干扰素α通过P204和P21诱导大鼠原代血管平滑肌细胞凋亡

目的 探讨干扰素-α(IFN-α)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响.方法 应用转染IFI204 siRNA和/或IFN-α瞬时干预体外培养的大鼠VSMCs,以非特异性siRNA转染组为对照组,RT-PCR法检测P204及P21mRNA表达,Western blot检测P204及P21蛋白表达,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,IFN-α组P204 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.01),细胞凋亡增多(P＜0.01),伴P21 mRNA和蛋白表达增多(P＜0.01);IFI204 siRNA转染组P204 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.01),细胞凋亡减少(P＜0.01),P21mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01);转染IFI204 siRNA后再加IFN-α干预,P204 mRNA及蛋白表达下调(P＜0.01),但P21 mRNA及蛋白表达增多(P＜0.01),促进细胞凋亡(P＜0.01).结论 P204及P21参与IFN-α诱导大鼠VSMCs凋亡过程的调控.     

沉默生物钟基因Timeless对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨沉默生物钟基因Timeless(TIM)对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测卵巢癌组织及正常卵巢组织中TIM蛋白表达,分析TIM表达与卵巢癌病理特征的相关性。选取卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白对照组、siRNA对照组和TIM沉默(TIM siRNA)组。采用Western blot检测TIM、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、caspase-3和caspase-9蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:TIM蛋白在正常卵巢组织中呈阴性表达,在卵巢癌组织中呈阳性表达。卵巢癌组织中TIM阳性表达率(84.0%)显著高于正常卵巢组织(10.0%;P0.01)。TIM表达与卵巢癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P0.05),而与年龄和病理类型无关(P0.05)。TIM siRNA组中TIM、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达显著低于空白对照组和siRNA对照组(P0.01),而Bax、caspase-3和caspase-9的蛋白表达显著高于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间TIM、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Bax、 caspase-3和caspase-9蛋白表达的差异无统计学显著性(P0.05)。TIMsiRNA组的细胞凋亡率显著高于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间细胞凋亡率的比较差异无统计学显著性(P0.05)。TIM siRNA组的细胞穿膜数显著低于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间细胞穿膜数的差异无统计学显著性(P0.05)。结论:利用siRNA沉默卵巢癌SKOV3细胞中TIM表达,可促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭。     

应用XIAP siRNA逆转卵巢癌顺铂耐药性的研究

目的本研究旨在探讨应用siRNA下调XIAP在卵巢癌耐药细胞中的表达而逆转其对顺铂的耐药性。方法应用Western Blot、Hoechst 33258等检测卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和耐药株COC1／DDP中XIAP表达和卵巢癌细胞的凋亡率,并将XIAPsiRNA导入耐药细胞,比较转染前、后耐药细胞对顺铂耐药性的改变。结果卵巢癌耐药细胞COC1／DDP中XIAP蛋白表达明显比敏感细胞COC1中高（P〈0．05）。XIAP siRNA可下调耐药细胞COC1／DDP中XIAP的表达,并显著增加对顺铂敏感性（P〈0．05）。结论XIAP siRNA可在一定程度上逆转卵巢癌顺铂耐药。     

HOXA5通过调控Egr-1抑制体外培养卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的探讨HOXA5对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响及相关机制。方法利用pcDNA.3.1质粒构建重组质粒pcDNA.3.1-HOXA5,转染卵巢癌细胞SKOV3和UACC-1598,过表达HOXA5;Egr-1 siRNA转染过表达HOXA5的卵巢癌细胞,干扰Egr-1表达;qRT-PCR法检测卵巢癌细胞中HOXA5和Egr-1 mRNA的表达量;Western blot法检测卵巢癌细胞中HOXA5和Egr-1的蛋白表达量;BrdU法检测卵巢癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力。结果 HOXA5 mRNA(P0.01)和蛋白表达量(P_(SKOV3)0.01,P_(UACC-1598)0.05)在卵巢癌细胞中的表达量降低;pcDNA.3.1-HOXA5转染卵巢癌细胞,HOXA5 mRNA和蛋白表达量显著升高(P0.01);过表达HOXA5显著抑制卵巢癌细胞的增殖(P0.01)和侵袭能力(P0.01);过表达HOXA5且干扰Egr-1,细胞增殖(P0.01)和侵袭能力(P_(SKOV3)0.01,P_(UACC-1598)0.05)显著提升,抑制了HOXA5过表达时对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。结论过表达HOXA5可通过调控Egr-1的表达量有效抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,为卵巢癌的治疗提供一定的理论基础。     

下调USP9X表达对胃癌AGS细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨下调X染色体连锁的泛素特异性肽酶9(USP9X)表达对胃癌细胞凋亡和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:将USP9X小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染胃癌AGS细胞,将细胞分为3组:未处理的AGS组、对照siRNA组和USP9X siRNA组。采用real-time PCR和Western blot检测不同处理组的胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术和Boyden小室分别检测不同处理组胃癌AGS细胞的凋亡和侵袭能力;Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:USP9X siRNA显著下调胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达水平。USP9X表达下调显著诱导胃癌细胞凋亡,并降低胃癌细胞的侵袭能力。USP9X表达下调显著降低Mcl-1和MMP-2的表达,但明显上调Bax蛋白的表达(P0.05)。结论:USP9X可能是胃癌细胞凋亡和侵袭的关键调控因子。     

下调EZH2表达促进卵巢癌细胞衰老的机制研究

目的:探讨下调EZH2表达促进卵巢癌细胞衰老的分子机制。方法:采用real-time PCR、Western blot及免疫组化检测卵巢癌组织和正常组织及4种卵巢癌细胞和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中EZH2的表达水平;运用脂质体2000转染法将EZH2小干扰RNA转染,或将GSK126作用于卵巢癌细胞和IOSE80细胞,siRNA转染的IOSE80细胞经5 Gy电离辐射照射,以阴性对照siRNA为对照。MTT法、集落形成实验、流式细胞术和SA-β-Gal染色法检测细胞增殖、凋亡率和细胞衰老情况;Western blot检测EZH2、p53、p21、p16、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、cleaved PARP、H3K27me3、H3K27me2和H3K27me1的蛋白水平。结果:EZH2在卵巢癌组织和4种卵巢癌细胞中的表达水平均显著高于正常组织和IOSE80细胞(P0.01);敲减EZH2表达显著抑制卵巢癌细胞的增殖,促进电离辐射诱导的细胞衰老,其作用与GSK126处理的细胞表型相一致。Western blot检测发现敲减EZH2表达明显抑制H3K27me3的表达,促进p53、p21和p16的表达(P0.01),但对细胞凋亡通路关键蛋白的水平无影响。结论:EZH2在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达。敲减EZH2表达通过降低H3K27me3水平促进卵巢癌细胞衰老,从而抑制细胞增殖。     

NGAL基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及机制

目的探讨人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及机制。方法构建针对NGAL基因的siRNA真核表达载体,转染入A2780细胞中,实验分为3组:空白对照组(Control)、转染NGAL-siRNA沉默组(NGAL-siRNA)和转染阴性对照组(NC-NGAL)。免疫荧光检测NGAL在A2780细胞及IOSE80正常卵巢细胞的表达情况。通过RNA技术沉默NGAL后,运用qRT-PCR及Western blot检测沉默NGAL基因效率。CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测NF-κB、Caspase-3蛋白表达。结果 NGAL在A2780细胞呈高水平表达。NGAL-siRNA组NGAL基因及蛋白表达都受到明显的抑制(P0.01)。与Control组相比,NGAL-siRNA组细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达明显增加,细胞活力及NF-κB蛋白表达明显下降(P0.01),而NC-NGAL组各项指标与Control组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默人卵巢癌细胞株A2780中NGAL基因表达,抑制细胞生长并促进细胞凋亡,与上调Caspase-3蛋白表达和下调NF-κB蛋白表达相关。     

Rab1A对多发性骨髓瘤细胞系8226增殖和凋亡的影响

目的 探讨Rab1A对多发性骨髓瘤(MM)细胞系8226增殖和凋亡的影响。 方法采用siRNA干扰Rab1A表达,将多发性骨髓瘤细胞8226分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组。其中空白对照组的多发性骨髓瘤细胞8226不做任何处理,阴性对照组的多发性骨髓瘤细胞8226转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。应用集落形成、CCK-8细胞增殖实验分析Rab1A对多发性骨髓瘤细胞8226增殖的影响。采用流式细胞技术检测多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡情况。采用Western blotting和Real-time PCR技术检测Rab1A siRNA对c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及Bax表达的影响。 结果Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的Rab1A mRNA和Rab1A 蛋白的表达显著较阴性对照组下调;集落形成、 CCK-8细胞增殖实验结果显示,Rab1A siRNA可抑制多发性骨髓瘤细胞8226增殖;Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡比例显著较阴性对照组增加（P<0.01）;Rab1A siRNA组c-Myc、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达量显著较阴性对照组下调（P<0.01）,Bax蛋白水平的表达量显著较阴性对照组上调（P<0.01）。 结论Rab1A可能通过调控c-Myc、cyclin D1、Bcl-2和Bax的表达促进多发性骨髓瘤细胞8226增殖,而RablA siRNA可有效抑制RPMI-8226细胞RablA的表达,从而抑制其增值,并促进凋亡。     

COX-2表达下调抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖并促进凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)表达对大肠癌细胞HT-29细胞的细胞活力、增殖和凋亡等生物学行为的影响。方法利用脂质体将siRNA COX-2及空载体转入HT-29大肠癌细胞中,并设立对照组。48 h后,real-time PCR法检测COX-2、Bcl-2、Bax和基质金属蛋白酶2(MMP2)mRNA表达;Western blot检测COX-2及p-AKT表达;CCK-8法检测细胞活力;Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞周期;划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力。结果与对照组及空载体组比较,COX-2抑制组COX-2蛋白及mRNA表达量显著降低(P0.01);细胞活力下降(P0.01);细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞于G期,细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01);Bcl-2及MMP2 mRNA表达下调(P0.01);Bax mRNA表达上调(P0.01);p-AKT蛋白表达下调(P0.01)。结论 COX-2表达量下调后能显著的抑制细胞增殖、迁移与侵袭,并诱导细胞凋亡,可能与下调p-AKT有关。     

RNA干扰沉默Aurora A基因表达对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制人胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞增殖及凋亡的影响。 方法 设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blotting检测Aurora A mRNA和蛋白的表达情况,同时利用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和流式细胞仪观察转染后U251细胞增殖抑制率和细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变。 结果 转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;U251细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率显著增高 (P<0.01),且U251细胞发生了显著的凋亡形态改变。 结论 体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功地抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能抑制胶质瘤细胞增殖、促进凋亡,提示Aurora A可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

siRNA对卵巢癌细胞周期及EGFR表达的影响

目的体外构建编码人类表皮生长因子受体（EGFR）的小干扰RNA（siRNA）的质粒表达载体,观察其对卵巢癌Skov-3细胞EGFR的特异性抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响。方法构建pSilencer-EGFR siRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株Skov-3,实验分为以下3组：空白对照组（未经转染的人卵巢癌Skov一3细胞）、非特异性转染组（转染非特异性质粒载体）及特异性转染组。用RT-PCR的方法检测mRNA水平的变化,用免疫荧光法检测EGFR蛋白水平的变化,流式细胞仪检测其对卵巢癌细胞周期及凋亡的影响。结果成功构建pSilencer—EGFR siRNA真核基因表达载体。psiRNA—EGFR质粒明显下调Skov-3细胞中EGFR的表达,阻断细胞周期在G1期,促进细胞凋亡。结论重组质粒psiRNA—EGFR能有效地抑制Skov-3细胞内EGFR的表达、抑制细胞增殖,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布、降低S期细胞比例和促进细胞凋亡有关。     

siRNA沉默Nox1基因抑制胃癌细胞的生长

目的: 探讨siRNA沉默NADPH氧化酶1(Nox1)基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。方法: 合成Nox1 siRNA, 采用实时定量PCR 和Western blotting观察Nox1 siRNA 转染后胃癌SGC-7901细胞Nox1 mRNA及相应蛋白表达的变化; 用CCK-8细胞增殖实验、流式细胞检测技术分别检测胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的变化。结果: 转染Nox1 siRNA 后的胃癌SGC-7901细胞Nox1 mRNA及蛋白表达明显受抑制。与对照组相比, 干扰组SGC-7901细胞生长明显变缓(P<0.05), 细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。结论: Nox1 siRNA 可明显下调靶基因Nox1的表达, 在体外可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长并促进其凋亡。     

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)对卵巢癌细胞增殖和转移的抑制作用。方法 ELISA分别检测卵巢癌患者与健康志愿者血清,SKOV3、3AO和HO8910上皮性卵巢癌细胞与IOSE80正常卵巢上皮细胞培养上清中CTRP6的水平;采用人CTRP6重组蛋白处理高转移性卵巢癌HO8910细胞,ELISA检测HO8910细胞白细胞介素8(IL-8)和血管内皮生长因子(VEGF)的分泌水平,采用CCK-8法检测细胞增殖、TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用CTRP6小干扰RNA(CTRP6 siRNA)或CTRP6抗体处理HO8910细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞培养上清中水平降低;CTRP6重组蛋白处理HO8910细胞48 h后,细胞增殖和侵袭能力显著下降;利用siRNA抑制CTRP6表达后,细胞增殖和迁移能力显著增强;CTRP6抗体处理后,细胞增殖和迁移能力亦显著增强。结论 CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞上清中水平降低;CTRP6可阻断IL-8/VEGF通路从而抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖和迁移。     

TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。方法体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的最佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达。结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P0.05)。结论 TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤。     

小干扰RNA沉默hPTTG1基因对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 利用RNA干扰技术沉默人垂体瘤转化基因1( hPTTG1 )表达,观察卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的改变并探讨分子机制。方法: 化学合成靶定 hPTTG1 的小干扰RNA(siRNA)转染体外培养的A2780细胞,RT-PCR和Western blotting检测 hPTTG1 及c-myc表达水平;MTT法和 -TdR掺入实验检测 hPTTG1 对细胞增殖的影响;annexin V/PI染色流式细胞术和TUNEL法测定各组细胞凋亡情况。结果: hPTTG1 siRNA转染组 hPTTG1 mRNA和蛋白表达下降,抑制率分别为70.5%±3.9%和63.8%±4.5%;转染 hPTTG1 siRNA 24 h细胞吸光度值开始下降,48 h抑制效果最明显,抑制率为42.9%±5.2%;转染 hPTTG1 siRNA后细胞 -TdR放射性计数明显低于空白组和阴性对照组; hPTTG1 siRNA干扰组细胞存活率下降,细胞凋亡率和坏死率均增加;TUNEL染色分析结果可见 hPTTG1 siRNA干扰组凋亡指数明显高于空白组和阴性对照组; hPTTG1 干扰后c-myc mRNA和蛋白表达均下调。结论: hPTTG1 siRNA通过下调c-myc表达抑制A2780细胞增殖,诱导细胞凋亡, hPTTG1 可作为卵巢癌基因治疗的候选靶点。     

下调lncRNA MALAT1表达保护PC12细胞免于氧糖剥夺/复糖复氧所致的损伤

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导PC12细胞损伤的作用。方法:体外培养PC12细胞,分为4组(n=3):正常(normal)组、模型(OGD/R)组、OGD/R+si-NC组(si-NC组)和OGD/R+MALAT1 siRNA组(siRNA组)。RT-qPCR检测MALAT1的表达,MTT法检测PC12细胞活力,流式细胞术检测PC12细胞凋亡率,Western blot分析环加氧酶2(COX-2)、Bax及Bcl-2蛋白的表达,ELISA试剂盒检测炎症因子的含量。结果:同normal组相比,OGD/R组MALAT1表达升高(P0.01),细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),炎症因子前列腺素E_2(PGE_2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达显著增加(P0.01),COX-2和Bax表达显著上调,Bcl-2和IL-10含量显著降低(P0.01)。同si-NC组相比,siRNA干扰MALAT1的表达后,PC12细胞活力显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.05),炎症因子PGE_2和TNF-α表达显著减少(P0.05或P0.01),IL-10表达明显增加(P0.05),COX-2和Bax表达显著下调(P0.05),Bcl-2明显上调(P0.05)。结论:下调MALAT1表达可减轻OGD/R诱导的PC12细胞损伤,其机制可能涉及减轻炎症反应和抑制细胞凋亡。     

小干扰RNA下调白血病细胞X连锁凋亡抑制蛋白的表达及其对化疗药物敏感性的影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)下调白血病MOLT-4、HL-60、K562细胞的白血病细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达对化疗药物敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量PCR和Western免疫印迹检测MOLT-4、HL-60、K562细胞及健康人外周血单个核细胞(PBMC)XIAP mRNA和XIAP蛋白表达水平.用NucleofectorTM核酸转染仪对高表达XIAP的K562细胞转染XIAP siRNA(实验组),同时以转染无同源性siRNA作阴性对照组,未转染任何siRNA的K562细胞作空白对照组,并检测3组细胞XIAP mRNA和XIAP蛋白表达水平.同时将实验组、阴性及空白对照组细胞暴露于不同浓度的依托泊苷(vp-16,0.01、0.1、1、10、100mg/L)及阿糖胞苷(Ara-c,0.1、1、10、100、1000、10 000mg/L),用CCK-8法检测细胞抑制率变化.结果 与健康人PBMC比较,MOLT-4、HL-60、K562细胞XIAPmRNA及蛋白表达均增高(均P＜0.05),其中K562细胞XIAPmRNA及蛋白表达水平最高,与MOLT-4、HL-60细胞比较差异有统计学意义(均P＜0.05).K562细胞转染XIAP siRNA48 h后,与阴性对照组、空白对照组比较,实验组细胞XIAP mRNA及蛋白表达水平均明显下降(mRNA:0.37±0.10比1.41±0.13比1.00±0.12,蛋白:0.37±0.03比0.99±0.08比0.98±0.07,均P＜0.05).在给予1 mg/L vp-16、10及100 mg/L的Ara-c后,实验组细胞抑制率与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(均P＜0.05);在给予其他浓度vp-16和Ara-c后,3组细胞抑制率差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 XIAP siRNA能特异性下调K562细胞XIAPmRNA和蛋白质水平的表达,增强K562细胞对化疗药物依托泊苷、阿糖胞苷的敏感性.     

脂肪间充质干细胞通过激活EZH2促进卵巢癌的增殖及侵袭

目的探讨脂肪间充质干细胞是否通过调节EZH2的表达促进卵巢癌细胞生长、侵袭及迁移。方法体外分离、培养健康人大网膜脂肪间充质干细胞并制备脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM),建立EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞系。条件培养基处理稳定转染及未转染的卵巢癌细胞,实时定量PCR及Western blot免疫印迹法检测2组细胞中EZH2mRNA及蛋白的表达差异,CCK-8方法及Transwell培养体系检测条件培养基对2组卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。结果条件培养基处理后的卵巢癌细胞较普通培养基培养的卵巢癌细胞EZH2表达显著升高,并伴随增殖及侵袭能力的增强;我们通过shRNA沉默卵巢癌细胞中的ezh2基因,建立稳定转染的卵巢癌细胞系,再用条件培养基处理EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞,处理后EZH2表达较未转染细胞未见明显升高,说明siRNA成功抑制细胞系中EZH2的表达。CCK-8检测和Transwell侵袭实验结果表明,稳定转染的卵巢癌细胞经条件培养基处理后,脂肪干细胞条件培养基对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的促进作用消失。结论人脂肪间充质干细胞可能通过调节卵巢癌细胞中EZH2的表达对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力起促进作用。     

miRNA-22在卵巢癌组织的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:观察在不同卵巢组织中miRNA-22的表达,并研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖、迁移与侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR(q PCR)检测不同卵巢组织样本miRNA-22的表达;随机将SKOV-3细胞分为正常对照组(control组)、空白载体组(miRNA-22-NC组)和转染miRNA-22-mimic组(miRNA-22-m组),q PCR检测各组细胞miRNA-22的表达,CCK-8法检测细胞存活率,划痕实验与Transwell小室法分别检测细胞的迁移与侵袭能力,Western blot法检测VEGF和P53蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miRNA-22的水平显著低于正常卵巢组织;与control组相比,miRNA-22-m组细胞miRNA-22的表达显著增加,细胞存活率显著降低,细胞迁移数和侵袭数下降,VEGF和P53的蛋白表达水平显著下降。结论:miRNA-22的低表达可能与卵巢癌的发生发展有关。过表达miRNA-22能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调VEGF和P53的蛋白表达有关。