人类脂肪来源成体干细胞体外定向成软骨的诱导实验

Objective To investigate the feasibility of inducing human adipose derived adult stem cells (hADASc) into chondrocytes by gene transfection.Methods hADASc were cultured in vitro, and transfected with gene PGL3-TGF-pl, whose Luceferase activity (RUL value) was measured.PT-PCR was used to monitor the expression of tranfected hADASc.Anti collagen II immunohistochemical staining was performed in the experimental group (transfected hADASc) , active control group (untransfected hADASc cultured in chondrocytes induction medium) and negative control group (untransfected hADASc cultured in conventional medium).The immuno-staining image was analyzed with an automated imaging analysis system and computed for PU values.Results Nucleated tissue cells with features of stem cells were isolated from in vitro culture of human subcutaneous adipose tissue.The RUL value of the experimental group (9 212.583±315.240) was higher than that of the control group(317.000?0.710, P＜0.01).RT-PCR revealed that the transfected hADASc could express the TGF-β1.Anti collagen Ⅱ immunohistochemical staining was positive in experimental group and active control group, with PU values (13.864±2.416 and 13.637±2.548,respectively) statistically different from that of the negative control group (6.013 ±0.827, P＜0.05).Conclusions Nucleated tissue cells with features of stem cells can be isolated from culture of human subcutaneous adipose tissue in vitro.The PGL3-TGF-β1-transfected hADASc may express TGF-β1.The endogenous TGF-β1-induced hADASc produces collagen Ⅱ , with similar actions of exogenous TGF-β1.     

Isolation,culture and osteogenic induction of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells

背景：骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,且可大量体外扩增培养,是重要的组织工程种子细胞。但尚无统一的体外培养及定向诱导方法。 目的：探讨体外定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的可行性。 方法：应用密度梯度离心法从兔四肢骨中分离纯化间充质干细胞,应用密度为1.073 g/mL的Percoll分离液,3 000 r/min×30 min离心,区别于相关报道的Ficoll分离液,2 000-2 500 r/min×(20-30) min离心以及全骨髓培养法体外扩增至第3代,分别在普通培养基(对照组)和成骨诱导培养基(实验组)中培养。 结果与结论：成功获得大量高纯度骨髓间充质干细胞。经成骨诱导后,实验组骨钙素含量明显高于对照组(P < 0.05)。实验组碱性磷酸酶和钙结节染色阳性,对照组均阴性。结果表明使用密度梯度离心法可成功建立兔骨髓间充质干细胞的分离培养体系,骨髓间充质干细胞可定向诱导为成骨细胞。     

维甲酸定向诱导小鼠核移植胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化

目的 初步探讨体外条件下定向诱导小鼠核移植胚胎干细胞分化为雄性生殖细胞的条件,建立有效诱导分化技术平台.方法 分离BALB/c小鼠NT-ESCs样集落并鉴定.NT-ESCs消化后分4组:1)采用维甲酸诱导NT-EBs向雄性生殖细胞方向分化;2)未分化的NT-ESCs;3)分化培养前的NT-EBs;4)自主分化的NT-EBs;5)小鼠胚胎成纤维细胞.RT-PCR法检测各组Oct-4、VASA、Scp3、Sry、Tex14和β-actin的mRNA表达;免疫荧光染色法检测VASA、Scp3蛋白表达.结果 NT-ESCs集落性生长,符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性.NT-EBs维甲酸诱导组Oct-4、VASA、Scp3、Sry、Tex14和β-actin均有表达,对照组为阴性;NT-EBs细胞诱导分化后Scp3荧光强度为(+);实验组VASA荧光强度(+)也优于对照组的(±).结论 采用维甲酸诱导可促进核移植胚胎来源NT-ESCs分化为雄性生殖细胞.     

Snail基因沉默对转化生长因子-β1促进骨髓间充质干细胞迁移的抑制作用

目的 研究转化牛长因子Cβl(TGF-β1)对体外培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)侵袭力的影响和对Snail、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的调节作用. 方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞.用免疫荧光法对培养第3代的细胞进行鉴定.用改良的Transwell小室检测不同浓度TGF-β1对细胞迁移力的影响;RT-PCR和免疫荧光法检测TGF-β1作用不同时间细胞Snail、MMP-2 mRNA表达以及Snail蛋白表达情况.用脂质体转染针对Snail基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA),Western blotting检测转染前后TGF-β1对Snail、MMP-2表达的影响. 结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠MSCs.免疫荧光检测显示,培养的细胞CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;外源性TGF-β1对MSCs迁移力的促进作用具有剂量依赖性,在2μg/L时达到最高.Snail、MMP-2 mRNA及Snail蛋白表达明显增高.Snail基因沉默可以明显抑制TGF-β1对MMP-2表达的促进作用. 结论 TGF-β1可显著增加促进MSCs的MMP-2表达,从而促进其迁移能力,此作用是通过TGF-131对Snail表达的上凋实现的.     

P13K/Akt信号通路在白蛋白诱导肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达中的作用

目的 研究白蛋白对人肾小管上皮细胞(HK-2)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,以及P13K/Akt信号通路在这一过程中的作用.方法 体外培养HK-2细胞,分为对照组、白蛋白(BSA)组和白蛋白加抑制剂(BSA+Ly294002)组.分别于培养12、24、48 h后,用MTT法检测HK-2细胞的增殖;RT-PCR检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA的表达;Western印迹测定HK-2细胞TGF-β1和磷酸化的PI3K(p-PI3K)、Akt(p-Akt)蛋白分泌.结果 白蛋白可明显诱导HK-2细胞增殖(P<0.05),诱导后12 hBSA组与对照组比较,TGF-β1 mRNA表达明显上调(0.472±0.025比0.233±0.021,P<0.05);TGF-β1蛋白明显上调(296±20.1比100±13.2,P<0.05);p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加(P<0.05).加Ly294002 12 h时HK-2增殖受抑制;48 h时TGF-β1 mRNA、蛋白和p-PI3K、P-Akt蛋白的表达也受到抑制(均为P<0.05).结论 白蛋白通过活化PI3-K/Akt信号转导通路诱导肾小管上皮细胞产生TGF-β1.     

人源脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞诱导分化的试验研究

目的通过成熟的体外培养和扩增脂肪干细胞的流程获得人脂肪干细胞,对脂肪干细胞的分化潜能进行研究,探索体外诱导脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞定向分化的方法。方法通过酶消化法从吸脂术后的脂肪抽吸液中分离脂肪干细胞并在体外培养、扩增。尝试利用TGF-β及抗坏血酸建立体外诱导脂肪干细胞向膀胱平滑肌细胞定向分化体系。以RT-PCR、免疫组织化学的方法评价平滑肌分化情况。结果人脂肪干细胞具有良好的增殖能力和分化潜能,诱导后细胞排列形态与平滑肌细胞漩涡状排列类似,RT-PCR结果提示a-肌动蛋白、Calpolin,Sm22表达,MHC表型无表达;免疫组化显示a-肌动蛋白显色随诱导培养时间增加。结论人脂肪干细胞具有向平滑肌细胞分化潜能,TGF-β及抗坏血酸具促使脂肪干细胞向平滑肌分化作用。     

TGF-β3与牙髓干细胞联合应用对兔面神经损伤修复的作用

目的 探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)与牙髓干细胞联合应用能否显著促进兔面神经的损伤修复.方法 取16只成年健康新西兰大白兔,制备面神经上颊支7mm缺损并于损伤局部进行硅胶管套接的动物模型.右侧面神经随机设为(TGF-β3+牙髓干细胞)实验组(8只兔)和TGF-β3对照组1(8只兔),左侧面神经设为PBS液对照组2(8只兔)和正常对照组(8只兔).术后3月,进行大体形态观察、组织学观察及电生理检测.结果实验兔16只均进入分析,实验组再生神经直径与近、远端神经干相当,无神经瘤形成,外膜血管丰富,质地坚韧.再生组织切片HE染色显示:实验组面神经外膜完整,神经纤维排列相对较整齐,形态较完整,髓鞘肿胀,仍可见肥大增生的雪旺细胞,胞核浓密,束间血管较多.光学显微镜图像分析显示:实验组再生神经纤维总数多于其他2个对照组,再生神经纤维直径也远远大于其他2个对照组,其差异具有统计学意义(p＜0.05).超薄切片透射电镜结果显示:实验组的再生纤维以有髓神经纤维为主,形态规则,髓鞘板层结构清晰,轴浆内细胞器丰富.神经电生理检测结果显示实验组神经肌肉动作电位的潜伏期明显短于其他2个对照组[实验组(1.96±0.32) ms,对照组1(2.35±0.41) ms,对照组2(3.42±0.55)ms,p＜0.05],并且实验组神经肌肉动作电位的波幅明显高于其他2个对照组[实验组(11.06±3.25) mV,对照组1(8.40±1.68) mV,对照组2(4.62±0.77) mV,p＜0.05].结论TGF-β3与牙髓干细胞联合应用能显著提高面神经损伤后的修复作用.     

小分子干扰RNA对新生鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1的干预效果及意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)小分子干扰RNA(siRNA)体外转染新牛鼠肺成纤维细胞的干预效果,研究TGF-β1 siRNA的最佳干预剂量及维持时间. 方法 首先采用化学合成TGF-β1 siRNA对新生鼠肺成纤维细胞进行干预,通过实时定量PCR检测技术筛选出有效干扰片段;然后构建TGF-β1 siRNA腺病毒载体,体外转染新生鼠肺成纤维细胞,半定量PCR检测体外转染后TGF-β1基因的抑制效果,确定其最佳干预剂量及维持时间. 结果 (1)化学合成siRNA抑制TGF-β1基因表达的效果:siRNA剂量为20 pmol,转染后24 h检测抑制效果,第2、3、4条siRNA均有不同效果,其中第3条siRNA抑制效率>70%;(2)TGF-β1 siRNA腺病毒载体转染细胞,观察20、50μl不同剂量转染后24 h抑制情况,并与20μl阴性和空白对照比较,结果显示20、50μl均有明显抑制效果;观察转染后24、48、72 h的抑制效果,比较显示转染后24 h有明显抑制效果,72 h抑制效果最强,说明随着转染时间延长,抑制作用越明显. 结论 TGF-β1 siRNA腺病毒载体体外转染新生鼠肺成纤维细胞对TGF-β1的表达均有明显抑制效果.     

白细胞介素-1β体外诱导小鼠中脑神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化

目的: 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)体外诱导中脑神经干细胞(M-NSCs)向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化情况,为帕金森病的转基因移植治疗在体外获得足够的多巴胺能神经元提供实验依据.方法:在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以IL-1β作诱导分化.酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测TH阳性神经元的百分率.结果:实验组促进M-NSCs分化为TH阳性神经元的比例为9.54%,而对照组仅3.46%,差异有统计学意义.结论:IL-1β可明显促进中脑神经干细胞分化成多巴胺能神经元.     

胎盘来源的间充质干细胞体外分离培养及向软骨细胞分化的研究

目的对人胎盘间充质干细胞体外分离培养及向软骨细胞分化进行研究,为软骨组织工程提供种子细胞。方法取人正常分娩后的胎盘,用组织块培养法分离获取胎盘间充质干细胞,对所获细胞进行体外培养和表面标志的流式细胞仪分析。对经过证实的骨髓间充质干细胞用含TGF-β_3、维生素C、胰岛素、地塞米松、转铁蛋白的诱导培养基处理7-28d,对诱导细胞进行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色,鉴定诱导后的软骨细胞表型。结果培养的人胎盘间充质干细胞均一表达CD_(29)和CD_(44),而CD_(31)、CD_(34)、CD_(45)和HLA-DR呈阴性。细胞经诱导液作用14d后,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色阳性。结论采用组织块培养法能分离获取高纯度的人胎盘间充质干细胞,该细胞经诱导液作用可定向分化为软骨细胞。     

转染白细胞介素1受体拮抗剂与转化生长因子β1软骨细胞和致炎软骨块共培养后炎性因子的变化

目的 观察重组人白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)和转化生长因子β1(TGF-β1)双基因在体外对兔骨关节炎(OA)的治疗效果.方法 取新西兰大白兔关节软骨经酶消化分离原代培养软骨细胞,并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.软骨细胞分为转染IL-1Ra组(A组)、转染TGF-β1组(B组)、转染IL-1Ra+TGF-β1双基因组(C组)、未转染组(D组)、空白组(E组).A、B、C 3组均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂质体为转染媒介.各组加入软骨块与软骨细胞共培养,除E组外,其余各组均加入20 ng IL-1β,转染共培养后分别在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察软骨细胞转基因的表达.于共培养第2,4、6天后应用放射免疫分析(RIA)分别检测各组IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.结果 成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色.胞核基本不着色.荧光显微镜下A、B、C组均有绿色荧光蛋白的表达,转染后24 h,3组细胞的转染率最高分别为(16.16+2.71)%、(16.54±2.91)%、(17.20±2.39)%,第2天后随时间的延长转染率逐渐降低.同时间点IL-1β水平D组＞B组＞A组＞C组＞E组;而第2、6天TNF-α水平D组＞A组＞B组＞C组＞E组,第4天E组＞A组＞B组＞C组＞D组,其中A组虽然略高于B组,但差异没有统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义.A、B、C组的IL-1β和TNF-α在第6天的水平明显低于第2、4天,D、E组IL-1β水平不随时间的延长而改变,TNF-α水平D组在第4天时最低,E组则最高.结论 转染IL-1Ra和TGF-β1基因均有降低炎性因子水平的作用.联合应用转染IL-1Ra和TGF-β1基因可能控制炎性反应,为体外OA的基因治疗提供实验基础.     

SOX-9和转化生长因子-β1共同诱导大鼠脂肪干细胞向软骨细胞分化

目的探讨应用SOX-9和TGF-β1基因转染大鼠ADSCs(Adipose stromal cells,ADSCs)后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路。方法6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150g。扩增、提取质粒pcDNA3.1-TGF-β1、pcDNA3.1-SOX-9。分离、纯化Wistar大鼠ADSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代ADSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志。将SOX-9和TGF-β1基因单独或共转染第3代ADSCs,按转染情况分为5组:对照组、转染空载体组、转染SOX-9组、转染TGF-β1组、SOX-9与TGF-β1共转染组。对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Westernblot法检测筛选后细胞的表达。结果免疫荧光法检测ADSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD106呈阴性反应。MTT法测定各组细胞在490nm波长处的吸光度(A)值,未转染组、空载体组与SOX-9组、TGF-β1组、SOX-9与TGF-β1共转染组间差异显著(P<0.01)。RT-PCR和Western blot检测目的基因和蛋白的表达量,SOX-9表达以转染SOX-9组最多;TGF-β1表达以SOX-9与TGF-β1共转染组组最多;II型胶原表达以SOX-9与TGF-β1共转染组最多。结论SOX-9和TGF-β1基因共同转染ADSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义。     

Chondrogenic potential of stem cells derived from amniotic fluid, adipose tissue, or bone marrow encapsulated in fibrin gels containing TGF-β3

In this study, several types of hMSCs, derived from bone marrow, adipose tissue, or amniotic fluid, were encapsulated in a fibrin hydrogel mixed with TGF-β3 and then evaluated for their capacity for differentiation in?vitro and in?vivo. For determination of stem cell differentiation, RT-PCR, real time quantitative PCR (qPCR), histology, and immunohistochemical assays were used for analysis of chondrogenesis. Using these analysis methods, several of the cultured hMSCS were found to highly express genes and proteins specific to cartilage forming tissues. Additionally, similar trends in expression were found in tissue recovered from nude mice transplanted with several types of hMSCs encapsulated in a fibrin hydrogel containing TGF-β3. The results of both in?vitro and in?vivo analyses showed that cultured or transplanted hMSCs mixed with TGF-β3 in a fibrin hydrogel differentiated into chondrocytes, suggesting that these cells would be suitable for reconstruction of hyaline articular cartilage.     

Chondrogenic potential of bone marrow- and adipose tissue-derived adult human mesenchymal stem cells

Regarding cartilage repair, tissue engineering is currently focusing on the use of adult mesenchymal stem cells (MSC) as an alternative to autologous chondrocytes. The potential of stem cells from various tissues to differentiate towards the chondrogenic phenotype has been investigated and it appears that the most common and studied sources are bone marrow (BM) and adipose tissue (AT) for historical and easy access reasons. In addition to three dimensional environment, the presence of member(s) of the transforming growth factor (TGF-β family and low oxygen tension have been reported to promote the in vitro differentiation of MSCs. Our work aimed at characterizing and comparing the degree of chondrogenic differentiation of MSCs isolated from BM and AT cultured in the same conditions. We also further aimed at and at determining whether hypoxia (2% oxygen) could affect the chondrogenic potential of AT-MSCs. Cells were first expanded in the presence of FGF-2, then harvested and centrifuged to allow formation of cell pellets, which were cultured in the presence of TGF-β3 and/or Bone Morphogenetic Protein-2 (BMP-2) and with 2 or 20% oxygen tension, for 24 days. Markers of the chondrocyte (COL2A1, AGC1, Sox9) and hypertrophic chondrocyte (COL10A1, MMP-13) were monitored by real-time PCR and/or by immunohistological staining. Our data show that BMP-2/TGF-β3 combination is the best culture condition to induce the chondrocyte phenotype in pellet cultures of BM and AT-MSCs. Particularly, a switch in the expression of the pre-chondrogenic type IIA form to the cartilage-specific type IIB form of COL2A1 was observed. A parallel increase in gene expression of COL10A1 and MMP-13 was also recorded. However when AT-MSCs were cultured in hypoxia, the expression of markers of hypertrophic chondrocytes decreased when BMP-2/TGF-β3 were present in the medium. Thus it seems that hypoxia participates to the control of AT-MSCs chondrogenesis. Altogether, these cellular model systems will help us to investigate further the potential of different adult stem cells for cartilage engineering.     

In vitro cartilage tissue engineering using adipose-derived extracellular matrix scaffolds seeded with adipose-derived stem cells

Extracellular matrix (ECM) secreted from the resident cell of tissue is an ideal biomaterial evolved by nature. Cartilage is also built from well-organized ECM components in a gel-like structure with a high collagen and proteoglycan content. Here, we explored cartilage tissue engineering using ECM scaffolds seeded with stem cells. Both scaffolds and stem cells were isolated from human adipose tissue, which is abundant and easily harvested in the human body. The human ECM scaffolds contained various endogenous bioactive factors, including transforming growth factor-beta1 (TGF-β1, 8782±4989?pg/g, dry ECM), insulin growth factor-1 (13319±1388?pg/g, dry ECM), basic fibroblast growth factor (82373±9572?pg/g, dry ECM), and vascular endothelial growth factor (25647±2749?pg/g, dry ECM). A composite of ECM and stem cells was prepared and cultured in chondrogenic medium (with 10?ng/mL TGF-β1 or not) for 45 days. The volumes and weights of the composites increased during culture and the surface gradually became smooth. Cell viability remained high throughout the 45 days of in vitro culture. Composites showed the formation of cartilage-like tissue with the synthesis of cartilage-specific proteins such as collagen and glycosaminoglycan. Important chondrogenic markers were expressed including Sox-9, aggrecan, and collagen type II and XI. These results demonstrate that a cell/ECM composite containing endogenous bioactive factors could provide biochemical cues for the promotion of cartilage formation.     

成年比格犬骨髓间质干细胞体外软骨方向分化的实验研究

目的：体外诱导成年比格犬骨髓间质干细胞（BMSCs）定向分化为软骨细胞，探讨体外诱导成软骨的方法和条件。方法:比格犬股骨取骨髓10 mL，体外行原代和传代培养扩增，加入转化生长因子（TGF-β1），以高密度细胞团块培养，诱导BMSCs分化为软骨细胞。甲苯胺蓝染色检测软骨基质的分泌，免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果:诱导的软骨样组织甲苯胺蓝染色阳性;Ⅱ型胶原免疫组织化学检测阳性。结论： 应用含TGF-β1的诱导液在体外可以诱导比格犬BMSC分化为软骨细胞，诱导的软骨细胞可作为软骨组织工程较理想的种子细胞。     

基因转染脐带间充质干细胞与丝素蛋白构建组织工程脂肪

背景：目前国内外构建组织工程脂肪的方法并不完善,虽然构建出了脂肪,但效果不理想。 目的：探讨一种新的构建组织工程脂肪的方法,观察携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白复合后在Wistar大鼠体内构建组织工程脂肪的能力。 方法：分离培养人脐带间充质干细胞,将携带重组人胰岛素基因慢病毒载体以最适MOI=10转染人脐带间充质干细胞,将转染组与未转染组(对照组)的人脐带间充质干细胞分别接种于丝素蛋白支架,移植于Wistar大鼠背部皮下。移植后12周取材,行荧光原位杂交技术鉴定、组织形态学和扫描电镜观察。 结果与结论：①油红O染色显示,两组移植物均呈阳性,证明移植物已在体内合成为脂肪组织,转染组脂肪样细胞数量明显高于对照组(P < 0.01)。②苏木精-伊红染色显示,两组移植物组织结构与正常脂肪组织相似,可见明显新生血管。转染组支架材料降解明显,炎性细胞浸润明显少于对照组,新生血管数量也多于对照组。③扫描电镜观察提示,转染组移植物内脂肪样细胞聚集成团,其结构与正常脂肪组织相似;对照组脂肪样细胞散在分布于支架孔隙内。④提示胰岛素基因能明显促进人脐带间充质干细胞成脂肪化,携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白支架复合后,在Wistar大鼠体内能构建出组织工程化脂肪组织,其结构类似正常脂肪组织。     

P> 不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化/P>

目的 探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法 用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠（各30只）腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。 结果 两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示：原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2~7d的ADMSCs阳性率分别为（3.87±1.34）%、（4.21±1.22）%、（9.00±0.98）%、（11.20±1.24）%、（9.50±2.19）%和（13.20±2.93）%;24月组分别为（8.67±1.05）%、（10.23±0.98）%、（12.80±0.78）%、（17.10±1.13）%、（19.80±1.59）%和（24.70±1.86）%。PI-Hoechst 33342染液双染显示：1月组原代培养2~7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4~7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。 结论 老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。     

miR-200c阻滞转化生长因子-β1在腹膜后成纤维细胞增殖和迁移侵袭中的作用

目的：阐明miR-200c对腹膜后成纤维细胞增殖的影响,并分析其分子机制,为抑制腹膜后纤维化提供理论依据。方法：收集36例人腹膜后组织,原代培养成纤维细胞,以5 ng/ml TGF-β1刺激者为TGF-β1组,pcDNA3-1-miR-200c转染成纤维细胞,再给予5 ng/ml TGF-β1刺激者为miR-200c组,仅以pcDNA3-1质粒转染者为pcDNA3-1质粒组,正常培养的成纤维细胞为对照组。分别以噻唑蓝（MTT）细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell细胞小室迁移实验检测成纤维细胞增殖和迁移能力,并以ELISA实验检测各组细胞裂解液中Akt蛋白的含量。结果：miR-200c组成纤维细胞的增殖OD值明显比TGF-β1组降低（P＜0.01）;与TGF-β1组相比,miR-200c组细胞迁移率明显降低（P＜0.01）;miR-200c组Akt蛋白的含量比TGF-β1组明显降低（P＜0.01）。结论：miR-200c下调Akt通路而抑制TGF-β1对成纤维细胞的增殖或迁移效果,对抑制腹膜纤维化具有重要意义。