雪灵芝粗多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的探讨雪灵芝粗多糖(arenaria kansuensis crude polysaccharide,AKCP)对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法将小鼠随机分为5组:空白对照组、环磷酰胺(CTX)模型组、AKCP高、中、低剂量组。除空白对照组外其他4组采用腹腔注射CTX建立小鼠免疫低下模型。各组分别给予蒸馏水、不同剂量AKCP灌胃,10 d后处死小鼠,检测体质量增率、胸腺指数、脾脏指数、脾淋巴细胞增殖活性和CD3~+/CD4~+/CD8~+亚群、NK细胞杀伤活性、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、血清中IL-2和IFN-γ水平。结果 CTX组除NK细胞杀伤活性外的上述各项指标均较对照组明显降低(P0.05),不同剂量AKCP作用可减轻CTX所致的各项指标下降,其中AKCP高、中剂量组体质量增率、胸腺指数、脾淋巴细胞CD3~+及CD3~+CD8~+亚群、巨噬细胞吞噬率与吞噬指数均较CTX模型组明显升高(P0.05),AKCP低剂量组脾脏指数、脾淋巴细胞增殖指数以及IL-2和IFN-γ水平显著高于CTX模型组(P0.05)。结论 AKCP对环磷酰胺致免疫抑制小鼠的免疫功能有保护作用。     

花青素通过Nrf-2/HO-1信号通路调控哮喘气道炎症

目的探讨花青素在哮喘小鼠模型中氧化应激的作用以及可能的作用机制。方法50只雌性Balb/c小鼠随机分成对照组、模型组、花青素低剂量组、花青素中剂量组、花青素高剂量组。体外卵清蛋白(OVA)诱导建立哮喘模型,Diff-quik染色后观察细胞总数和各分类细胞数,肺组织切片HE染色观察肺部炎症情况。ELISA方法检测花青素对支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、IL-5和IL-13表达的影响。使用活性氧检测试剂盒通过荧光光谱法定量活性氧(ROS)。Western blot方法检测NF-κB表达水平的变化。Western blot和免疫组化观察Nrf2和HO-1的表达改变。结果与正常组相比,模型组中炎症细胞计数、IL-4、IL-5和IL-13表达升高,ROS含量升高,细胞核内NF-κB p65表达增高(P0.05);与模型组相比,花青素中、高剂量组中,炎症细胞数、IL-4、IL-5和IL-13的表达下降,ROS含量下降,细胞核内NF-κB p65表达下降,HO-1表达水平和Nrf2核转位明显升高(P0.05)。结论花青素通过激活Nrf-2/HO-1信号通路调控哮喘小鼠的气道炎症。     

柚皮素通过调控AMPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻糖尿病小鼠心肌损伤

目的:探讨柚皮素(naringenin,NAR)对糖尿病小鼠心肌的保护作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的影响。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为正常组(N组)和模型组。模型组采用连续腹腔注射链脲佐菌素的方法建立1型糖尿病小鼠模型,成模后将其分为糖尿病组(D组)、低剂量NAR干预组(D+L-NAR组)、中等剂量NAR干预组(D+M-NAR组)和高剂量NAR干预组(D+H-NAR组),对干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃,N组和D组给予与D+M-NAR组等体积的生理盐水灌胃。6周后处死小鼠,观察NAR对小鼠体重及血糖的影响;HE和Masson染色观察心脏形态学改变,测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化观察心脏组织中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-10的蛋白水平;TUNEL染色检测心肌组织凋亡情况;荧光探针DHE测定心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的生成;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及丙二醛(malondialdehyde, MDA)试剂盒测定心肌细胞中SOD活性及MDA的含量;Western blot测定心脏组织p-AMPKα、AMPKα、Nrf2、HO-1、NAD(P)H:醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1, NQO1]和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与N组相比,D组成模后血糖明显升高,体重明显下降;与D组相比较,NAR干预组的血糖有所下降,体重有所增高。与N组相比,D组CVF明显增大,凋亡率明显增加,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平升高,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平降低,ROS生成率和MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与D组相比较,NAR干预组CVF明显降低,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平降低,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平升高(P<0.05);与D组比较,D+L-NAR组ROS成率、MDA含量及SOD活性的差异无统计学显著性,D+M-NAR组及D+H-NAR组的ROS生成率降低、MDA含量降低,SOD活性升高。结论:NAR能减轻糖尿病小鼠心肌损伤,其机制可能与激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路,增强抗氧化反应,减轻心肌纤维化、凋亡及炎症反应有关。     

血红素加氧酶-1上调CD4~+ CD25~+ Treg foxp3表达以增强Treg的免疫抑制功能

本研究探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)诱导CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)foxp3表达,增加IL-10分泌,提高CD4+CD25+Treg的免疫抑制功能。选用磁珠分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,转染含HO-1质粒pcDNA3HO-1,或用血红素(hemin)、锡-原卟啉(Sn-protoporphyrin,SnPP)干预,培养48 h。用卵清蛋白致敏、激发BALB/c小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段分别经血红素和SnPP干预。用Real-Time PCR和Western blot方法分别测定培养细胞内HO-1、foxp3 mRNA及蛋白量;ELISA方法分别测定细胞上清液和动物血清中IL-10、TGF-β水平;用磁珠分离哮喘动物脾脏CD4+CD25+Treg进行功能抑制试验。结果显示:经pcDNA3HO-1和血红素上调CD4+CD25+Treg HO-1表达,foxp3表达及蛋白水平相应增加,上清液IL-10水平明显升高。而OVA致敏、激发的哮喘小鼠模型,经血红素干预后,血清IL-10分泌亦增多,CD4+CD25+Treg功能抑制作用显著增强。该结果表明HO-1诱导CD4+CD25+Treg特异性转录因子foxp3表达,促进IL-10分泌,增强CD4+CD25+Treg的调节功能,具有显著的免疫抑制作用。     

基于Nrf2通路姜黄素抑制卡介苗感染巨噬细胞氧化应激

目的：基于Nrf2通路探讨姜黄素对卡介苗（BCG）感染巨噬细胞氧化应激的抑制作用。方法：以THP-1源性巨噬细胞建立感染模型,分为4组：对照组、BCG组、BCG+姜黄素组、BCG+姜黄素+ML385组。采用活性氧（ROS）检测试剂盒,荧光显微镜下观察各组细胞ROS荧光强度;采用比色法检测细胞还原型谷胱甘肽（GSH）含量;Western blot检测Nrf2及其下游靶基因NQO1、HO-1的蛋白表达;MTT法检测各组细胞增殖率。结果：BCG感染显著增强ROS荧光强度,降低细胞GSH含量（P<0.01）,抑制Nrf2及其下游靶基因NQO1、HO-1的蛋白表达,抑制细胞增殖（P<0.01）;而姜黄素可显著减弱ROS荧光强度,提高GSH水平（P<0.05）,促进Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达及细胞增殖（P<0.01）;Nrf2抑制剂ML385则逆转了姜黄素的上述作用。结论：姜黄素可以通过增加Nrf2的表达,诱导下游抗氧化分子的转录从而减轻BCG诱导的巨噬细胞氧化应激。     

川芎嗪通过AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1途径减轻过敏性气道炎症和氧化应激的实验研究

目的本研究旨在探讨川芎嗪对过敏性炎症反应和氧化应激的影响,并探讨其机制是否与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。方法用组织化学染色来观察小鼠肺组织病理学改变;小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞数量用Diff-quik染色法检测;用ELISA法检测BALF中各种细胞因子和IgE的含量以及SOD,CAT活性和MDA表达水平;免疫荧光法检测p-AMPK和NF-κBp65在肺组织中表达水平;免疫组化法检测Nrf-2和HO-1在肺组织中表达水平;肺中的AMPK、p-AMPK、NF-κBp65、Nrf-2和HO-1蛋白进行定量分析采用Westernblot方法。结果哮喘小鼠模型中,川芎嗪可减少炎症细胞的渗出和浸润,抑制杯状细胞增生。川芎嗪治疗后,哮喘小鼠BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和IgE等蛋白表达水平明显降低,而干扰素-γ(IFN-γ)的表达增高。川芎嗪治疗后可使哮喘小鼠BALF中SOD和CAT活性升高,而MDA表达水平降低。川芎嗪也可降低OVA诱导哮喘小鼠NF-κBp65的表达,增加p-AMPK、Nrf-2和HO-1的表达。结论川芎嗪可以改善哮喘小鼠气道炎症反应和氧化应激,其机制可能与AMPK/NF-κB和Nrf-2/HO-1信号通路有关。     

小豆蔻素调节Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探究小豆蔻素（CAR）调节核因子e2相关因子2/血红素加氧酶-1/核因子-κB(Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠氧化应激损伤的影响。方法 实验分为对照组（Control组）、妊娠糖尿病模型组（GDM组）、低剂量CAR组（L-CAR组）、高剂量CAR组（H-CAR组），高剂量CAR+Nrf2抑制剂Brusatol组（H-CAR+BR组），每组12只。采用血糖仪测定大鼠空腹血糖（FBG）；胰岛素放射免疫分析试剂盒检测大鼠胰岛素（FINS）水平；试剂盒检测血清天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）以及总抗氧化能力（T-AOC）；试剂盒测定肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）水平；ELISA法测定血清炎性因子-肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-6)水平；H-E染色法检测肝脏组织病理变化；western blot法检测大鼠肝脏组织Nrf2、HO-1、NF-κB p65、p-...     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究迷迭香酸对抑郁模型大鼠的保护作用

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路在迷迭香酸(RA)保护抑郁模型大鼠中的作用。方法:采用孤养结合慢性不可预知性轻度应激(CUMS)法复制抑郁症大鼠模型,将60只SPF级6周龄雄性SD大鼠随机分为对照(Cont)组、CUMS组、CUMS+RA(10 mg/kg)组和CUMS+RA(10 mg/kg)+Nrf2抑制剂(Nrf2-IN-1,1 mg/kg)组(n=15)。CUMS造模3周后开始给药,连续3周。采用糖水偏好实验、强迫游泳实验和悬尾实验观察大鼠的抑郁样行为,采用HE染色和免疫荧光实验观察海马神经元损伤和小胶质细胞浸润情况,Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白的表达,试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:与Cont组相比,CUMS组表现出神经元排列疏松紊乱、胞核皱缩、小胶质细胞活化等损伤,强迫游泳和悬尾静止时间延长(P0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α、ROS和MDA水平升高(P0.05),糖水偏爱指数、SOD活性及HO-1、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、脑源性神经营养因子(BDNF)和核/质Nrf2蛋白表达降低(P0.05)。RA治疗可明显减轻上述损伤,缩短强迫游泳和悬尾静止时间(P0.05),降低IL-6、IL-1β、TNF-α、ROS和MDA水平(P0.05),上调糖水偏爱指数、SOD活性及HO-1、NQO1、BDNF和核/质Nrf2蛋白表达(P0.05)。与CUMS+RA组相比,CUMS+RA+Nrf2-IN-1组上述指标均显著逆转(P0.05)。结论:RA可通过活化Nrf2/HO-1通路,减轻海马组织氧化应激和炎症损伤,减少CUMS所致大鼠抑郁样行为。     

三种赤灵芝粉对免疫抑制模型小鼠免疫功能的调节作用

目的:为了探讨灵芝调节机体免疫功能的作用机制,并寻找出一种能有效改善机体免疫功能的灵芝制剂,本文研究了三种赤灵芝粉对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法:实验动物随机分为5组(Ⅰ～Ⅴ组),Ⅱ～Ⅴ组采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)70 mg.kg-1.bw-1,隔日注射,共4次,以制备动物模型,Ⅰ组注射等体积生理盐水。Ⅲ～Ⅴ组于注射CTX次日及末次注射CTX后11日内分别灌胃给予赤灵芝破壁孢子粉(D1)、赤灵芝孢子粉(D2)和赤灵芝精粉(D3)(1g.kg-1.bw-1),定期监测小鼠体重;给药后无菌取脾脏称重,计算脾指数;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验检测巨噬细胞吞噬功能;采用NK细胞介导的细胞毒试验检测NK细胞功能;采用淋巴细胞转化试验检测T、B淋巴细胞功能;采用流式细胞术检测CD4+T及CD8+T细胞比例。结果:与免疫抑制组相比,小鼠给予灵芝粉后,三组小鼠体重均升高(P<0.05);D3组脾指数降低;D1和D2组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬指数较免疫抑制组升高(P<0.05);三组小鼠NK细胞杀伤活性无明显变化;脾脏T、B淋巴细胞增殖能力无明显变化;D3组小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞比例明显升高,特别是CD4+T细胞升高最为显著且较正常对照高(P<0.05)。结论:三种灵芝对免疫抑制模型小鼠的免疫功能具有调节作用,尤其是赤灵芝精粉具有显著提高CD4+T细胞数量的作用,为其临床应用提供了实验依据。     

青藤碱通过调节 Nrf2 通路保护心肌细胞免受缺氧复氧损伤 #br#

【摘要】 目的 探究青藤碱通过调节 Nrf2 通路对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响。 方法 建立缺氧复氧损伤细胞模型, CCK-8 法检测细胞存活率; 乳酸脱氢酶试剂盒检测 LDH 水平; 肌酸激酶同工酶测试盒检测CK-MB 水平; 肌钙蛋白测定测试盒检测 cTnⅠ 水平; DCFH-DA 探针检测 ROS 含量; 总超氧化物歧化酶测定试剂盒检测 SOD 含量; 测定试剂盒检测 MDA 含量; 过氧化氢酶测定试剂盒检测 CAT 含量; 谷胱甘肽过氧化物酶测试盒检测 GSH-Px 含量。 ELISA 检测 TNF-α、 IL-6 和 IL-1β 水平; Hoechst 染色检测细胞凋亡率;Western 印迹检测 Cleaved caspase-3、 Cleaved caspase-9、 Keap1、 Nrf2、 p-Nrf2、 HO-1、 NQO1 蛋白表达水平;利用 siRNA 敲减 Nrf2 低表达 Nrf2 后再次检测上述指标变化。 结果 与 OGD / R 组比较, 各剂量组细胞存活率降低, LDH、 CK-MB、 cTnⅠ 水平降低, ROS、 MDA 含量降低, SOD、 CAT 和 GSH-Px 含量升高, TNF-α、IL-6 和 IL-1β 水平降低, 细胞凋亡率降低, Cleaved caspase-3、 Cleaved caspase-9、 Keap1蛋白水平降低, pNrf2 / Nrf2、 HO-1、 NQO1 蛋白水平升高。 通过 siRNA 敲减 Nrf2 低表达 Nrf2 后, 氧化应激, 炎性反应和相关蛋白表达被逆转。 结论 青藤碱通过调节 Nrf2 通路保护心肌细胞免受缺氧复氧损伤。