AGEs对肾小管上皮细胞转分化、1型胶原合成及smad信号通路的影响

目的:观察终末期糖基化终产物(AGEs)对正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E ）转分化、collagenⅠ合成及Smads信号通路的影响。 方法:应用自制的AGEs（AGE-BSA）刺激NRK52E细胞，采用免疫细胞化学方法检测pmad2/3核表达情况；ELISA方法检测细胞培养上清TGF-β₁的浓度；RT-PCR检测TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；Western印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、E-钙粘着糖蛋白（cadherin）和1型胶原（collagenⅠ）蛋白的表达。 结果: AGE-BSA刺激15 min后pSmad2/3核表达明显增加，于30 min（68%）和24 h（76%）出现两个高峰，与刺激前及时间匹配的BSA对照组比较均有显著差异（P<0.05）；AGE-BSA以时间依赖方式上调TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；NRK52E细胞α-SMA和collagenⅠ蛋白表达高于对照组（P<0.01），E-cadherin蛋白表达低于对照组（P<0.01），细胞上清液TGF-β₁的浓度高于对照组（P<0.01）。 结论:AGEs可诱导肾小管上皮细胞Smads信号通路活化，促进肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质collagenⅠ的合成。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。     

内外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞胶原合成的比较研究

目的：探讨内外源性结缔组织生长因子（CTGF）对人肾小管上皮细胞（HK2）胶原合成的作用。方法：将HK2细胞分为5组：（1）对照组；（2）TGF-β₁ 5 μg/L刺激组；（3）CTGF 5 μg/L刺激组；（4）TGF-β₁ 5 μg/L刺激＋CTGF反义ODN 3 mmol/L干预组；（5）TGF-β₁ 5 μg/L刺激＋CTGF正义ODN 3 mmol/L干预组。采用 RT-PCR 和Western blotting检测胶原Iα₁（Col Iα₁）、胶原IVα₁（Col IVα₁） mRNA水平和蛋白水平表达。 结果：TGF-β₁刺激可使HK2细胞Col Iα₁、Col IVα₁ mRNA和蛋白表达显著升高，而CTGF刺激则无此作用，CTGF反义ODN可拮抗TGF-β₁刺激引起Col Iα₁、Col IVα₁ mRNA和蛋白表达升高，正义ODN无拮抗作用。 结论：内源性CTGF介导了TGF-β₁刺激引起的HK2细胞胶原合成，外源性CTGF对HK2细胞胶原合成无影响。     

JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的：观察Janus激酶/信号转导和转录活化因子(JAK/STAT) 信号的激活对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）,分别给予高糖和JAK拮抗剂AG490干预,采用免疫沉淀和Western印迹检测JAK2的磷酸化;Western印迹检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1 (phospho-STAT1, p-STAT1) 和p-STAT3的水平; 酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子β₁(TGF-β₁)和I型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β₁mRNA表达。结果:与低糖对照组比较,高糖培养的HKCs中α-SMA 的水平及p-JAK2 、p-STAT1 和p-STAT3 比例明显上调；E-cadherin表达明显下调；TGF-β₁ mRNA 表达增加；细胞培养上清液中TGF-β₁、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制JAK2磷酸化、下调p－STAT1 和p-STAT3的同时,明显抑制高糖刺激HKCs中α-SMA表达的升高，减轻E-cadherin表达下降程度；降低TGF-β₁ mRNA 表达及TGF-β₁、Ⅰ型胶原的分泌。结论:JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的HKCs转分化，并刺激TGF-β₁和细胞外基质的分泌。     

心肌细胞结缔组织生长因子的表达及TGF-β1对其表达的影响

目的： 研究纯化的心肌细胞中结缔组织生长因子（CTGF）基因及蛋白的表达，并探讨转化生长因子β1（TGF-β₁）对其表达的影响。方法: 分离培养乳鼠心肌细胞，48 h后用流式分选方法（FACS）分选纯化心肌细胞，纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为对照组（空白纯化心肌细胞组）和TGF-β₁刺激组，用RT-PCR方法测定两组细胞中TGF-β₁、CTGF、纤维连接蛋白（FN） mRNA的含量， 用Western blotting法检测两组细胞胞浆蛋白中CTGF、FN含量。结果: 心肌细胞中有较低水平的CTGF表达，在予以 TGF-β₁刺激后细胞内CTGF mRNA与蛋白含量分别提高 2.49 倍(P<0.01) 和3.63 倍（P<0.01），FN mRNA与蛋白含量分别提高 1倍(P<0.01)和4.18倍（P<0.01），而TGF-β1mRNA水平减少34%（P<0.01）。结论: 纯化的心肌细胞有CTGF的基础表达，并且TGF-β1可以明显上调其表达，提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化过程。     

人参皂苷Rb1对白消安诱导人脐静脉内皮细胞表达PAI-1、TF和TGF-β1的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用机制。方法:体外培养HUVECs，分别用白消安（BU）和人参皂苷Rb1干预，以RT-PCR、实时荧光定量PCR以及ELISA方法检测其PAI-1、TF和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达。结果:60 mg/L BU使HUVECs PAI-1、TF和TGF-β₁ 蛋白水平明显增高及mRNA表达显著增强，80 mg/L人参皂苷Rb1则可明显抑制BU对HUVECs的这种作用。结论:BU可能通过激活TGF-β₁信号转导途径而上调PAI-1及TF的表达，增强HUVECs促凝活性；人参皂苷Rb1则可能通过抑制这一途径降低PAI-1及TF表达，保护HUVECs，纠正其高凝、低纤溶活性的异常状态。     

雌二醇通过调节上皮细胞系的旁分泌促进前列腺间质细胞增殖和分化

目的： 研究雌二醇通过调节上皮细胞的旁分泌对前列腺间质细胞增殖、分化和胞外基质蓄积的作用。方法： 雌二醇处理前列腺增生上皮细胞系BPH-1，用收集的条件培养液（CM）培养人前列腺间质细胞，MTT法检测细胞的增殖；用实时定量RT-PCR检测细胞中smoothelin、纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA的表达水平；用Western blotting检测细胞平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）的表达；用放射性免疫法和ELISA分别检测Ⅳ型胶原、纤维黏连蛋白和TGF-β₁的蛋白水平。结果： 雌二醇能够上调BPH-1细胞中TGF-β₁的表达和分泌；经雌二醇刺激的BPH-1 CM能促进间质细胞的增殖；雌二醇刺激的BPH-1 CM对平滑肌细胞特异蛋白（smoothelin和SM-MHC）表达的促进作用较未经雌二醇刺激者更加明显；TGF-β₁中和抗体可以抑制BPH-1 CM对间质细胞中Ⅳ型胶原和SM-MHC的促表达作用。结论： BPH-1 可通过分泌TGF-β₁促进间质细胞的分化和胞外基质的蓄积；雌二醇可通过上调BPH-1 TGF-β₁的分泌进一步促进间质细胞的分化；雌二醇还可通过调节BPH-1分泌的某种活性因子促进间质细胞的增殖。     

前列腺素E2抑制转化生长因子-β1诱导的人胚肺成纤维细胞转分化及胶原合成

目的：研究前列腺素E₂（PGE₂）对转化生长因子-β₁（TGF-β₁） 诱导人胚肺成纤维细胞（HLF）转分化及促胶原(COL)合成作用的干预。方法： HLF 细胞生长至融合后分为 ①对照组、②TGF-β₁组、③TGF-β₁+PGE₂组、④TGF-β₁+吲哚美辛组，给予干预24 h后用细胞免疫荧光及Western blotting法观察发生转分化为肌成纤维细胞的标志蛋白 α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的表达，用RT-PCR法检测结缔组织生长因子（CTGF）mRNA和Ⅰ型胶原（COLⅠ）mRNA的水平，用免疫细胞化学法检测CTGF蛋白表达，比色法检测培养上清中羟脯氨酸含量。结果: TGF-β₁ 可将HLF转分化为 α-SMA 阳性表达的肌成纤维细胞，PGE₂则能抑制这种转分化作用；PGE₂ 可显著减低TGF-β₁ 致肌成纤维细胞、CTGFmRNA与蛋白水平（P<0.05）和COLⅠmRNA 水平升高（P<0.05）； 吲哚美辛升高TGF-β₁ 致HLF肌成纤维细胞CTGF与COLⅠ的表达； 放线菌酮预处理肌成纤维细胞3 h后再加入TGF-β₁＋PGE₂，其COLⅠmRNA 水平明显低于TGF-β₁ 处理组水平（P<0.05）。结论: PGE₂可抑制TGF-β₁ 对成纤维细胞的转分化及促胶原合成作用, 且可通过依赖CTGF和非依赖2种方式下调COLⅠ的转录。     

糖尿病大鼠肾皮质细胞表型转化的探讨

目的： 探讨糖尿病大鼠肾皮质中波形蛋白（vimentin）、结蛋白（desmin）和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的变化规律及其相互关系。 方法： 建立STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型；用RT-PCR法检测造模成功后第3、7、14、30、60和90 d糖尿病大鼠肾皮质中vimentin、desmin和TGF-β₁ mRNA的表达水平。结果： ①糖尿病大鼠肾皮质TGF-β₁和vimentin mRNA的表达分别从模型建立后第7 d和第14 d起逐渐增多，desmin mRNA的表达从第14 d起逐渐减少，糖尿病大鼠和对照组大鼠相比差异显著（P<0.05,P<0.01）。②糖尿病大鼠肾皮质TGF-β₁和vimentin 的mRNA表达呈显著正相关，TGF-β₁和desmin的mRNA表达却呈显著负相关,desmin和vimentin 的mRNA表达也呈显著负相关。 结论： 糖尿病大鼠TGF-β₁在肾皮质局部表达增多可能促进肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化。     

银杏叶提取物对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制

目的：研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba, EGB)对转化生长因子β₁(transforming growth factor-β₁ TGF-β₁)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human tubular epithelial cells)转分化的影响及其机制。方法:复苏并传代培养HK2细胞，应用10 μg/L TGF-β₁诱导HK2细胞向间充质的转分化，给予EGB干预。应用Western印记法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α- 平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、NADPH氧化酶p67phox以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）的表达，检测细胞培养液上清中丙二醛（malondialdehyde, MDA）的含量。结果:EGB显著抑制TGF-β₁诱导的E-cadherin下调(P＜0.05)和α-SMA上调(P＜0.05)； EGB显著抑制TGF-β₁诱导的p67phox表达增加(P＜0.05)，显著抑制TGF-β₁诱导的SOD表达降低(P＜0.05);同时，TGF-β₁显著促进了MDA的产生(P＜0.05),EGB可以部分抑制TGF-β₁刺激的MDA浓度的升高(P＜0.05)。结论:EGB显著抑制TGF-β₁诱导的HK2细胞转分化，其机制可能是EGB 抑制了TGF-β₁诱导的p67phox上调并上调SOD的表达。     

上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的： 探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Smad7对TGF-β₁作用下大鼠腹膜间皮细胞Smad2表达的影响。 方法： 通过脂质体介导的方法，将表达Smad7的重组质粒（PCDNA3-Smad7）转染培养的大鼠腹膜间皮细胞，分别培养于不同浓度TGF-β₁培养液(0、1.25、2.5和10 μg/L)，用RT-PCR及Western blotting的方法检测不同时间（0、5、15、30、60和120 min）Smad2、Smad7表达的水平。 结果： 正常间皮细胞Smad2 mRNA和蛋白在TGF-β₁刺激后5 min开始表达，呈时间依赖性，在30 min达到高峰，而后逐渐减弱；Smad7 mRNA和蛋白也在TGF-β₁刺激后5 min可见表达，但此后逐渐减弱，30 min达到最低，60 min又开始逐渐增强。Smad2 和Smad7 mRNA和蛋白，随TGF-β₁浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Smad7 mRNA和蛋白表达显著上调，并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β₁刺激下，Smad2 mRNA及蛋白的表达均低下，刺激0、5、15、30、60 和120 min后Smad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%（P<0.05）。Smad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%（P<0.05）。 结论： 上调表达抑制性信号蛋白Smad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Smad2的表达和活性，提示Smad7可能对TGF-β₁起反向调控作用。     

Decorin 基因转染抑制高糖培养的大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA表达

目的： 观察核心蛋白聚糖Ⅱ（DCN）基因转染对高糖培养的大鼠肾系膜细胞（RMCs）细胞外基质（ECM）mRNA表达的影响。方法： 用已构建的AD-DCN腺病毒感染高糖环境培养的大鼠肾系膜细胞，采用半定量RT-PCR测定decorin、转化生长因子β₁（TGF-β₁）、纤维粘连蛋白（fibronectin）和IV型胶原（collagen IV） mRNA水平。结果： 高糖培养的RMCs感染AD-DCN后，DCN mRNA水平显著增高，24 h至第7 d，该组DCN mRNA水平始终显著高于高糖组及AD－LacZ感染组(P<0.05)，decorin mRNA水平增高后表现出对TGF-β₁ mRNA 水平的抑制作用，在mRNA水平，AD-DCN感染的RMCs细胞外基质fibronectin和collagen IV随TGF-β₁ mRNA水平下降而下降。结论： DCN重组腺病毒感染大鼠肾系膜细胞后能高效表达目的基因decorin并拮抗 TGF-β₁ 的生物活性，其下调ECM成分 mRNA水平的作用与使用TGF-β抗体的效果相似。     

白细胞介素1β刺激对脑微血管内皮细胞COX活性、mRNA表达和PGE2释放的影响

目的： 探讨白细胞介素1β（IL-1β）刺激不同时间对大鼠脑微血管内皮细胞（rCMEC）的环氧合酶（COX）活性及其mRNA表达和PGE₂释放的影响。 方法: 建立rCMEC培养，进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。细胞长至融合状态后加入IL-1β（30 μg/L），分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24 h，ELISA测定细胞内COX-1、COX-2的活性及细胞外液PGE₂含量，荧光实时定量PCR检测COX-1、COX-2的mRNA表达量，扩增产物进行熔解曲线图及琼脂糖电泳分析，并与未刺激的rCMEC作比较。 结果: ①Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90％以上的培养细胞呈阳性，确认为rCMEC。②IL-1β刺激4 h时细胞培养液PGE₂含量已明显高于未刺激组（P<0.05）；12 h时PGE₂含量达到最大值（P<0.01）；24 h时PGE₂含量有所回降，但与未刺激组比较仍有显著差异（P<0.05）。③IL-1β刺激不同时间rCMEC内COX-1活性与未刺激组相比无统计学差异（P>0.05）；COX-2活性在第8 h时已明显高于未刺激组（P<0.05），12 h活性达峰值（P<0.01），24 h活性有所回降，但仍具显著差异（P<0.05）。④IL-1β刺激不同时间COX-1 mRNA表达与未刺激组比较无明显差异（P>0.05）；未刺激组在本实验条件下未检测到COX-2 mRNA表达，IL-1β刺激1h时可见COX-2 mRNA表达，4 h时COX-2 mRNA表达至峰值，而后开始回降，第12 h时已未见表达。熔解曲线图显示无非特异性扩增；琼脂糖电泳可见扩增基因与目的基因长度相符，结果与荧光定量PCR一致。 结论: IL-1β作用下，rCMEC释放的PGE₂持续增加并于12h达峰值，这一过程主要与COX-2 mRNA表达激活及COX-2活性增加有关。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的：探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制。方法: 将大鼠随机分成3组，正常对照组（n=6）、阿霉素肾病组（n=7）、罗格列酮治疗组（n=7），12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮，用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA（夹心法）检测肾组织NF-κB p65的活性，RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β₁ mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β₁蛋白表达，并进行相关分析。 结果: 与阿霉素肾病组相比，罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少，血清白蛋白升高，血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻；肾组织NF-κB p65活化和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达均明显受抑制，而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强，差异显著（P＜0.01)；阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.8305, P＜0.01）；肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β₁ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.7938, P＜0.01 ）。结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后，可能通过上调PPARγ表达，部分抑制肾组织NF-κB p65活性，进而抑制肾组织中TGF-β₁ 表达，从而使系膜基质沉积减少，肾组织病变减轻。     

激活法尼酯X受体上调核心蛋白聚糖表达对肾小管上皮细胞转分化的作用

目的研究激活法尼酯X受体(FXR)对核心蛋白聚糖(decorin)表达的变化及其对肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响。方法 (1)采用不同浓度的FXR特异性激动剂CDCA及拮抗剂Guggulsterones处理肾小管上皮细胞(HK-2),观察decorin的mRNA和蛋白表达的变化;(2)将HK-2细胞分为对照组,TGF-β1诱导组(20 ng/ml),TGF-β1诱导加CDCA组(100μmol/L)和TGF-β1诱导加CDCA、Guggulsterones共处理组,48 h后观察各组细胞的形态变化,检测各组decorin、E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达的情况。结果 (1)CDCA激活HK-2细胞FXR,decorin的mRNA和蛋白表达升高,且呈剂量依赖。在100μmol/L CDCA和不同浓度Guggulsterones共处理HK-2细胞,随着Guggulsterones浓度升高,decorin的mRNA和蛋白表达逐渐减低;(2)RT-PCR和Western blot显示,decorin在对照组、TGF-β1组无表达,在TGF-β1+CDCA组明显上调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著下降;E-cadherin在对照组高表达,在TGF-β1组显著下调,在TGF-β1+CDCA组显著上调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著下降;α-SMA在对照组无表达,在TGF-β1组显著上调,在TGF-β1+CDCA组显著下调(与TGF-β1组比,P<0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著上调。结论 CDCA激活肾小管上皮细胞FXR能够通过上调decorin的表达,从而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化。     

血小板反应蛋白1在转化生长因子β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞中的作用

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP-1）在转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法: 差速贴壁法分离新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。MTT法测CFs生长,羟脯氨酸法测CFs胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1mRNA表达。结果: TGF-β₁诱导CFs TSP-1的表达呈浓度-时间依赖性增加(P<0.01)。TGF-β₁（20 μg/L）作用下24 h可诱导CFs增殖和胶原合成(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的CFs的MTT A值、胶原含量减少(P<0.01)。结论: TGF-β₁可诱导新生大鼠CFs TSP-1表达,TSP-1反义寡核苷酸对TGF-β1诱导大鼠CFs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用,TSP-1在TGF-β₁诱导大鼠心肌纤维化中可能具有重要的作用。     

莫索尼定及贝那普利对肾脏致纤维化因子影响的对比研究

目的： 应用莫索尼定(moxonidine)及贝那普利(benazepril)干预阿霉素肾病（ADR）大鼠，比较二者对致纤维化生长因子的影响。方法： 大鼠右肾切除加尾静脉注射阿霉素复制肾病模型，随机分为模型组、莫索尼定组(1.5 mg·kg^-1·d^-1)、贝那普利组(10 mg·kg^-1·d^-1)、假手术对照组，每组10只。12周测蛋白尿、血压及血生化水平；显微镜下观察肾组织改变；免疫组化检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、 血小板源性生长因子（PDGF）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达；原位杂交测TGF-β₁ mRNA、PDGF mRNA表达。结果： 模型组大鼠尿蛋白、血压、血浆NE、AngⅡ水平、肾间质纤维化面积、肾小球体积、肾重/体重比值均显著高于对照组（P<0.01）；肾组织内TGF-β₁、PDGF、CTGF蛋白及TGF-β₁ mRNA、PDGF mRNA表达均显著高于对照组（P<0.01）；莫索尼定及贝那普利干预组，上述上调指标除血压无明显改变之外，其余都被显著抑制（P<0.01）。2种药物之间比较，贝那普利较莫索尼定更明显降低蛋白尿、血浆AngⅡ水平及下调PDGF及CTGF蛋白、PDGF mRNA表达；莫索尼定下调TGF-β₁ mRNA表达较贝那普利明显。结论： 莫索尼定及贝那普利通过抑制交感神经活性，调节致纤维化因子的表达而起肾保护作用。     

尿IgG亚类对人肾小管上皮细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的调节作用

目的： 探讨微小病变型（MCD）及膜性肾病型（MN）肾病患者尿IgG亚类对人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的影响。方法: 收集MCD和MN肾病患者的尿液，分离纯化尿IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄ 4个亚类纯品，并加以鉴定。将这两种病理类型肾病患者的尿 IgG₃、IgG₄分别刺激HK-2细胞，用Western blotting的方法检测HK-2细胞MIF蛋白表达的量效关系（0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 g/L，刺激HK-2细胞24 h）和时效关系（1 g/L刺激HK-2细胞0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h）。结果: MN和MCD肾病患者的尿IgG₃、IgG₄均可上调HK-2细胞表达MIF蛋白，并呈明显的剂量和时间依赖关系。MN患者尿IgG₃刺激HK-2细胞随着剂量的增加,MIF蛋白表达逐渐增强，到1.0 g/L时达到峰值，时间效应则在1h即明显升高，12 h达到峰值；IgG4在0.1 g/L时即达到峰值，时间效应则6 h即明显升高，12 h达峰值。而MCD患者尿IgG₃刺激HK-2细胞表达MIF蛋白，在1.0 g/L时才开始明显升高，5.0 g/L达峰值，时间效应上则在12 h才明显升高；IgG₄在0.1 g/L时开始明显升高，0.5 g/L时达峰值，时间效应上则在48 h时才出现明显升高，并达峰值。结论: MN及MCD肾病患者的尿IgG₃、IgG₄均可上调HK-2细胞表达MIF蛋白，且MN患者尿IgG₃、IgG₄的作用强于MCD患者，提示这两种病理类型肾病患者尿IgG亚类可能存在结构或功能上的差异。     

小檗碱对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smad通路的影响

目的研究小檗碱(BBr)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化(EMT)及TGF-β/Smad通路的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:1正常对照组;2TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);3小檗碱作用组(30μM小檗碱作用24h后加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western Blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Smad2、Smad3、磷酸化的Smad2、3(P-Smad2、3)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果 TGF-β1处理可导致NRK-52E细胞的α-SMA蛋白表达明显升高,E-cadherin蛋白表达降低。而小檗碱处理能够减少肾小管上皮细胞α-SMA的高表达,提高E-cadherin蛋白的表达;同时,小檗碱可有效降低由TGF-β1引起的NRK-52E细胞中ROS的过多产生。此外,小檗碱可有效抑制Smad2/3的活化。结论小檗碱可逆转TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用机制可能是通过抑制氧化应激及TGF-β/Smad信号通路而发挥作用。