大鼠急性心肌缺血后心肌及血淋巴细胞肾上腺素能受体的变化

用亚型选择性标记配基~3H CGP12177及~3H-哌唑嗪分别观察急性缺血时大鼠心肌β_1肾上腺素能受体(β_1AR)及α_1AR的变化。同时用~3H-DHA测定血淋巴细胞βAR的改变。8只Wistar大鼠在急性缺血60分钟后β_1AR密度为97.5±13.1fmol/mg蛋白,较12只正常对照组(49.6±5.1fmot/mg蛋白)增高96.6%,P<0.01;较7只手术对照组61.7±8.9fmol/mg蛋白增高58.5%,P<0.05。缺血组9只大鼠平均α_1AR密度564.2±     

人心肌与外周血淋巴细胞β受体相关性研究

临床研究难以获得心肌组织,本研究采用~3H-DHA放射性配基结合法对4例风心,4例先心手术共8例病人,年龄30±8岁,测定右房心肌和外周血淋巴细胞β受体,并作相关性分析。结果:心肌Bmax36.22±9.09fmol/mg蛋白,外周血Bmax16.52±2.44fmol/10~6 cells(X±SD),心肌与外周血淋巴细胞β-受体直线回归相关系数r=0.749,(P<0.05)。结果表明:本研究结果显示心肌与外周血淋巴细胞β受体相关性良好,与国外报告一致,可用外周血淋巴细胞β受体进行心脏疾病临床研究。     

急性冠状动脉缺血后大鼠淋巴细胞β_2受体的变化

为了解急性冠状动脉缺血对大鼠外周血淋巴细胞β_2受体的影响,我们观察了结扎冠状动脉后1小时大鼠外周血淋巴细胞β_2受体的变化,本实验共设4组,分别为正常组,假手术组,结扎冠状动脉组及心得安组(结扎冠状动脉前喂心得安5mg/kg/日,共10天)。结扎左冠状动脉起始处1小时后断头取血,用[~3H]-双氢心得舒([~3H-DHA),测淋巴细胞的β_2受体、结果见附表。     

肺组织内两种β肾上腺素能受体的直接证明

本文作者应用~3 H标记的二羟基外搏停(~3H-DHA,一种β受体阻滞剂),与大鼠肺组织膜进行结合,直接证明了肺内存在β_1和β_2两型肾上腺素能受体,其比例为1:3。~3H-DHA与肺组织膜的结合具有高度亲和力和立体结构特异性,其药理学性质表明是结合在β受体上。此种特异性结合可代表总结合力的90％。在此基础上,作者应用了某些β受体阻滞剂来置换~3H-DHA的结合,其中有些是属于非选择性β阻滞剂,即对β_1和β_2受体都有同样的亲和力,有的则是β_1受体选择性阻滞剂。结果表明,非选择性β阻滞剂如噻吗心安     

22例急性心肌梗塞患者梗塞后外周血淋巴细胞β-受体动态变化

本研究采用~3H-DHA(美国Duponf产品,比活度3959.0GBq/mmol)放射性配基结合分析法观察了1992年4月至10月我科住院确诊的22例急性心肌梗塞病人梗塞后1、3、7、和21天外周血淋巴细胞β-受体Bmax及Kd。结果:见附表。结论,急性心肌梗塞后24小时即出现β-受体明显升高,3天后下降,但仍高于     

当归对大鼠肺β-受体数目的影响

建立了用放射性配基测定肺组织β-受体数目的方法,并探讨了当归对其影响。结果表明:当归与~3H-DHA没有竞争性结合,对正常大鼠、低氧大鼠肺组织β-受体数均无明显影响。提示当归缓解低氧性肺动脉高压不是通过改变肺β-受体数目而实现的。     

多器官衰竭家兔肝、肺β受体的研究

对由失血性休克加喂菌所致多器官功能衰竭(2个以上器官)家兔的肝、肺β受体进行测定。正常兔肝组织细胞膜制剂与浓度逐渐增高的~3H-DHA结合显示逐渐饱和,求得最大结合容量(Bmax)为95.36±53.68fmol/mg蛋白,平衡解离常数(Kd)为1.55±0.64nM。致伤兔肝细胞膜β受体表现受体结合部位的最大容量     

实验性哮喘豚鼠肺组织β-肾上腺素能受体的量变及电针刺激对其影响

本文采用放射配基结合法,观察了实验性哮喘豚鼠肺组织β-肾上腺素能受体的变化,并与正常动物作了比较。结果表明,哮喘豚鼠肺组织的β-受体结合~3H-DHA的最大结合量(BmAX)比对照组者低38%(P<0.01)。首次观察到随哮喘发作次数的增多,豚鼠肺组织β-受体的减少趋于明显;电针刺激可使哮喘豚鼠肺组织的β-受体数量恢复至对照动物水平。电针刺激对正常动物的β-受体数量未见有影响。     

病态窦房结综合征β-受体测定

本文采用~3H-DHA(美国Dupont产品,比活度3959.0GBg/mmol)观察了10例(男6,女4,年龄65±9岁)临床确诊为病态窦房结综合征患者的血淋巴细胞β-受体。结果:Bmax13.01±6.0>对照;Bmax     

家兔心肌缺血时α1—肾上腺素能受体的变化

本文用[~3H]-哌唑嗪为配基,测定了家兔心肌缺血前、心肌缺血后缺血区及非缺血区α_1-受体数目及亲和力的变化。发现家兔心肌缺血后15min缺血区α_1-受体明显增加,并持续到30min;45min时开始降低。非缺血区缺血前、后α_1-受体数目均无明显变化。α_1-受体亲和力在心肌缺血后缺血区和非缺血区均无显著变化。     

硬膜外麻醉对外周血淋巴细胞β-受体的影响

硬膜外麻醉中血压下降是最常见的并发症,有关硬膜外麻醉对应激及内分泌影响的研究报导较多,但对硬膜外麻醉后受体改变尚未见报导。本文采用~3H-DHA(美国杜邦产品,比活度3959.0GBq/mmol)放射性配体结合分析法对20例硬膜外麻醉前后外周血淋巴细胞β-受体进行测定,以探讨硬膜外麻醉对β-受体的影响,与血压的关系。研究对象:20例,男9女11,年龄52±16岁,均为择期腹部手术患者,术前排除心、肺、内分泌疾病及未使用对β-受体有影响的药物。标本采集:硬膜外麻醉前及麻醉后1小时,淋巴细胞β-受体测定:按Boyum     

儿茶酚胺-β受体-cAMP系统在高血压左室重构中的生物学作用

目的:研究儿茶酚胺-β受体-cAMP系统在高血压心室重塑中的变化特征及其生物学意义.方法:144例高血压患者采用超声心动图(Ganau标准)将患者分为:正常构型组(LVMI与RWT均正常,n=26)、向心性重构组(LVMI正常、RWT增加,n=41)、向心性肥厚组(LVMI与RWT均增加,n=28)及离心性肥厚组(LVMI增加、RWT正常,n=39).正常血压健康男性40例.采用高效液相-电化学检测技术测定血浆去甲肾上腺素(NE)和肾上腺素(E)浓度;采用放射性配基(3H-DHA)结合分析法测定外周血淋巴细胞β受体密度(βmax);采用蛋白竞争结合法测定淋巴细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果:不同左室构型的高血压患者血浆NE、E水平均明显高于正常对照组;在正常构型、向心性重构、向心性肥厚、离心性肥厚组血浆NE、E水平增加依次显著;外周血淋巴细胞β受体密度与cAMP含量在正常构型、向心性重构和向心性肥厚组均明显高于正常对照组,在离心性肥厚组显著低于正常对照组.结论:儿茶酚胺-β受体-cAMP系统参与高血压左室结构的重建过程.     

电针“肺俞”穴对变应性哮喘豚鼠肺组织中β受体及环核苷酸变化的观察

采用~3H-DHA放射性配基结合分析法,观察了实验性变应性哮喘豚鼠模型及其模型加同步针刺组、正常对照组的肺组织中β受体的变化。并用~(125)I放免分析法,对比观察了同体动物的血浆、组织(肺、支气管)中环核苷酸含量的变化。     

多不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能

目的 探讨增加不饱和脂肪酸摄入比例对心脏ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)比值及心肌缺血-再灌注时缺血区炎症状态及线粒体功能的影响.方法 C57BL/6小鼠80只,随机分为普通饮食组及植物油脂组(n=40).喂养1个月后,建立心脏缺血再灌注模型.气相色谱法检测心脏ω-3及ω-6 PUFAs含量.TTC染色检测心肌梗死面积.差速离心法分离心肌线粒体,氧电极法测定线粒体呼吸控制率.实时定量PCR检测缺血区心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达,ELISA法检测心肌TNF-α及白细胞介素-1(IL-1)蛋白含量.结果 与普通饮食组相比,植物油脂组小鼠心脏ω-6/ω-3 PUFAs比值显著减低(P＜0.05),心肌梗死面积显著减小(P＜0.01),缺血区心肌线粒体呼吸控制率显著改善(P＜0.05),TNF-αmRNA表达、TNF-α及IL-1蛋白含量均显著降低(P＜0.05).结论 不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能.     

预适应和后适应对缺血/再灌注损伤大鼠心肌组织炎症因子的影响

目的:观察缺血预适应(IPC)、缺血后适应(IPOC)对大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)损伤后Toll样受体(TLR)及下游炎症因子的影响。方法:SD大鼠60只,通过SPSS软件随机分为假手术组(冠状动脉前降支下置线不结扎,n=15);I/R组(冠状动脉前降支结扎30min,再灌注60min,n=15);IPC组(冠状动脉前降支3次3min/5min的缺血/再灌注循环,然后结扎30min后,再持续灌注60min,n=15);IPOC组(冠状动脉前降支结扎30min,3次10s的缺血/再灌注循环,再持续灌注60min,n=15)。实验结束后测定大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白T(cTNT)水平;氯化硝基四氮唑兰(NBT)染色测定大鼠左室心肌梗死面积;免疫组织化学法测定心肌组织TLR-2、4的表达;酶联免疫吸附法测定心肌组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:与I/R组比较,IPC组、IPOC组大鼠血清CK-MB和cTNT水平显著降低(P<0.01),心肌梗死面积显著减小(P<0.01),心肌组织TLR-2、4表达和炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1、TNF-α含量显著下降(P<0.05,P<0.01);与IPC组比较,IPOC组减小I/R大鼠心肌梗死面积,降低血清CK-MB及心肌组织IL-6等作用和IPC组无显著差异(P>0.05)。结论:IPOC与IPC同样具有减轻心肌I/R损伤程度和缩小心肌梗死范围等作用,抑制TLR-2、4的表达可能是其保护I/R心肌的一个重要途径。     

用PCR技术研究缺氧时大鼠肺肾上腺素能β_2受体mRNA水平的变化

我室以往工作表明间断常压缺氧2及4周大鼠肺β受体减少,其中主要是β_2受体减少。本文在此基础上探讨常压缺氧后大鼠肺肾上腺素能β_2受体mRNA表达的变化。大鼠置常压缺氧舱内(O_2=10%)间断缺氧(6小时/天,6天/周)。右心导管测定平均肺动脉压;在用放射性配基(~3H-DHA)结合法测定β及β_2受体的同时,用聚合酶链反应(PCR)扩增β_2受体mRNA。根据大鼠β_2受体基因序列,设计合成一对引物,在PCR反应时掺入α-~(32)P-dATP,最后进行液体闪烁测量,以特异性条带放射性(cpm)反映β_2受体mRNA水平的高低。结果表     

PI3K/Akt通路介导TRPV1抑制离体小鼠心脏缺血再灌注后的细胞凋亡

目的研究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对离体小鼠心脏缺血/再灌注(I/R)后心肌细胞凋亡的影响及与PI3K/Akt通路的关系。方法 TRPV1基因敲除(TRPV1~(-/-))和野生型(WT)小鼠各54只,均各随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)和LY294002处理组(LY)。建立Langendorff离体心脏灌注模型,检测心功能;灌注结束后,TTC染色法检测心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt和p-Akt的蛋白表达水平。结果 I/R后,TRPV1~(-/-)小鼠较WT小鼠的LVDP明显降低(P0.001),LVEDP明显升高(P0.001),同时心肌梗死面积和心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt表达水平下降(P0.001)。LY294002阻断PI3K后,与相应的I/R组相比,WT小鼠心肌梗死面积明显扩大(P0.001),心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt蛋白表达水平降低(P0.001)。结论 TRPV1可能通过PI3K/Akt通路抑制离体小鼠心脏缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡。     

离心重力诱导脂肪间充质干细胞向软骨样细胞分化

目的探讨离心重力对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)向软骨样细胞分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过加载不同离心力(0、500、1000、2000、2500、3000×g)和持续时间(0、15、30、45、60 min)刺激脂肪干细胞分化为软骨样细胞,并利用荧光定量PCR和Western blot检测Sox 9基因的上调表达来筛选条件,将培养的P3代h ADSCs分3组,对照组(不干预处理)、离心重力组和TGF-β3组(加入TGF-β3成软骨诱导剂),持续培养21 d后,通过阿利辛蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定Ⅱ型胶原基因表达,Western blot进一步检测对照组和离心重力组中Sox 9、β-catenin、GSK3β和p-GSK3β蛋白的表达。结果加载最适的离心重力(2500×g,30 min)刺激h ADSCs后,培养24 h,Sox 9的m RNA和蛋白表达显著上调。阿利辛蓝和苏木精-伊红染色显示,离心重力组和TGF-β3组中软骨表达呈阳性。GAG实验结果显示,TGF-β3组促GAG分泌的能力优于离心重力组(P0.05),荧光定量PCR结果表明TGF-β3组其Ⅱ型胶原mRNA表达的能力高于离心重力组(P0.05),Western blot结果显示,相比对照组,离心重力组中β-catenin和p-GSK3β的蛋白表达水平降低,而GSK3β和Sox 9蛋白表达升高。结论离心重力和TGF-β3诱导脂肪干细胞成软骨分化中的表达具有相似的能力,离心重力对h ADSCs诱导成软骨作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

β_2-肾上腺素能受体过表达后成年犬心肌细胞收缩功能的改变及机制

背景:在转基因小鼠、大鼠等小动物实验中发现,心肌细胞特异性过表达β-肾上腺素受体可以改善其收缩功能,但目前尚缺乏在大型哺乳动物进行的有关实验报道。目的:探讨犬心肌细胞过表达β2-肾上腺素受体后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制。方法:采用胶原酶消化法分离培养犬心肌细胞,用携带β2-肾上腺素受体目的基因的重组腺病毒转染心肌细胞。转染48h后观察心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及在基础状态和最大收缩状态下(以异丙肾上腺素10-6mol/L刺激)心肌细胞cAMP水平及收缩功能的变化。结果与结论:转染β2-肾上腺素受体的心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及胞内cAMP水平明显增多(P0.05),基础状态下收缩功能明显增强,但不改变最大收缩幅度百分比。说明β2-肾上腺素受体的过表达可能通过增加心肌细胞内cAMP水平改善心肌细胞的收缩功能。     

α-亚麻酸在缺血性心衰中的保护作用及其对缺血早期炎症小体NLRP3的抑制作用

目的探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)在缺血性心衰中的保护作用及其对TNF-α、IL-6和炎症小体NLRP3(pyrin domain containing 3)等炎症介质的影响。方法通过结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型,给予ALA或其对照,监测MI后1周、2周和4周大鼠血清中TNF-α和IL-6炎症因子变化,检测MI后1周心肌组织中NLRP3相关蛋白及和MI后4周心脏功能的变化。结果与假手术组比较,血清中TNF-α和IL-6水平在MI后1周和2周均显著增加。MI后1周缺血区心肌组织中NLRP3表达显著增加,半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)活性升高,IL-1β和TNF-α蛋白含量显著升高。补充ALA不仅显著降低大鼠MI后1周和2周血清中TNF-α和IL-6水平,而且减少MI后1周心肌组织中的NLRP3含量和caspase-1活性,进而降低了IL-1β和TNF-α含量,减少了中性粒细胞在心肌组织中的浸润,改善了MI 4周后的心脏功能。结论 MI前补充ALA可减少MI后1周炎症小体NLRP3相关蛋白表达,抑制TNF-α、IL-1β及IL-6炎症因子的生成,改善MI 4周后的心脏功能,延缓缺血性心衰的发生发展。