CD226基因敲除小鼠血小板的结构异常与功能障碍

目的研究共刺激分子CD226对小鼠血小板功能的调控作用。方法取40周龄老年CD226基因敲除(CD226KO)小鼠为实验组,同龄野生型(WT)C57BL/6小鼠为对照组。取尾静脉血进行血小板计数,剪取小鼠尾尖,检测出血时间;分离小鼠血小板,透射电镜观察血小板超微结构;建立三氯化铁(FeCl_3)诱导的小鼠颈动脉血栓模型,观察CD226KO小鼠与WT小鼠血栓形成的差异。获取人血小板蛋白,通过免疫沉淀和质谱分析,获得与血小板CD226相互作用蛋白的信息。结果与同龄WT小鼠相比,老年CD226KO小鼠血小板数量明显减少,出血时间明显延长。CD226KO小鼠血小板内质网形态发生明显弯曲皱缩变形。在Fe Cl3诱导的小鼠血栓模型中,CD226KO小鼠血栓形成时间明显延长,血栓稳定性显著下降。质谱检测结果提示,人血小板中CD226与脑源性神经生长因子(BDNF)、脂肪酸结合蛋白5(FABP5)、载脂蛋白1(Apo A1)等蛋白具有相互作用。结论 CD226KO小鼠血小板功能障碍,CD226参与血小板生物学活性的发挥。     

抑郁症小鼠模型的神经免疫改变

目的 建立慢性束缚应激（CRS）和慢性不可预见性应激（CUMS）模型，观察C57BL/6小鼠行为学指标，海马区及脾脏结构及相关因子基因表达的差异，探讨不同慢性应激造模手段对小鼠神经免疫系统的影响，为抑郁症发病机制及抗抑郁药初筛选提供实验依据。方法 建立6周的对照组、CRS及CUMS小鼠模型共45只，通过行为学评价测定小鼠行为学指标；运用HE染色观察小鼠大脑海马区及脾脏组织形态；运用尼氏染色观察海马区神经元受损情况；Real-time PCR检测海马区抑郁相关基因脑源性神经营养因子(BDNF)、五羟色胺转运体(5-HTT)，吲哚胺2，3加双氧酶1（IDO1）及脾脏炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达情况。结果 慢性应激6周后， CRS组小鼠的水平穿格数及直立数无显著变化而CUMS组极显著下降；CRS组与CUMS组小鼠悬尾及强迫游泳试验累计不动时间均显著增加（P<0.05）；同时两种应激均能引起海马和脾脏结构的损伤，但CUMS组海马区的神经元损伤更严重；仅有CUMS组海马区相关基因显著改变；CUMS组脾脏IL-1β，IL-6的基因表达水平显著升高，而CRS组IL-6水平无显著变化。结论 应激6周后，CRS和CUMS均可不同程度地引起抑郁样症状；从神经免疫学角度观察，CUMS模型的抑郁样症状明显。提示，与CRS模型相比，CUMS模型更能反映机体的抑郁症状。     

CD226基因敲除加重小鼠放射性肝损伤的发生

目的观察CD226基因敲除(KO)对小鼠放射性肝损伤的影响。方法雄性野生型(WT)和CD226KO小鼠随机分为非辐照组和辐照组,非辐照组不经过任何处理,辐照组接受8 Gy ~(60)Co照射建立急性放射性损伤模型。观察小鼠存活和体质量改变情况, HE染色观察肝脏和结肠病变情况,实时定量PCR检测肝和结肠组织炎症因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、 IL-12p40、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA水平。结果与辐照WT小鼠相比,辐照后的CD226KO小鼠体质量明显下降,存活率下降; CD226KO小鼠肝脏损伤加重,肝指数(肝质量/体质量)下降显著, iNOS、 IL-1β、 IL-6、 IL-12p40、 TNF-α、 MCP-1 mRNA水平显著升高;但CD226KO小鼠结肠炎症减轻,炎症因子mRNA水平降低。结论 CD226缺失降低辐照小鼠存活率,与肝损伤加重密切相关。     

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的 探讨氟西汀（FLX）对慢性束缚应激（CRS）所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4（BRD4）表达的影响。 方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照（NS）组、抑郁模型（CRS）组、氟西汀干预（CRS+FLX）组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天 CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀（10mg/kg）,NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。 结果 与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低（P<0.01）,喷糖实验舔糖时间缩短（P<0.05）,强迫游泳不动时间增加（P<0.01）,新事物辨别指数降低（P<0.0001）,抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现（P<0.05）;与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调（1.;0000 ± 0.04577 比 0.08337 ± 0.01658;1.0000 ± 0.04379 比 0.6672 ± 0.03193,P<0.05）,而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达（0.08337 ± 0.01658 比 0.4983 ± 0.08574;0.6672 ± 0.03193比0.8572 ± 0.03181,P<0.05）。 结论 氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。     

Balb/c小鼠PD-1敲除后抑制疟原虫生长及其机制初探

目的探讨PD-1 KO(knock out)对约氏疟原虫P.y17XL增殖的影响及其可能的作用机制。方法感染约氏疟原虫P.y17XL后,比较WT和PD-1 KO小鼠的存活率及其体内的原虫血症;然后,流式细胞技术检测约氏疟原虫P.y17XL感染能否诱导WT小鼠巨噬细胞、DC、中性粒细胞和活化的CD4+T细胞表面PD-1表达;最后比较感染约氏疟原虫P.y17XL的WT和PD-1 KO小鼠的脾脏CD4+T细胞功能以及血清中的抗体水平。结果与WT小鼠相比,PD-1 KO小鼠的疟原虫增殖明显受到抑制,而且存活率也明显高于感染的WT小鼠;约氏疟原虫P.y17XL感染能诱导WT小鼠巨噬细胞、DC、中性粒细胞和CD4+T细胞表面PD-1的表达;虽然WT和PD-1 KO小鼠的脾脏CD4+T细胞功能没有显著差别,但是PD-1 KO小鼠的血清总IgG水平在感染后第6、8天显著高于WT小鼠。结论 PD-1 KO后能提高感染小鼠的存活率,增强其清除红内期疟原虫的能力;其机制可能与PD-1 KO小鼠血清中抗体水平升高有一定的关系。     

CD226基因敲除减轻小鼠失血性休克急性肺损伤

目的探讨内皮细胞特异性敲除CD226(CD226 CKO)对小鼠失血性休克急性肺损伤的影响及其机制。方法雄性野生型(WT)和CD226 CKO小鼠随机分为假手术组和失血性休克组,假手术组只进行心脏穿刺不抽血,失血性休克组抽取30%的总血量。HE染色观察肺脏病变情况,免疫荧光组织化学染色检测肺组织CD31、 CD226和脾脏CD3、 CD226的表达和分布;采用RNA干涉技术(RNAi)敲除人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的CD226,厌氧产气袋培养法建立细胞缺氧模型; Western blot法检测小鼠肺组织和HUVEC中Bcl2的蛋白表达; JC-1线粒体膜电位染色检测细胞早期凋亡。结果在失血性休克模型中,与WT小鼠相比, CD226 CKO小鼠急性肺损伤明显减轻,肺组织中Bcl2表达水平升高;体外缺氧细胞学模型同样发现,与siRNA阴性对照(siNC)组细胞相比,特异性敲低CD226的细胞Bcl2蛋白水平增加,细胞凋亡减少。结论敲除CD226基因减轻小鼠失血性休克的急性肺损伤,与增加血管内皮细胞Bcl2的表达、减少细胞凋亡密切相关。     

TNFSF14对STZ诱发Ⅰ型糖尿病的影响及其机制初探

目的:以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射小鼠,建立Ⅰ型糖尿病动物模型,探讨TNFSF14在Ⅰ型糖尿病病理发生的作用。方法:以55 mg/kg的剂量,腹腔注射STZ于野生型(WT)和TNFSF14缺陷(TNFSF14 KO)小鼠体内,连续注射5 d,并在最后一次注射的当天开始测量血糖,根据情况每周测量2～3次;在指定的时间点处死小鼠,收集胰腺组织、脾脏和胰腺淋巴结。HE染色观察胰腺组织的病理情况;流式细胞术检测脾脏和胰腺淋巴结的淋巴细胞中T细胞亚群(CD3~+T细胞、CD4~+T细胞以及CD4~+FoxP3~+调节性T细胞)的频率。结果:连续5 d注射STZ后,WT组小鼠的血糖随即急剧上升,23 d后所有小鼠均超过了正常水平,而TNFSF14 KO小鼠的血糖值相对稳定,23 d后仍有80%的小鼠维持在正常血糖水平。HE染色显示,与WT小鼠相比,TNFSF14 KO小鼠的胰岛中淋巴细胞浸润明显减少,胰岛相对完整。流式细胞术结果表明,与WT组小鼠相比,TNFSF14 KO小鼠脾脏和胰腺淋巴结淋巴细胞中的CD3~+T细胞百分比都明显下调(脾脏:P0.05;胰腺淋巴结:P0.01),而CD4~+T细胞百分比差异不显著(P0.05),但CD4~+FoxP3~+调节性T细胞百分比显著升高(脾脏:P0.01;胰腺淋巴结:P0.05)。结论:TNFSF14在STZ诱导的Ⅰ型糖尿病中发挥重要作用,其可能通过下调CD4~+FoxP3~+调节性T细胞的分化来介导Ⅰ型糖尿病的发生。     

丙酮酸激酶M2缺失不影响TCRαβ~+T细胞的增殖、活化、分化和抗肿瘤能力

为探究丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2, PKM2)在TCRαβ~+T细胞中的功能,研究制备了TCRαβ~+T细胞条件性敲除PKM2小鼠。FACS检测发现PKM2缺失不影响小鼠外周淋巴器官中TCRαβ~+CD4~+与CD8~+T细胞百分比、增殖能力及活化潜能。TCRαβ~+T细胞特异性PKM2~(-/-)小鼠可在结肠组织中形成正常的Th1与Th17亚群,也可在体内外诱导产生正常的Th1与Th17。PKM2缺失同样不影响MC38移植瘤生长,也不改变移植瘤中TCRαβ~+CD4~+/CD8~+T细胞比例和T细胞IFN-γ的表达。因而,TCRαβ~+T细胞特异性PKM2~(-/-)小鼠具有正常的T细胞功能亚群。Western blotting表明,PKM2~(-/-)TCRαβ~+CD4~+与CD8~+T细胞中PKM1表达上调。据此,作者推测PKM1部分代偿了PKM2在TCRαβ~+T细胞中的生理功能。     

慢性束缚应激对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响

目的 探讨慢性束缚应激(CRS)对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响。方法 48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(control)、模型组(CRS)、氟西汀(FLX)药物干预组(CRS+FLX),每组各16只。慢性束缚应激3周建立抑郁小鼠模型，应激的第8天至第21天，CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射FLX(10 mg/kg),control组及CRS组注射等体积生理盐水。采用旷场实验以及糖水偏好实验检测各组小鼠行为变化；采用免疫组织化学法和Western blotting检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；Real-time PCR检测海马A1和A2型星形胶质细胞标记物的表达。结果 与control组相比，CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为，包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.0001),体重明显较低(P<0.05),旷场实验在中央区域活动的距离明显降低(P<0.0001),FLX干预可逆转CRS所诱导的抑郁样行为表现(P<0.05);与control组相比，CRS组小鼠海马星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(...     

口服伤寒杆菌后小鼠肠道黏膜上皮内淋巴细胞的变化

目的研究经口服伤寒杆菌后,小鼠肠道黏膜上皮内淋巴细胞中T细胞亚群的变化,探讨肠道黏膜免疫应答机制。方法将8～10周龄的BALB/C小鼠100只随机分为对照组和实验组。实验组灌胃伤寒杆菌悬液分两次进行免疫,在第二次灌胃后第3、5、7、9、11d分别处死小鼠。通过免疫组化染色对小鼠肠道上皮内淋巴细胞进行表型分析,并按表型进行计数。对照组给予同体积PBS。结果实验组小鼠上皮内淋巴细胞中CD4+、CD8+、TCRαβ+、TCRγδ+亚群在3、5、7、9、11天呈增高趋势,其中从第5天开始CD8+、TCRγδ+T细胞亚群数量(个/100肠上皮细胞)与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),CD4+、TCRαβ+T细胞数量与对照组相比。差异无统计学意义(P>0.05)。结论肠道黏膜上皮内淋巴细胞中CD8+、TCRγδ+T细胞增殖明显,提示其在抗感染免疫应答中起主导作用。     

microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响

目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。     

小鼠CD^3＋TCRαβ^＋CD^—CD8^—胸腺细胞特性分析

目的：分析CD^3 TCRαβ^ CD^-CD8^-胸腺细胞的特性，推断其在胸腺发育中表型和功能的成熟过程。方法：分离纯化小鼠胸腺DN细胞，用多重染色的方法分析CD^3 TCRαβ^ CD^-CD8^-细胞的表型和TCR库，并与外周淋巴结的相应细胞进行对比。结果：DNA胸腺细胞为异质性细胞，包括CD3^-DN细胞和CD3^ DN细胞，而CD3^ DN细胞又分为CD^3 TCRαβ^ 和CD3^ TCRγδ^ 2个亚群。其中，CD^3 TCRαβ^ DN细胞体积较小，绝大部分细胞对可的松耐受，细胞中能与自身反应的Vβ^3 和Vβ11^ 细胞比例极低，表型较为成熟，与髓质型SP（single positive) 细胞相似。结论：CD^3 TCRαβ^ DN细胞不同于CD^3 TCRαβ^－DN细胞，是一个独特的细胞亚群，只有在经历表型和功能的进一步成熟才能迁出胸腺，移至外周。     

Treg细胞参与LIGHT缺失小鼠对利什曼原虫感染的敏感性

目的探讨LIGHT对利什曼原虫(L.major)感染模型中CD4+T细胞亚群免疫应答的影响。方法采用LIGHT KO和野生型(WT)小鼠,经小鼠脚掌注射L.major建立感染模型。从感染第2周至24周连续观察被感染脚掌的病损程度,并测定感染24周小鼠体内寄生虫载量。其次,取感染第7天小鼠引流淋巴结(d LN)细胞,运用3H-Td R掺入方法检测T细胞体外刺激的增殖情况,并且利用ELSIA检测体外刺激后d LN细胞IL-12和IFN-γ的表达水平。最后,通过流式细胞术检测感染第7天小鼠脾脏和d LN中Treg水平。结果 LIGHT KO小鼠被感染脚掌和d LN的寄生虫载量均显著高于WT对照小鼠。感染早期LIGHTKO小鼠d LN中T细胞增殖水平,以及IL-12和IFN-γ的表达水平均显著低于WT对照小鼠。感染早期LIGHT KO小鼠中脾脏和d LN中的Treg细胞百分率相对WT小鼠均显著升高。结论 LIGHT可能通过抑制Treg细胞的产生,促进Th1细胞的分化,从而增强小鼠抗L.major感染的能力。     

不同生长期小鼠胸腺T细胞不同亚群的变化及ROCK抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的促进作用

目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群;ROCK抑制剂体外处理衰老进程中小鼠TEC,荧光酶联斑点分析仪观察细胞增殖情况;ROCK抑制剂处理20月龄衰老小鼠,流式细胞术检测小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群的变化。结果随月龄增加,胸腺细胞、TEC总数及各细胞亚群数量均显著降低;脾脏中总CD4⁺T细胞及CD8⁺T细胞比例无显著性改变,但CD4+初始T细胞、CD8+初始T细胞和CD4+近期胸腺迁出细胞(RTE)在脾脏中所占比例呈下降趋势;ROCK抑制剂在体外促进衰老进程中小鼠TEC增殖,ROCK抑制剂在体内使衰老小鼠胸腺细胞、TEC以及外周脾脏中T淋巴细胞各亚群数量明显增加。结论随着小鼠月龄增加,胸腺呈进行性退化。ROCK抑制剂可以显著缓解衰老小鼠胸腺的萎缩,促进衰老小鼠胸腺再生。     

Bcl3基因敲除对小鼠脾脏免疫细胞组成及抗肿瘤能力的影响

目的观察Bcl3基因敲除对小鼠脾脏免疫细胞的组成及抗肿瘤能力的影响。方法使用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立Bcl3基因敲除小鼠(Bcl3-/-), 血常规检验和流式细胞术检测Bcl3-/-小鼠的免疫细胞组成;建立B16F10黑色素瘤肺转移小鼠模型, 记录肺部肿瘤结节数和小鼠生存时间, 对比野生型(wild type, WT)小鼠和Bcl3-/-小鼠的抗肿瘤能力。结果 Bcl3-/-小鼠成功繁育成品系, 子代基因敲除纯合小鼠无胚胎致死现象, 且生长正常, 与WT小鼠相比外观、生长发育、繁育性能未见明显差异;主要脏器无明显异常, 但脾脏肿大且脾脏免疫细胞总数明显增加(P<0.05);血小板计数和中性粒细胞计数及百分比均显著低于WT小鼠;CD19+B细胞比例无明显改变, CD3+T细胞比例显著增加, 同时T细胞亚群(CD4+、CD8+、Treg)比例均呈明显上升趋势(P<0.05);固有免疫细胞中NK细胞(NK1.1+)和中性粒细胞(Gr1+)比例下降(P<0.05), DC(CD11b+)比例无明显变化;Bcl3-/-荷瘤小鼠的肺部可见大量由黑色素瘤细胞形成的肿瘤...     

微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响

观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7的表达变化;进一步用Con A、CD3和CD28抗体刺激miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞,CCK8检测细胞增殖率;Real-time PCR检测miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达的变化;FACS检测CD4+T和CD8+T细胞的数量变化及CD4+T细胞膜分子CD44、CD62L和IL-4、IFN-γ的表达变化。结果显示,WT小鼠脾脏T淋巴细胞活化后,miR-7的表达水平显著上调(P0.05);与WT小鼠相比,在Con A、CD3和CD28抗体作用下miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显增加(P0.05);miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均明显上调(P0.05),而IL-10表达显著下调(P0.05);FACS检测结果显示CD4+T细胞比例明显上调(P0.05),而CD8+T细胞的比例变化不显著(P0.05);CD4+T细胞膜分子CD62L水平显著下降,CD69及IL-4、IFN-γ的表达水平均显著上调(P0.05)。结果表明,miR-7敲减以后可显著影响小鼠脾脏T淋巴细胞的功能,本实验为后续深入探讨其在T淋巴细胞功能调控中的作用提供实验依据。     

尿素通道蛋白B敲除小鼠脑组织水通道蛋白4表达改变与抑郁样行为的关系

目的 探讨尿素通道蛋白B（UT-B）敲除小鼠海马超微结构改变,以及水通道蛋白4（AQP4）的表达变化,探讨形态改变与小鼠抑郁样行为的关系。方法 采用糖水偏好和强迫游泳实验检测野生型与UT-B敲除小鼠（各10只）的行为差异,透射电子显微电镜观察小鼠海马组织的超微结构改变,免疫组织化学观察脑组织AQP4的表达,免疫印迹技术检测AQP4表达水平。 结果 野生型小鼠与UT-B基因敲除小鼠糖水偏好指数分别为(84.67±4.85)%和(65.67±7.97)%（P<0.001）,而强迫游泳实验不动时间分别为(128.56±11.24) s和(209.11±20.99) s（P<0.001）;两种行为学检测结果显示,UT-B敲除小鼠表现出抑郁样行为。电子显微镜结果显示,敲除小鼠出现神经元神经纤维肿胀和退行性改变,血管周围星形胶质细胞终足肿胀。免疫组织化学结果显示,敲除小鼠脑皮质、海马、丘脑等部位AQP4免疫阳性细胞数量明显减少,AQP4免疫阳性细胞主要分布于软脑膜、室管膜及脑血管周围,但脑血管周围免疫染色减弱。免疫印迹法检测提示,海马组织中AQP4表达水平下调27.1%（P<0.05）。 结论 UT-B 基因敲除小鼠脑皮质和海马AQP4表达减少,可能通过影响神经发生和脑代谢引起小鼠的抑郁样行为。     

CD28协同刺激分子对T细胞受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响

目的：分析anti-TCRαβmAb anti-CD28mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度，分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响。方法：新鲜分离胸腺细胞，加入anti-TCRαβmAb-anti-TCRαβmAb anti-CD28mAb等培养20h，进行多重染色，流式细胞仪分析。结果：与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较；（1）双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目，尤其是CD4^ CD8^ 胸腺细胞的凋亡数目。（2）凋亡的CD4^ CD8^ 亚群，CD4^ CD8^-亚群细胞表面CD28的表达均增多。结论：CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关，CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡。     

TLR7介导日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏的T细胞反应

目的 探究日本血吸虫感染后小鼠脾脏TLR7对T细胞反应的调节作用。方法 使用日本血吸虫感染6周的C57BL/6小鼠（WT）和TLR7-KO小鼠,并设立相应对照组。然后观察组织病变情况,分离脾脏淋巴细胞,运用qRT-PCR、流式细胞术检测脾脏中CD4⁺T和CD8⁺T细胞数量改变以及TLR7分子表达;进一步通过流式细胞术检测WT和TLR7-KO小鼠感染前后CD4⁺T和CD8⁺T细胞CD25、CD69、CXCR5、CD40L等活化表型的变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测CD4⁺T和CD8⁺T细胞IFN-γ、IL-4分泌情况。结果 日本血吸虫感染后,小鼠肝脏和脾脏明显增大,脾脏中CD4⁺T和CD8⁺T细胞发生大量聚集;感染后CD4⁺T和CD8⁺T细胞多种活化及功能相关指标均显著上升,且IL-4⁺CD4⁺T...     

Fas-FasL信号通路在木瓜蛋白酶诱导的小鼠哮喘模型中的作用

Fas-Fas配体(Fas-Fas ligand, Fas-FasL)信号通路在免疫反应中发挥着重要作用,但其在变态反应中的作用鲜有报道。为研究Fas-FasL信号通路在哮喘中的作用,研究者用木瓜蛋白酶建立小鼠急性哮喘模型,并通过流式细胞术检测了WT小鼠与Fas敲除(Fas knockout,Fas KO)小鼠在初始状态及木瓜蛋白酶诱导哮喘时髓系细胞及T淋巴细胞在肺组织中的浸润情况;并通过HE染色和PAS染色分别检测了哮喘模型小鼠肺组织炎症细胞浸润和杯状细胞增殖情况。实验结果显示,在初始状态下Fas KO小鼠与WT小鼠肺组织及肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞等髓系细胞的比例没有明显差别;而在哮喘模型中,Fas KO小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞、杯状细胞的数量均明显减少,CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例明显升高。上述研究结果表明,Fas信号通路能够促进木瓜蛋白酶诱导的哮喘模型小鼠肺组织炎症细胞浸润。研究为探索Fas-FasL信号通路在哮喘模型中的作用提供了新依据。