ARE——基因表达转录后调控的重要元件之一

 位于一些基因3'端非翻译区的富含A、U元件（AREs）是目前公认的能够在转录后水平调节mRNA稳定性的元素之一。它兼具介导相关因子mRNA衰变及增强某些mRNA稳定性的作用，ARE结合蛋白及p38 MAPK信号转导通路在此过程中作用关键，miRNA与其也具有密切联系。     

Daxx研究进展

Daxx(death dom ain assoc iated prote in)是一种多功能的核蛋白,能与Fas死亡结构域结合,激活Jun氨基端激酶通路诱导细胞凋亡。Daxx也具有抗凋亡作用。Daxx与细胞内的转录因子和转录相关蛋白结合,发挥转录调控的作用。Daxx与多种病毒蛋白相互作用,调节病毒的复制周期和感染性。     

Smads蛋白结构与功能的研究进展

TGF-β家族成员与细胞膜上受体结合后 ,通过 Sm ads蛋白 ,调节细胞核内特异的基因表达。从结构和功能上看 ,Smads蛋白可以分为 3类。受体调节 - Sm ads(R- Sm ads)作为具有 Ser/Thr激酶活性的 TGF-β受体 - I的底物 ,激活后通过 MH2结构域 ,与共同介导的 Smads(Co- Smads)相互作用形成异聚体 ,直接结合在目的基因启动子上 ,影响基因转录。而转录抑制 Smads(I- Sm ads)能够拮抗 R- Sm ads的生物活性。在细胞内 ,Smads蛋白通过与不同的转录蛋白或转录共调节因子相互作用 ,在不同类型的细胞内介导特异的基因表达。改变 Smads蛋白的正常结构和功能常引起人体发生各种病变     

热休克转录因子1及其突变体的研究进展

热休克因子1（HSF1）是一种转录因子，在正常时不活化，应激时活化而具有反式激活能力。在其蛋白质结构中含有DNA结合域、三聚结构域、调节结构域、转录活化结构域等，它们在HSF1活化过程中各自发挥重要作用。通过改变HSF1的结构构建其突变体，能特异地引起或阻碍HSF1的活化。这些突变体已应用于心血管疾病、肿瘤、神经系统疾病的研究。     

野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压对大鼠肺Hippo信号通路相关分子表达的影响

目的:研究野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时肺Hippo信号通路相关分子表达的变化,探讨Hippo信号通路对肺动脉高压发生发展的意义。方法:45只SD大鼠随机分为对照组(n=15)和模型组(n=30),模型组一次性给予颈部皮下注射野百合碱(60 mg/kg)建立肺动脉高压模型,对照组注射相同剂量的生理盐水。4周后通过右心导管术检测右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP),计算右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)和右心室质量指数(right ventricular mass index,RVMI);HE染色观察肺小动脉重构,计算中膜厚度百分比(medialthickness/external diameter, M/E%);Masson染色检测肺组织纤维化;免疫组化检测肺小动脉中Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、tafazzin(TAZ)和TEAD蛋白表达的变化;Western blot和RT-qPCR检测肺组织中YAP、TAZ和TEAD蛋白和mRNA表达的变化。结果:与对照组相比,模型组大鼠的血管壁显著增厚,M/E%明显增高(P0.01),肺组织纤维化明显;模型组的RVSP、RVHI和RVMI均明显高于对照组(P0.01);免疫组化染色结果提示模型组肺小动脉YAP、TAZ和TEAD的蛋白水平显著高于对照组,Western blot和RT-qPCR结果显示肺组织YAP、TAZ和TEAD的蛋白和mRNA水平同样高于对照组(P0.05)。结论:Hippo信号分子的激活可能促进了肺小动脉的重构,进而介导了野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压的发生发展。     

泛素化在TRAF2介导的NF-κB信号通路中的作用

NF-κB(核因子κ增强子结合蛋白)是核转录因子家族成员,具有调节免疫、炎症和细胞存活的功能.它可被TRAF2(tumor necrosis factor receptor associated factor 2,肿瘤坏死因子受体相关因子2)等相关因子活化.TRAF2包含了N-端的环指结构域和C-端的高度保守结构域.它通过与肿瘤坏死因子受体超家族成员相互作用,介导了下游信号通路.而TRAF2的泛素化在过程中是关键的,鞘磷脂作为TRAF2的泛素化连接酶辅助因子,在TRAF2介导的NF-κB信号通路中发挥重要作用.     

LIM蛋白的功能

L IM结构域的主要作用是参与蛋白质之间的相互作用 ,目前已发现多种蛋白含有这种结构域 ,将它们统称为“L IM蛋白”。目前 L IM蛋白主要分为 4类 :L IM同源异型结构域蛋白 (L HX)、单纯 L IM结构域蛋白(L MO)、L IM激酶以及其它 L IM蛋白。 L HX蛋白的功能主要是通过激活转录参与细胞命运的决定 ,L MO蛋白的功能主要是通过调节转录来控制细胞的异常增生 ,L IM激酶的作用则是参与细胞骨架的组织。因此 ,L IM蛋白在机体的生长发育中发挥着重要的作用 ,了解 L IM蛋白功能将对于我们进一步解释相关的生理和病理现象、控制疾病的发生提供一定的基础     

抑癌基因Runx3的研究进展

Runt区域转录因子也称PEBP2／CBF（polyomavirus enhancer—core binding protein 2／core binding factor）转录因子家族，是TGF—β超家族信号重要的靶目标，在哺乳动物发展中扮演重要角色。它由Runx基因编码的α亚基和一个由Cbfβ基因编码的β亚基组成。α亚基内含有一段由128个氨基酸组成的高度保守域，有两个不同的功能：与DNA结合的能力和与β亚基相互作用的功能，其保守域叫Runt结构域（Runt domain，RD），因与果蝇Runt蛋白的一个区域同源而得名。RD位于Runx的氨基末端，包含一个S型免疫球蛋白折叠，介导Runx蛋白质α与β亚基的异二聚体化以及Runx蛋白质与其保守的DNA靶序列PyGPyGGT（Py为嘧啶碱基）的结合。这种结合导致靶基因的激活或抑制。PyGPyGGT保守序列存在于一系列病毒和细胞启动子和增强子中。     

原癌基因c-ets编码与c-Fos和c-Jun协同激活转录的转录因子

许多不同的癌基因,血清生长因子和肿瘤促进剂TPA对转录的激活都要AP-1和PEA3的协同作用。本文作者证明以前不知其功能的原璃基因ets-1和ets-2的产物是一类通过PEA3结合区激活转录的转录因子。p68 蛋白特异性地同DNA结合,并含有转录激活结构域。这个结构域同其它转录因     

酵母双杂交体系一种研究蛋白—蛋白相互作用的强有力方法

双杂交体系是研究蛋白－蛋白相互作用的一种有效方法。将相互作用的两个蛋白分别与转录因子的ＤＮＡ结合结构域和转录激活结构融合成两个杂交体，在酵母细胞内，通过报告基因的表达情况反反映两蛋白之间的相互作用。其主要特点是操作简单，可以研究蛋白间弱相互作用，通用筛库可直接得到与目的蛋白相互作用蛋白的ＤＮＡ序列，用双杂交体系筛库时最值得注意的是假阳性问题。     

BTB-Kelch家族蛋白KLHL32参与炎症反应调控的初步分析*

 目的：克隆人BTB-Kelch家族蛋白KLHL32编码基因并初步鉴定其在细胞中的功能。方法：采用实时荧光定量PCR分析Toll样受体5（Toll-like receptor 5,TLR5）特异性激活剂鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白（flagllin from S. typhimurium,ST-FLA）刺激经佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导分化的THP-1巨噬细胞中KLHL32 mRNA表达水平的变化,应用RT-PCR克隆人KLHL32编码区的cDNA序列并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1,采用萤光素酶双报告基因表达系统分析KLHL32过表达对转录因子核因子κB（NF-κB）活性的影响,并采用免疫共沉淀实验分析了KLHL32与Cul-3蛋白在细胞内的相互结合。结果：ST-FLA（100 μg/L）刺激经PMA诱导分化的THP-1巨噬细胞4 h引起KLHL32 mRNA的表达水平下调;成功克隆了人KLHL32基因并将其克隆至真核表达载体中获得重组质粒pcDNA3.1-KLHL32-FLAG,在HEK293细胞中过表达KLHL32蛋白对TNF-α诱导的转录因子NF-κB激活没有明显影响,但KLHL32可通过其氨基端的BTB结构域与Cul-3相互结合。结论：成功鉴定了人KLHL32蛋白,其通过BTB结构域与Cul-3蛋白相互结合,可能是一种潜在的E3泛素连接酶,证实了TLR5受体激活可诱导其表达水平的下调,提示KLHL32蛋白在细胞中可能参与炎症细胞信号转导的调控。     

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析

目的：分析甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法：用进化足迹法，结合转录因子数据库的搜索，预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位，在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果：预测出11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位，其中除已知转录因子激活蛋白1（activatorprotein1，AP1）在MNNG处理后被激活外，用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有2个转录因子——核因子Y（nuclear factor Y，NFY）和GATA结合因子（GATA-binding factor，GATA）的活性升高。结论：进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。     

CREB结合蛋白辅活化子复合物的差异作用

在环腺苷酸反应元件结合蛋白CREB,核受体信号转导子和转录激活子STATl等转录因子的激活过程中,P300和CREB结合蛋白(CBP)是必不可少的激活蛋白。腺病毒的早期基因产物EIA可抑制CBP的转录激活子活性。作者通过对EIA抑制视黄酸受体RAR和STATl介导的转录激活作用机制的研究揭示了CBP的不同功能。CBP的半胱氨酸、组氨酸富含区C/H3可与     

淫羊藿苷通过YAP促进大鼠关节软骨细胞增殖的研究

目的 研究淫羊藿苷（Icariin）通过yes相关蛋白（YAP）促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用和机制。方法 采用细胞增殖实验、RT-qPCR和免疫荧光染色测定淫羊藿苷促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用。采用RT-qPCR检测淫羊藿苷促进YAP表达的作用。通过沉默YAP基因的表达来确定YAP在细胞增殖中的作用以及淫羊藿苷是否通过YAP来促进细胞的增殖。结果 大鼠关节软骨细胞的增殖与YAP表达上调有关。淫羊藿苷能促进YAP表达和去磷酸化,使其进入细胞核内启动增殖相关基因的表达,从而促进软骨细胞增殖。结论 淫羊藿苷通过上调YAP表达以及激活YAP来促进软骨细胞增殖,可能有助于损伤软骨的再生修复。     

NF-κB在人肝细胞肝癌中的表达及与HBV X蛋白的关系

目的：研究核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒（HBV ）X蛋白的关系。方法；用免疫组织化学S－P法，检测52例人肝细胞肝癌组织中核转录因子NF－-κB及HBV X蛋白的表达；用脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染入人肝癌细胞系HCC－9204，检测肝癌细胞内核转录因子NF－-κB的表达。结果：52例人肝细胞肝癌组织均有核转录因子NF－-κB的广泛表达，并且在11例HBV X蛋白阳性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于细胞胞质和胞核，而在41例HBV X蛋白阴性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于肝癌细胞的胞质。将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染 入人肝癌细胞系HCC－9204，并在稳定表达X蛋白 的肝癌细胞，核转录因子NF－-κB定位于其胞质和胞核，而未进行基因转染的亲体细胞，核转录因子NF－-κB仅定位于细胞质，细胞核无核转录因子NF－-κB的表达。结论：核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中广泛表达，人肝细胞肝癌中存在着核转录因子NF－-κB的异常激活，并且核转录因子NF－-κB的异常激活与HBV X蛋白有关，X蛋白激活核转录因子NF－-κB， 使其从细胞转位于细胞核，这可能在HBV相关的人原发性肝癌肝癌的发生中起一定作用。     

人p100蛋白:可增强STAT6基因转录活性的新因子

目的：建立可稳定表达人类p100蛋白的细胞株，研究细胞内p100蛋白参与STAT6介导的基因转录调控的机制。方法：利用免疫共沉淀法检测蛋白与蛋白问结合，荧光素酶法测定STAT6基因转录活性。结果：p100既可与STAT6结合，亦可与RNA多聚酶Ⅱ结合，并能增强STAT6介导的基因转录活性。结论：p100蛋白是STAT6共激活因子，可桥连STAT6和基本转录调控元件，促进STAT6介导的基因转录活性。     

核蛋白CREB的转录调控机制

CREB(c AMP反应元件结合蛋白 )是一重要的核转录因子 ,为 b ZIP家族成员之一。它的蛋白单体从 N端到 C端主要包括激酶诱导域 (KID)、碱性区 (basic region)和亮氨酸拉链模体 (leucine zipper m otif)。 CREB受多种信号转导通路的调控 ,除了经典的 c AMP调控通路外 ,还有如 Ras- Raf- MAPK通路、Ca2 + - Ca MK通路、应激相关的 P38通路等。活化的 CREB需同辅激活因子 CBP相结合 ,才能激活转录发生。 CREB为管家基因的产物 ,功能广泛而复杂 ,可诱导癌细胞凋亡 ,对胚胎发育具有不可或缺的作用     

转录因子GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节Tie2基因的表达

目的：探讨在炎症刺激因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）介导的炎症反应中转录因子GATA家族成员是否参与了Tie2基因的转录调控。方法: 采用实时定量PCR测定TNF-α作用前后人主动脉内皮细胞（HAECs）和肺动脉内皮细胞（HPAECs）中GATA家族成员GATA2、GATA3 mRNA的表达,利用荧光素酶活性检测研究GATA转录因子能否激活Tie2基因启动子,并采用电泳迁移变动分析（EMSAs）和超级迁移率变动试验（supershift）研究GATA转录因子是否通过与Tie2基因启动子结合,从而激活Tie2基因的表达。结果: TNF-α可诱导人血管内皮细胞HAECs和HPAECs中转录因子GATA2的表达,高表达的GATA2可与Tie2基因启动子上的（T/A）GATA(A/G)序列结合,激活Tie2基因启动子,从而上调Tie2基因的表达。结论: GATA转录因子家族成员GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节了Tie2基因的表达。     

锌指蛋白ZNF580定位在MGC803细胞核

新基因(AF184939)ZNF580是由本组克隆并于Genbank注册的C2H2型锌指蛋白转录因子基因,其cDNA 748~1266 bp之间的碱基构成一个完整的开放阅读框,编码172个氨基酸。蛋白功能基序分析表明:其羧基端序列中含有3个重复串联的C2H2型锌指蛋白主构域:CX2CX3FX5LX2HX3H(X代表保守性差的氨基酸),富含脯氨酸残基的氨基端序列为转录激活结构域[1]。利用绿色荧光(green fluorescence pro-tein,GFP)在活细胞内的示踪作用[2],我们将GFP与ZNF580cDNA开读框融合,导入胃癌MGC803细胞株中,直观地观察到ZNF580基因在细胞内的表达及亚细胞定位,…