谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞自身抗体联合检测早期诊断成人迟发性自身免疫性糖尿病

目的 探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)与胰岛细胞自身抗体(ICA)的联合检测,早期诊断成人迟发性自身免疫性糖尿病.方法 采用ELISA法对358例糖尿病患者的血清进行GADA与ICA的联合检测.将患者分为两组,A组为胰岛素依赖性(1型)糖尿病患者组,B组为2型糖尿病患者组,比较两组患者的检测结果.结果 1型糖尿病患者组GADA阳性率为52.34%,ICA阳性率为30.84%(P<0.005)明显高于2型糖尿病组(GADA阳性率为26.77%,ICA阳性率为13.39%).GADA与ICA联合检测,则1型糖尿病组的阳性率为69.56%,2型糖尿病组为24.62%.结论 GADA在1型糖尿病患者血清中有较高的阳性率,可作为1型糖尿病的免疫诊断指标,GADA与ICA的联合检测可提高1型糖尿病的检出率.对2型糖尿病而言,GADA、ICA各有一定的阳性率,其联合检测,可提高成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的及早筛出与治疗,并为临床及早应用胰岛素治疗,以保护残存的胰岛β细胞功能提供了依据.     

1型糖尿病一级亲属GADA、IAA与ICA联检的临床意义

目的：探讨联检1型糖尿病（DM1）一级亲属谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、胰岛素自身抗体（IAA）和胰岛细胞抗体（ICA）的临床意义。方法：采用ELISA测定血清GADA、IAA及ICA。结果：一级亲属GADA、IAA、ICA的检出率均显著高于正常对照组，自身抗体联检的阳性率显著高于单抗体或双抗体阳性率。结论：联检可以提高DM1高危人群筛查的阳性率。     

谷氨酸脱羧酶抗体与2型糖尿病口服耐药相关性研究

目的 探讨2型糖尿病口服降糖药耐药与血清谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）的相关性。方法 将72例2型糖尿病患者根据口服降糖药治疗效果分成口服耐药组（31例,男18例,女13例）和口服药有效组（41例,男17例,女24例）,检测两组患者血中GADA、胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素抗体（IAA）,空腹及餐后血糖和C肽水平,糖化血红蛋白及体重指数。结果 体重指数和C肽水平口服耐药组明显低于口服药有效组（p〈0．005）,糖化血红蛋白及血糖,口服耐药组明显高于口服药有效组（p〈0．001）,口服耐药组GADA检出率明显高于口服药有效组（P〈0．05）,而两组间ICA、IAA检出率的比较无显著差别（p〉0．05）。结论 GADA在2型糖尿病口服耐药人群检出率较高,提示2型糖尿病人在疾病发展到一定程度后．胰岛β细胞的功能损伤可能与免疫因素有关,口服降糖药耐药现象仅是其表现形式。     

血清GADA、ICA、IAA和IA-2A测定在糖尿病分型中的应用及诊断价值

本文分别对1型糖尿病（DM1）和2型糖尿病（DM2）及健康人检测了谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素抗体（IAA）、酪氨酸磷酸酶样蛋白分子抗体（IA-2A）,探讨糖尿病自身抗体对DM1的诊断和与DM2的鉴别价值,及时对糖尿病做出早期诊断及分型,对改善患者生存质量和预后十分重要。     

蛋白酪氨酸磷酸酶抗体在糖尿病分型诊断中的价值

糖尿病主要依据其病因学的不同而进行分型，其中1型糖尿病是一种免疫介导的疾病，患者血清中可检测到针对胰岛B细胞的自身抗体，是存在免疫损害的有力佐证。目前临床上主要以胰岛细胞抗体（ICA）、谷氨酸脱羟酶抗体（GADA）、胰岛素自身抗体（IAA）联合检测作为糖尿病分型辅助的诊断。     

1型糖尿病患者甲状腺自身抗体检测的临床意义

1型糖尿病为器官特异性自身免疫性疾病,常合并自身免疫性甲状腺疾病[1],本研究检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)和胰岛细胞抗体(ICA)、血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)及甲状腺功能,并探讨其临床意义.     

胰岛β细胞自身抗体及C肽检测对成人迟发型糖尿病诊断的意义

成人迟发型糖尿病（LADA）是新近发现的糖尿病的一个亚型。此类患者一般主张早期应用胰岛素治疗,因此对LADA患者的早期诊断尤显重要。LADA患者的血清中存在与胰岛B细胞有关的自身抗体,如谷氨酸脱羧酶抗体（GAD—Ab）、胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素自身抗体（nA）,一般将GAD—Ab或ICA阳性的成年起病的DM2诊断为LADA。本文通过检测GAD—Ab、ICA、IAA及C肽水平,以探讨其对LADA早期诊断的意义。     

糖尿病检测谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体的临床意义

探讨血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)检测对糖尿病(DM)的临床意义。对46例1型糖尿病(DM1)、78例2型糖尿病(DM2)和50名对照组应用增敏化学发光免疫分析法、RIA法检测其血清中GAD-Ab、ICA和IAA的阳性率并进行分组分析。结果表明DM1组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为67.39%、39.13%和23.91%,三者联合检测阳性率为91.30%,均显著高于DM2组(P<0.01)及对照组(P<0.01);DM2组GAD-Ab、ICA和IAA阳性率分别为8.97%、15.39%和10.26%,三者联合检测的阳性率为29.49%,也显著高于对照组(P<0.01)。结论是血清GAD-Ab、ICA和IAA的检测对DM的分型、指导临床用药以及判断预后具有重要的临床应用价值。     

儿童1型糖尿病外周血Foxp3+调节T细胞和细胞因子变化及相关分析

目的 探讨初发儿童1型糖尿病(T1DM)外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+ Treg)及相关细胞因子的表达水平与自身抗体和胰岛细胞功能的关系.方法 45例儿童T1DM(T1DM组)患儿根据有无并发酮症酸中毒(DKA)和是否出现自身抗体分为DKA组、非DKA组、自身抗体阳性组、自身抗体阴性组,30例正常健康儿童作为对照组.采用流式细胞术检测外周血Foxp3+ Treg百分率,ELISA法检测血清IL-18、IL-10的表达水平,免疫印迹法(IB)检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素瘤相关蛋白2自身抗体(IA-2A)和胰岛素自身抗体(IAA);电化学发光法(ECLIA)检测血清空腹C肽(FC-P)水平.结果 T1DM组外周血Foxp3+ Treg百分率、血清IL-10水平和FCP含量明显低于正常对照组(P＜0.01),而血清IL-18水平则显著高于正常对照组(P＜0.01);DKA组、自身抗体阳性组外周血Foxp3+ Treg百分率和FCP含量明显低于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),血清IL-18水平则显著高于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),IL-10在T1 DM各组间差异无统计学意义.T1DM组患者GADA、IA-2A和IAA的检出率明显高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,Foxp3+Treg百分率与IL-10、FC-P水平呈正相关,而与IL-18水平及自身抗体呈负相关;IL-18与自身抗体呈正相关,而与IL-10、FC-P呈负相关;IL-10水平与FC-P含量及胰岛自身抗体无明显相关性.结论 初发儿童1型糖尿病外周血Foxp3+ Treg百分率减低及相关细胞因子的表达水平失衡可能参与了儿童T1DM的发生和发展,并与自身抗体和胰岛细胞功能相关.     

胰岛素自身抗体检测研究进展

自身免疫糖尿病患者体内存在着多种糖尿病相关抗体，例如胰岛素自身抗体（IAA）、谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶2抗体（IA-2A）、锌转运体8抗体（ZnT8A）等。IAA为针对内源性胰岛素的自身抗体，是糖尿病相关抗体中唯一针对胰岛β细胞的一类特异性抗体，可出现在未应用过外源性胰岛素或应用时间不超过7～10d以及糖尿病前期的个体中，对于自身免疫糖尿病尤其是儿童1型糖尿病（T1DM）有着极其重要的预测价值。本文扼要介绍其近年来的研究进展。     

治疗性抗体的改造

市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。     

Calculation of monoclonal antibody affinity constants directly from antibody dilution curves

A method for estimating the affinity constants of monoclonal antibody directly from antibody dilution curves is described.     

A rapid method for the determination of antibody affinity

A rapid method for estimating antibody affinity is described. To perform the assay fixed amounts of radiolabeled antigen and antibody are mixed in different total reaction volumes. The fraction of antigen bound to antibody is measured in aliquots from each reaction volume by the ammonium sulfate precipitation technique. Affinity constants can be estimated from these data graphically or by means of a microcomputer. This method is much quicker and easier to perform than traditional techniques for estimating antibody affinity.     

Identification of HBsAg-specific antibodies from a mammalian cell displayed full-length human antibody library of healthy immunized donor

Hepatitis B immunoglobulin (HBIG) is important in the management of hepatitis B virus (HBV) infection. Aiming to develop recombinant monoclonal antibodies as an alternative to HBIG, we report the successful identification of HBV surface antigen (HBsAg)-specific antibodies from a full-length human antibody library displayed on mammalian cell surface. Using total RNA of peripheral blood mononuclear cells of a natively immunized donor as template, the antibody repertoire was amplified. Combining four-way ligation and the Flp recombinase-mediated integration (Flp-In) system, we constructed a mammalian cell-based, fully human, full-length antibody display library in which each cell displayed only one kind of antibody molecule. By screening the cell library using fluorescence-activated cell sorting (FACS), eight cell clones that displayed HBsAg-specific antibodies on cell surfaces were identified. DNA sequence analysis of the antibody genes revealed three unique antibodies. FACS data indicated that fluorescent strength of expression (FSE), fluorescent strength of binding (FSB) and relative binding ability (RBA) were all different among them. These results demonstrated that by using our antibody mammalian display and screening platform, we can successfully identify antigen-specific antibodies from an immunized full-length antibody library. Therefore, this platform is very useful for the development of therapeutic antibodies.     

免疫性抗体在不孕不育妇女诊治中的作用

目的探讨抗精子抗体（AsAb）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、抗心磷子抗体（ACAb）和抗卵巢抗体（AO-Ab）在不孕不育过程中的作用。方法采用ELISA法检测AsAb、EMAb、ACAb和AOAb。结果AsAb阳性率为29.7%,EMAb阳性率为16.3%,ACAb阳性率为15.2%,AOAb阳性率为14.1%。结论AsAb、EMAb、ACAb和AOAb和不孕不育密切相关,对女性不孕不育有一定的诊断价值。可以作为不孕不育症妇女常规检查的项目。     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.     

单克隆的抗-HBs在同系鼠体内诱导抗-HBs的观察

作者采用BALB/c鼠的抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)作为抗原,免疫同系BALB/c小鼠,使其在自身体内产生Ab_2,观察了由Ab_2诱导的Ab_3的消长情况。经测定其血清,免疫小鼠在第7天出现Ab_2,随后第9天、第19天出现Ab_2的显著增高。Ab_3的出现是在第9天,随后在第11天,第17天和第21天出现增高现象。Ab_2与Ab_3的量的变化,呈周期性消长。一般说来,当Ab_2增高时,Ab_3减低;若Ab_2降低,则Ab_3增高。实验过程中,还发现Ab_3能与外界进入体内的HBsAg结合。上述实验中出现的Ab_2和Ab_3之间的相互刺激和相互中和的现象,表明是小鼠体内自身的抗个体型抗体的调节作用的结果,因而出现了上述周期性的动态变化,支持体内存在着一个个体型——抗个体型免疫网络的理论,本文依据实验事实,认为传统的被动免疫方法,在一定条件下,也能诱导出主动免疫。     

微型双功能抗体抗CD3／抗CD20的构建和表达

目的：构建和表达抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并测定微型双功能抗体的生物学活性。方法：采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和分了排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果：DNA序列测定结果表明：抗CD3／抗CD20微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达1mg/ml以上,纯化产物中二聚体的比例达90％,具有与Jurkat(CD3^ 0和Daudi细胞（CD20^ ）结合的活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论：利用Diabody形式,首次成功地构建了抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并获得较高表达,表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。     

反复自然流产的免疫因素分析探讨

为分析探讨反复自然流产的免疫性因素，应用补体微量淋巴细胞毒实验方法检测女性反复自然流产的封闭抗体，用ELISA法检测女性反复自然流产的抗心磷脂抗体(ACA)、抗精子抗体(ASA)共752例。结果显示，封闭抗体与反复自然流产明显相关，抗心磷脂抗体与反复自然流产有一定关系，抗精子抗体与反复自然流产无明显相关。研究表明，封闭抗体、抗心磷脂抗体是造成反复自然流产的重要免疫因素。     

抗核抗体核型分布及核型与特异性抗体相关性分析

目的通过对ANA核型分布及核型与特异性抗体相关性分析,为临床对ANA和ANA谱检测结果判读提供参考。方法用间接免疫荧光法检测ANA,免疫印迹法检测ANA谱,对449例ANA或ANA谱阳性的结果进行核型和特异性抗体分析。结果 ANA核型分布以核颗粒型为主,占78.2%;核型与特异性抗体有一定的相关性,但同一种自身抗体可出现不同的荧光核型。结论 ANA和ANA谱同时检测能提高AID的检出率,有助于准确的判断特异性抗体,对AID的诊断、病情监测、预后判断有十分重要的作用。