损害性因素对乳鼠心肌细胞甘氨酸受体α1亚基表达的影响

目的：研究脂多糖（LPS）、缺氧/复氧（H/R）、异丙肾上腺素(ISO)以及高糖（HG）对乳鼠心肌细胞甘氨酸受体α₁亚基（GlyRα₁）表达的影响。方法：体外培养乳鼠心肌细胞，分别用LPS、H/R、ISO以及HG处理，采用CCK-8试剂检测细胞活力，RT-PCR方法检测心肌细胞上GlyRα₁亚基mRNA的表达。结果：LPS（5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80mg/L）、ISO（20 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L）以及HG（25 mmol/L、50 mmol/L）处理心肌细胞24 h与心肌细胞缺氧3 h/复氧3 h、单纯缺氧3 h对心肌细胞存活率无明显影响（P＞0.05）；LPS（5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L）、缺氧（3 h）/复氧（3 h）、单纯缺氧（3 h）以及ISO（20 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L）组心肌细胞上GlyRα1亚基mRNA表达均高于对照组（P<0.01），而HG（25 mmol/L、50 mmol/L）组心肌细胞上GlyRα₁亚基mRNA表达均低于对照组（P<0.01）。结论：一定浓度的LPS、ISO与一定时间的H/R、单纯缺氧均可上调乳鼠心肌细胞GlyRα₁亚基mRNA的表达，而HG可下调乳鼠心肌细胞GlyRα₁亚基mRNA的表达。     

TGF-β1及其信号蛋白Smad3对大鼠心肌细胞肥大的作用

目的：探讨转化生长因子β1（transforming growth factor,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3在诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。 方法： 培养新生大鼠心肌细胞，流式细胞仪检测心肌细胞总蛋白含量，RT-PCR法检测胚胎抗原ANF mRNA（atrial natriuretic factor）及Smad3 mRNA的表达，Western blotting检测Smad3蛋白的表达。 结果： 不同浓度TGF-β1均能明显增加心肌细胞总蛋白含量和ANF mRNA的表达, Smad3基因反义寡核苷酸能抑制TGF-β1诱导的心肌细胞肥大，TGF-β1诱导肥大的心肌细胞内信号蛋白Smad3表达的增加。 结论： TGF-β1及其信号蛋白Smad3可能参与诱导大鼠心肌细胞肥大的病理过程。     

STAR蛋白QKI在去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚时的表达变化

目的：探讨QKI mRNA及蛋白在SD大鼠病理性心肌肥厚时的表达。方法：采用去甲肾上腺素制备SD大鼠心肌肥厚模型，利用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠心肌肥厚时QKI mRNA和蛋白质的表达变化。结果：在SD大鼠心脏中有3种QKI异构体mRNA和QKI蛋白的表达；当去甲肾上腺素持续输注引起大鼠心肌肥厚时，心脏QKI-5 mRNA和QKI蛋白质表达水平均明显降低（P<0.05）；去甲肾上腺素诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大时，QKI-5 mRNA表达量也明显低于对照（P<0.05）。结论：大鼠心脏有QKI mRNA和蛋白质表达，心脏病理性肥厚时其表达发生变化。     

超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4在大鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞中的表达

目的 ：探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)在大鼠体内和体外心肌成纤维细胞、心肌细胞中的表达分布及其增龄变化。方法 ：SD大鼠分为新生组（1～3 d），成年组（17个月）和老年组（22个月），每组8只，其中4只用于冰冻切片，另4只用于PCR；取新生SD大鼠心，酶消化法分离培养原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞。用免疫荧光、免疫组织化学检测原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞HCN4的表达；免疫印迹、实时荧光定量PCR检测原代心肌成纤维细胞HCN4的表达，用实时荧光定量PCR检测不同月龄大鼠心肌组织HCN4的表达。结果 ：体外细胞培养显示，成纤维细胞和原代心肌细胞中均表达HCN4。组织切片显示，新生、成年和老年大鼠心肌成纤维细胞和部分心肌细胞表达HCN4。P1～P4代成纤维细胞的免疫印迹和实时荧光定量PCR结果显示HCN4随着成纤维细胞代次增加，表达量逐渐降低；不同月龄大鼠左心室的实时荧光定量PCR结果显示随着大鼠月龄增加，HCN4的表达量逐渐降低，其结果与培养的细胞表达一致。结论 ：HCN4在心肌成纤维细胞和部分心肌细胞中表达。随增龄变化，心肌细胞和成纤维细胞HCN4的表达量逐...     

雌激素对大鼠心脏雌激素受体α和β表达的影响

目的研究雌激素受体（ER）α和β在新生、成年和卵巢切除大鼠心脏的表达。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法,分析新生和成年大鼠心脏各部的ERα和βmRNA及ER蛋白质的表达,探讨不同剂量的17β雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和βmRNA、ER蛋白质的表达调控及对心房、心室重量和它们与体重比变化的影响。结果ERα mRNA在新生大鼠心脏各部表达较低,而成年大鼠心脏各部ERα mRNA的转录水平提高3～20倍,这种差别体现在ERα蛋白质的表达水平不同。反之新生大鼠心脏ERβ mRNA表达水平较高,而成年大鼠心脏ERβ mRNA的表达降低2～7倍。卵巢切除减少成年大鼠心房ERαmRNA和蛋白质的表达,减轻心房重量及心房／体重比;17肛雌二醇替代却能反转这些改变,同时随着血浆17β-雌二醇水平的增高,这种影响在一定程度上呈剂量依赖关系。卵巢切除和178一雌二醇替代并不改变心脏和心室／体重比,也不影响ERβ mRNA的表达。结论雌激素受体α和β在新生和成年大鼠心脏的表达存在差别,ERβ可能在大鼠心脏的发育过程中起重要作用,ERα足雌激素对成年大鼠心脏调控的优势受体;雌激素的主要靶器官是心房,且通过其受体的介导促进心房肌细胞的增生。     

大鼠心肌细胞和心肌细胞系H9C2表达弹性蛋白

目的 检测弹性蛋白在大鼠心肌细胞和H9C2心肌细胞系内的表达。 方法 取新生和成年SD大鼠各5例的新鲜心脏，冷冻切片；取20只新生3 d SD大鼠心脏，通过0.05%胰蛋白酶和0.075%Ⅱ型胶原酶消化法，获取原代心肌细胞；免疫组织化学和免疫荧光技术检测大鼠心肌组织、原代心肌细胞和H9C2心肌细胞系的弹性蛋白表达;ELISA法检测培养的H9C2心肌细胞系上清中的弹性蛋白。 结果 在大鼠心肌细胞、H9C2心肌细胞系和新生、成年大鼠心肌组织上均发现心肌肌钙蛋白T和弹性蛋白的共表达。免疫组织化学结果发现，弹性蛋白在成纤维细胞、平滑肌细胞和细胞间质内均有表达。H9C2心肌细胞培养液的上清中检测到少量的弹性蛋白。 结论 大鼠心肌细胞表达弹性蛋白，可能参与心肌细胞的势能和细胞间质弹性纤维的构建。     

高血压大鼠主动脉平滑肌BK通道表达增强

 目的 研究在自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常对照组大鼠(wistar-kyoto,WKY)主动脉平滑肌上大电导钙激活钾通道(BK)的功能改变及其机制。方法 用实时定量PCR反应和免疫印迹对SHR和WKY大鼠的主动脉组织的BK通道组成亚基α和β1表达量的检测。结果 SHR大鼠α和β1亚基的mRNA的表达量明显高于WKY大鼠（n=6,p<0.05）,SHR大鼠的α亚基的蛋白表达量与WKY没有显著性差异（n=6,p>0.05）,β1亚基的蛋白表达量SHR大鼠却明显高于WKY大鼠（n=6,p<0.05）。结论 SHR大鼠BK通道在mRNA水平和蛋白水平的表达都比WKY增强,可能是在高血压状况下机体负反馈抑制血管张力的一种调节机制。     

血管紧张素Ⅱ对培养新生大鼠心肌细胞MHC基因表达的影响

目的：本研究新生大鼠原代培养心肌细胞上，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞ＭＨＣ基因表达的影响。方法和结果：（１）在培养新生大鼠心肌细胞中，用１０－７ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ处理后，６ｈ就引起α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平的迅速增加，１２ｈ达峰值，为对照组的１７５倍（Ｐ＜００５）。β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平也有所增加，为对照组的１２５倍（Ｐ＜００１），两者均呈量效关系。（２）ＡｎｇⅡ受体阻断剂ｓａｒａｌａｓｉｎ可阻断ＡｎｇⅡ诱导的α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因的表达。结论：ＡｎｇⅡ可能通过ＡｎｇⅡ受体的介导作用，诱导心室肌细胞α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因表达增加     

病毒感染大鼠心室肌细胞钙通道基因表达及功能改变的研究

目的：研究大鼠心室肌细胞感染柯萨奇病毒B3（CVB3）后L型钙通道mRNA表达量及其电生理特性的变化。 方法: 用CVB3感染培养的SD大鼠心室肌细胞，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术，检测病毒感染心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化；用全细胞膜片钳技术，观察病毒感染前后心室肌细胞L型钙电流（ICa-L）的变化。结果: 病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量显著高于正常对照组（4.00±0.07 vs 2.21±0.41, P<0.01; 2.06±0.06 vs 1.22±0.30, P<0.05），而α2/δ亚单位mRNA表达量的改变不明显（4.12±0.19 vs 4.13±0.27, P>0.05）；感染组细胞ICa-L的平均电流密度明显大于正常组细胞［（-8.66±0.99) pA/pF vs (-6.97±1.75) pA/pF, P<0.01］，且前者的电流-电压曲线下移，峰电流密度增加25.74%（P<0.05）。结论: CVB3感染心室肌细胞后，使其L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量增加，ICa-L增大，可能是病毒感染导致心肌出现异常电生理活动的细胞和分子机制之一。     

17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的观测17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）对肾上腺素（PE）诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药，用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积，[^3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率，免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达，半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链（pMHC）、α-骨骼肌肌动蛋白（α-skA）和心房肽（ANP）的mRNA表达。结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加；17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达；17β-雌二醇降低pMHC、α-skA的mRNA表达，但增加ANPmRNA表达。结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大，其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达，逆转收缩蛋白基因（β-MHC和α-skA）向胚胎型转化及促进ANPmRNA表达有关。     

PARP-2在大鼠心肌肥大中的作用

目的:在细胞和整体水平研究多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶2(PARP-2)在心肌肥大过程中表达的变化规律以及PARP-2对心肌肥大的调控作用。方法:健康雄性SD大鼠采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立心肌肥大动物模型,采用real-time PCR和Western blot检测PARP-2的mRNA和蛋白表达变化;使用PARP-2特异性的siRNA干扰序列来处理细胞后,通过检测心肌细胞表面积及ANF、BNP和β-MHC的mRNA表达变化来作为评判心肌细胞肥大状况。结果:AAC大鼠心脏组织中PARP-2的蛋白和mRNA表达均显著上调;在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中,AngⅡ能时间和剂量依赖性地上调PARP-2的mRNA和蛋白表达;用siRNA干扰序列沉默PARP-2能够逆转AngⅡ所诱导心肌细胞的肥大。结论:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的体外模型和腹主动脉缩窄诱导的心肌肥大动物的体内模型中,PARP-2的mRNA和蛋白水平均显著上调;特异性沉默PARP-2能够抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

Expression of glycine and other amino acid receptors by rat spinal cord mRNA in Xenopus oocytes

Xenopus oocytes were injected with mRNA from adult or neonatal rat spinal cord, or from adult cerebral cortex, and examined electrophysiologically to measure currents elicited by various receptor agonists. The mRNAs induced the oocytes to acquire similar types of amino acid receptors, albeit with different potencies. In oocytes injected with adult cord mRNA the responses to kainate and gamma-aminobutyrate were much smaller, whilst the currents elicited by glycine and beta-alanine were markedly larger, than those in oocytes injected with cortex mRNA. For these receptors, the expressional potency of neonatal spinal cord mRNA is similar to that of the adult cord mRNA, except for a lower sensitivity to beta-alanine.     

Expression profile of AMPA receptor subunit mRNA in single adult rat brain and spinal cord neurons in situ

The differential expression of AMPA receptor subunit mRNA was analyzed in the adult rat brain and spinal cord using quantitative RT-PCR with laser capture microdissection. The expression of all four AMPA receptor subunits was demonstrable, with the mRNA expression level for GluR2 being the highest in all the brain areas and neuronal subsets examined. Both the absolute expression level of GluR2 mRNA and its expression relative to the other subunits were the lowest in motoneurons. The unique AMPA receptor expression profile of motoneurons may render them selectively vulnerable to AMPA receptor-mediated excitotoxicity.     

Engineered heart tissue model of diabetic myocardium

Myocardial infarction resulting in irreversible loss of cardiomyocytes (CMs) is a leading cause of heart failure. Previously, we reported an in vitro test-bed for screening cell integration between injected test cells and host CM using the engineered heart tissue as a recipient. The objective of this study is to expand our system to diabetic cardiomyopathy conditions. Patients with diabetes show dysfunction of CMs independent of myocardial infarction, indicating that diabetes directly affects CMs. However, the underlying mechanisms are not fully understood, and developing a diabetic CM test-bed could enable drug screening studies specific to the diabetic heart. Diabetic cardiac conditions were mimicked by cultivating neonatal rat CMs seeded onto collagen scaffolds in normal or high glucose with or without insulin. Our results show that high glucose conditions, which mimic diabetic hearts, display poor electrical properties. Gene expression profiles from diabetic, adult, and neonatal rat hearts as well as engineered heart tissues under different conditions were compared. The diabetic rat heart and high glucose conditions increased the ratio of myosin heavy-chain isoform β to α indicative of diseased states; thus, this model system captures some molecular aspects of diabetic cardiomyopathy. Moreover, thiazolidinedione diabetic drug treatment improved electrical excitabilities and exhibited anti-apoptotic effects.     

低氧无血清对乳鼠心肌细胞皮肤桥蛋白表达的影响

 目的 在体外用低氧无血清条件模拟缺血心肌微环境,探讨心肌细胞皮肤桥蛋白(DPT)表达的变化。方法 以低氧无血清处理乳鼠心肌细胞0 、6 、12 和24 h,用实时反转录聚合酶链式反应检测DPT mRNA的表达变化,用Western blot检测DPT的蛋白表达变化。用酶联免疫吸附实验（ELISA）证实低氧无血清处理乳鼠心肌细胞24 h DPT蛋白的表达变化。结果 与0 h组相比,低氧无血清处理心肌细胞6 、12 、24 h DPT的mRNA和蛋白水平均显著升高（p<0.05）。ELISA的方法也检测到低氧无血清处理心肌细胞24 h DPT的表达水平高于正常对照组（p<0.05）。结论 低氧无血清可促进乳鼠心肌细胞DPT的表达,DPT可能在缺血缺氧引起的心室重构中发挥一定的作用。