绿茶多酚通过抑制TLR4通路减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的探讨绿茶多酚通过抑制TLR4通路对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的影响。方法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,随机分为模型组、绿茶多酚组、TAK-242(TLR4抑制剂)组、绿茶多酚+TAK-242组,每组12只;另取12只大鼠设为假手术组。药物处理后,对所有大鼠进行神经功能缺损评分,检测各组大鼠脑组织含水量,采用Evans蓝外渗实验评定血脑屏障通透性,采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠脑皮层神经元受损情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用蛋白免疫印迹法检测脑组织中TLR4通路蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠皮层结构紊乱疏松,神经元出现变性、坏死,数目减少,细胞核固缩、深染等病理改变,脑组织及神经元受损,神经功能缺损评分、脑组织含水量、Evans蓝渗出量、血清中IL-6及TNF-α水平、脑组织TLR4、MyD88及NF-κB p65蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,绿茶多酚组、TAK-242组、绿茶多酚+TAK-242组大鼠脑皮层神经元损伤减轻,神经功能缺损评分、脑组织含水量、Evans蓝渗出量、血清中IL-6及TNF-α水平、脑组织TLR4、MyD88及NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05);与绿茶多酚组及TAK-242组分别相比,绿茶多酚+TAK-242组大鼠脑组织及神经元病理损伤进一步减轻,神经功能缺损评分、脑组织含水量、Evans蓝渗出量、血清中IL-6及TNF-α水平、脑组织TLR4、MyD88及NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05)。结论绿茶多酚可通过抑制TLR4通路减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤。     

干扰素-γ水平影响系统性红斑狼疮小鼠体TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的初步研究

目的 探究干扰素-γ(IFN-γ)水平对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠体内Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子κB亚基p65(TLR9/MyD88/NF-κB p65)信号通路的影响.方法 将30只SLE MRL/lpr小鼠随机分为模型组、空质粒组和IFN-γ siRNA组,空质粒组和IFN-γsiRNA组采用活体电转染技术分别转入空质粒、IFN-γsiRNA质粒,并鉴定转染后SLE小鼠外周血IFN-γγ的表达;另取10只C57BL/6小鼠作为正常组,ELISA检测IL-6、TNF-α和自身抗体[抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗组蛋白抗体(IgM)]水平,观察各组小鼠肾组织病理变化及肾功能情况[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)],Western blot检测肾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组血清IFN-γγ、 IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,IFN-γsiRNA组IFN-γγ、IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P＜0.05);但空质粒组与模型组上述指标的比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 转染IFN-γγsiRNA质粒后,可减轻SLE小鼠炎症反应与肾损伤,可能与抑制TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路有关.     

富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及TLR4/Myd88/NF-κB信号分子的影响

目的探讨富氢液(HRS)对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及其对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路表达的影响。方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(SEP组)和富氢液处理组(C组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢水和等量生理盐水;三组均于模型建立后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血浆中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western blot检测肠组织TLR4、Myd88和NF-κB表达。结果富氢液可以减轻脓毒血症大鼠肠黏膜损伤,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,降低炎症因子TNF-α、IL-6表达,促进IL-10升高(P0.05),抑制肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达(P0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,可能与TLR4/Myd88/NF-κB信号通路有关。     

抑制Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路加重鲍曼不动杆菌感染大鼠的炎症

目的利用Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242处理大鼠,检测鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染过程中TLR4的作用。方法将健康雄性SD大鼠分为正常对照组、TAK-242处理组、A.baumannii接种组以及TAK-242和A.baumannii联合处理组。TAK-242处理组大鼠通过尾静脉注射TAK-242(1 mg/kg),感染大鼠通过气道接种方法接种A.baumannii。于接种后72 h,取肺组织匀浆后接种至LB培养基,进行肺组织细菌计数;HE染色观察肺组织炎症变化。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平。分离外周血单个核细胞(PBMC),Western blot法检测PBMC中磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)的蛋白水平。结果免疫功能正常的大鼠感染A.baumannii 72 h后,肺内细菌基本被清除,而TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,肺中细菌计数显著增加;正常大鼠感染后,肺部有轻微炎症,TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后肺部炎症较为明显;TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,TNF-α和IL-6增加幅度小于正常感染组大鼠;正常大鼠感染A.baumannii 72 h后,PBMC中p-NF-κBp65蛋白水平升高,而经过TAK-242处理的大鼠感染后,PBMC中p-NF-κBp65的水平升高不明显。结论抑制TLR4/NF-κB通路引起大鼠A.baumannii感染加重。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达北大核心CSCD

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。     

人参皂苷Rg1通过TLR4/MyD88/NF-κB p65通路调控小鼠急性肾损伤诱导的急性肝损伤的机制研究

目的：探讨人参皂苷Rg1(GRg1)对小鼠急性肾损伤所诱导的急性肝损伤的保护作用及其调控机制。方法：昆明小鼠随机分为假手术（sham）组、模型（model）组、GRg1组和necrostatin-1 (Nec-1)组，每组10只。制备急性肾损伤模型，24 h后收集血液。采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酸转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。采用ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。HE染色观察组织病理学改变，采用免疫组织化学和Western blot法检测TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较，model组小鼠出现明显的肝细胞坏死、肝肾功能减退，血清中SCr、BUN、AST和ALT均显著升高（P<0.01）,MDA含量显著上升，SOD活性显著降低（P<0.01），且血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量显著升高（P<0.01）,TLR4、MyD88和N...     

基于TLR4 / NF-κB 信号通路探讨通痹胶囊对胶原诱导型关节炎治疗机制的研究

目的:基于TLR4/NF-κB信号通路研究通痹胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)的治疗机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤组(0. 01 g/kg)和通痹胶囊低(0. 075 g/kg)、中(0. 150 g/kg)、高(0. 300 g/kg)剂量组,每组8只;使用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠CIA模型;采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测滑膜组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常大鼠相比,模型大鼠关节肿胀度均显著升高,通痹胶囊治疗后关节肿胀度显著降低,模型组滑膜组织增生明显,炎症细胞浸润,关节软骨破坏,通痹胶囊治疗明显改善滑膜组织的增生,降低炎症细胞的浸润;模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平显著升高,通痹胶囊处理后显著降低血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达;与通痹胶囊高剂量组相比,TLR4激动剂处理显著提高血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结论:通痹胶囊可以通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎性反应,显著改善CIA症状。     

川芎嗪抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻子宫内膜异位症大鼠炎症反应北大核心CSCD

目的探讨川芎嗪抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路减轻子宫内膜异位症(EMs)大鼠炎症反应的作用。方法自体子宫移植法构建EMs大鼠模型,随机分为EMs组、川芎嗪(低、中、高)剂量组、阳性药物组,每组各12只;进行假手术的12只大鼠作为假手术组。游标卡尺测定异位病灶体积,HE染色检测异位内膜组织病理学改变,ELISA检测血清性激素及炎症因子水平,qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色分别检测异位内膜组织中炎症因子mRNA表达、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达及NF-κB p65入核情况。结果与假手术组比较,EMs组大鼠异位内膜组织出现明显病理损伤,血清雌二醇(E2)、孕激素(P)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6水平及异位内膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、总蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κB p65和核蛋白NF-κB p65表达水平升高,血清促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量降低(P<0.05),同时NF-κB p65蛋白大量入核;与EMs组比较,川芎嗪(低、中、高)剂量组和阳性药物组可缓解EMs模型大鼠的上述改变并降低异位病灶体积,且川芎嗪高剂量组和阳性药物组对EMs大鼠的作用效果较好且相近。结论川芎嗪可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活减轻EMs大鼠炎症反应。     

雷帕霉素减轻大鼠脑缺血再灌注损伤与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关性

目的观察雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节。方法 SD大鼠30只,随机分为三组,每组十只,分别为:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组)和雷帕霉素预处理组(RAP组)。HE染色观察脑组织病理改变,TUNEL检测脑组织凋亡,ELISA检测脑损伤标志物和炎症因子的变化,Western blot检测脑组织TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达。结果雷帕霉素改善缺血再灌注造成的脑组织损伤,改善脑组织损伤造成的细胞凋亡,降低缺血再灌注损伤脑组织脑损伤标志物及炎症因子水平,雷帕霉素降低缺血再灌注损伤脑组织TLR4信号通路相关蛋白表达。结论雷帕霉素减轻大鼠脑缺血再灌注损伤与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。     

贞芪扶正胶囊介导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制慢性湿疹小鼠炎症反应

目的 探讨贞芪扶正胶囊对慢性湿疹小鼠炎症反应的抑制作用.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只,按随机数字表法随机分为对照组(control组)、模型组(CAD组)与贞芪扶正胶囊组(ZQFZ组).观察各组小鼠双耳肿胀程度、双耳变应评分;HE染色观察病灶处皮肤病理学变化;ELISA法检测血清炎性因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平;RT-PCR检测皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β mRNA表达;Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达;RT-PCR检测皮肤中TLR4、MyD88及NF-κB mRNA表达.结果 ZQFZ可以显著改善小鼠双耳肿胀程度,降低小鼠双耳变应评分(P＜0.05);减轻小鼠皮肤炎症浸润并降低血浆及皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β蛋白与mRNA表达(P＜0.05);同时ZQFZ还可显著下调小鼠皮肤组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白与mRNA表达(P＜0.05).结论 贞芪扶正胶囊可以通过抑制炎性反应达到治疗慢性湿疹作用,其作用机制可能与其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关.     

TLR4对氧化低密度脂蛋白作用巨噬细胞后凋亡和炎症因子的影响

目的：研究Toll样受体4（TLR4）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用后巨噬细胞凋亡和炎症因子的影响。方法：巨噬细胞Ana-1分为Con（不做处理）、ox-LDL（50 pg/ml ox-LDL处理）、TAK-242（50 pg/ml ox-LDL和20 μmol/L的TLR4阻断剂TAK-242处理）。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、核因子-κBp65（NF-κBp65）、TLR4蛋白水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中ROS水平,ELISA检测培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。结果：ox-LDL处理后的Ana-1细胞中TLR4表达水平升高,而TLR4阻断剂TAK-242可以部分降低细胞中TLR4水平。ox-LDL细胞凋亡率从（6.12±0.95）%升高到（45.35±2.71）%,而TAK-242作用后的凋亡率降低至（29.59±4.23）%,同时ox-LDL细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平和ROS水平均明显高于Con（P<0.05）,而TAK-242细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平ROS水平均明显低于ox-LDL（P<0.05）。ox-LDL细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显高于Con（P<0.05）,而TAK-242细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显低于ox-LDL（P<0.05）。结论：巨噬细胞经过ox-LDL作用后细胞中TLR4表达升高,细胞凋亡增多,细胞分泌的炎症因子水平升高,细胞中ROS水平和NF-κBp65水平均升高,而敲低TLR4能够抑制ox-LDL的上述作用。     

青蒿素减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤的实验研究

目的:探究青蒿素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肠上皮IEC-6细胞屏障功能损伤的影响。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为5组:对照组、LPS(100 mg/L)组和LPS+青蒿素(30、50和100μmol/L)组,MTT法检测各组细胞毒性变化,ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化,电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER),酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1和occludin)以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达的变化。结果:LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC-6细胞均无毒性。与对照组相比,LPS处理下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB的mRNA和蛋白表达明显增加,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达升高(P0.05),均呈现浓度依赖性。结论:青蒿素可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。     

ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。     

ATP敏感性钾通道在硫化氢抑制坏死性凋亡介导的高糖致H9c2心肌细胞炎症中的作用

目的:探讨ATP敏感性钾通道(K_ATP通道)在硫化氢(H2S)抑制坏死性凋亡介导的高糖(HG)致H9c2心肌细胞炎症中的作用。方法:应用Western blot法测定受体相互作用蛋白3(RIP3)和环氧化酶-2(COX-2)的表达水平;ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,其RIP3的表达水平明显升高,100μmol/L K_ATP通道开放剂二氮嗪(DZ)和400μmol/L H_2S的供体硫氢化钠(Na HS)预处理心肌细胞30 min均可抑制HG对RIP3表达的上调;100μmol/L K_ATP通道阻断剂5-羟基癸酸(5-HD)预处理心肌细胞30 min可阻断Na HS对HG上调RIP3表达的抑制作用。另一方面,100μmol/L坏死性凋亡的特异性抑制剂necrostatin-1共处理或100μmol/L DZ、400μmol/L Na HS预处理心肌细胞均能抑制高糖引起的心肌细胞炎症,使COX-2表达及IL-1β和TNF-α的分泌水平均减少;而100μmol/L 5-HD能明显拮抗Na HS的上述抗炎症反应作用。结论:K_ATP通道在H_2S抑制坏死性凋亡介导的高糖致心肌细胞炎症反应中发挥重要的作用。     

血管紧张素-(1-7)通过抑制TLR4激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制Toll样受体4(TLR4)激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法:应用Western blot检测心肌细胞受体相互作用蛋白3(RIP3;反映坏死性凋亡的指标)和TLR4的表达水平;CCK-8法测定心肌细胞存活率;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平;双氯荧光素染色法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;罗丹明123染色法测定线粒体膜电位(MMP)。结果:HG(35 mmol/L葡萄糖)作用H9c2心肌细胞24 h可使RIP3的表达水平明显升高,应用30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h可抑制HG对RIP3的上调;另一方面,HG可上调TLR4的表达,100μmol/L坏死性凋亡的特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和HG共处理心肌细胞24 h可抑制HG对TLR4的上调;而1μmol/L Ang-(1-7)和HG共处理心肌细胞24 h能同时抑制HG对RIP3和TLR4的上调。此外,1μmol/L Ang-(1-7)、30μmol/L TAK-242或100μmol/L Nec-1与HG共处理心肌细胞均能对抗HG引起的心肌细胞损伤,细胞存活率升高,LDH活性降低,ROS生成和MMP丢失减少,同时IL-1β和TNF-α的分泌减少。结论:Ang-(1-7)通过抑制TLR4激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤。     

TLR4／NF-κB信号通路在SiO2所致矽肺模型肺泡巨噬细胞脂质代谢调控中的作用#br#

目的 探讨Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）/核转录因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）通路在二氧化硅（SiO2）所致大鼠矽肺模型肺泡巨噬细胞的脂质代谢中的作用。 方法 按随机数字表法将36只SD大鼠分为正常组、模型组、抑制剂组。模型组、抑制剂组采用一次性气管内缓慢滴注1 mL SiO2悬浮液进行造模。造模成功后抑制剂组大鼠每天定时耳缘静脉注射TAK-242（TLR4/NF-κB信号特异性抑制剂）,剂量为0.5 mg/kg,正常组和模型组注射等剂量生理盐水。4周后处死大鼠收集支气管灌洗液（bronchial lavage fluid,BALF）,ELISA测定各组大鼠BALF中白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;提取BALF中的肺泡巨噬细胞进行培养,油红O染色观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的脂滴形成;Western blot检测各组肺泡巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平。 结果 与正常组相比,模型组、抑制剂组大鼠BALF中IL-6和TNF-α的含量,巨噬细胞中油红O阳性比例,巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达升高,差异具有统计学意义（均P<0.05）;与模型组相比,抑制剂组大鼠上述指标降低,差异具有统计学意义（均P<0.05）。 结论 在SiO2所致大鼠矽肺模型中,TLR4/NF-κB信号参与肺泡巨噬细胞的脂质代谢的调控,抑制该信号的表达,能明显抑制矽肺的病理损伤。     

血红素氧合酶1通过影响脓毒症大鼠血栓调节蛋白表达发挥肾脏保护作用

目的:探讨血红素氧合酶1(HO-1)对脓毒症大鼠肾脏的保护作用及其机制,观察肾脏血栓调节蛋白(TM)表达的变化以及HO-1对TM的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作脓毒症大鼠模型。将72只脓毒症大鼠随机分为对照组、CLP组、CLP+HO-1诱导剂组和CLP+HO-1抑制剂组,每组18只;按分组处理后分时相处死大鼠,留取血浆和肾脏组织,分析各组之间血清肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys-C)、碳氧血红蛋白(COHb)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)的差别,ELISA法检测血浆TM、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平变化,肾脏组织经马休黄/猩红/天青石蓝染色(MSB)法对比各组之间病理变化,并应用Western blot分析肾脏组织TM表达水平。结果:与对照组相比,脓毒症组中大鼠肾脏微血栓形成明显,凝血功能障碍,炎症反应明显,肾脏功能受损;在HO-1诱导剂组中大鼠肾脏微血栓及炎症反应较脓毒症组显著减轻(P0.05),肾脏功能得到改善,TM表达较脓毒症组上调(P0.05);而HO-1抑制剂起到了相反的作用。结论:HO-1能够增加脓毒症大鼠肾脏TM的表达,发挥抗凝血及抗炎作用,从而改善脓毒症大鼠的肾脏功能。     

Adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的保护作用及肺泡上皮钠离子通道的调节

目的:探讨adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道(ENaC)的调节。方法:40只C57BL/6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin(PI3K抑制剂)组,每组10只。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变;伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率(AFC),BCA法测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,评估肺组织通透性改变;ELISA检测BALF中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测MPO活性,吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数,Western blot法检测肺组织α-ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平,实时荧光定量PCR检测肺组织α-ENaC的mRNA转录水平。结果:与control组相比,LPS组表现出典型的ARDS病理改变,肺损伤明显(P0.05),湿干重比(W/D)和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),而肺α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。与LPS组相比,adipolin组肺损伤明显减轻(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强(P0.05),且BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量均较LPS组显著降低(P0.05),伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调(P0.05)。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比,其肺损伤明显加重(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显增高,AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),同时伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。结论:Adipolin/CTRP12可通过PI3K/Akt信号通路介导的α-ENaC上调机制,增强肺水肿液清除能力,从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。     

硫化氢抑制大鼠急性心肌缺血引起的细胞炎症反应

 目的：探讨硫化氢（H2S）能否抑制大鼠急性心肌缺血引起的细胞炎症反应。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支4 h,引起心肌缺血损伤。健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、缺血组（ischemia）以及硫氢化钠(NaHS) 5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L组。NaHS组分别于心肌急性缺血2 h时更换为5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L NaHS灌流液。缺血后4 h记录心功能变化。实时荧光定量PCR检测离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和ICAM-1 mRNA表达;Western blotting检测离体心肌组织中NF-κB的表达。结果：Ischemia组离体心肌功能下降（与sham组相比P<0.01）,NaHS组离体心肌功能比ischemia组明显改善（P<0.05或P<0.01）。Ischemia组离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1 mRNA表达显著增强,IL-10 mRNA表达显著降低（与sham组相比P<0.01）;NaHS组离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1 mRNA表达比ischemia组明显降低,NaHS 10 μmol/L,20 μmol/L组离体心肌组织中IL-10 mRNA表达比ischemia组明显升高（P<0.05或P<0.01）。与sham组相比,ischemia组NF-κB表达显著增加（P<0.01）,而NaHS 10 μmol/L和20 μmol/L组NF-κB的表达明显低于ischemia组（P<0.05或P<0.01）。结论：H2S可通过阻断NF-κB相关信号通路的转导,抑制炎症反应,明显改善大鼠急性心肌缺血损伤。