碘标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤导向治疗的意义和观察

本文报告用~(131)I标记肝癌单克隆抗体HAb18、及其F(ab’)2片段对裸鼠移植瘤导向治疗的观察,具有明显的杀伤效应,其效果优于国外同类抗体。 同位素标记与显像 用~(131)I标记HAb8、18IgG及其F(ab’)2片段,全部采用氯胺T碘化法,标记率:51％比活性:9.58×10~4Bq/μg。抗体与肝癌细胞在体外的亲和率:IgG—70％,F(ab’)2—55％。尾静脉注入碘标记物后,荷瘤裸鼠肿瘤部位明确显像。其定位指数;IgG—3.09,F(ab’)2—6.99。 实验分组与治疗12只荷瘤肝癌裸鼠(SMMU—LTNM)分4组,实验前服用0.25％     

抗肝癌单链抗体(鼠及人源化)融合突变型TNF-α的构建、表达及其作用研究

我室从HAb25抗肝癌单克隆抗体中制备并高效表达了抗肝癌鼠及人源化单链抗体m/hscFv25(人源化工作由军事医学科学院袁清安等完成),与人天然型TNF-α连接后取得了一定的治疗效果.但由于天然型TNF-α的毒副作用很大,我们尝试用高活性、低毒性的突变型TNF-α(mTNF-α)将之替代,构建新型、高效、低毒的抗肝癌抗体原核表达载体pGEX4T-1/scFv25-mTNF-α,通过诱导表达、纯化后,对SMMC-7721肝癌细胞及荷肝癌裸鼠进行导向治疗研究.     

~(131)I—抗AFP单克隆抗体放射免疫治疗原发性肝癌的探讨

采用我科研制的3株混合的抗AFPMcAb,经Protein A-Sepharose CL-4 B亲和层析柱纯化为IgG,用改良的氯胺T法用~(131)I标记,标记率30％～60％,放射性比度10～40mci/mg IgG,标记前后抗体活性测定未见明显变化。 共治疗23例原发性中,晚期肝癌。从放射免疫治疗的角度分析探讨其疗效。治疗的~(131)I剂量为17～70mCi,抗AFP McAb的     

~(131)I标记抗AFP抗体SPECT扫描对肝细胞癌定位及诊断

用核素标记抗AFP抗体对肝癌的放射免疫探测(Radioimmunodetection,RA-ID)研究受到人们的重视。本文对17例患者(其中12例肝癌、2例肝血管瘤、2例肝硬化及1例肝脓肿)进行了~(131)I标记抗AFP抗体的RAID研究。氯胺丁法~(131)I标记纯化的马抗人AFP多克隆抗体和鼠抗人AFP单克隆抗体。静脉注射标记抗体2.0～2.5mCi后     

~（131）I－HAb18肝癌单克隆抗体对荷肝癌裸鼠的导向治疗药效研究

￣（１３１）Ｉ－ＨＡｂ１８肝癌单克隆抗体对荷肝癌裸鼠的导向治疗药效研究米力，陈志南，曲萍，边惠洁，刘成刚（第四军医大学国家８６３肝癌导向药物项目组，西安７１００３２）单克隆抗体对肿瘤相应抗原具有高度的亲和性，用放射性核素标记ＭＣＡｂ．可选择性地杀伤瘤...     

肝癌单克隆抗体亲和常数测定及其在体内的导向意义

单克隆抗体的亲和常数反映了抗体的亲和力及其靶抗原分布的位点和密度,是选择具有导向意义的抗肿瘤单抗的重要依据。本文报告肝癌单抗HAb18亲和常数的测定及其在导向诊断中的意义。 取HAb18 IgG单抗,采用高效碘标法,参照Hayes DF等法,取标记抗体起始浓度     

抗肝癌单链抗体融合TNFα导向作用的初步实验研究

目的 获得有效果的抗肝癌基因工程单链免疫细胞因子（TNFα）。方法 将抗肝癌单克隆抗体（mAb)HAb25的单链抗体（scFv25)与人TNFα基因偶联,构建抗肝癌免疫细胞因子（scFv25-TNFα,亚克隆人原核GST融合表达载体pGEX4T-1中,在大杆菌中进行表达。对肝癌细胞SMMC-7721涂片进行间接免疫荧光染色,测定纯化后目的蛋白的活性,通过对荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠进行的初步抑瘤实验,检测scFv25-TNFα的导向治疗效果。结果scFv25-TNFα具有与亲本抗体HAb25类似的抗原结合特异性。scFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径2mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,达到3/3完全缓解,明显强于TNFα对照组。该组有交待得只有2/3,且无完全缓解。结论 scFv250-TNFα为具有一定效果的抗肝癌双功能抗体。     

~(181)I-抗人肝癌细胞系(BEL-7402 )单克隆抗体在裸鼠人肝癌模型中的定位

肿瘤导向是当前十分活跃的研究领域,近来,随单克隆抗体技术的发展,用放射性核素标记抗肿瘤单克隆抗体作肿瘤定位及治疗已引起普遍的关注。 我们自1986年起,用~(131)I标记抗人肝癌细胞系(BEL-7402)单克隆抗体(Hepama I),     

肝癌相关抗原SMP-30羧基端基因的构建、表达及血清学分析

目的：用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌肿瘤相关抗原衰老标记蛋白-30(SMFL30)，检测肝癌、肝硬化及其它肿瘤病人血清中相应抗体的阳性率。方法：PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌相关抗原SMP-30羧基末端165个氨基酸的DNA序列，构建其表达质粒，经原核表达和亲和层析纯化获得目的蛋白，经N-末端氨基酸序列测序证实为SMP-30蛋白。采用ELISA方法检测肝癌、肝硬化与其他肿瘤患者血清中抗SMP-30抗体的阳性率。结果：以63例正常人血清为对照，肝癌、慢性肝炎、肝硬化和鼻咽癌血清中SMP-30抗体阳性率分别为39．7％(23／58)、21．9％(7／32)、64．7％(11/17)和21．6％(5／23)。7例肺癌和25例胃肠疾病中无一例阳性。Western blot亦显示部分肝癌患者血清存在有SMP-30蛋白抗体。结论：SMP-30蛋白抗体检测可望作为肝癌和肝硬化等疾病的血清学诊断指标之一。     

全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

目的: 构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库, 从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv), 并对其特异性进行鉴定.方法: 采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库.对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选, 获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序.结果: scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库.对抗体库进行3轮正负淘选和富集后, 随机挑取2 798个克隆进行ELISA, 发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应, 而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应.对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定, 结果与ELISA一致.免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义.结论: 构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库.通过淘选富集、 ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆, 为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.     

肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。     

肝癌单克隆抗体HAb18在人体肝癌导向诊断中的意义和应用

近年,肿瘤单抗的导向研究已取得较大进展,尤其是放射免疫诊断(RIAD)取得了令人鼓舞的成功。本文用放射性碘标记肝癌膜蛋白单抗HAb18IgG及其F(ab’)2片段,对     

碘标记肝癌单克隆抗体HAb18的探讨及免疫活性分数测定

抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb18用氯胺T法在3种不同条件下碘标记,同时用溴代琥珀酰亚胺标记。用Lindmo的双倒数作图法体外测定标记抗体~(125)I-HAb18与肝癌细胞QGY-7703结合的免疫活性分数。对不同的标记方法和标记条件下的标记参数进行比较。结果,氯胺T法在3种条件下的标记率和免疫活性分数相差不显著,免疫活性分数为0.32+0.029～0.45±0.041。而溴代琥珀酰亚胺法标记率为94.5％±3.2,免疫     

肝癌细胞特异性结合抗体的筛选及序列测定

目的通过噬菌体展示技术筛选与肝癌细胞特异性结合的抗体.方法用肝癌细胞系SMMC7721免疫小鼠,提取脾细胞总RNA,构建单链抗体库,从中筛选特异性结合的抗体.结果构建了一个库容量为2×105的单链抗体库,并筛选到1个与肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体-单链抗体.此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低125倍以上.结论本研究成功构建了单链抗体库并筛选到与靶细胞特异性结合的噬菌体-单链抗体.     

可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性

目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化,用100g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv。将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后,观察其对细胞生长的影响。结果:经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10。经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达。Western blot分析证明,表达产物的相对分子质量(Mr)均为36000左右,与理论预期值相符。ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合,并抑制HepG2细胞的生长。结论:从人源噬菌体抗体库中,筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv,并在大肠杆菌中表达,有望用于肝癌生物治疗的实验研究。     

~(131)I-抗AFP单克隆抗体肝癌免疫显像的研究

用放射性核素标记抗体,利用抗原抗体的免疫特异性结合,导向在靶器官癌灶区出现放射性浓聚,称之为放射免疫显像(RII)。由于杂交瘤技术的日趋完善和广泛应用,可以研制各种类型的单克隆抗体,促使RII的     

肝癌特异性黏附肽的鉴定和分析

利用体内噬菌体随机肽库技术筛选出肝癌特异性噬菌体肽A54,随后用化学合成法在体外合成该多肽,并标记荧光素和生物素,在组织和细胞水平对该肽进行了体内外肝癌特异性的鉴定及其抗原定位。将生物素(Biotin)标记的A54肽通过尾缘静脉注射入荷瘤裸鼠体内,通过免疫组化方法,检测A54肽与肝癌组织特异性结合的情况;并用免疫荧光细胞化学技术,对荧光素(FAM)标记A54肽进行了细胞水平的肝肿瘤特异性鉴定及抗原定位。体内外检测结果表明,A54肽仍保留了特异性识别肝癌组织的特性,且结合于肝癌细胞的膜表面。实验证明,化学合成的多肽,在体内仍然具有靶向肝癌细胞膜表面的作用,这进一步证明了筛选出来的目标噬菌体克隆其特异性靶向作用确实是由其表面插入的小分子多肽所介导的,为肝癌特异性导向药物载体的研究提供了科学依据。     

全人源性肝癌单链抗体的表达、纯化及功能鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人源性肝癌单链抗体(scFv),并分析他的结合活性。方法:应用噬菌体表面呈现技术获得人源性肝癌scFv,利用重叠延伸PCR将VL和VH基因以(Gly4ser)3linker连接成单链,插入表达载体pET28a( ),诱导目的蛋白表达,对包涵体进行溶解、复性、纯化,得到可溶性目的蛋白,应用非竞争细胞ELISA检测与肝癌细胞结合的特异性及结合能力。结果:在A600为0.8时开始诱导,持续6h,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的26%,包涵体经过复性纯化后,得到纯度达到95%的重组scFv,其亲和常数为:3.6×107mol/L。结论:实现了人源性肝癌scFv的蛋白表达,抗体蛋白与肝癌细胞具有较强的特异性结合能力,为今后进行免疫学检测和开发肿瘤靶向治疗提供了研究手段。     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌(HCC)的单克隆抗体(MAb),为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经"尾静脉.脾脏联合方法"免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术(LSCM)进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 (1)获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%(67/68);(2)注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

两株新的抗肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及特异性鉴定

以外科手术切除的肝癌标本制备的细胞悬液和新建株的肝癌细胞为免疫原。籍多重免疫途经致敢ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经２０次融合，从近１０，０００个融合孔中，筛选出两株（ＨＡｂ２５，ＨＡｂ２７）肝癌单克隆抗体，在９４例肝癌、１４１例其他肝病组织，２６种正常组织，１２９例各组织系统的肝外恶性肿瘤组织上做了交叉反应。除ＨＡｂ２７与毛细胆管有弱的反应外，两株抗体与肝癌组织结合的阳性率高（８３．１５％，８５．１１％），仅与少数消化道肿瘤有交叉．１３１Ⅰ标记抗体进行放射免疫显像，最佳显像时间为７２ｈ，瘤／肝、瘤／血比值分别为５．０７～６．８４、１．２６～２．１３，可望为肝癌导向药物研究，提供新的载体。