丙二醛通过抑制Nrf2/ARE促进肾小球系膜细胞凋亡

目的探索丙二醛(MDA)对糖尿病肾病的影响机制。方法用终浓度为0、1、5、10和50μmol/L的MDA处理肾小球系膜细胞(GMC),MTT法检测细胞活性,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot法检测Nrf2,HO-1和γGCL表达。结果 MDA剂量依赖的抑制肾小球系膜细胞的活性。MDA浓度为5μmol/L可诱导细胞内大量活性氧(ROS)产生(P0.05),抗氧化剂t BHQ可缓解MDA诱导的细胞活性的下降。MDA抑制了抗氧化反应原件(ARE)HO-1和γGCL的表达,以及Nrf2的表达水平(P0.05)。结论 MDA可通过抑制Nrf2/ARE来调控ROS生成,抑制肾小球系膜细胞的活性。     

人N端脂多糖结合蛋白基因在sf21昆虫细胞中的表达

目的 表达重组人N端脂多糖结合蛋白（truncated lipopolysaccharide binding proten,tIBP）。方法 通过病毒鉴定、SDS-PAGE、western blot、毛细管电泳、体外结合实验、细胞活性实验对重组病毒及重组蛋白tLBP的分子量、纯度和生物学活性进行分析。结果 重组病毒空斑分析确定MOI(multiplicity of infection)为8～10,SDS-PAGE显示感染时间65～72h为最佳表达分析;凝胶扫描显示特异表达蛋白占总产物的9.8%,纯化蛋白的分子量约27000u,纯度达95%以上;毛细管电泳显示表达产物呈单一峰型;Lowry法测定约1L上清液可获9mg纯化蛋白;Western blot间接显示表达产物反应带与预期值相符;酶联体外结合实验证实该蛋白可特异结合LPS。应用U937细胞,经LPS(1ng/mL）刺激与LPS（1mg/mL）刺激加纯化蛋白细胞中获得高效表达,并观察到它在体外具有结合或中和内毒素的活性作用。     

阿托伐他汀对高糖高脂环境下人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞相互作用的影响

 目的 探讨高糖高脂环境下人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞间的相互作用及阿托伐他汀对内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响。方法人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞共培养和人肾小球系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、BN52021组、阿托伐他汀组。ELISA法检测细胞上清液纤维联接蛋白（Fn）、血小板活化因子（PAF）含量,实时荧光定量检测系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R）mRNA表达。结果 (1)高糖高脂条件下,共培养和单培养Fn、PAF升高（P <0.05）;高糖高脂条件下,共培养Fn、PAF较单培养升高（P <0.05）,BN52021和阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的Fn升高（P <0.05）,阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的PAF升高（P <0.05）;（2）高糖高脂可上调系膜细胞PAF-R mRNA表达（P <0.05）,阿托伐他汀可显著抑制PAF-R mRNA表达上调（P<0.05）。结论 (1) 高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用。(2)阿托伐他汀可影响高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞的相互作用。     

脂氧素A4拮抗肿瘤坏死因子α对系膜细胞Jak1/STAT3途径的活化

目的：验证脂氧素A4(LXA4) 是否抑制肿瘤坏死因子α(TNFα) 所致的大鼠肾小球系膜细胞的增殖，并探讨其作用中信号转导的分子机制。 方法： 对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4 预刺激，再加入TNFα共同孵育，或单用TNFα刺激系膜细胞。用MTT渗入法检测细胞的增殖。用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）检测信号转导子和转录激活子-3（STAT3）的活性。用RT-PCR法检测细胞周期素E的mRNA表达。用Western blotting法检测细胞周期素E的蛋白表达量。结果： LXA4呈剂量依赖性地抑制TNFα诱导的肾小球系膜细胞的增殖、STAT3结合活性增加、细胞周期素E mRNA表达与蛋白合成的亢进。结论： LXA4能够抑制TNFα所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制可能是阻断Jak1/STAT3信号转导途径。     

肾小球系膜细胞与单核细胞趋化蛋白-1的关系

肾小球系膜细胞是最活跃的细胞固有成分,单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）是一种对单核细胞具有特异趋化功能的细胞因子,系膜细胞可表达MCP-1及其特异性受体,两者相互作用对多种肾小球病理生理过程发挥重要影响。本文简要地叙述了肾小球系膜细胞及MCP-1的生物学作用,重点分析介绍影响系膜细胞MCP-1表达的因素以及干预治疗对MCP-1表达的影响。     

NF-kB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拈抗肿瘤坏步E因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL）-β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4预刺激，再加入TNF-α共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β,IL-6蛋白表达量；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA)测定核因子-kB(NF-KB)的DNA结合活性。结果发现，LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达，抑制NF-kB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-kB的DNA结合活性，拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

五味子多糖对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞外基质FN和COLⅠ表达的影响

目的：探讨五味子多糖（SCP）对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞基质（ECM）表达的影响。方法：体外培养人肾小球系膜细胞，采用4 ng/ml TGF-β1诱导人肾小球系膜细胞构建系膜增生性肾炎细胞模型，分为正常对照（Con）组、模型（TGF-β1）组、SCP低、中、高浓度（SCP-L、SCP-M、SCP-H）组，MTT检测细胞增殖活性，ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量，qRT-PCR和Western blot分析纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）表达，Western blot评估TLR4/NF-κB信号传导途径关键蛋白表达。结果：与Con组相比，TGF-β1组细胞增殖活性明显升高，IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量明显升高，FN、COLⅠ、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子（MyD88）和磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)表达明显上调（P<0.05）；与TGF-β1组相比，不同浓度SCP干预均能够抑制细胞增殖活性，降低IL-6、IL-1β、TNF-α和M...     

高糖诱导人肾小球系膜细胞CTGF启动子去甲基化及基因表达

目的:观察高糖刺激和甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化水平和基因表达的影响.方法:用不同终浓度的5-aza-dCyd(0、1、2、5、10 μmol/L)刺激HMCs,于48h提取细胞基因组DNA、总RNA和蛋白质;用不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L、30 mmol/L)刺激细胞,于0、24、48、72 h收集细胞;应用甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞CTGF基因启动子甲基化状态,RT-PCR检测CTGFmRNA表达,Western blot检测 CTGF 蛋白表达.结果:不同浓度5-aza-dCyd处理HMCs 48 h后,0、1、2、5 μmol/L 5-azadcyd组CTGF基因启动子呈半甲基化状态,均有微量CTGFmRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义(均P＞0.05);10 μmol/L 5-aza-dCyd组甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,CTGF mRNA和蛋白表达均增加,与0 μmol/L组比较差异有统计学意义(P＜0.01).5 mmol/L葡萄糖组HMCs各时间点CTGF基因启动子均呈半甲基化状态,表达微量CTGFmRNA和蛋白质,差异无统计学意义(均P＞0.05);30 mmol/L葡萄糖组CTGF启动子在0 h呈半甲基化状态,甲基化条带较强;24 h甲基化条带减弱,48 h甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,24 h、48 h、72 h CTGF mRNA和蛋白质表达均增加,与5 mmol/L组相应时间点比较差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:高糖和甲基化抑制剂5-aza-dCyd均可诱导人肾小球系膜细胞CTGF基因启动子的去甲基化并增加CTGF的表达,提示DNA甲基化可能参与了人肾小球系膜细胞CTGF基因表达的调控.     

IL-13对LPS诱导人系膜细胞分泌IL-12的影响

目的: 探讨白细胞介素13（IL-13）对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的影响作用。方法: 用酶联免疫吸附（ELISA）法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测系膜细胞IL-12蛋白和L-12p40 mRNA表达。结果: LPS诱导系膜细胞的IL-12p40 mRNA表达及其蛋白分泌（P<0.01）。IL-13在1-100 μg/L浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12分泌及其mRNA表达（P<0.05或P<0.01）。结论: IL-13可能通过抑制LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，而调整了体内Th1/Th2细胞因子平衡。     

胰岛素对THP-1细胞脂蛋白脂酶 mRNA表达及细胞泡沫化的影响

目的 观察胰岛素在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人髓系白血病单核细胞株THP-1细胞泡沫化过程中的作用,并探讨其机理.方法 用不同浓度胰岛素及ox-LDL与THP-1细胞一起共同孵育,观察THP-1细胞脂蛋白脂酶(LPL) mRNA RT-PCR产物、非特异性脂酶染色THP-1细胞所得脂酶阳性细胞数、细胞大小变化、油红O染色所得含脂滴细胞数、细胞内胆固醇含量.结果 100 mU/L以上浓度胰岛素各组THP-1细胞LPL mRNA表达与ox-LDL对照组比较上调2倍;细胞周长、脂滴阳性细胞百分率及细胞内胆固醇含量均明显高于ox-LDL对照组(P＜0.05).结论 高浓度胰岛素在ox-LDL存在条件下有促进THP-1细胞向泡沫细胞转化的作用,其机理可能与细胞LPL mRNA表达上调有关.