紫铆花素对人黑素瘤细胞A375生物活性及线粒体膜电位的影响

目的观察紫铆花素对人黑素瘤细胞A375细胞增殖、细胞周期、酪氨酸酶活性、黑素合成及线粒体膜电位的影响。方法用不同浓度紫铆花素处理人黑素瘤细胞A375 48h后,采用MTT法测定黑素细胞增殖率;流式细胞仪测定黑素细胞周期和线粒体膜电位变化;L-DOPA法测定黑素细胞酪氨酸酶活性及Na OH裂解法测定黑素含量变化。结果与对照组相比,0.1~5.0μg/m L浓度范围紫铆花素与人黑素瘤细胞A375共孵育48h后,能明显促进人黑素瘤细胞A375增殖,具有不同程度提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成及调节细胞周期和线粒体膜电位的作用。结论紫铆花素对体外培养的人黑素瘤细胞A375起促进细胞增殖、提高酪氨酸酶活性、增加黑素合成的作用,其作用可能与紫铆花素对细胞周期和线粒体膜电位的调节有关。     

白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

探讨白芷对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.采用MTT法测定白芷对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较.结果显示,白芷浓度在0.1～10mg/mL对人A375黑素瘤细胞增殖无影响.1、2和5mg/mL白芷对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用,2mg/mL及5mg/mL白芷与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).白芷对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有剂量相关性激活作用.     

三氧化二砷对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的 探讨三氧化二砷(As₂O₃)对A375人恶性黑素瘤细胞株酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,465nm比色法测定黑素含量。结果 As₂O₃浓度<0.01μmol/L时,随As₂O₃浓度的增加,促进黑素瘤细胞的增殖、黑素的合成及上调酪氨酸酶的活性;As₂O₃浓度等于0.01μmol/L时作用最强。0.1～1μmol/L则表现为抑制作用;>1μmol/L则出现细胞毒性作用。结论 经As₂O₃处理后A375人恶性黑素瘤细胞株的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的生成与As₂O₃浓度呈双相性变化。     

维A酸对A375细胞黑素合成及酪氨酸酶蛋白表达的影响

目的探讨维A酸对人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及蛋白表达的影响。方法将培养的A375细胞分为维A酸组、8-甲氧补骨脂素(8-MOP)组、氢醌组、阴性对照组(A375细胞只加入相应溶媒,不加入药物)分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性;培养24 h Western检测酪氨酸酶蛋白的变化。结果 A375细胞加入维A酸24 h、48 h、72 h后黑素含量及酪氨酸酶活性均较阴性对照组下降(P0.05)。阴性对照组A375细胞酪氨酸酶蛋白含量测定值为(0.89±0.085),维A酸组A375细胞酪氨酸酶蛋白含量为(0.56±0.044)(t=3.811,P0.05)。结论维A酸能抑制人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及蛋白表达。     

308nm准分子光联合他克莫司对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨308nm准分子光联合他克莫司对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法体外人A875黑素瘤细胞培养。将人A375黑素瘤细胞分为四组:正常对照组、308nm准分子光组(100 mJ/cm~2)、他克莫司(10 nmol/L)组及308准分子光(100mJ/cm2)联合他克莫司(10 nmol/L)组(以后均称联合组)。作用48h后MTT法测定每组对A875黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH法测定每组对黑素合成的影响。结果与对照组相比,联合组人A875黑素瘤细胞的增殖率及黑素合成明显增加(P 0.001)。结论308准分子光及他克莫司联合使用可以促进人A875黑素瘤细胞的增殖及黑素合成,为白癜风的临床治疗方案进一步提供理论依据。     

补骨脂对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的观察补骨脂对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法给已经稳定传代的黑素细胞、角质形成细胞添加高、中、低三种浓度的补骨脂培养,用MTT法测细胞增殖、多巴氧化法测酪氨酸酶的活性、NaOH裂解法测黑素含量。结果与对照组相比,三种浓度补骨脂均能促进黑素细胞与角质形成细胞增殖,增加酪氨酸酶活性及黑素合成,有统计学意义(P 0.05),以中浓度组效果最佳(P 0.01)。结论补骨脂从多个环节促进黑素的合成,且适宜的浓度效果最佳,对于临床治疗白癜风有着指导意义。     

CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响

目的将CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞,观察其上清液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,探讨CLEC2B基因在白癜风发病中的作用。方法培养人淋巴瘤细胞Jurkat细胞和小鼠黑素瘤细胞B16,采用脂质体介导的方法瞬时转染CLEC2B重组质粒入Jurkat细胞,半定量RT-PCR法鉴定CLEC2B基因过表达;将其细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞48 h后,MTT法检测黑素瘤细胞的增殖情况,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量。结果 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用后的黑素瘤细胞增殖比空载体组、正常对照组降低,差异有统计学意义(均P0.05),CLEC2B过表达组黑素含量比空载体组、正常对照组减少,差异有统计学意义(均P0.05),CLEC2B过表达组、空载体组、正常对照组之间的酪氨酸酶活性比较差异无统计学意义(均P0.05),空载体组与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用,对酪氨酸酶活性影响不明显。提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞功能间接影响黑素细胞增殖和黑素合成,从而参与白癜风发病。     

复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响

目的 研究复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 培养小鼠B16黑素瘤细胞,采用MTT法测定不同浓度复方木尼孜其颗粒对细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定其对细胞酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测细胞黑素含量.结果 复方木尼孜其颗粒高剂量组能明显抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,但是对酪氨酸酶活性无影响.结论 复方木尼孜其颗粒能抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,在治疗色素性皮肤病中有一定前景.     

复方中药白癜冲剂对B16黑素瘤细胞生物学特性影响的实验研究

目的：观察复方中药白癜冲剂对体外培养的B16黑素瘤细胞生物学特性的影响。方法：体外培养B16黑素瘤细胞,测定不同浓度白癜冲剂对B16黑素瘤细胞增殖、对酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。结果：低浓度剂量组白癜冲剂对B16黑素瘤细胞较对照组有明显促增殖作用,黑素合成增多,酪氨酸酶活力增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：复方中药白癜冲剂能促进B16黑素瘤细胞的黑素合成,提高酪氨酸酶活力。     

复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的：研究复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素的影响及其机制。方法：通过CCK8、流式细胞术、NaOH裂解法、多巴氧化法和Western-blotting技术检测复方甘草酸苷对B16鼠黑素瘤细胞生长,黑素合成与转运及酪氨酸酶活性和蛋白含量的影响。结果：(1) 复方甘草酸苷注射液浓度低于30μl/ml,对B16鼠黑素瘤细胞生长无明显影响;浓度大于50μl/ml,细胞生长速率减慢;浓度达到500μl/ml,细胞生长明显受抑制。(2) 浓度在10μl/ml到200μl/ml之间,黑素的合成和酪氨酸酶的活性均增加。黑素的合成在复方甘草酸苷注射液浓度为50μl/ml时增加最明显;且酪氨酸酶活性呈浓度依赖性增加,在浓度为100μl/ml和150μl/ml时达到最高。结论：复方甘草酸苷注射液有促进黑素瘤细胞黑素的合成与转运及增加酪氨酸酶活性的作用。     

窄谱中波紫外线对体外培养黑素细胞增殖及代谢影响研究

目的探讨窄谱中波紫外线(Narrow band ultraviolet B,NB-UVB)对体外培养黑素细胞增殖及黑素代谢的影响。方法不同剂量的NB-UVB作用于体外培养纯的黑素细胞,细胞增殖与活性测定试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)测定黑素细胞增殖的影响;多巴氧化方法测定酪氨酸酶活性,Na OH裂解法测定黑素含量。结果 NB-UVB对体外培养黑素细胞的增殖有明显抑制作用,且有剂量依赖效应;而对黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有不同程度的促进作用。结论 NB-UVB对黑素细胞的增殖具有抑制作用,而对其功能有促进作用。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

内皮素-1对培养的黑素细胞生物学特性的影响

目的:探讨内皮素-1对体外培养的正常人黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法:采用不含佛波醇酯和霍乱毒素的培养液培养黑素细胞,倒置显微镜观察细胞形态,分别用CCK-8法、多巴氧化法和NaOH法测定细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量.结果:内皮素-1可促进黑素细胞的树突形成,可上调酪氨酸酶活性,增加黑素合成,均在10 nM 时最显著.1～100 nM的内皮素-1可明显刺激细胞增殖,随时间延长效应更明显.结论:一定浓度的内皮素-1具有促进培养的人黑素细胞树突形成、增殖、上调酪氨酸酶活性和增加黑素生成的作用.     

淫羊藿苷等6种中药单体抑制Cloudman S91黑素瘤细胞株黑素合成的研究

观察淫羊藿苷、白藜芦醇苷、红景天苷等6种中药单体对体外培养的CloudmanS91黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择系列浓度梯度的中药单体作用于体外培养的CloudmanS91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。结果:淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷3种药物明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.05),且呈浓度依赖性,作用3d内呈时间依赖性。其中淫羊藿苷的作用与氢醌比较,差异无显著性(P>0.05),而白黎芦醇苷和红景天苷的作用明显弱于氢醌(P<0.01)。淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷均促进细胞的增殖,其中淫羊藿苷对细胞增殖促进作用明显。结论:淫羊藿苷、白黎芦醇苷和红景天苷能抑制CloudmanS91黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性。     

黑素生成素对黑素瘤mel586细胞白癜风相关基因-1和酪氨酸酶表达的影响

采用MTT法测定黑素生成素对细胞增殖率的影响;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;半定量RT-PCR检测黑素生成素对黑素细胞白癜风相关基因-1（VIT-1）,酪氨酸酶（TYR）和酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP1）基因表达的影响。结果：黑素生成素能促进黑素瘤细胞mel586的增殖,并与浓度呈正相关性,对TYR和TRP-1mRNA表达无明显促进作用;黑素生成素在浓度为6μg/mL和12μg/mL时对黑素瘤细胞mel586酪氨酸酶活性有促进作用（P〈0.05）。黑素生成素治疗白癜风有效的机制可能与提高VIT-1的表达量和促进细胞增殖有关。     

姜黄素联合热疗对人黑素瘤A375细胞毒性的实验研究

目的从细胞水平探讨姜黄素联合热疗治疗人恶性黑素瘤的可行性。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理因素对人恶性黑素瘤A375细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测A375细胞的凋亡情况。结果 30μmol/L姜黄素联合热疗的细胞抑制率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(F=5.47,P0.01);A375细胞增殖抑制率与姜黄素浓度呈正相关(rs=0.95);30μmol/L姜黄素联合热疗组细胞早期凋亡率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(H=15.37,P0.01)。结论姜黄素联合热疗对人恶性黑素瘤A375细胞的毒性起协同相加作用,细胞毒性与姜黄素的剂量成明显剂量-效应关系。     

高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成及TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达的影响

目的探讨不同质量分数高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成以及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸相关蛋白-2(TRP-2)mRNA的影响。方法选取人黑素瘤A375细胞,随机分为空白对照组、阳性对照组、90%高良姜素组和99%高良姜素组,其中阳性对照组、90%高良姜素组和99%高良姜素组各分为1.0,5.0和10.0 mmol/L组,每组给予相应浓度的含8-甲氧基补骨脂素、90%高良姜素和99%高良姜素的培养液,对照组给予等体积的培养液,采用MTT法测定细胞增殖情况,Na OH裂解法检测黑素合成情况,RT-PCR检测细胞TYR mRNA等表达情况。结果相同浓度下,90%高良姜素组和99%高良姜素组A值均高于阳性对照组(均P0.05),且两组比较差异无统计学意义(P0.05);10.0 mmol/L浓度下,90%高良姜素组和99%高良姜素组黑素水平分别为(170.12±0.07)%和(121.41±0.07)%,明显高于浓度为1.0 mmol/L和5.0 mmol/L浓度组(P0.05);相同浓度下,90%高良姜素组黑素水平明显高于99%高良姜素组(P0.05);在1.0 mmol/L浓度下,99%高良姜素组能显著上调TYP和TRP-2 mRNA表达,分别为(0.65±0.08)和(0.72±0.30),明显高于空白对照组以及相同浓度下90%高良姜素组(P0.05);在5.0 mmol/L浓度下,99%高良姜素组能显著上调TYP,TRP-1,TRP-2 mRNA表达,分别为(0.61±0.07)、(0.61±0.11)和(0.67±0.27),明显高于空白对照组以及相同浓度下90%高良姜素组(P0.05)。结论高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成及TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA表达有所影响,其中99%高良姜素促进细胞黑素合成的能力弱于90%高良姜素,值得进一步研究。     

白消一号方对黑素瘤细胞与角质形成细胞混合培养模型中黑素合成的影响

目的 体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素瘤细胞的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用.方法 分别培养角质形成细胞、黑素瘤细胞;体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,大鼠中药灌胃后不同时间取血清加入此模型中,用MTT法、多巴氧化法、及NaOH法.检测含药血清对黑素瘤细胞增殖、酪氧酸酶活性以及黑素合成的影响.结果 含药血清可促进黑素瘤细胞增殖,上调酪氨酸酶活性.增加黑素合成.结论 成功构建了黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,白消一号方作用于此模型对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成均呈促进作用.     

全反式维A酸对UVB照射的A375细胞酪氨酸酶代谢及铜锌超氧化物歧化酶的影响

目的 探讨全反式维A酸（ATRA）对中波紫外线（UVB）照射的人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶及铜锌超氧化物歧化酶（Cu/ZnSOD）的影响。方法 将培养的A375细胞分为6组：ATRA + UVB组：A375细胞照射UVB后加入全反式维A酸;氢醌 + UVB组：照射UVB后加入氢醌;UVB组：仅照射UVB;ATRA组：A375细胞加入ATRA;氢醌组：A375细胞加入氢醌;阴性对照组：A375细胞只加入相应溶媒,既不照射UVB,也不加入药物。分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性;于培养24 h, Western 印迹检测酪氨酸酶蛋白的变化,实时定量PCR法分别检测酪氨酸酶和Ｃu/Zn SOD在mRNA水平的变化。结果 UVB照射的A375细胞加入全反式维A酸后24 h、48 h、72 h黑素含量及酪氨酸酶活性均下降。UVB照射A375细胞后24 h酪氨酸酶蛋白及mRNA测定值分别为0.72 ± 0.070、1.400 ± 0.135,加入全反式维A酸24 h后酪氨酸酶蛋白及mRNA值分别为0.42 ± 0.056（P < 0.01）、0.810 ± 0.062（P < 0.01）;UVB照射A375细胞后24 h Cu/ZnSOD mRNA水平为0.323 ± 0.066,加入全反式维A酸后Cu/ZnSOD在mRNA水平增高为0.625 ± 0.103（P < 0.01）。结论 全反式维A酸能够通过酪氨酸酶途径抑制UVB辐射导致的A375细胞黑素含量增加,并可提高Cu/ZnSOD水平。     

槲皮素对过氧化氢诱导A375细胞氧化损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮素对人A375黑素瘤细胞的氧化损伤是否具有保护作用。方法体外培养人A375黑素瘤细胞,随机分为空白对照组、H2O2损伤组、不同浓度槲皮素预处理组(槲皮素终浓度为5、10、25、50μmol/L)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法测定细胞增殖,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪(Annexin V/PI法)测定细胞早期凋亡百分率。结果与H2O2损伤组相比,25μmol/L槲皮素组对细胞增殖有促进作用,其余槲皮素各组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P0.05);与H2O2损伤组相比,各浓度的槲皮素均对细胞的黑素合成有促进作用(P0.05)。各槲皮素预处理组细胞早期凋亡百分率均低于H2O2损伤组(P0.05)。结论槲皮素可以减轻H2O2对人黑素瘤细胞造成的氧化损伤和早期凋亡。