乙型肝炎病毒正链转录及调节的研究进展

乙型肝炎病毒正链转录体（HBV asRNA），通过与HBV负链转录产生的mRNA互补结合成双链RNA（dsRNA），在核内或胞质中下调病毒的转录与表达，是病毒复制表达的重要自身调节分子。HBV通过抑制正链的转录，保护负链的转录产物作为逆转录及翻译相应病毒蛋白的模板，促进自身的复制与表达。因此，研究HBV正链的转录与调节，能深人对HBV分子病毒学机制的探索，为今后的抗病毒治疗提供新的思路。     

乙肝病毒基因组的复制,转录与调控

本文综述了HBV DNA复制、转录及其调控的研究进展。HBV DNA的复制包括:cccDNA形成,前基因组RNA的合成与包装,DNA负链合成及DNA正链合成等四个主要步骤.HBV DNA转录的机理目前不十分清楚,其可能有赖于宿主体内的RNA聚合酶Ⅱ,转录的模板是cccDNA。目前已经证实HBV DNA可转录3.5kb,2.1kb和0.8kb三种主要的转录体。HBV DNA转录受顺式和反式激活因子调控,HBV增强子成分和启动子成分是主要的顺式激活因子;HBxAg可能是HBV DNA转录的反式激活因子,这些调控因子共同参与HBV DNA转录的调节。     

HBV转录后调节基序

乙型肝炎病毒(HBV)基因的表达调控是近年来HBV分子生物学研究的重点之一,对于了解HBV的致病机理、HBV与肝癌的关系以及对乙型肝炎和肝癌的预防和治疗均有重要的意义.HBV转录后调节基序就是新近发现的在转录后水平顺式调节HBV复制与表达的调控区域.     

HBV转录后调节基序

乙型肝炎病毒(HBV)基因的表达调控是近年来HBV分子生物学研究的重点之一，对于了解HBV的致病机理、HBV与肝癌的关系以及对乙型肝炎和肝癌的预防和治疗均有重要的意义。HBV转录后调节基序就是新近发现的在转录后水平顺式调节HBV复制与表达的调控区域。     

脊髓灰质炎病毒单链RNA和双链RNA在去核细胞中的不同感染性

脊髓灰质炎病毒在细胞内复制过程中,产生一种复制中间体(replieative form RNA),简称RF。即可能是一个带有基因组的正链和一个互补的负链组成的一个完整的双链RNA分子,这种复制中间体的感染性问题,正在引起人们的注意。一般认为带有单链RNA的病毒粒子对细胞感染     

肝脏内源性microRNA调控乙型肝炎病毒基因的表达与复制

目的探讨肝脏内源性microRNA对乙型肝炎病毒(HBV)复制与基因表达的影响。方法通过miRNA靶点分析软件寻找与HBV序列之间相关联的肝脏内源性microRNA,体外化学合成相应的microRNA分子,将合成寡核苷酸及对照与1.3倍HBV全基因组真核表达质粒pUC18-HBV1.3采用Lipofectamine2000共转染HepG2细胞,转染48h后收集细胞培养上清;通过ELISA检测HBsAg、HBeAg的表达水平;Western印迹检测HBcAg的表达水平;Trizol抽提转染细胞RNA,逆转录后用荧光定量PCR检测HBVmRNA的水平;提取细胞基因组DNA,Southern印迹检测HBV的复制中间体。经以上检测从HBV蛋白表达、转录和复制水平评价相应的microRNA作用效应。结果生物信息学方法提示miR-16和miR-122存在与HBV基因组作用的可能结合位点。经试验初步证实miR-16可下调HBV蛋白的表达及HBVDNA水平;miR-122可下调HBsAg、HBeAg的表达,上调HBVmRNA的水平。结论肝脏内源性microRNA可以调节HBV的复制与基因表达。     

乙型肝炎病毒mRNA转录后剪接加工的研究进展

据统计,全世界乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的携带者可达两亿人。在我国,它是导致肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因。然而,到目前为止,ＨＢＶ的某些遗传特性及转录后调控的分子生物学机制尚不十分清楚。本文试就ＨＢＶ ｍＲＮＡ转录后剪接加工的机制、类型、及可能的生物学作用作一综述。１ＨＢＶ基因组及其复制与表达 ＨＢＶ基因组由一个约３．２ｋｂ的双链环形ＤＮＡ组成,双链长度不对称,全长的一链因与病毒ｍＲＮＡ互补,定为负链,较短一链定为正链。正链仅５’端固定,长度为负链的５０％～１００％,其３’端位置不定,因而在病毒群体中…     

HBx与宿主蛋白质的相互作用

HBx是哺乳动物嗜肝性 HBV的 X读码框所编码的 HBV中唯一具有多种调控功能的病毒蛋白质。这些调控作用包括 :激活宿主细胞和病毒自身基因的转录、调控凋亡、抑制细胞中受损 DNA的外切修复反应以及激活细胞中信号转导通路如 :MAPK、JAK、STAT的级联反应等 ;HBx通过这样的多种调控作用直接或间接地对病毒自身的复制与增殖以及宿主细胞中基因的表达与调控、细胞的凋亡与癌变等过程都产生了广泛的影响     

固有免疫因子APOBEC3蛋白及其抗病毒作用的研究进展

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3(APOBEC3)是APOBEC蛋白家族成员,是新发现的固有免疫抗病毒因子,具有脱氨酶活性,可使负链胞嘧啶脱氨变为尿嘧啶(C→U),新合成的正链DNA降解或产生致死性G→A突变,从而达到抑制病毒复制的作用.APOBEC3在抗HIV的研究较多,对HBV的抗病毒作用也得到了证实.因...     

反义技术在抗HBV感染中的应用

反义技术是近些年来随着现代分子生物学技术的发展而产生的新的生物医学治疗技术.它采用反义核酸分子抑制、封闭或破坏靶基因组的技术手段,包括反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等.反义分子通过与靶基因异性互补配对结合,阻断靶基因的复制、转录或翻译过程,从而发挥抗病毒作用.针对乙型肝炎病毒的反义技术也有了广泛而深入的研究.根据反义技术在分子、细胞以及动物水平上的研究表明:反义技术能够高效、特异地抑制HBV的复制与表达.     

慢性乙型肝炎病毒感染与自身免疫相关性的研究

自身免疫在病毒性肝炎发病机制、病情转归及癌变中的作用正日赵受到研究者们的重视.我们通过检测慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患都的HBV-DNA载量、自身抗体及肝功能指标,探讨HBV感染后HBV复制情况与自身抗体阳性率的关系以及自身抗体检测在乙型病毒性肝炎诊断及治疗中的意义.     

乙型肝炎病毒X基因与肝细胞癌

当前发现乙型肝炎病毒（HBV）基因组中的X基因及其编码产物X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBx）是HBV中惟一具有多种调控功能的病毒蛋白质。这些调控作用包括激活宿主细胞和病毒自身基因的转录、调控凋亡、抑制细胞中受损DNA的外切修复反应以及激活细胞中的信号转导通路如有丝分裂原激酶（MAPK）、JAK、STAT的级联反应等。HBx通过这样的多种调控作用直接或间接地对病毒自身的复制与增殖以及宿主细胞中基因的表达与调控、细胞的凋亡与癌变等过程都产生了广泛的影响。     

乙肝病毒X蛋白上调骨桥蛋白表达增强肝癌细胞干性的研究

目的在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中探讨乙肝病毒x蛋白(HBx)对骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达及肝癌细胞干性的影响。方法采用免疫印迹(Western blot,WB)及免疫组化等方法在肝癌组织标本上检测OPN表达水平与患者性别、年龄、AFP、HBV病毒复制量、肿瘤大小、TNM分期等临床病理因素的关系;在稳定整合HBV基因组的HepG2.2.15细胞系及慢病毒介导的HBx转染HepG2细胞中,进一步验证HBV及HBx过表达对OPN及干性相关转录因子Nanog、Oct4,干性细胞表面标记分子CD44、CD90、Ep CAM表达水平的影响。结果免疫组化及WB检测结果均表明OPN在HBV阳性的HCC肝癌组织中的表达水平显著高于HBV阴性的肝癌组织(P0.05)。HepG2.2.15细胞中OPN的mRNA及蛋白质含量较HepG2细胞显著增加(P0.05);在HepG2细胞中,过表达HBx显著上调OPN mRNA及蛋白质水平(P0.05),流式细胞术定量分析显示过表达HBx的HepG2细胞中Ep CAM、CD90阳性的干性细胞数量明显升高(P0.05),实时定量PCR显示干性相关转录因子Nanog、Oct4及其表面标志分子CD44、CD90、Ep CAM水平显著升高。结论 HBx能够显著上调OPN的表达,并增强肝癌细胞的干性,提示HBx/OPN/肝癌细胞干性增强通路可能在HBV相关HCC患者预后不良中具有重要作用。     

乙肝病毒HBx蛋白具有激活胞浆Ras蛋白及胞核转录因子的双重特性

研究表明,HBV的HBx蛋白可凭藉广泛的病毒和细胞调节元件反式激活基因的表达。HBx蛋白能在体内激活Ras蛋白形成Ras-GTP复合物,迅速诱发Ras-Raf-MAP激酶胞浆信号转导的级联反应,导致细胞复制增加及转录因子AP-1和NF-κB的反式活化。另外,HBx蛋白还可直接与转录复合体的核因子相互作用激活转录。 利用激光共焦扫描免疫显微镜及遗传学方法,     

应用人工转录因子技术抑制乙型肝炎病毒复制

目的设计与构建特异性结合乙型肝炎病毒增强子1(HBV Enh1)的锌指蛋白人工转录因子(ZFP-ATF),检测在Hep G2.2.15细胞内的表达、对细胞生长影响及观察其抑制HBV DNA复制与表达的作用。方法构建含结合结构域ZFP与抑制性效应结构域Krüppel相关盒(KRAB)的人工转录因子(ATF),进行相关修饰、优化后,将人工合成ATF核酸序列插入真核表达质粒载体pc DNA3.1(~+),测序鉴定其正确性,X-treme GENE HP转染Hep G2.2.15细胞,共聚焦显微镜下观察ATF蛋白表达情况,CCK-8法检测ATF对细胞生长的影响,ATF转染24、48、72 h后,采用实时定量PCR、ELISA、Western blot法检测对HBV DNA复制与表达的抑制作用。结果成功构建pc DNA3.1-ATF(nls-ZFP-KRAB-FLAG)真核表达载体,ATF在Hep G2.2.15细胞中能正常表达,且对细胞生长无明显的影响,ATF具有抑制HBV DNA复制与表达的作用,在转染72 h后抑制作用达最高,抑制率达68.0%。结论构建的ATF在Hep G2.2.15细胞中能够正常表达且无毒性作用,可特异性结合HBV Enh1靶序列并具有抑制HBV DNA复制与表达的作用。     

逆转录和PCR检测HCV RNA负链

PCR是一种极其敏感的检测方法,但用该方法检测组织中的HCV时就不能鉴别是血中的HCV沾染组织表面,还是组织中本身就存在。HCV是单股正链RNA病毒,在HCV复制细胞中就会有负链RNA作为模板合成基因组RNA。作者检测了血浆、外周血单个核细胞(PBMC),以及肝组织中的正链和负     

microRNA在固有免疫调控中作用的研究进展

microRNA(miRNA)是一类内源性的短链非编码RNA分子,能与特定的信使RNA靶向结合,在转录后水平调控基因表达.miRNA可在多个环节参与调控机体固有免疫反应.微生物感染时,miRNA可通过调控模式识别受体信号通路及产生的细胞因子,负性或正性调控固有免疫应答.在病毒感染时,宿主编码的miRNA能抑制病毒复制,...     

调节HIV基因表达的两个重要蛋白质-Tat及Rev

Tat及Rev都是HIV复制所必不可缺的病毒调节蛋白。它们主要通过与各自的靶序列及细胞内的蛋白因子相互作用来发挥调节功能。Tat可以增加HIV所有基因的表达;而Rev则有选择性地促进编码病毒结构蛋白的基因表达,促使病毒从感染的早期阶段进入晚期阶段,起到控制病毒基因表达转换开关的作用。Tat可以在转录及转录后水平上发挥其反式激活作用,Rev主要在转录后水平起作用。     

HBV基因组的紧密结构

乙型肝炎病毒(HBV)基因组是一个环状的、长约32000bp的DNA分子。与其它能独立复制的双链DNA病毒相比,HBV是迄今已知能对人感染的病毒中最小的基因组。因而,HBV利用其遗传物质节俭是不奇怪的。它通过两种罕见的排列来达到这一点,即:蛋白质由重迭的翻译框架编码;所有调节信号都存在于蛋白质编码的序列中。因此,HBV从它的基因组的许多区域获得重复利用的能力。从进化观点看,这显示了该病毒结构的精巧。     

马传染性贫血病毒基因表达调节机制的研究进展

马传染性贫血病毒(equineinfectiousanemiavirus, EIAV)与HIV同属于逆转录病毒亚科慢病毒属, EIAVLTR被认为是影响病毒复制效率和决定病毒细胞嗜性的重要因素。在LTRU3区的增强子和启动子区域存在大量部分重叠的转录因子结合基序, 对病毒的复制起正负调节作用。但LTR并不是决定EIAV基因表达调节的唯一因素, 病毒自身编码的小分子蛋白Tat、Rev等均对病毒的复制水平有重要影响。我们对EIAV的基因表达调节机制进展做一概述。1　EIAVLTR高变异区主要集中在增强子区域EIAV长末端重复序列 (longterminalrepeat, LTR)较其它…