人胸腺基质淋巴细胞生成素(hTSLP)在早孕绒毛组织的表达及意义

目的:探讨人早孕母胎界面表达TSLP及其受体(TSLPR)的特征.方法:使用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法分析正常绒毛组织TSLP/TSLPR的表达;RT-PCR、免疫细胞化学法分析原代培养的滋养细胞TSLP/TSLPR的表达;ELISA检测原代培养的人滋养细胞上清TSLP分泌水平.结果:从转录水平至蛋白水平,绒毛细胞滋养细胞与合体滋养细胞均表达TSLP及TSLPR.结论:TSLP表达于正常早孕绒毛组织,可能与早孕期调节性T细胞的扩增及功能变化相关.     

肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-β(TNF-β)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者效应T细胞(CD8+HLA-DR+T细胞)损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用。方法:以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β(终浓度分别为0、15、25、50 ng/ml)为实验组,并设空白对照组,孵育72小时后,通过流式细胞术以Annexin V检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN-γ水平。结果:空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为(49.85±20.33)%、(51.65±20.34)%、(55.94±20.19)%、(57.72±19.45)%,TNF-β终浓度为50 ng/ml组及25 ng/ml组均明显高于空白组和15 ng/ml组细胞凋亡比例(P<0.05),但空白组与15 ng/ml组,25 ng/ml组与50 ng/ml组细胞凋亡比例无显著差异(P>0.05)。空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47)ng/ml、(216.47±29.00)ng/ml、(212.15±13.19)ng/ml、(218.01±28.61)ng/ml,各组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-β终浓度50 ng/ml组培养上清IFN-γ水平[(593.50±48.18)ng/ml]明显高于空白对照组[(544.85±69.77)ng/ml],15 ng/ml组[(567.38±74.51)ng/ml]、25 ng/ml组[(544.05±79.69)ng/ml](P<0.05)。结论:TNF-β能增强SAA患者效应T细胞诱导骨髓造血细胞凋亡,并呈浓度依赖性;高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用。     

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

目的:研究抗原85B(Ag85B)体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞(m DCs)的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)介导下m DCs表达TSLP受体(TSLPR)和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法:应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B+TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果:体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高(P0.05),表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加(P0.05);与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高(P0.05)。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B+TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低(P0.05),与空白对照组比较差异不显著。结论:Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。     

紫檀芪对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响

目的:探讨紫檀芪(PTE)对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响。方法:以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象。采用CCK-8法和流式细胞术分别测定不同浓度的PTE对HeLa细胞活力和凋亡率的影响;透射电镜观察细胞中自噬体数目;qPCR测定细胞中SIRT1和FoxO的mRNA表达;Western blot测定细胞中SIRT1、FoxO、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Bax和Bcl-2水平。结果:PTE作用于HeLa细胞24和48 h后,细胞活力抑制率随浓度增加而升高。与0μmol/L PTE相比,15、30和60μmol/L PTE处理后,HeLa细胞凋亡率、细胞中自噬体数目及Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、SIRT1和FoxO水平显著升高(P0.05),Bcl-2和p62水平显著降低(P0.05),且呈浓度依赖性。结论:PTE可能通过激活SIRT1-FoxO信号通路诱导HeLa细胞自噬和凋亡,从而抑制HeLa细胞活力。     

CD4+CD25+Treg细胞对B细胞的作用机制分析

目的研究CD4 CD25 调节性T细胞对B细胞作用机制.方法用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Wistar大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4 CD25 Treg细胞,然后将分离纯化的Wistar大鼠Treg细胞负载SD大鼠抗原.以Trans Well Millcell-PCF分隔培养槽分隔或共培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA法检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平. 结果分隔培养组上清中的IgG和IgA水平分别为(4.7±1.1)、(10.5±1.7)μg/ml,与阳性对照组中IgG的含量(5.1±1.0)μg/ml以及IgA的(11.2±1.6)μg/ml相比没有显著差异(P＞0.05).而与阳性对照组相比较,共培养组上清中的IgG和IgA水平明显降低(P＜0.01),分别达到了(2.2±0.8)μg/ml和(5.4±0.9) μg/ml.在共培养体系中加入Anti-TGF-β1后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.1±0.5)μg/ml和(6.9±0.8)μg/ml;加入Anti-CTLA4后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.2±0.6)μg/ml和(7.2±0.9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.5±0.5)μg/ml和(7.4±0.6)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P＜0.05),但仍明显低于阳性对照组的水平(P＜0.05). 结论CD4 CD25 Treg通过细胞-细胞间接触机制直接抑制B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用.     

RNA干扰对宫颈癌细胞中E6AP基因的影响及其意义

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对宫颈癌细胞系HeLa细胞E6AP基因表达及细胞增殖和凋亡的影响.方法 实验分为3组:空白对照组(未经转染的HeLa细胞)、转染阴性对照的小干扰RNA(siRNA)组及转染特异性E6AP siRNA组.采用半定量RT-PCR技术、Western blot方法 检测E6AP mRNA、蛋白表达水平,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞增殖状况,用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 转染E6AP siRNA 24、48、72 h后,E6AP siRNA组E6AP mRNA表达水平与对照siRNA组比较下降33%、72%、70%.Western blot结果 显示,在转染48及72 h,E6AP蛋白表达下降38%、59%.MTT法检测显示,转染HeLa细胞24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低,E6AP siRNA组与空白对照组(F=101.38,P＜0.05)、对照siRNA组(F=38.64,P＜0.05)比较,差异均有统计学意义.E6AP siRNA作用24、48、72 h后E6AP siRNA组凋亡率明显高于对照siRNA组(F=41.48,P＜0.05)和空白对照组(F=86.36,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 体外合成的siRNA能有效封闭宫颈癌细胞中E6AP基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞的凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据.     

炎性因子IL-1β对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响

目的:本研究应用原代培养星形胶质细胞,探讨炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响。方法:在原代星形胶质细胞培养中分别加入1 ng/ml IL-1β,流式细胞仪检测不同作用时间(0、24、48、72 h)细胞线粒体膜电位改变,激光共聚焦显微镜观察活性氧(ROS)生成,分光光度法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR、Western Blot检测星形胶质细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达变化。结果:1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24~72 h,细胞线粒体膜电位无明显改变,细胞未出现明显损伤。IL-1β孵育24 h,细胞内ROS生成减少,GSH生成增加;48 h细胞内ROS生成增加,GSH较24 h组减低(P0.05);72 h,原代培养星形胶质细胞内ROS生成明显增加,GSH较0 h组降低(P0.05)。1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24 h,细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平较0 h组升高(P0.05);但仅是一过性反应,IL-1β孵育72 h后,原代培养星形胶质细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平均较0 h组降低(P0.05)。结论:持续炎性因子刺激下,星形胶质细胞抗氧化应激能力呈现动态改变,并且细胞内抗氧化物参与此变化过程。     

小鼠睾丸细胞体外培养制备染色体的初步探讨

小鼠睾丸组织经研磨制成细胞悬浮液,按常规法分别培养4、24、48、和72小时后制片,统计出生精细胞中终变期、中期细胞所占的百分数,并与未经培养组(对照组1)及活体内注射秋水仙素后取材制片组(对照组2相比较。结果表明:经4、24小时培养的分裂指数分别为0.44±0.15、1.16±0.52,比对照组1(0.16±0.05)有明显升高;培养4小时组与对照组2(0.42±0.16)相近,但培养24小时组则高于对照组2(P<0.05)。本实验证实:小鼠睾丸细胞在体外经4—24小时的培养,也可达到增加可供染色体分析细胞数的目的。     

胸腺基质淋巴细胞生成素对小鼠巨噬细胞抗原提呈功能及炎性分泌功能的影响

目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制。方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激。采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ、CD86的表达;采用实时定量PCR以及ELISA方法检测小鼠巨噬细胞内以及培养上清液炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达。结果:与野生型对照组比较,野生型实验组小鼠巨噬细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达明显升高,炎症因子MCP-1和TNF-α表达及分泌均增高,IL-10表达及分泌无明显变化;与TSLPR基因敲除对照组相比较,TSLPR基因敲除小鼠巨噬细胞经TSLP刺激后细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达及炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达及分泌均无明显变化;与野生型实验组相比较,TSLPR基因敲除可明显抑制TSLP诱导的小鼠巨噬细胞抗原提呈分子增加以及炎症因子表达。结论:TSLP可通过与TSLPR结合促进小鼠巨噬细胞活化,增加巨噬细胞抗原递呈能力,产生炎症因子,促使小鼠巨噬细胞向促炎巨噬细胞表型M1型转化。     

川芎嗪调控NF-κB信号通路对银屑病HaCaT细胞模型趋化因子和炎症因子表达影响北大核心CSCD

目的:探讨川芎嗪调控NF-κB信号通路对银屑病HaCaT细胞模型趋化因子和炎症因子表达的影响。方法:HaCaT细胞分为Control、Model(10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-L(0.1 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M(0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-H(0.4 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M+PMA组(1μmol/L的NF-κB信号激活剂PMA、0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)。qRT-PCR检测Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达,ELISA法检测IL-6、IL-4、IL-13含量,Western blot检测p65、IκBα蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平升高(1.00±0.09 vs 3.69±0.25,1.00±0.10 vs4.51±0.28,1.00±0.11 vs 2.96±0.21,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(96.32±8.87)pg/ml vs(275.14±26.31)pg/ml,(23.61±1.47)pg/ml vs(108.62±11.96)pg/ml,(5.58±0.42)pg/ml vs(26.35±2.47)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.23±0.02 vs 0.86±0.08,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.96±0.09 vs 0.25±0.04,P<0.05)。与Model组相比,TMP-L、TMP-M、TMP-H组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平依次降低(3.69±0.25 vs 2.75±0.14、2.23±0.16、1.40±0.11,4.51±0.28 vs 3.27±0.36、2.23±0.17、1.80±0.12,2.96±0.21 vs 2.03±0.14、1.62±0.12、1.14±0.11,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13减少[(275.14±26.31) pg/ml vs (204.15±13.62) pg/ml、(162.01±14.81) pg/ml、(117.62±10.30) pg/ml,(108.62±11.96) pg/ml vs(80.43±7.79)pg/ml、(53.24±4.11)pg/ml、(31.20±2.26)pg/ml,(26.35±2.47)pg/ml vs(14.20±1.22)pg/ml、(10.66±1.04)pg/ml、(6.42±0.50)pg/ml,P<0.05],细胞中p65蛋白表达水平降低(0.86±0.08 vs 0.56±0.05、0.45±0.04、0.30±0.03,P<0.05),IκBα蛋白表达水平升高(0.25±0.04 vs 0.52±0.06、0.63±0.06、0.79±0.07,P<0.05)。与TMP-M组相比,TMP-M+PMA组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA水平升高(1.00±0.08 vs 1.86±0.12,1.00±0.10 vs 2.64±0.23,1.00±0.09 vs 1.56±0.13,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(163.50±12.84)pg/ml vs(200.61±13.60)pg/ml,(52.87±5.39)pg/ml vs(86.48±6.92)pg/ml,(9.76±0.75)pg/ml vs(16.42±1.37)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.45±0.06 vs 0.98±0.12,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.60±0.07 vs 0.26±0.03,P<0.05)。结论:川芎嗪通过抑制NF-κB信号通路降低银屑病HaCaT细胞模型趋化因子表达和炎症因子分泌水平。     

Sputum basophils from allergic asthmatic patients do not express IL-7Rα that is essential for TSLP signalling

Basophils are crucial in regulating allergic reactions via immediate secretion of multiple mediators upon IgE-induced degranulation. IL-3 regulates the development and activation of human basophils while epithelial cytokine thymic stromal lymphopoietin (TSLP) is another key regulator for murine basophils. Despite association of increased TSLP with exaggerated basophil responses in oesophageal biopsies, the effects of TSLP in regulating human basophil degranulation and activation are under debate. In this study, we aimed to examine whether human basophils responded to TSLP by co-expression of TSLP receptors, TSLPR and IL-7Rα (CD127), upon in vitro activation and in sputum of allergic asthmatic patients. Flow cytometric analysis of fresh basophils from healthy controls revealed no detectable TSLPR and CD127. Further flow cytometric analysis of basophils from healthy controls in vitro stimulated by multiple established basophil modulators for 24 hours showed induction of TSLPR but not CD127 by IL-3 (10 ng/ml), anti-IgE (10 μg/ml) and C5a (50 ng/ml). One-hour stimulation of basophils from allergic asthmatic patients and healthy controls by TSLP (50 ng/ml) with or without IL-3 (10 ng/ml) and anti-IgE (10 μg/ml) had no effect on induction of CD63⁺ degranulated basophils. Similarly, TSLP (50 ng/ml) with or without IL-3 (10 ng/ml) and anti-IgE (10 μg/ml) did not induce IL-4 and IL-13 production by basophils from healthy controls. Further ex vivo analysis revealed that sputum basophils from allergic asthmatic patients did not express CD127. We conclude that human basophils from healthy controls and allergic asthmatic patients do not respond to TSLP as lacking CD127.     

Early production of thymic stromal lymphopoietin precedes infiltration of dendritic cells expressing its receptor in allergen-induced late phase cutaneous responses in atopic subjects

Background: Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) is an interleukin (IL)‐7‐like cytokine that triggers dendritic cell‐mediated T helper (Th)2 inflammatory responses through a receptor consisting of a heterodimer of the IL‐7 receptor alpha (IL‐7Rα) chain and the TSLP receptor (TSLPR), which resembles the cytokine receptor common gamma chain. Dendritic cells activated by TSLP prime development of CD4⁺ T cells into Th2 cells contributing to the pathogenesis of allergic inflammation. We hypothesized that allergen exposure induces expression of TSLP and results in recruitment of TSLPR bearing cells in the cutaneous allergen‐induced late‐phase reaction (LPR) in atopic subjects. Methods: Skin biopsies were obtained from atopic subjects (n = 9) at various times after cutaneous allergen challenge. In situ hybridization and immunohistochemistry were used to determine TSLP mRNA expression and to measure infiltration of TSLPR⁺ DC in skin LPR. RT‐PCR and flow cytometry were employed to analyse TSLPR expression on isolated blood DC. Results: Allergen‐induced skin TSLP expression occurred as early as 1 h after allergen challenge, whereas TSLPR⁺ and CD11c⁺ cells infiltrated relatively late (24–48 h). The majority of TSLPR⁺ cells were DC co‐expressing blood DC antigen‐1 (BDCA‐1) or BDCA‐2. Freshly isolated blood DC expressed both TSLPR and IL‐7Rα chains. Maturation and stimulation with TSLP or polyriboinosinic–polyribocytidylic acid in vitro upregulated the expression of both TSLPR and IL‐7Rα chains in DC but not in chemoattractant receptor‐homologous molecule expressed on Th2 cells⁺ CD4⁺ T cells. Conclusion: The data suggest that TSLP plays a role in augmenting, through DC recruitment and activation, the development of Th2‐type T cells in allergic inflammation.     

抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性

目的:研究抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-421 inhibitor转染4株宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki,以转染阴性核苷酸为对照,real-time PCR检测子宫内膜上皮细胞ESC细胞和4株宫颈癌细胞中miR-421的表达水平;转染的细胞经不同剂量电离辐射(0、2、4、6和8 Gy)处理48 h后运用MTT法、ELISA和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和细胞凋亡率;运用Western blot检测细胞中cleaved caspase-9、caspase-9、cleaved PARP、PARP、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果:miR421在ESC细胞中低表达,而在4株宫颈癌细胞中高表达,转染miR-421 inhibitor后miR-421显著低于阴性对照组(P0.05)。相同条件下,辐照后低表达miR-421的宫颈癌细胞活力和LDH漏出率显著低于阴性对照组,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。Western blot结果显示,电离辐射后与阴性对照组比较,低表达miR-421的宫颈癌细胞中cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bcl-2的蛋白水平明显增高,而Bax蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:miR-421在正常子宫内膜上皮ESC细胞中低表达,而在宫颈癌细胞系中高表达;下调miR-421表达能抑制宫颈癌细胞的活力,显著增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制至少部分通过激活caspase-9细胞凋亡通路进而促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达和抑制促凋亡蛋白Bax表达而实现。     

miR-145过表达对宫颈癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-145过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000将miR-145-mimic转染4株宫颈癌细胞系He La、Ca Ski、C33A和Si Ha,以NC-mimic为阴性对照,并以real-time PCR检测子宫内膜基质细胞(ESC)和4株宫颈癌细胞中miR-145的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后于不同时点运用MTT法和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力和细胞凋亡率;运用免疫荧光检测组蛋白γH2AX的表达水平;Western blot检测细胞中螺旋酶样转录因子(HLTF)的蛋白表达水平。结果:miR-145在ESC中高表达,而在4株宫颈癌细胞中均呈低表达,转染miR-145-mimic后4株宫项癌细胞中miR-145的表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P0.05)。相同条件下,辐照后miR-145过表达的宫颈癌细胞的活力显著低于NC-mimic组细胞,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。免疫荧光观察结果显示miR-145过表达显著促进电离辐射诱导的γH2AX激活;Western blot结果显示,miR-145过表达显著抑制HLTF的表达,与NC-mimic比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-145在正常子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌细胞系中低表达;miR-145过表达可显著抑制宫颈癌细胞的活力,促进电离辐射诱导的细胞凋亡。miR-145过表达增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制可能与下调HLTF表达、抑制DNA损伤修复、促进细胞凋亡有关。     

Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

 目的:研究结核分枝杆菌抗原85B（Ag85B）慢病毒对正常人支气管上皮细胞（NHBEC）表达胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin, TSLP）和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。 方法: 将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体pLVX-IRES-Neo-EGFP-Ag85B（Ag85B慢病毒）。用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率。利用Lipofectamine 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组。Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平。 结果: 成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×1011 TU/L, 感染效率达到90%以上。Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达。与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。 结论: Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症。     

STMN1在宫颈癌中表达的临床意义及抑制其表达对宫颈鳞癌SiHa细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨微管解聚蛋白1(STMN1)在宫颈癌中表达的临床意义及抑制其表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:Western blot法检测宫颈癌组织中STMN1的蛋白表达,并分析其表达与宫颈癌临床指标的关系;将靶向STMN1基因的小干扰RNA(siRNA)转染宫颈鳞癌Si Ha细胞,转染48 h后通过Western blot法检测各组细胞中STMN1及信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路中STAT3、p-STAT3和survivin的蛋白水平;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧簇(ROS)的水平。结果:STMN1在宫颈癌组织中表达显著高于癌旁组织(P0.01),其表达水平与宫颈癌患者年龄和组织学分型无关,而与临床分期、组织学分化程度及淋巴结转移相关(P0.01);STMN1-siRNA转染可显著降低宫颈鳞癌Si Ha细胞中STMN1的表达;与未经处理细胞比较,STMN1-siRNA转染的细胞活力显著降低,凋亡率增加,ROS含量升高,p-ATAT3和survivin蛋白水平均下调(P0.01),STAT3的蛋白水平与未经处理细胞的差异无统计学显著性。结论:STMN1在宫颈癌中高表达,其表达与临床分期、组织学分化程度及淋巴结转移相关,抑制其表达可通过下调STAT3信号通路降低肿瘤细胞的活力及诱导凋亡。     

Linc00152靶向miR-376c-3p对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA Linc00152对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞以及正常宫颈细胞Ect1/E6E7中Linc00152与微小RNA-376c-3p(miR-376c-3p)的表达水平。建立Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达的宫颈癌HeLa细胞系,MTT法、流式细胞术、集落形成实验和Western blot分别检测Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞的活力、凋亡、放射敏感性及相关蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证Linc00152与miR-376c-3p的调控关系。结果:与Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞中的Linc00152表达上调,miR-376c-3p表达下调(P<0.05)。Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达均可抑制HeLa细胞的活力,并诱导其凋亡,增强其放射敏感性,抑制cyclin D和Bcl-2蛋白表达,促进P21和Bax蛋白表达(P<0.05)。Linc00152在HeLa细胞中负向调控miR-376c-3p的表达,抑制miR-376c-3p表达可逆转Linc00152低表达对HeLa细胞活力、凋亡和放射敏感性的作用。结论:宫颈癌细胞中Linc00152高表达;Linc00152通过靶向调控miR-376c-3p影响HeLa细胞的生长、凋亡和放射敏感性,是宫颈癌潜在的诊治靶点。     

siRNA阻断NF-κB信号通路抑制宫颈癌HeLa229细胞的增殖及侵袭

 目的 通过RNA干扰阻断宫颈癌HeLa229细胞中NF-κB信号通路，研究其与肿瘤细胞增殖、耐药和侵袭力的关系。方法 利用RNAi技术,将HeLa229分为转染组和对照组， MTT法检测细胞增殖， Boyden chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果 MTT实验表明，转染组细胞存活率比对照组明显下降，联合应用化疗药，转染组和对照组细胞的存活率均随着5-Fu浓度的增加而下降，但在同一浓度，siRNA与5-Fu联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药的敏感性。体外侵袭实验结果表明，和对照组相比，转染p65siRNA组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少（P<0.05）。结论 应用RNAi 技术可有效阻断NF-κB信号通路, 抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力，增强对5-Fu的敏感性。因此，可将NF-κB信号通路作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

miR-30c抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-30c过表达抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将pGenesil-1-miR-30 c质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,以转染p-Geresil-1的细胞为阴性对照;运用TaqMan real-time PCR检测各组细胞中miR-30c的表达水平;采用MTT法、集落形成实验、Transwell法、Annexin V-FITC及流式细胞术分别测定细胞活力抑制率、集落形成能力、迁移率及凋亡率;Western blot检测Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的蛋白表达水平。结果:转染p Genesil-1-miR-30c质粒的宫颈癌细胞系中miR-30c表达水平均显著高于阴性对照组(P0.01);过表达miR-30 c的宫颈癌细胞活力抑制率显著高于阴性对照组(P0.05),细胞集落形成率和迁移率显著低于阴性对照组(P0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-30c过表达的宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05);Western blot结果显示miR-30 c过表达促进Bax和TIMP-1蛋白的表达,而抑制Bcl-2和MMP-13蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论 :miR-30 c过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移,诱导宫颈癌细胞凋亡,其机制与激活细胞凋亡通路及抑制MMP-13表达有关。