平喘方干预哮喘模型观察“IL-33-ST2”肺肠免疫变化的研究北大核心CSCD

目的:采用平喘方干预哮喘模型观察IL-33-ST2通路在肺肠组织的变化研究。方法:40只BALB/c小鼠分空白对照组、模型组、地塞米松组(DEX)和平喘方组(PCF)。用OVA联合Al(OH)3建造哮喘模型。通过HE染色观察肺和肠道组织形态学变化。ELISA检测BALF中IL-5和IL-13的变化。通过RT-PCR和Western blot检测肺和肠道组织中IL-33-ST2通路上相关因子的mRNA和蛋白的表达。结果:平喘方能够有效下调哮喘小鼠肺部IL-5和IL-13(P<0.05)的表达,其中IL-13的表达差异最为显著。同时能够下调肺肠组织中IL-33-ST2通路上相关因子,其中IL-33等表达差异显著(P<0.05)。结论:平喘方下调哮喘模型肺肠组织IL-33-ST2通路中相关因子的表达。     

miR-31在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-31在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用realtime PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-31的表达;化学合成miR-31模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-6(IL-6)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-31表达显著升高(P0.01)。HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-31模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与IL-6的蛋白表达显著升高(P0.01)。结论 miR-31在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,miR-31模拟物能够上调哮喘小鼠的气道炎症。     

miR-221在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-221在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用realtime PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-221的表达。化学合成miR-221抑制剂与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠肺组织IL-1β与IL-4的蛋白表达。结果 HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-221表达水平显著升高(P0.01)。哮喘小鼠肺组织IL-1β与IL-4的蛋白表达水平显著高于正常对照组,而低于miR-221抑制剂组(P0.01)。结论 miR-221在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,miR-221抑制剂能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。     

温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:60只SD大鼠随机分为6组,即正常组、模型组、温阳益气平喘高剂量组、温阳益气平喘低剂量组、桂龙咳喘宁组,氨茶碱组,每组10只.除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型,各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药,激发并给药4周后处死大鼠.应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡,免疫组织化学检测肺组织Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:温阳益气平喘方高低剂量组大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数显著高于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高剂昔组优于氨茶碱组(P＜0.01);肺组织及气道壁中Bcl-2蛋白阳性细胞的比例显著低于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高剂量组优于桂龙咳喘宁和氨茶碱组(P＜0.01);Bax蛋白阳性细胞的比例显著高于哮喘模型组(P＜0.01),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高低剂量组优于氨茶碱组(P＜0.01和P＜0.05).结论:温阳益气平喘方可通过调节抑制凋亡基因bcl-2和促进凋亡基因bax蛋白的表达,促进肺内EOS凋亡,减少炎细胞浸润,减轻哮喘气道炎症.     

miR-33a在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-33a在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用real-time PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-33a的表达;化学合成miR-33a模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-6(IL-6)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-33a表达显著降低(P0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-33a模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与IL-6的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论 miR-33a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中低表达,miR-33a模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。     

miR-21在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-21在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用实时PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-21的表达;化学合成miR-21模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-21表达显著升高(P<0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-21模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与NF-κB的蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,miR-21模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。     

miR-146a在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-146a在哮喘患儿痰液中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用real-time PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-146a的表达;化学合成miR-146a模拟物与阴性对照,并分别滴鼻至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-146a表达显著升高(P0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-146a模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织IL-1β与IL-4的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论 miR-146a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,miR-146a模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。     

miR-155在哮喘患儿痰液的表达及对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨miR-155在哮喘患儿及哮喘小鼠中的表达及其对气道炎症的作用。方法应用realtime PCR方法检测哮喘患儿和健康儿童痰液,以及卵清蛋白诱导的哮喘小鼠和正常小鼠肺组织中miR-155的表达;化学合成miR-155模拟物与阴性对照,并分别鼻滴至哮喘小鼠,HE染色验证哮喘小鼠模型的成功建立,免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠肺组织TNF-α与NF-κB的蛋白表达。结果与对照组相比,哮喘患儿痰液及哮喘小鼠肺组织中miR-155表达显著降低(P0.01);HE染色显示哮喘模型组小鼠炎症细胞浸润明显高于正常对照组,哮喘小鼠模型成功建立。miR-155模拟物滴入后,哮喘小鼠肺组织TNF-α与NF-κB的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论 miR-155在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中低表达,miR-155模拟物能够抑制哮喘小鼠的气道炎症。     

miRNA-21在支气管哮喘患儿血清及哮喘小鼠模型肺组织中表达上调

目的探讨miRNA-21在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达,观察其靶基因PTEN在哮喘小鼠模型肺组织中的表达变化。方法应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miRNA-21的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症。应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miRNA-21及其靶基因PTEN的表达,Western blot方法检测哮喘小鼠与对照组小鼠肺组织PTEN蛋白的表达。结果支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-21表达水平显著高于正常儿童(P0.01)。哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数及肺组织炎症细胞浸润显著高于正常对照组,哮喘组小鼠肺组织miRNA-21mRNA表达水平显著高于正常对照,PTEN mRNA与蛋白水平明显低于正常对照组(P0.01)。结论 miRNA-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,表明其可能参与支气管哮喘的发病机制。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14 (Fn4)表达的调节作用.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型.将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只.HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P＜0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P＜0.01).TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P＜0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P＜0.01).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应.     

芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解哮喘小鼠气道炎症的作用机制

目的 探讨芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道炎症。方法 将40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机分为5组,分别为正常组(control)、OVA模型组、芝麻素低剂量组(50 mg/kg)、芝麻素高剂量组(100 mg/kg)、阳性对照地塞米松(dexamethasone, DEX)治疗组(1 mg/kg),每组8只。使用Diff-Quick染色法对每组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中的各种炎症细胞进行分类、计数;小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量使用ELISA法进行检测;流式细胞术测定小鼠肺组织CD4阳性细胞群中细胞因子的阳性百分率;对各组小鼠的肺组织进行HE、PAS染色,并观察其病理学改变;对小鼠肺组织进行免疫组织化学染色,观察NLRP3蛋白的表达分布情况;Western blot方法检测AMPK、p-AMPK、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达水平。结果 芝麻素能够减少OVA引起的哮喘小鼠BALF中各种炎症细胞数量,降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13...     

葫芦素E通过抑制MAPKs/NF-κB通路减轻哮喘小鼠气道炎症

目的:探讨葫芦素E对哮喘小鼠气道炎症及MAPKs和NF-κB信号通路的影响。方法:将40只健康小鼠随机分成对照组、模型组、葫芦素E低剂量组、葫芦素E高剂量组和地塞米松组。用卵清蛋白致敏法制备哮喘模型,观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞分类计数、肺组织炎症细胞浸润以及BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13及干扰素γ(IFN-γ)含量的变化;测定肺组织中磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化NF-κB p65(p-p65)的含量。结果:与正常组比,模型组BALF中炎症细胞数量明显增加,并且MAPKs和NF-κB信号通路相关蛋白活性显著增强。我们发现高剂量葫芦素E可减轻哮喘小鼠气道炎症反应,并明显抑制MAPKs和NF-κB信号通路相关蛋白活性。病理组织学结果显示,模型组小鼠肺组织内有杯状细胞及支气管黏膜上皮细胞增生,肺泡内有炎症细胞浸润,管腔狭窄;各剂量葫芦素E处理组病理改变均较模型组显著减轻。结论:葫芦素E可以减轻哮喘小鼠气道炎症反应,其机制可能与抑制MAPKs和NF-κB信号通路有关。     

全氟辛酸暴露对哮喘小鼠炎症介质IL-4和IFN-γ及糖皮质激素受体的影响

目的:研究全氟辛酸(PFOA)对哮喘小鼠气道炎症、外周血炎症介质白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)以及肺组织糖皮质激素受体(GR)表达的影响及其可能机制。方法:30只BALB/c小鼠随机分为正常对照(C)组、哮喘模型(A)组、哮喘+PFOA低剂量(AP10)组、哮喘+PFOA中剂量(AP50)组和哮喘+PFOA高剂量(AP100)组,根据不同分组分别制作哮喘模型及PFOA暴露模型。留取肺组织标本后进行HE染色,透射电镜标本制作,ELISA法检测外周血IL-4及IFN-γ水平,并以Western blot及免疫组织化学染色法检测肺组织GR的蛋白表达。结果:肺组织病理切片HE染色结果显示,与正常小鼠相比,哮喘小鼠气道及血管周围可见明显的炎症细胞浸润及黏液分泌,AP各组表现更为明显。透射电镜结果显示,哮喘小鼠肺组织超微结构破坏明显。ELISA检测血清炎症因子结果表明,与C组相比,A组及AP各组外周血炎症因子IL-4升高,IFN-γ明显降低(P0.05);与A组相比,AP10组及AP50组无明显差异,而AP100组外周血炎症因子IL-4升高,IFN-γ明显降低(P0.05)。Western blot结果显示哮喘小鼠肺组织GR表达较正常小鼠降低(P0.05),而A组与AP各组之间无显著差异。免疫组化结果提示GR蛋白主要表达于小鼠肺组织支气管柱状上皮细胞、气道平滑肌细胞及血管平滑肌细胞胞浆。结论:哮喘小鼠气道PFOA急性暴露可通过诱导Th2型免疫反应加剧肺部炎症,促进气道及血管周围的炎症细胞浸润并破坏肺组织超微结构,且与剂量相关。     

哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+调节T细胞和Foxp3蛋白的变化及淫羊藿苷干预作用

目的:研究哮喘小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节T(Treg)细胞和Foxp3蛋白的变化,探讨淫羊藿苷对哮喘干预机制。方法:将BALB/c小鼠32只随机分为正常对照组、哮喘模型组、淫羊藿苷组、地塞米松阳性对照组,每组8只。哮喘模型制备用卵白蛋白(OVA)致敏大鼠并雾化吸入刺激,治疗组采用相应药物灌胃给药,对照组用等量生理盐水代替。最后一次激发24小时后,采用Buxco肺功能仪有创法检测小鼠气道反应性;HE染色评价观察小鼠肺组织病理形态学改变;流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3蛋白表达量;免疫印迹法测定肺组织Foxp3蛋白表达量;ELISA法测定血清及肺泡灌洗液(BALF)IL-10水平。结果:与正常对照组比较:模型组气道阻力及气道炎症指数显著增加(P<0.05);脾Treg细胞比例无明显变化(P>0.05);脾Foxp3蛋白表达显著下降(P<0.05),肺组织Foxp3蛋白表达显著升高(P<0.05),外周血IL-10水平显著下降(P<0.05),BALF中IL-10无显著差异(P>0.05);与模型组比较:淫羊藿苷组气道阻力和气道炎症明显减轻(P<0.05);脾Treg细胞比例和脾Foxp3蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),但淫羊藿苷可进一步上调哮喘小鼠肺组织Foxp3蛋白表达量(P<0.05),并增加外周血IL-10水平(P<0.05)。结论:哮喘小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞Foxp3蛋白表达水平下降,淫羊藿苷可显著改善哮喘小鼠气道炎症和气道高反应,可能与其上调肺组织Foxp3蛋白表达和增加外周血IL-10水平相关。     

芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解哮喘小鼠气道炎症的作用机制

目的 探讨芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道炎症。方法 将40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机分为5组,分别为正常组(control)、OVA模型组、芝麻素低剂量组(50 mg/kg)、芝麻素高剂量组(100 mg/kg)、阳性对照地塞米松(dexamethasone, DEX)治疗组(1 mg/kg),每组8只。使用Diff-Quick染色法对每组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中的各种炎症细胞进行分类、计数;小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量使用ELISA法进行检测;流式细胞术测定小鼠肺组织CD4阳性细胞群中细胞因子的阳性百分率;对各组小鼠的肺组织进行HE、PAS染色,并观察其病理学改变;对小鼠肺组织进行免疫组织化学染色,观察NLRP3蛋白的表达分布情况;Western blot方法检测AMPK、p-AMPK、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达水平。结果 芝麻素能够减少OVA引起的哮喘小鼠BALF中各种炎症细胞数量,降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13...     

番茄红素抗哮喘作用及机制研究

目的:探讨番茄红素对哮喘气道炎症的影响及可能的作用机制。方法:雄性BALB/c小鼠40只随机分为对照组(control)、模型组(model)、番茄红素低剂量组(LYC 50 mg/kg)和番茄红素高剂量组(LYC 100 mg/kg)。卵清蛋白诱导建立哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),Diff-quik染色进行炎症细胞计数,HE染色观察肺组织病理学变化,ELISA和Western blot分别检测IL-4、IL-5和IL-13水平,乙酰甲胆碱雾化吸入检测哮喘小鼠气道高反应性,利用荧光探针DCFH-DA检测ROS水平,比色法检测SOD活性和MDA含量,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT以及p-p65蛋白表达水平。结果:番茄红素能够明显降低哮喘小鼠BALF中炎症细胞数,改善哮喘小鼠肺组织病理改变及气道高反应性,降低哮喘小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5和IL-13水平,降低ROS水平和MDA含量,提高SOD活性,抑制p-PI3K、p-AKT以及p-p65蛋白表达。结论:番茄红素通过抑制ROS调控的PI3K/AKT/NF-κB信号通路发挥抗哮喘作用。     

姜黄素对哮喘小鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶的影响

目的探讨姜黄素对哮喘小鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶的影响。方法36只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和姜黄素组,用卵蛋白作为致敏原制备哮喘小鼠模型,对支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,硝酸还原酶法检测肺组织iNOS活性及NO含量,免疫组织化学和Western blot方法检测大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白表达,双抗体夹心法检测肺组织白细胞介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平。结果姜黄素干预可显著降低哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数与肺组织iNOS活性及NO含量,减轻炎症反应。免疫组织化学和Western blot结果显示,姜黄素组小鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白表达显著低于哮喘小鼠(P0.01)。结论姜黄素可降低哮喘小鼠气道炎症及iNOS表达水平,提示姜黄素对于哮喘可能有潜在的治疗作用。     

CCR5第二胞外环的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响

目的:研究与CC趋化因子受体5(CC chemokine receptor 5,CCR5)第二胞外环特异性结合的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响。方法:筛选最适宜的卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏浓度,构建OVA诱导的BALB/c小鼠哮喘模型。模型构建成功后通过尾静脉注射不同浓度拮抗短肽干预模型小鼠,HE染色对肺组织进行病理细胞学分析及炎症分级,real-time PCR与Western blot实验分别检测小鼠肺组织TNF-α的mRNA和蛋白表达水平。结果:筛选出的OVA最佳致敏浓度为500 mg/L(0.1 mL)。尾静脉注射0.2m L不同浓度(1.5 g/L、2.5 g/L和3.5 g/L)拮抗短肽干预哮喘小鼠,能减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达,以2.5 g/L浓度效果最佳,较模型组炎症程度减轻2级,炎症细胞数明显减少,TNF-α的mRNA表达量较模型组下降近90%,蛋白表达水平下降约70%。同时该短肽(2.5 g/L)也起到了一定的预防作用,炎症程度改善1级,TNF-α的mRNA及蛋白水平较模型组下降约50%左右。结论:CCR5第二胞外环的拮抗短肽能有效减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达。     

哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt的表达与气道炎症的关系

目的:探讨Th17细胞转录因子RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与哮喘气道炎症的关系.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平;免疫印记(Western blot)方法检测肺组织RORγt蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、蛋白水平及IL-17水平均明显高于对照组和地塞米松治疗组(P＜0.05),RORγt蛋白表达量与嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、BALF、外周血中IL-17含量、肺组织IL-17 mRNA表达量均呈正相关关系(r＝0.789、0.795、0.902、0.669、0.806、0.883,P值均＜0.01).结论:RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达,其表达水平与气道炎症密切相关,参与了哮喘气道炎症的发生过程.