β-葡萄糖醛酸苷酶基因转染的人肾癌细胞的生物学特性观察

目的：建立高表达β-葡萄糖醛酸苷酶(以下简称βG)基因的肾癌细胞模型，并观察转染细胞的生物学特性。方法：构建真核表达载体pcDNA3．1—βG，并利用阳离子脂质体介导将其转人人肾癌细胞株GRC—1中。用mRNA打点杂交和Westemblot，鉴定其转录与表达水平，并通过光镜、电镜及细胞增殖周期检测等方法，观察转染细胞的生物学特性。结果：在mRNA与蛋白水平证实，转染细胞内有βG基因的高表达。透射电镜观察，转染细胞中的溶酶体、内质网丰富，细胞微绒毛及突起增多，但转染前后肾癌细胞GRC—1的周期及生长情况无显著性差别。结论：应用脂质体介导法，将βG基因导人人肾癌GRC—1细胞后，获得生物学特性稳定βG基因高表达的肾癌细胞模型，为进一步研究奠定了基础。     

胸腺嘧啶核苷激酶/丙氧鸟苷自杀基因系统旁观者效应机制的探讨

目的 探讨用单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶／丙氧鸟苷系统进行基因治疗时发生的旁观才效应机制。方法 构建表达ＨＳＶ－ＴＫ和β－半乳糖苷酶基因的重级逆转录病毒载体,将其分别直接导入胰腺癌细胞,细胞计数检测ＧＣＶ对ＨＳＶ－ＴＫ基因转化细胞的抑制作用;以Ｌａｃ Ｚ基因转化细胞为旁观细胞,唑蓝法检测旁观者效应,并通过上清移换实验１维拉帕米抑制实验及电镜观察超微结构。结果 ＧＣＶ对ＨＳＶ－ＴＫ基因转化细胞的生长     

重组PAI—2基因抑制纤维肉瘤细胞侵袭转移的超 …

目的：研究重组ＰＡＩ－２（纤溶酶原激活剂抑制剂－２）基因在裸鼠皮纤维肉瘤移植瘤细胞中的表达及其对超微结构的影响。方法：应用常规诊断电镜和免疫电镜技术，观察肿瘤细胞的结构变化，定位研究ＰＡＩ－２蛋白的表达。结果：重组ＰＡＩ－２基因转染的纤维肉瘤细胞，其移植瘤具有ＰＡＩ－２蛋白的表达，以活性形式存在于细胞表面，同时细胞超微结构的恶性特征减弱，分化趋向成熟，侵袭转移能力下降。结论：ＰＡＩ－２基因的表达在     

胆管癌中长链非编码RNASOX2OT表达水平与调控作用及临床相关性分析

目的分析lncRNA-SOX2OT在胆管癌组织和细胞中的相对表达水平,探讨RNA对细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法选取对数生长期胆管癌细胞并利用Lipofectamine 2000转染干扰RNA(si-SOX2OT、si-NC)。采用qRT-PCR法检测lncRNA-SOX2OT表达量,MTT实验观察培养24、48、72、96 h细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞迁移、侵袭能力。结果胆管癌与癌旁组织相比,其SOX2OT表达明显升高(P0.05),且SOX2OT上调表达与患者淋巴结侵犯(P=0.031)、TNM分期(P=0.007)、术后复发(P=0.002)有相关性。胆管癌细胞(RBE,QBC939)与正常胆管细胞(HIBEC)相比,其SOX2OT高表达,且si-SOX2OT转染可有效降低胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 lncRNA-SOX2OT在胆管癌中高表达,并可有效促进癌细胞的增殖、迁移以及侵袭,且SOX2OT有望成为胆管癌的潜在生物学标志物。     

重组PAI-2基因抑制纤维肉瘤细胞侵袭转移的超微结构研究

目的：研究重组ＰＡＩ－２（纤溶酶原激活剂抑制剂－２）基因在裸鼠皮下纤维肉瘤移植瘤细胞中的表达及其对超微结构的影响。方法：应用常规诊断电镜和免疫电镜技术，观察肿瘤细胞的结构变化，定位研究ＰＡＩ－２蛋白的表达。结果：重组ＰＡＩ－２基因转染的纤维肉瘤细胞，其移植瘤具有ＰＡＩ－２蛋白的表达，以活性形式存在于细胞表面，同时细胞超微结构的恶性特征减弱，分化趋向成熟，侵袭转移能力下降。结论：ＰＡＩ－２基因的表达在肿瘤细胞侵袭转移机制中起负调控作用     

PAI—1在TGF—β1基因和反义TGF—β1基因转染人肝癌？…

目的：通过对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）转染ＴＧＦ－β１基因及反义ＴＧＦ－β１基因,观察该细胞ＰＡＩ－１表达的变化。方法：采用电穿孔法进行基因转染,并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法另以鉴定后,分别应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ观察该细胞表达ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的变化。结果：过表达的ＴＧＦ－β１细胞克隆ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达均高于对照组,而低表达ＴＧＦ     

腺病毒介导的双自杀基因对胆管癌细胞的体外杀伤作用

目的：研究CD、HSV-tk融合基因对胆管癌细胞QBC939生长的抑制作用。 方法： 构建了含CD、HSV-tk融合基因的重组腺病毒载体，体外转染胆管癌细胞株QBC939，并与单基因转染对照，观察其对胆管癌细胞的杀瘤活性。 结果： CD、HSV-tk融合基因经体外转染可在人胆管癌细胞QBC939中高效表达。与单一自杀基因转染组对照，双基因组对前体药物的敏感性增强，表现出更强的抗肿瘤作用，具有更明显的旁观者效应（BSE）。 结论： CD/HSV-tk双自杀基因对胆管癌细胞具有更强的抗肿瘤作用，是一种较单自杀基因治疗更合理的研究方向。     

CD147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究

目的了解CD147与胆管癌侵袭转移的关系。方法通过RT-PCR和免疫荧光法了解CD147在胆管癌细胞株QBC939中的表达,然后构建反义CD147分子基因片断的重组腺病毒抑制胆管癌细胞株CD147分子的表达,观察其基质金属酶MMPs改变及生长情况。结果 CD147分子在胆管癌细胞株QBC939中表达,表明反义CD147通过抑制肿瘤细胞的CD147分子的表达,主要减少了肿瘤组织中基质金属酶MMP-2,而不是MMP-9的表达,导致肿瘤的生长抑制。结论 CD147分子的高表达能够促进胆管癌的肿瘤生长,并且CD147促进肿瘤生长的能力可能与MMP-2的高表达密切相关。     

反义人端粒酶RNA对胃癌细胞生长的抑制效应

目的 探讨反义人端粒酶ＲＮＡ（ｈＴＲ）对胃癌细胞的生长抑制作用。方法 将反义ｈＴＲ真核表达载体经脂质体介导转染入胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１,体外培养及接种裸鼠观察其基因转染细胞的细胞周期、超微结构变化、生长速率及致瘤性。结果 反义ｈＴＲ在潮霉素筛选的阳性克隆中稳定表达,正义ｈＴＲ表达下调,并出现凋亡改变。基因转染细胞体外传代培养的生长速率大多减慢,在裸鼠皮下的致瘤性明显降低。荷瘤鼠存活时间延长。结论     

外源表达EGR-1对肝癌及食管癌细胞生长的影响

目的：探讨早期生长反应基因－１（ＥＧＲ－１）对肝癌和食管癌细胞的生长是否有抑制作用。方法：用脂质体技术将ＥＧＲ－１真核表达载体转染于无ＥＧＲ－１转录，表达的肝癌及食管癌细胞株中，观察外源高表达的ＥＧＲ－１对二癌细胞生长，细胞周期、克隆形成及致瘤性的影响，以空白载体为对照。结果：转染ＥＧＲ－１的ＨＨＣＣ细胞株（肝癌）和ＥＣａ１０９细胞株（食管癌）的生长速率较对照组明显减慢，Ｓ期细胞比例分别减少４５．     

早期胃腺癌与胃粘膜上皮细胞内β—葡糖醛酸酶免疫电镜比较研究

目的：早期胃癌与胃粘膜上皮细胞内β－葡糖醛酸酶免疫电镜定位，定量，并进行比较，探索β－Ｇ在两者之间的差异。方法：采用低温包埋、紫外线照射，胶体金标记，免疫电镜技术，结果；β－Ｇ定位于早期胃癌细胞与胃粘膜上皮细胞中的溶解体与内质网内，早期胃癌细胞中β－Ｇ量多于胃粘膜上皮细胞。结论：结果提示β－Ｇ的增多可能与癌细胞旺盛的机能活动和异常的形态结构有关。     

转化生长因子β1 mRNA在实验性肝癌间质差异形成中的 …

目的：应用原位分子杂交技术观察了ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ在实验性大鼠胆管细胞性肝癌（ＣＣ）和肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中的表达,探讨肝癌间质差异形成的可能机制。方法：大鼠肝癌组织经ＨＥ和Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ染色确认ＣＣ或ＨＣＣ,用ＴＧＦ－β１反应ＲＮＡ探针检测ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达,同时以ＴＧＦ－β１正链,β－ｍＲＮＡ呈弱到中等强度的表达,少数ＣＣ的间质细胞也有ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达。结论：由于Ｔ     

miR-24在胆管癌组织和细胞系HCCC-9810中的表达

目的探讨microRNA-24(miR-24)在胆管癌患者组织中的表达情况,并分析其表达预后价值及生物学功能。方法收集124例胆管癌患者的癌组织和癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR检测miR-24含量,使用χ~2检验对miR-24和胆管癌临床病理学特征的关系进行分析,并通过Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估miR-24在胆管癌中的预后价值。以人胆管癌细胞系HCCC-9810为研究对象,通过转染pEGFP-C1-miR-24融合表达载体,分析miR-24对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-24在胆管癌组织中的表达较癌旁组织上调(P0.05),且与患者淋巴结转移、肿瘤细胞分化及TNM分期显著相关。miR-24高表达的胆管癌患者的整体生存率显著低于低表达患者(P0.001),是胆管癌的独立预后因子(HR=5.518, 95%CI=2.394～12.717,P0.001)。此外,胆管癌细胞中上调的miR-24能够显著地促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力。结论胆管癌中表达水平上调的miR-24与患者不良预后显著相关,并参与了胆管癌的进展过程,可能成为胆管癌治疗的新靶点。     

MiR-21通过抑制RECK表达促进了胆管癌细胞QBC939的侵袭

 目的 研究miR-21在胆管癌组织及细胞系中的表达特征及其在胆管癌发生过程中的功能。方法 利用Real-Time PCR与Northern Blot方法分别分析miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中的表达水平;选择特异抑制剂Anti-miR-21 敲低QBC939细胞内源性miR-21的表达,研究其对细胞增殖及凋亡表型的影响;利用萤光素酶双报告基因以及流式细胞仪分析方法筛选并鉴定miR-21的靶基因;根据靶基因的功能研究miR-21对胆管癌细胞系QBC939体外侵袭能力的影响。结果 表达分析显示, miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中表达均明显上调;细胞表型分析显示,QBC939转染Anti-miR-21后,细胞增殖被抑制,同时凋亡细胞增加明显;靶基因分析显示,miR-21可以抑制RECK的表达,并可以通过两者之间的相互作用,参与QBC939细胞系的体外侵袭调控。结论 miR-21在胆管癌组织及细胞系中表达上调,促进了胆管癌细胞增殖并抑制细胞凋亡;RECK是miR-21在胆管癌细胞中的靶基因,通过抑制其表达,miR-21增强了胆管癌细胞的侵袭能力。     

TGF—β胎盘定位及与妊高征发病关系

为确定胎盘ＴＧＦ－β的分布，探讨ＰＩＨ胎盘ＴＧＦ－β表达有无异常，用免疫组织化学染色观察了１０例早孕绒毛，１４例正常孕妇、４１例ＰＩＨ胎盘ＴＧＦ－β的分布。发现早孕绒毛滋养层细胞ＴＧＦ－β染色强阳性；晚孕期染色较早孕期显著减弱；绒毛外滋养层细胞ＴＧＦ－β阳性。ＰＩＨ患者绒毛滋养层细胞ＴＧＦ－β表达降低，且与病情程度相关。率先表明滋养层细胞存在ＴＧＦ－β的自然分泌与旁分泌，ＴＧＦ－β表达受抑可能与Ｐ     

奥曲肽通过G0/G1期阻滞抑制胆管癌细胞的增殖

为观察四种胆管癌细胞系（RBE、NEC、QBC939、SSP－25）是否能够表达生长抑素受体（SSTR），以及八肽生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对胆管癌细胞的抑制作用，采用逆转录－聚合酶链反应方法检测四种细胞系2，3型SSTR的表达；四氮唑蓝法检测不同浓度OCT（10、1、0.1、0.01和0.001mg/L)在体外对胆管癌细胞增殖的影响。并应用碘化丙啶（PI）及Annexin V-PI染色后于流式细胞仪检测经OCT作用后胆管癌细胞周期和凋亡情况。结果显示四种胆管癌细胞系均可以表达SSTR2 mRNA，但未检测到SSTR3 mRNA的表达。体外10、1和0.1mg/L OCT明显抑制四种胆管癌细胞的增殖（与各自对照组相比，P＜0.05)；1mg/L OCT作用48h后流式细胞分析表现为G0／G1期细胞增加，S期和G2／M细胞减少（与各自对照组相比，P＜0.01)，但没有明显凋亡发生。从而证明OCT抑制胆管癌细胞增殖的机制主要与引起细胞周期阻滞有关，而不是促进凋亡。对于表达生长抑素受体的胆管癌，OCT有望用于临床辅助治疗。     

人肝细胞毛细胆管表达IL-2R_α的研究及意义

目的 了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα,观察其表达特异性和灵敏度.方法 对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜3种方法 观察其表达.结果 免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞质、细胞核不被IL-2Rα标记.酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积.结论 人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,其特异性和灵敏度均优于CEA(多克隆抗体).     

外源性野生型p53基因对人肺腺肺癌细胞系GLC—82的生物学效应

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因对人肺癌细胞系ＧＬＣ－８２的生物学作用。方法：将含有野生型ｐ５３基因的ｐＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体，通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染ＧＬＣ－８２细胞，用流式细胞仪，电镜及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，观察野生型ｐ５３基因对ＧＬＣ－８２细胞的生物学效应。结果：电镜观察可见，转染野生型ｐ５３基因，可使ＧＬＣ－８２细胞出现的一些病理现象，如胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀；流式细胞仪     

识别肝癌抗原在TCRVβ7亚家族克隆转基因后的生物学作用

目的:研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。方法：用RT－PCR的方法扩增出TCRVβ7基因,克隆到表达载体pLXSN上,用脂质体转染的方法,将重组载体导入淋巴细胞,然后淋巴细胞作用于肝癌细胞,淋巴细胞用流式细胞仪测表型,肝癌细胞作超微结构分析。结果：具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多,肝癌细胞出现凋亡。结论：TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。     

中国人β神经生长因子基因的分子克隆、序列分析及其在哺乳动物细胞中的分泌表达

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出短体前β神经生长因子（ｐｒｅ－ｐｒｏ－β－ＮＧＦ）编码基因。将所得基因片段重组于Ｍ１３噬菌体载体，筛选得到含中国人ｐｒｅｐｒｏ－β－ＮＧＦ基因的克隆。采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的仅有一个碱基不同。将该基因亚克隆于真核表达载体ｐＥＶ１，经转染哺乳动物细胞ＢＨＫ后，在培养上清中检测到了成熟型β－ＮＧＦ。