pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗预防接种对慢性鱼藤酮损害小鼠的神经保护作用

目的探讨优化人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)核酸疫苗(pVAX1-IL4/SYN-B)预防接种对慢性鱼藤酮损害小鼠的神经保护作用。方法将小鼠随机分为3组:核酸疫苗组、空质粒组、PBS对照组,在小鼠双侧后肢胫前肌部位分别注射pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗,空质粒pVAX1,PBS各100μl,共免疫3次。末次注射3周后全部小鼠背部皮下注射鱼藤酮1 mg/kg,1次/d,连续注射40 d。最后一次注射后,观察小鼠行为学变化;免疫组化方法检测小鼠中脑黑质致密部α-syn表达和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数目变化;RT-PCR检测α-syn mRNA表达情况。结果行为学观察发现,各组小鼠自由活动实验显示核酸疫苗组,空质粒组,PBS对照组小鼠移动格子数及下肢站立次数明显改善,并有显著差异(P<0.05)。免疫组化发现核酸疫苗组小鼠与空质粒组、PBS对照组相比,TH阳性细胞数增加63.27%、55.34%(P<0.05),α-syn表达减少55.68%,55.34%(P<0.05)。RT-PCR发现核酸疫苗组α-syn mRNA相对表达水平0.38±0.03较空质粒组0.77±0.05及PBS对照组0.73±0.01明显减少(P<0.05)。结论 pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗能有效防止鱼藤酮神经毒素对黑质多巴胺能神经元的损害,对多巴胺能神经细胞具有保护作用。     

优化核酸疫苗对慢性MPTP帕金森病小鼠的免疫作用

目的评价优化核酸疫苗(pVAX1-IL-4/SYN-B)预防接种对小鼠MPTP损害的免疫保护作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、PBS模型组、空质粒模型组、优化核酸疫苗模型组4组,分别在小鼠双后肢胫前肌注射PBS、PBS、空质粒、pVAX1-IL-4/SYN-B各100μl,共3次。末次注射3周后,后3组注射MPTP构建慢性帕金森病小鼠模型,正常对照组注射同体积的PBS。末次给药后观察小鼠行为学变化;免疫组织化学、Western blot检测小鼠黑质部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达情况;RT-PCR检测小鼠黑质TNF-α、IL-1β的mRNA水平。结果与PBS模型组、空质粒模型组相比,优化核酸疫苗模型组小鼠运动症状明显改善;TH丢失减少;TNF-α、IL-1β的mRNA水平表达降低;差异有统计学意义。结论优化核酸疫苗预防接种对小鼠的慢性MPTP损害有一定的神经保护及抗炎作用。     

优化核酸疫苗对帕金森病小鼠纹状体神经末梢的免疫治疗作用

目的探讨优化人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B免疫接种对MPTP慢性帕金森病模型小鼠纹状体多巴胺能神经元轴突末梢的免疫治疗作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、PBS模型组、空质粒模型组和优化核酸疫苗模型组4个组,对后3组腹腔注射MPTP构建慢性帕金森病小鼠模型,正常对照组注射等体积的PBS。之后分别在正常对照组和3组模型组小鼠双后肢胫前肌注射PBS,PBS,空质粒和pVAX1-IL-4/SYN-B各100μl,一共进行3次注射。末次注射后2周,观察小鼠行为学变化后杀鼠取纹状体,免疫组化和Western blot检测小鼠纹状体酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和突触素(synaptophysin,SYP)表达水平。结果行为学观察各组小鼠自由活动实验显示:优化核酸疫苗模型组小鼠移动格子数和下肢站立次数与PBS模型组、空质粒模型组相比,明显增加,差异有统计学意义。优化核酸疫苗模型组小鼠纹状体TH和SYP丢失与PBS模型组、空质粒模型组相比显著减少,差异有统计学意义。结论优化核酸疫苗能对帕金森病小鼠纹状体多巴胺能神经元轴突末梢产生较好的治疗作用。     

优化hα-syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价

目的评价pVAX1-IL-4/SYN-B核酸疫苗对C57BL/6J小鼠免疫反应的效果和安全性。方法采用C57BL/6J小鼠模型,应用ELISA法、免疫组织化学、RT-PCR技术,比较PBS对照组、空质粒组、优化核酸疫苗组、全长核酸疫苗组小鼠动物行为学及免疫学指标的差异。结果①优化核酸疫苗组小鼠血清中α-syn抗体明显增加;②优化核酸疫苗组中IL-4较高,IFN-γ较低,其他3组无明显差异;③免疫组织化学法显示疫苗产生的抗体可与帕金森模型小鼠脑切片中α-syn阳性包涵体发生特异性结合反应,而对照组和空质粒组无反应;④RT-PCR显示优化核酸疫苗组COX-2表达量明显少于全长核酸疫苗组(P<0.05),与对照组、空质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论优化核酸疫苗可在小鼠体内产生高效价α-syn抗体,主要引起体液免疫反应;比全长核酸疫苗更有效、更安全,为优化核酸疫苗的进一步筛选奠定了基础。     

PD模型小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein基因对外周单核细胞浸润的影响

目的小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑发生外周单核细胞浸润的影响。方法本研究使用转突变型A53Tα-Syn基因的帕金森病小鼠模型(以下简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位技术检测2、12月龄的Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧背盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)的P2Y12、CD11b、CD169和Iba-1的表达情况。结果免疫荧光结果显示,在2月龄的Pitx3/A53T和nTg小鼠,以及12月龄的nTg小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR),仅检测到中枢神经系统(CNS)小胶质细胞(P2Y12+CD11b+和CD169-Iba-1+)。在12月龄的Pitx3/A53T小鼠中脑部位,除了有CNS小胶质细胞外,其SNR部位还特异性存在外周单核细胞(P2Y12-CD11b+和CD169+Iba-1+)。此外,在2月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平较nTg小鼠高(P0.05,SNC、VTA、SNR);12月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显低于nTg小鼠(P0.01,SNC、VTA;P0.001,SNR);与2月龄的小鼠相比,12月龄小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显降低(P0.001,Pitx3/A53T;P0.05,nTg)。结论小鼠中脑特异性表达突变型A53Tα-Syn后,其在老龄时中脑发生外周单核细胞浸润。而且小鼠中脑部位P2Y12的表达水平变化与年龄和突变型A53Tα-Syn关系密切。     

仙台病毒核酸疫苗对小鼠脾脏淋巴细胞分型的作用

目的评价核酸疫苗pVAX1-F和pVAX1-HN的免疫效果。方法用成功构建的仙台病毒天津株HN基因和F基因的真核表达质粒pVAX1-F和pVAX1-HN,单独或联合免疫幼鼠,采用流式细胞技术(Flow Cytometry,FCM)。检测免疫后第7、14、21和28天的脾脏淋巴细胞分型,观察它们在幼鼠体内的免疫应答作用。结果淋巴细胞分型结果显示,构建质粒能够增高CD3+CD4+/CD3+CD8+比值、B细胞和NK细胞百分含量。结论构建的核酸疫苗pVAX1-F和pVAX1-HN能够有效增强小鼠的细胞特异性免疫能力。     

小鼠对HIV-2 gp105核酸疫苗免疫应答的研究

目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法检测小鼠血清抗HIV -2抗体, 用流式细胞仪测定CD4 、CD8 T细胞亚群数, 以乳酸脱氢霉释放法检测脾特异性CTL的杀伤活性。结果: 重组质粒pVAX1 -gp105免疫组小鼠的血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及特异性CTL的杀伤活性, 均明显高于对照组, 分别为P<0. 01, P<0. 05和P<0. 01。结论: HIV -2gp105核酸疫苗能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。     

中脑过表达突变型A53T α-Synuclein增加血脑屏障通透性的研究

目的小鼠中脑特异性过表达突变型A53Tα-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑血脑屏障通透性的影响。方法应用过表达人转突变型A53Tα-Syn基因的帕金森病小鼠模型(简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位和苏木精-伊红(HE)染色,检测Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧被盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)白蛋白(albumin)的泄漏情况,GFAP、血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)的表达情况,以及血管变化情况。结果免疫荧光和HE染色结果显示,过表达人突变型A53Tα-Syn会促进小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR)albumin的泄漏(P0.01),上调GFAP(P 0.05)和VEGFR1的表达,增加微血管的数目(P0.01)。结论过表达突变型A53Tα-Syn可能通过影响星形胶质细胞和血管新生,从而增加血脑屏障通透性。     

尼莫地平对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元的保护作用

目的:研究尼莫地平在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠中对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:雄性健康C57BL/6N小鼠随机分为对照组,腹腔注射生理盐水;模型组,腹腔注射MPTP(25 mg/kg);尼莫地平治疗组,每次注射MPTP前3 h灌胃给予尼莫地平(15 mg/kg)。观察各组小鼠行为学变化,免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化。结果:与对照组小鼠比较,MPTP模型组小鼠出现典型的PD症状,中脑黑质TH阳性神经元大量丢失,PGE2和TNF-α阳性细胞显著增多,蛋白水平明显升高;经尼莫地平治疗后,上述症状得到明显改善。结论:在MPTP所致PD小鼠模型中,尼莫地平通过抑制炎症因子PGE2和TNF-α的表达从而对多巴胺能神经元具有一定的保护作用。     

红景天甙通过抑制肿瘤坏死因子-α表达对帕金森模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的;研究红景天甙对1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的帕金森病(PD)小鼠模型黑质区多巴胺能神经元保护作用及其可能机制.方法:采用MPTP制备PD小鼠模型.将小鼠随机分为MPTP模型组、红景天甙组和对照组.对各组动物进行行为学观察,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法,观察各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)阳性细胞表达和蛋白水平的变化;观察红景天甙对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型的PD样症状.MPTP模型组黑质区(SN) TH阳性神经元和蛋白表达水平较对照组减少约为40％和60％,TNF-α阳性细胞和蛋白表达水平增加;经红景天甙处理后,上述变化均减轻.结论:红景天甙可在一定程度上阻抑MPTP诱导的PD模型小鼠黑质区多巴胺能神经元的丢失;其神经保护机制可能与抑制TNF-α的表达有关.