泌尿生殖道解脲脲原体检测方法比较及抗菌药物耐药性分析

目的比较液体培养法和荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)两种不同的解脲脲原体检测方法,了解本地区泌尿生殖道感染患者解脲脲原体的检出率和耐药情况。方法研究对象为2009年8月至2010年7月在宣武医院皮肤性病科就诊的、拟诊为非淋球菌性尿道炎的患者,所有患者泌尿生殖道感染症状和体征较轻。采集受试者尿道或宫颈拭子进行解脲脲原体的液体培养及药物敏感试验,其中部分标本同时应用荧光PCR法检测解脲脲原体。结果液体培养法336例标本解脲脲原体检出率为40.18%。从336例标本中随机抽取110例应用荧光PCR法检测解脲脲原体,检出率为37.27%,药敏试验显示解脲脲原体在体外对美满霉素、强力霉素及交沙霉素敏感。结论液体培养法与荧光PCR法检测解脲脲原体检出率没有明显差异。本地区解脲脲原体耐药情况严重,治疗解脲脲原体感染可以首选美满霉素、强力霉素及交沙霉素。     

三种检测技术在不孕不育症患者解脲脲原体检测中的应用比较

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Testing,SAT)、液体培养法、荧光定量PCR法检测不孕不育症患者解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu),对检测结果进行评估,以评价临床效果。方法对180例不孕不育症患者取泌尿生殖道拭子和尿液样本各一份,拭子样本采用SAT检测法、液体培养法及荧光定量PCR法进行检测,尿液标本再进行SAT方法检测,并对结果进行分析。结果三种方法检测解脲脲原体,阳性率分别为45.00%、48.33%、46.67%,差异无显著意义(P0.05)。结论 SAT检测不孕不育患者解脲脲原体与液体培养法和荧光定量PCR法相比具有较好相关性,为解脲脲原体的临床实验室诊断提供了新的检测手段。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的应用

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)对不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子及尿液进行解脲脲原体(UU)检测,并评价其敏感性和特异度。方法对452例不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子标本,采用SAT检测法、培养法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)进行UU检测,同时再对同一患者的尿液标本进行SAT检测,根据实验结果评估SAT在拭子及尿液标本UU检测中的灵敏度和特异度;同时UU培养阳性的标本经过临床UU规范治疗后,仍采用上述方法对患者进行UU复查,根据实验结果评估SAT在UU检测中的判断预后效果。结果初检时与UU培养结果作比较,UU-SAT拭子标本的检测灵敏度为97.1%(170/175),特异度为97.8%(271/277),差异无统计学意义(χ2=0.010 2,P=0.919 7);UU-SAT尿液标本的检测灵敏度为96.0%(168/175),特异度为98.9%(274/277),差异无统计学意义(χ2=0.163 5,P=0.686 0)。结论 SAT检测泌尿生殖道患者拭子及尿液UU检测具有很高的灵敏度和特异性,同时又有很好的判愈效果,为UU的临床实验室诊断提供了新的检测手段。     

实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法在不孕不育人群解脲脲原体检测中的应用比较

目的比较实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法在解脲脲原体(UU)检测中的诊断价值,以选择更为准确、快速、实用的临床检测方法。方法采集本院就诊的不孕不育对象200例的分泌物2份拭子样本,分别用于液体培养法和SAT法检测。结果液体培养法阳性率为60%,SAT法阳性率为47%,培养法阳性率高于SAT法,女性UU阳性率显著高于男性,26例结果不一致中有11例培养阴性SAT阳性,15例培养阳性而SAT阴性,SAT法的敏感性(100%)和特异性(93.5%)均高于培养法。结论解脲脲原体在不孕不育人群中感染率较高,加强就诊对象UU的筛查、诊治和预防,确保优生优育。SAT技术简便、快速、精准,具有较高的临床实用性,是适合实验室诊断的检测方法 。     

LAMP法在肺结核患者痰标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核患者痰标本中的应用。方法收集该院2016年12月至2017年4月门诊及住院诊断为肺结核且抗结核治疗涂片阳性的患者痰标本75份、涂片阴性患者痰标本72份,每份痰标本同时进行LAMP法结核分枝杆菌复合群核酸快速检测、罗氏固体(L-J)培养,分别计算LAMP法及L-J培养的阳性率。结果 75份痰涂片抗酸染色阳性标本中,LAMP法检测阳性75份,L-J培养阳性64份,LAMP法阳性检出率[(100%)75/75]显著高于L-J培养阳性检出率[(85.3%)64/75],且差异具有统计学意义(χ2=9.09,P0.05)。72份痰涂片抗酸染色阴性标本中,LAMP法检测阳性23例,L-J培养阳性12例;与痰涂片阴性标本比较,LAMP阳性检出率[31.9%(23/72)]显著高于L-J培养阳性检出率[16.7%(12/72)],且差异具有统计学意义(χ2=6.67,P0.05)。结论 LAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性检出率高于痰涂片和L-J培养,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可用于临床上早期发现结核病患者。     

脲原体属感染及相关耐药基因研究北大核心CSCD

目的探讨脲原体的耐药性及其相关耐药基因分布。方法采用支原体培养、鉴定和药敏一体化试剂盒对疑似脲原体感染患者的泌尿道分泌物标本进行检测;将筛选得到的脲原体株进行耐药相关基因gyr A、par C、23Sr RNA、tet M PCR扩增并测序分析。结果 1 117份泌尿道分泌物标本检出54株脲原体。药敏结果显示,脲原体对四环素类药物中的米诺环素敏感率最高(92.6%),耐药率最低(5.6%);对喹诺酮类药物中氧氟沙星敏感率最低(5.6%),耐药率最高(53.7%)。2基因测序结果显示:耐药基因tet M在2316、2526二个位点发生突变,分别为G突变为A、T突变为C;par C基因于248位点发生突变,碱基C突变为T,结果导致83位丝氨酸被亮氨酸替换(S83L);gyr A基因未检测出突变;23Sr RNA基因于2149、2181、2230三个位点发生突变,分别为T突变为G、T突变为A、A突变为G。结论脲原体对四环素类药物敏感率最高,尤其是米诺环素;对喹诺酮类药物耐药最严重,尤其是氧氟沙星,为临床合理用药提供一定依据;par C、23Sr RNA、tet M基因相关突变可能与脲原体耐药机制有关。     

脲原体属感染及相关耐药基因研究

目的探讨脲原体的耐药性及其相关耐药基因分布。方法采用支原体培养、鉴定和药敏一体化试剂盒对疑似脲原体感染患者的泌尿道分泌物标本进行检测;将筛选得到的脲原体株进行耐药相关基因gyr A、par C、23Sr RNA、tet M PCR扩增并测序分析。结果 1 117份泌尿道分泌物标本检出54株脲原体。药敏结果显示,脲原体对四环素类药物中的米诺环素敏感率最高(92.6%),耐药率最低(5.6%);对喹诺酮类药物中氧氟沙星敏感率最低(5.6%),耐药率最高(53.7%)。2基因测序结果显示:耐药基因tet M在2316、2526二个位点发生突变,分别为G突变为A、T突变为C;par C基因于248位点发生突变,碱基C突变为T,结果导致83位丝氨酸被亮氨酸替换(S83L);gyr A基因未检测出突变;23Sr RNA基因于2149、2181、2230三个位点发生突变,分别为T突变为G、T突变为A、A突变为G。结论脲原体对四环素类药物敏感率最高,尤其是米诺环素;对喹诺酮类药物耐药最严重,尤其是氧氟沙星,为临床合理用药提供一定依据;par C、23Sr RNA、tet M基因相关突变可能与脲原体耐药机制有关。     

ＰＣＲ 荧光探针法检测 ４ 种生殖道病原体的结果分析

目的 探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率，评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法 收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道分泌物1 738例、血液标本227例，采用PCR荧光探针法进行解脲脲原体、淋球菌、沙眼衣原体、单纯性疱疹病毒-2型检测，并同时采用培养法检测解脲脲原体、淋球菌；胶体金法检测沙眼衣原体；ELISA法检测单纯性疱疹病毒-2抗体，对PCR荧光探针法及其他3种方法检测结果进行分析。结果 478例PCR荧光探针法和培养法同时检测解脲脲原体中，PCR荧光探针法检测阳性率[38.7%(185/478)]略低于培养法检测阳性率[39.96%(191/478)],差异无统计学意义(P>0.05);654例PCR荧光探针法和胶体金法同时检测沙眼衣原体中，PCR荧光探针法检测阳性率[7.34%(48/654)]高于胶体金法检测阳性率[3.21%(21/654)],差异有统计学意义(P<0.001);379例PCR荧光探针法和培养法同时检测淋球菌中，PCR荧光探针法检测阳性率...     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的 探讨噬蒲体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53.49%(46/86)、49.32%(36/73)、60.00%(18/30);涂片抗酸染色阳性率分别为24.42%(21/86)、2.74%(2/73)、20.00%(6/30);罗氏培养阳性率分别为44.19%(38/86)、4.11%(3/73)、36.67%(11/30).20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法 敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值.     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的 评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者,20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 73例结核性胸膜炎胸水.噬菌体生物扩增法阳性率为49.3%(36/73)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(2/731、罗氏培养阳性率为4.1%(3/73).20例非结核性胸膜炎,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法 .     

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。     

3种抗双链DNA抗体检测方法比较及其联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值研究

目的分析间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的差异,以及联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用价值。方法选取2012年1月至2015年3月确诊的SLE患者50例,以及同期其他自身免疫病(AID)患者100例和体检健康者100例。分别采用3种方法检测其血清抗dsDNA抗体,比较3种方法的灵敏度与特异度,并分析3种方法联合检测的灵敏度与特异度。结果IIF法特异度(99.5%)最高,ELISA法灵敏度(74.0%)最高。IIF与ELISA法、IIF与IBT法、ELISA与IBT法检测SLE患者抗dsDNA抗体的检出率比较,差异均有统计学意义(χ~2值分别为11.435、13.994、4.539,P0.05);且一致性检验的Kappa值(κ)分别为0.411、0.522、0.278。3种方法串联检测特异度提高到99.5%,并联检测的灵敏度提高到82.0%。结论 3种检测抗dsDNA抗体的方法中,IIF特异度最高,ELISA灵敏度最高,联合检测可提高检测灵敏度与特异度。     

泌尿生殖道标本解脲脲原体和人型支原体检测及抗菌药物敏感性试验结果分析

目的了解泌尿生殖道标本解脲脲原体和人型支原体对常用抗菌药物敏感性,为临床抗菌药物选择提供客观依据。方法采用商品化的支原体培养及药敏试验试剂盒,对2016—2018年连续3年同济大学附属上海市第一妇婴保健院泌尿生殖道标本进行支原体检测及药敏测定。结果3年间共采集泌尿生殖道标本35006份,12572份(35.9%)标本检出解脲脲原体,1073份(3.1%)标本同时检出解脲脲原体与人型支原体,15份(0.04%)标本仅检出人型支原体。解脲脲原体、人型支原体对四环素、多西环素、克拉霉素和交沙霉素敏感率高(≥93.3%);但解脲脲原体与人型支原体混合体,仅对多西环素、米诺环素、交沙霉素保持有较高敏感率(≥70.4%)。生殖道支原体对喹诺酮类药物敏感率低(≤46.7%)。结论泌尿生殖道支原体以解脲脲原体多见;对喹诺酮类耐药性高,应根据培养及药敏结果选择抗菌药物。     

LAMP法在临床诊断的肺结核患者BALF标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增法(LAMP)在临床诊断的肺结核与非肺结核两组患者中支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌的检测效果。方法收集2017年6月至2018年2月于遵义医学院附属医院住院的患者130例,其中临床诊断肺结核51例,非肺结核79例,分别行支气管肺泡灌洗(BAL)进一步寻找病原体。所有标本均送支气管刷检物行涂片抗酸染色,支气管肺泡灌洗液分别行结核分枝杆菌罗氏培养及LAMP检测,并进行统计学分析。分别计算LAMP法及培养法的阳性率及阳性检出率。结果 51例临床诊断肺结核患者中,抗酸染色阳性3例,阳性率为5.9%(3/51),18例BALF培养阳性,阳性率为35.3%(18/51),28例LAMP阳性,阳性率为54.9%(28/51)。非肺结核组79例标本中,支气管刷检物行涂片抗酸染色及肺泡灌洗液培养均阴性,LAMP法阳性2例(1例临床诊断为肺癌,1例临床诊断为肺炎)。结论在BALF标本中,TBLAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性率及阳性检出率高于罗氏固体培养,并明显高于抗酸染色法,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可替代抗酸染色法用于临床上早期发现结核病患者。     

应用葡萄球菌A蛋白快速检测金黄色葡萄球菌的诊断价值

目的评价应用葡萄球菌A蛋白(SPA)快速检测金葡菌的临床诊断价值。方法 200株鉴定明确的菌株(金葡菌和非金葡菌各100株)采用SPA法检测,统计检测方法的灵敏度和特异度;118份ICU患者的痰标本,采用双盲法分别对其进行传统痰培养鉴定和SPA镜下快速检测,计算该诊断试验的评价指标,并对痰培养和SPA方法的相关性进行分析。结果 SPA检测的灵敏度和特异度均为100%;双盲法痰标本SPA检测敏感度为100%,特异度97.7%,SPA检测和痰培养的结果呈高度相关性(P>0.05)。结论 SPA检测法可早期诊断金葡菌感染,是一项快速的、灵敏度和特异度较高的诊断试验。     

荧光定量PCR法与培养法在检测解脲支原体中的比较

79例患者各取两份标本,用荧光定量PCR法和培养法同时进行检测。结果79份标本中PCR法阳性率为60.76%;培养法阳性率为49.37%。其中有6例用PCR法检测为阳性的标本但用培养法为阴性;有3例用培养法检测出阳性。PCR方法检查技术要求较高,但是一般的实验室的检测结果准确性低,且不能鉴别标本中UU的死活情况。培养法虽过程耗时长但准确性好,是临床的金标准,所以两者运用到临床时应相互参考使用。     

全自动核酸提取仪对三种性传播病原体检测的性能评价

目的评价全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)和解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum,UU)检测结果应用于临床的可行性。方法收集检测CT样本159例、NG样本128例、UU样本144例,应用荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Testing,SAT),同一样本分别采用手工提取分装加样和MagX提取分装加样两种检测方法,然后进行实时荧光PCR。以手工检测结果为金标准,对MagX检测结果进行阳性符合率(灵敏度)、阴性符合率(特异度)、总符合率(准确度)的评价。同时,对该仪器进行防污染验证。全自动核酸(RNA)提取仪与手工检测结果进行Kappa一致性分析。结果 159例CT,128例NG和144例UU样本的阳性符合率、阴性符合率、总符合率依次为CT:0.910 6,92.59%,98.48%和97.48%;NG:0.938 3,100.00%,98.18%和98.44%;UU:0.885 6,93.33%,95.24%和94.44%;其Kappa系数均0.8(CT:Kappa=0.910 6,NG:Kappa=0.938 3,UU:Kappa=0.885 6),CV值均5%;没有携带污染现象存在。结论上海仁度生物科技生产的CT,NG和UU核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)在全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)的检测符合临床检测标准,可在临床使用。     

环介导等温扩增检测肺炎链球菌方法的建立及临床应用

目的 建立环介导等温扩增(LAMP)快速检测肺炎链球菌的方法.方法 根据美国国家生物信息中心(GenBank)上提交的肺炎链球菌R6株的lytA基因序列(登录号AF2)08540)设计特异LAMP引物,以盐酸胍一苯甲醇法提取阳性血培养瓶中细菌DNA,然后以LAMP技术扩增lytA基因,反应条件为63℃45 min,采用肉眼观察浊度和琼脂糖电泳的方法来观察结果.结果 在196份阳性血培养瓶中,采用LAMP法检测到肺炎链球菌16株,与传统方法比较,其检测肺炎链球菌的灵敏度和特异度均达到100%,且检测时间缩短为1 h左右.模拟标本的检测结果显示该方法的最低检测限为102CFU/ml.结论 该方法灵敏度高,特异性强,操作方便快速,适合从临床标本中检测肺炎链球菌.     

应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的结果比较

目的比较应用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法和间接ELISA法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的检查结果,为临床血液样本抗-HCV的筛查提供参考依据。方法收集2017年6月至2018年2月某院检测的1 300份住院患者传染病丙肝筛查标本作为研究对象,经荧光定量PCR血液筛查,其中抗-HCV阴性标本1 221份,抗-HCV阳性标本79份,所有血液样本均分别采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法进行检测,记录两种检测方法的结果,并与荧光定量PCR血液筛查结果进行对照,计算两种检测方法的灵敏度、特异度、符合率等指标。结果双抗原夹心ELISA法检测出抗-HCV阳性标本1 174份,其中真阳性1 173份,假阳性1份。间接ELISA法检测出抗-HCV阳性标本1 072份,其中真阳性1 060份,假阳性12份。双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的灵敏度、特异度以及符合率分别为96.07%(1 173/1 221)、98.73%(78/79)、96.23%(1 251/1 300),间接ELISA法检测抗-HCV的灵敏度、特异度以及符合率分别为86.81%(1 060/1 221)、84.81%(67/79)、86.69%(1 127/1 300),双抗原夹心ELISA法检测的灵敏度、特异度以及符合率均明显高于间接ELISA法,差异均有统计学意义(P0.05)。结论与间接ELISA法比较,双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的灵敏度和特异性明显提高,能提高临床检测的准确性,降低假阳性,减少血液的浪费,可作为临床血液样本抗-HCV筛查的首选方法。     

泌尿生殖道支原体液体培养法检测的实验评价

目的比较液体培养法和固体培养法平行检测解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)结果的一致性;评价液体培养法检测Uu和Mh的可靠性,加强Uu和Mh检测的质量控制。方法采用液体培养基和固体A7琼脂培养基平行检测369例临床标本的Uu和Mh。结果液体培养法阳性155例,阳性率为42%;固体培养法阳性111例,阳性率为30%;液体培养法阳性而固体培养法阴性49例;固体培养阳性而液体培养法为阴性5例。两种方法的阳性检出率差异有统计学意义(P0.005)。两种方法所得结果基本一致(kappa系数为0.554)。结论泌尿生殖道支原体的检测不能仅凭液体培养法变色而报为阳性,应结合固体培养法作鉴定,才能报为阳性.用固体培养法提高检验的特异性,用液体培养法进行药敏试验,两者结合诊断和指导临床治疗,具有较好的临床应用价值,值得临床推广应用。