4只)、阳性组(4只),持续饲喂高脂饲料(1%胆固醇+4%猪油)2周,构建DN模型。正常组灌胃0.9%生理盐水1 ml/(kg·d)连续12周,阴性组DM模型成功后灌胃0.9%生理盐水1 ml/(kg·d)连续12周,预防组DM模型成功后灌胃LBP 10 mg/(kg·d)持续12周,阳性对照组DM模型成功后第8周开始灌胃美卡素3.7 mg/(kg·d)持续4周,治疗组DM模型成功后第8周开始灌胃LBP 10 mg/(kg·d)持续4周。在12周末处死动物取肾脏,做组织切片,电镜下观察。取肾脏测肾组织中的nephrin蛋白及mRNA表达。结果正常兔足细胞足突细密,栅栏状,紧贴在毛细血管基底膜外面。基底膜连续平滑,无增厚。足细胞无深染,细胞核无固缩无裂解。糖尿病DN兔足细胞肥大,染色深。细胞核可见裂解,核仁异染。足突大面积融合,基底膜(GBM)广泛裸露,足突增粗、倒伏、弯曲增多,基底膜中重度增厚,不规则增厚。LBP干预组DN兔足细胞肿胀程度减轻,细胞核浓集现象减轻,足突融合情况改善。与正常组相比,各组nephrin蛋白mRNA的表达明显下降,差异存在极显著性(P0.01),与阴性组、治疗组、阳性组相比,预防组nephrin蛋白mRNA的表达较多,差异有极显著性(P0.01)。结论 LBP可以明显改善DN兔足细胞的凋亡情况,减少足突的融合,基底膜的增厚,并且可以拮抗糖尿病所导致的nephrin蛋白表达的下降。     

滋补肝肾中药对大脑中动脉闭塞大鼠脑勿动蛋白A表达的影响

目的:观察滋补肝肾中药对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑内勿动蛋白A的影响,探讨中药促进神经发生的作用途径。方法:实验于2004-09/2005-01在山东省医学分子生物学重点实验室完成。30只大鼠随机分为药物组、模型组、假手术组,每组10只。用Tamura法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,于造模成功后6天药物组给予中药复方复健片水溶液10g/kg灌胃,复健片主要成份为何首乌、草决明、桑寄生、海马、淫羊藿等,由山东鲁信药业有限公司生产。其余两组分别灌胃给予同等量生理盐水2周,1次/天。原位杂交法观察大脑中动脉闭塞大鼠脑内勿动蛋白-A的表达,并对切片进行图像分析,测定染色平均灰度。结果:30只Wistar大鼠纳入结果分析。模型组给药1周后大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为122.60±10.96,药物组为104.07±14.00,两组比较差异有显著性(P<0.01);2周后模型组大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为132.48±7.77,药物组为98.09±10.33,两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。同组1周与2周比较差异均无显著性(P均>0.05)。假手术组大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为130.96±1.23,与药物组比较差异显著(P<0.01),与模型组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:中药复方复健片可显著抑制大脑中动脉闭塞大鼠脑内勿动蛋白A的表达,从而促进缺血性卒中神经发生。     

褪黑素对糖尿病周围神经病变大鼠氧化应激及周围神经功能和形态的作用

背景:课题组前期针对糖尿病肾病的实验显示,褪黑素可以显著提高糖尿病大鼠血浆和肾脏内抗氧化酶的活性,改善肾脏的形态学变化。目的:在前期实验的基础上,进一步观察褪黑素对糖尿病周围神经病变大鼠氧化应激和周围神经功能和形态的作用。设计、时间及地点:随机对照动物试验,于2005-04/11在解放军第二军医大学动物实验中心完成。材料:2月龄健康雄性SD大鼠,单次腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg诱导建立糖尿病大鼠模型。方法:将糖尿病模型大鼠维持饲养8周建立糖尿病周围神经病变大鼠模型,然后按体质量随机分为3组:模型组,褪黑素0.5,10mg/(kg·d)组,以未造模、鼠龄及体质量相匹配的8只大鼠为正常对照组。褪黑素0.5,10mg/(kg·d)组大鼠每日16:00灌胃给予相应剂量的褪黑素,其他2组大鼠予等量体积分数为0.02的乙醇溶液灌胃,持续8周。主要观察指标:检测各组大鼠坐骨神经内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性和脂质过氧化产物丙二醛含量的变化,大鼠摆尾阈值、坐骨神经神经传导速度和超微结构的变化。结果:各组糖尿病大鼠坐骨神经传导速度显著低于正常对照组(P<0.01),褪黑素0.5,10mg/(kg·d)治疗后神经传导速度高于模型组(P<0.05,0.01)。褪黑素0.5,10mg/(kg·d)组丙二醛含量低于模型组(P<0.01),血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性高于模型组(P<0.01)。模型组大鼠坐骨神经多数有髓纤维髓鞘板结构破坏严重,出现裂隙、空泡等现象,轴突严重被挤压,轴突变性、萎缩。褪黑素治疗后坐骨神经纤维的髓鞘仍不正常,但较模型组明显减轻,褪黑素10mg/(kg·d)组改变要好于褪黑素0.5mg/(kg·d)组。结论:褪黑素能有效抑制糖尿病周围神经病变大鼠的氧化应激反应,改善神经功能和结构变化。糖尿病时自由基损伤和抗氧化能力的降低可能在糖尿病周围神经病变的发生发展中发挥重要作用。     

丁苯酞对脑梗死大鼠迁徙蛋白2表达的影响

目的探讨丁苯酞对脑梗死大鼠迁徙蛋白2(secreted leucine-rich repeat-containing protein 2,Slit2)表达的影响及其在脑梗死中的可能作用。方法 SD大鼠90只随机分为模型组、药物组和对照组各30只。模型组、药物组采用线栓法制备大鼠局灶性脑梗死模型,对照组颈总动脉不插入线栓;模型制备成功后,药物组给予丁苯酞120 mg/kg+花生油稀释至2 mL灌胃1次,模型组、对照组给予等量花生油灌胃。灌胃后1、3、7d,评定3组神经行为学评分,并分别处死10只大鼠,采用ELISA法检测3组脑组织Slit2表达水平。结果灌胃后1、3、7d,模型组神经行为学评分[(2.43±0.21)、(1.32±0.15)、(0.61±0.15)分]高于药物组[(1.50±0.24)、(0.41±0.12)、(0.03±0.01)分]和对照组[0、0、0分](P0.05);灌胃后1、3、7d,药物组、模型组神经行为学评分逐渐降低;灌胃后1、3 d,药物组神经行为学评分高于对照组(P0.05),灌胃后7 d与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);灌胃后1、3、7 d,药物组Slit2水平[(0.35±0.02)、(0.51±0.04)、(0.83±0.05)μg/L],模型组Slit2水平[(0.22±0.01)、(0.34±0.02)、(0.50±0.01)μg/L]高于对照组[(0.15±0.02)、(0.15±0.02)、(0.15±0.02)μg/L],且药物组Slit2水平高于模型组(P0.05)。结论丁苯酞可能通过促进Slit2表达来减轻脑梗死大鼠脑损伤程度,促进脑功能恢复。     

大鼠脊髓损伤后P物质与神经源性肠道功能障碍的关系

目的探讨脊髓损伤后结肠中P 物质与神经源性肠道功能障碍的关系。方法60 只体质量(220±40) g 的雄性Sprague-Dawley 大鼠随机分为假手术组(n=20)、正常对照组(n=20)和模型组(n=20)。氯胺酮60 mg/kg 腹腔注射麻醉大鼠,利用NYU脊髓打击器,以75 g &#8901;cm致伤力制作T10脊髓损伤模型,分别于造模后24 h、1 周、3 周和5 周时切除大鼠结肠组织制作标本,检测肠道传输功能,采用ELISA 方法测定血清中和组织中的P 物质含量,实时荧光定量PCR和Western blotting 法检测P 物质mRNA和蛋白表达。结果模型组大鼠脊髓损伤后出现肠道传输功能下降,且于造模后3 周时肠道传输达到最低值;造模后3 周时模型组血清和组织中P 物质含量与假手术组相比均降低,结肠组织中P 物质的mRNA及蛋白表达水平也下调,与假手术组、正常对照组相比具有显著性差异,假手术组P 物质的表达是模型组的(3.12±0.51)倍(P<0.05)。结论大鼠脊髓损伤后神经源性肠道功能障碍与结肠中P物质的表达降低有关。     

鞘内转染AAV6-hNGFβ对糖尿病神经病变大鼠的修复作用

目的观察鞘内转染腺相关病毒6-人神经生长因子β(AAV6-hNGFβ)对糖尿病神经病变(DPN)大鼠背神经节损伤修复的影响。方法将72只SD大鼠随机均分为4组,正常组、模型组、hNGFβ组(模型组+AAV6-hNGFβ-EGFP)和阴性对照组(模型组+AAV6-EGFP)。正常组注射等量生理盐水,hNGFβ组、阴性对照组和模型组均建立糖尿病周围神经病变模型,并于造模后分别在鞘内注射AAV6-hNGFβ-EGFP、AAV6-EGFP和等量生理盐水。8周后观察大鼠背根神经节组织形态,并测定不同病程(1周、4周、8周)大鼠坐骨神经传导速度,同时检测背根神经节神经生长因子(NGF)、细胞因子(ICAM-1、TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠背根神经节尼氏小体明显减少且染色变浅,伴有空泡样变化,神经组织出现损伤,同时坐骨神经传导速度降低,背根神经节NGF表达减少,炎性因子表达增多,差异有统计学意义(P 0. 05);模型组和阴性组大鼠以上指标比较均无显著差异;与模型组和阴性对照组比较,hNGFβ组大鼠背根神经节尼氏小体明显增多,坐骨神经传导速度明显提高,背根神经节NGF表达增加,炎性因子表达降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论鞘内转染AAV6-hNGFβ可上调NGF同时抑制细胞因子,从而修复DPN大鼠的神经节损伤。     

靶肌肉注射甲钴胺对大鼠周围神经损伤再生的作用

背景:甲钴胺是维生素B12的一种衍生物,可促进核酸蛋白质代谢、神经轴浆的转运及轴突的再生。目的:通过靶肌肉注射不同剂量的甲钴胺,观察其对大鼠坐骨神经损伤的再生作用。设计:随机对照的动物试验。单位:南京医科大学附属常州第二人民医院。材料:试验于2003-03完成。选取健康Wistar大鼠30只,随机分为高剂量组、低剂量组、空白对照组3组,每组10只。方法:所有大鼠均行左侧坐骨神经横断后即刻行外膜缝合,制备大鼠坐骨神经损伤模型。高剂量组和低剂量组均注射甲钴胺,分别为300μg/(kg·d),100μg/(kg·d),空白对照组注射同体积的生理盐水1mL,术后靶肌肉注射1次/d。术后第4周、第8周每组分别提取5只大鼠,以左小腿三头肌湿重、光镜和电镜坐骨神经形态学观察并图象分析作为检测指标,分析不同剂量甲钴胺对大鼠坐骨神经损伤的影响。主要观察指标:①术后4周,8周的左腿三头肌湿重。②术后8周坐骨神经髓鞘的横截面积和壁厚度。结果:30只大鼠均进入结果分析。①术后4周左小腿三头肌湿重比较:高剂量组高于低剂量组、空白对照组[(1.367±0.012)g,(1.164±0.011)g,(0.950±0.009)g,P<0.05];②术后8周左小腿三头肌湿重比较[(2.205±0.015)g,(1.611±0.013)g,(1.230±0.014)g,P<0.05]。③术后8周坐骨神经髓鞘的横截面积比较:高剂量组明显高于低剂量组和空白对照组[(13.30±1.167,9.453±1.233,5.689±0.454)mm2,P<0.05]。④术后8周坐骨神经髓鞘的壁厚度比较:[(1.145±0.108,0.806±0.065,0.560±0.045)mm,P<0.05]。结论:靶肌肉注射甲钴胺可促进周围神经的再生,高剂量的甲钴胺可以更好地发挥其对损伤神经的营养作用。     

乙醇灌胃对大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白、S-100B蛋白表达的影响

目的:观察乙醇灌胃致大鼠海马区神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白表达的改变。方法:实验于2004-09/2005-09在延边大学医学院附属医院神经内科学教研室完成。选用3月龄Wistar雄性大鼠60只,完全随机分为正常组、灌胃1,2,4,6,8周组6组,每组10只,各灌胃组按8g/(kg·d)乙醇灌胃,依周数喂养结束后取大鼠脑组织,常规制片,行胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白的免疫组化染色,光镜下进行形态学观察;采用HPIAS-1000计算机彩色病理图文分析系统对胶质纤维酸性蛋白和S-100B阳性细胞计数行定量分析,进行各灌胃组与正常组的比较。结果:60只Wistar大鼠中灌胃8周组于喂养第7周死亡1只(死亡原因为乙醇误灌入肺内,造成急性肺水肿而死亡),其余各组动物全部进入结果分析。①形态学改变:正常神经胶质细胞胞体轮廓清晰,星状突起纤细,胶质纤维酸性蛋白分布于胞浆及星状突起中。S-100B阳性染色也见于胶质细胞中,均匀分布于胞浆中。随灌胃周数增加,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞胞体变大、形态各异,突起增多明显且粗大不规则,S-100B阳性细胞体积有所增大,胞浆丰富显色较深。②灌胃1,2,4,6,8组大鼠胶质纤维酸性蛋白和S-100B免疫反应产物阳性细胞计数值均较正常组显著增高,差异有显著性意义犤胶质纤维酸性蛋白阳性细胞计数:(76.49±6.43),(84.20±3.17),(92.60±4.81),(138.20±5.52),(142.12±6.41),(29.32±2.42)个,F=883.62,P<0.05犦;犤S-100B阳性细胞计数:(196.96±11.47),(182.22±17.28),(215.88±15.50),(239.70±14.95),(254.92±23.42),(115.53±11.62)个,F=99.88,P<0.05犦。结论:乙醇使大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S-100B的表达增加,增加的程度与乙醇灌胃时间有关。随着灌胃时间的延长,大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S-100B的表达增多。     

糖尿病肾病大鼠血管内皮细胞生长因子及其受体表达与厄贝沙坦的干预效应

目的:观察糖尿病大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子及其受体表达与血管紧张素1型受体拮抗剂—厄贝沙坦的影响。方法:实验于2003-12/2005-02在青岛大学医学院病理学教研室及中心实验室进行。①将正常Wistar大鼠36只随机分为正常对照组、模型组和厄贝沙坦组,每组12只。模型组和厄贝沙坦组分别用链脲佐菌素65mg/kg诱导建立糖尿病肾病模型,并给予长效胰岛素2u隔日皮下注射。②模型建立后第2天起,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦50mg/(kg·d)灌胃,其他两组给予等量生理盐水灌胃。③于造模4周和8周各组分别处死大鼠6只。测定血生化及24h尿蛋白定量,采用特异性抗体和免疫组织化学方法,观察大鼠肾小球血管内皮细胞生长因子及其受体的分布及其强度变化,并结合肾脏病理进行分析;电镜下观察肾脏超微结构的变化;应用RT-PCR技术测定血管内皮细胞生长因子及其受体mRNA的表达。结果:36只大鼠进入结果分析。①模型组血管内皮细胞生长因子及其受体在肾小球表达强度显著高于正常对照组(P<0.01),厄贝沙坦治疗8周后肾组织中表达低于模型组。②模型组血管内皮细胞生长因子及其受体mRNA均较正常对照组表达上调,8周时较4周时增高(P<0.05),厄贝沙坦组低于模型组(4周:0.643±0.136,1.389±0.491;1.563±0.307,1.480±0.404;8周:1.519±0.433,2.563±0.880;1.668±0.355,1.754±0.468;P均<0.05)。③肾小球基底膜增厚率厄贝沙坦组低于模型组(38%,81%,P<0.01)。④造模后4,8周模型组和厄贝沙坦尿蛋白排泄率和血肌酐、三酰甘油浓度均高于正常对照组(P<0.01),但厄贝沙坦组低于模型组(P<0.01)。结论:糖尿病肾病大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子及其受体表达增强,厄贝沙坦能降低其表达,而厄贝沙坦对肾脏的保护作用可能与其降低肾小球血管内皮细胞生长因子及其受体的表达有关。     

复方血栓通对1型糖尿病大鼠氧化应激的影响及机制探讨

目的观察复方血栓通胶囊(XST)减轻糖尿病大鼠肾脏损伤的作用,探讨其保护机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg制作糖尿病大鼠模型,成模大鼠随机分为糖尿病组(DM组,10只)、糖尿病α-硫辛酸干预组(ALA组,10只)、糖尿病血栓通干预组(XST组,10只),另设正常对照组(10只)。ALA组大鼠予以α-硫辛酸0.1 g/kg灌胃,血栓通组大鼠予以XST 1 g/kg灌胃,DM组和正常对照组均每日同时间给予同体积蒸馏水灌胃。12周后比较各组肾脏/体重,24 h尿蛋白,尿蛋白/肌酐比,尿素氮(BUN)。测定各组大鼠肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的mRNA含量。结果和正常对照组相比,DM组、XST组、ALA组24 h尿蛋白、左肾重/体质量比、尿白蛋白/肌酐比、BUN均升高,GSHPx降低,MDA升高,i NOS表达上调(P0.05);与DM组相比,XST组和ALA组肾皮质GSH-Px活性增加,MDA含量降低,i NOS明显下降(P均0.05)。各组SOD比较差异无统计学意义(P0.05)。XST组和ALA组各指标变化相似,差异均无统计学意义(P0.05)。结论复方血栓通胶囊可通过抗氧化应激,降低i NOS的表达改善糖尿病大鼠肾脏损伤。     

雌激素调控Notch1信号通路对卵巢去势大鼠血管钙化的影响

目的探讨雌激素对去势大鼠血管组织Notch1信号通路的调控作用及对血管钙化严重程度的影响。方法 45只接受卵巢去势手术的SD大鼠,随机分为对照组、血管钙化模型组、雌激素干预组,每组15只,血管钙化模型组和雌激素干预组采用肌内注射维生素D_3和尼古丁灌胃诱导建立血管钙化模型,雌激素干预组皮下注射17-β雌二醇40μg/kg进行干预,1次/d,连续8周;对照组不进行药物干预处理。8周后,对3组大鼠主动脉进行Von Kossa染色,采用实时定量PCR法检测3组大鼠主动脉Notch1和Jagged1mRNA相对表达量,采用比色法测定主动脉碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性及钙水平。结果血管钙化模型组主动脉Notch1、Jagged1mRNA相对表达量(0.896±0.010、0.822±0.011)、ALP活性[(189.60±22.74)u/(mg·pro)]及钙水平[(71.28±7.66)μmol/g]均高于雌激素干预组[0.671±0.009、0.646±0.010、(130.48±20.33)u/(mg·pro)、(53.39±6.78)μmol/g]和对照组[0.423±0.008、0.479±0.009、(58.40±16.18)u/(mg·pro)、(20.56±4.87)μmol/g](P0.05),雌激素干预组高于对照组(P0.05)。结论补充雌激素能抑制维生素D_3和尼古丁诱导的卵巢去势大鼠血管钙化,雌激素干预Notch1信号通路表达可能是影响血管钙化形成和进展的重要机制之一。