丙型肝炎病毒三种不同分型方法的比较

分别应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物酶切分型法（酶切法）、型特异引物分型ＰＣＲ法及血清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）型特异性抗体酶联免疫测定法（ＥＩＡ），对１２０例抗－ＨＣＶ阳性患者血清进行ＨＣＶ分型检测，比较其分型结果。结果显示酶切法与ＰＣＲ法均成功地对９６例（８０％）进行分型，其中Ⅱ型８６例（８９．６％），Ⅲ型８例（８．３％），Ⅱ／Ⅲ型混合感染２例（２．１％），且两种方法的结果完全一致。ＥＩＡ法检测出型特异性抗体７８例（６５％），其中血清１型（相当于基因Ⅰ、Ⅱ型）６８例（８７．２％），血清２型（相当于基因Ⅲ、Ⅳ）６例（７．７％），血清１、２型双阳性者４例（５．１％）。对三种方法均阳性的６６例的分型结果进行比较，ＥＩＡ法与酶切法和ＰＣＲ法的符合率达９７．０％。表明三种分型方法的结果高度一致。     

丙型肝炎病毒血清学分型应用的研究

为了探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性,对148份抗ＨＣＶ阳性标本进行血清分型和基因分型。血清分型应用ＥＩＡ技术,采用ＨＣＶ核心区第65～81氨基酸合成多肽,血清1型为ＲＰＫＡＲＲＰＥＧＴＷＡＱＰＧＹ,血清2型为ＩＰＫＤＲＲＳＴＧＫＳＷＧＫＰＧＹ,可将ＨＣＶ分为血...     

微柱凝胶法检测疾病对ABO血型抗原的影响及血清学特性分析

目的：探讨疾病对ABO血型抗原性的影响及其血清学特性分析。方法：应用微柱凝胶法、单克隆抗体血型分型试剂和RBC试剂，对100例患者和30例献血员的RBC（检测抗原）和血清（检测抗体）进行正反定型，测定血型抗原性和抗体效价。对血型抗原性极度减弱导致血型鉴定困难的患者血液，进行吸收放散、血型物质测定、不规则抗体筛选和抗球蛋白试验。结果：100例患者中血型抗原性减弱者占24％，其中自血病患者占40％（12／30），恶性肿瘤患者占36．67％（11／30），其他疾病患者占2．50％（1／40）。抗原性减弱在ABO血型中的分布：A型为40．48（17／42），B型为16．67％（5／30），O型为7．14％（2／28）；献血员血型抗原性减弱者为3．33％（1／30）。100例患者中血清血型抗体效价降低者2％，献血员血清血型抗体效价降低者为0％。结论：白血病和恶性肿瘤对血型抗原性的影响较其他疾病大，患者ABO血型抗原性减弱正定型时容易导致血型误判，但其血清中仍存在着规则的抗A或抗B抗体，唾液中含有血型物质，应用微柱凝胶法进行正反定型，同时进行吸收放散试验和血型物质的测定，能提高血型检测的准确性.     

广西吸毒者,肝病患者及献血员丙型肝炎病毒血清？…

选择２８３名静脉注射（静注）吸毒者、１０３例肝病患者和３５５名献血员（其中有１１０名为丙型肝炎病毒抗体阳性）进行丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗体免疫学检测、ＨＣＶ血清学基因型和基因型的分子生物学研究。结果表明：２８３名静注吸毒者、１０３例肝病患者和３５５名献血员的抗－ＨＣＶ阳性检出率分别为９７．２％（２７５／２８３）、１１．７％（１２／１０３）和４．６％（１１／２４０）。这三组人群的ＨＣＶ血清学基因型Ｉ     

丙型肝炎病毒血清学分型与基因分型研究

为了解某农村单采浆供血员人群所感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的血清型和基因型构成，并对两种分型方法进行比较，本工作以ＨＣＶＣ区型特异性多肽对抗－ＨＣＶ进行血清学分型，对已确定血清型的血清进行５′非编码区（ＮＣＲ）逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析以确定基因型，并对６份扩增产物进行序列测定。结果显示１４０份抗－ＨＣＶ阳性血清中，血清Ⅰ型和Ⅱ型分别为４４份（３１．４３％）和１２份（８．５７％），余８４份未能分型。４４株已知血清型的ＨＣＶ中，１ｂ、２ａ和３ｂ等３种基因型分别为３４株（７７．２７％）、９株（２０．４５％）和１株（２．２７％）。两种分型方法一致率为９３．１８％（４１／４４）。对６株ＨＣＶ５′ＮＣＲ的序列分析证实了ＲＦＬＰ分型的正确性。结论认为该人群ＨＣＶ感染以血清Ⅰ型或基因１ｂ型为主；Ｃ区型特异性多肽血清学分型法与ＲＦＬＰ基因分型法符合率高，具有一定应用价值。     

丙型肝炎病毒血清型基因型与抗HCV抗体类别的关系

采用EIA法检测丙型肝炎患者血清IgG、IgM、IgA类抗HCV抗体;以丙型肝炎病毒核心区2个型特异性合成多肽对抗HCV进行血清学分型,对已确定血清型的血清进行5′非编码区逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)和限制性片段长度多态性(RFlp)分析以确定基因型.结果:23例HCV RNA阳性的丙型肝炎患者中19例抗HCV阳性(IgG、IgM、IgA三者中至少一种阳性);12例可行血清学分型,其中1型8例,2型2例,1、2混合型2例;11例未能分型.12例已知血清型的HCV中,基因型Ⅰ型9例,Ⅱ型2例,Ⅰ、Ⅱ混合型1例.两种分型方法一致率为91.7%(11/12).提示:血清学分型具有一定应用价值,联合IgA、IgM抗HCV检测可提高血清学分型的检出率.     

用合成寡肽的酶免疫法检测丙型肝炎病毒血清型

目的探讨适合我国临床广泛推广应用的丙型肝炎分型方法。方法采用丙型肝炎病毒核心区及ＮＳ４区合成寡肽建立酶联免疫检测方法，对血清中丙型肝炎病毒抗体进行分型。用此方法对某地个体供血者及慢性肝病患者的血清标本进行测定。首先使用美国ＡｂｂｏｔＩＭｘ试剂测定抗－ＨＣＶ，阳性者再测定其血清型。为验证血清分型与基因型的关系，对ＨＣＶＲＮＡ阳性的标本用型特异性引物的分型ＰＣＲ方法测定其基因型。结果７０例已往单采血浆供血者中ＨＣＶＲＮＡ阳性为３０％，抗－ＨＣＶ阳性率６８．６％，其中血清分型阳性率为７２．９％。血清１型与基因Ⅱ（１ｂ）型相对应；血清２型与基因Ⅲ（２ａ）型相对应。结论本方法操作简便、快速，具有较强特异性，基本能满足国内临床需要，对丙型肝炎发病及流行病学研究具有重要意义。     

HCV反向点杂交基因分型方法的建立

目的利用反向点杂交技术建立HCV基因分型新方法。方法在HCV5’端非编码区（5’NCR）设计引物和分型探针（1．2．3．6型）,采用反向点杂交分型技术对53例HCVRNA阳性（浓度均在102～107IU／mL之间）血清进行分型,并以基因序列分析作为金标准,对新方法的敏感性、特异性和重复性进行评价。结果反向点杂交基因分型新方法检出的基因型有52例：1b型32例占60．38％,2a型4例占7．55％,6a型8例占15．09％．3b型8例占15．09％;未检出的基因型有1例,用基因序列分析也未能确定型别（失败的原因应是该HCVRNA扩增产物浓度偏低2．24×10^2IU／mL）。本研究的方法敏感性为98．1％,特异性为100％,随机抽取20份标本再次检测的结果与前次检测的结果完全一致,重复性好。结论相对现有的型特异性PCR分型、基因芯片、核酸序列分析等各种方法,反向点杂交技术用于HCV基因分型是一种准确有效和简便经济的方法。     

沈阳地区各型丙型肝炎患者丙型肝炎病毒的基因分型

目的研究沈阳地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型分布状况及其临床意义。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对沈阳地区８４例血清抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ均阳性的各临床型丙型肝炎患者进行ＨＣＶ基因分型。结果８４例丙型肝炎中,ＨＣＶ－Ⅱ型４５例（５３．６％）,ＨＣＶ－Ⅲ型２６例（３０．９％）,Ⅱ／Ⅲ混合型１３例（１５．５％）;ＨＣＶ不同基因型在各型丙型肝炎中总体分布不一致,经统计学处理,Ｐ＜０．０５;在急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化中,ＨＣＶ－Ⅱ型感染分别占５５．６％,３６．２％,７５．０％,８５．７％及８８．９％;ＨＣＶ－Ⅲ型感染分别占２２．２％,４６．８％,８．３％,０％骸１１．１％。结论沈阳地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主,其次为Ⅲ型及Ⅱ／Ⅲ混合型;ＨＣＶ基因型与丙型肝炎严重程度密切相关。     

慢性丙型肝炎患者HCV血清学分型研究

目的探讨HCV基因分型与血清学分型的关系。方法对来自14家医院的104例已知HCV基因型的慢性丙型肝炎患者血清，经ELISA方法，用Murex HCV Serotyping 1-6 Assay血清分型试剂进行HCV的血清学分型。结果104例血清中的86（82，69％）例可分出血清型，检出血清型病毒株91株，病毒株检出率为78．4％。血清型与基因型的总符合率为62，1％，血清型1型、2型和3型的符合率分别为69，4％、51，2％和70．0％，以2b基因型的符合率和漏检率最低（54．5％）。结论HCV血清型特异性受病毒基因型的影响，与基因型存在一定的差异。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增，扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交，通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中，HCV RNA的检出率为57．9％（88／152），其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示，HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异，为半定量指标，可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。     

原位杂交法检测非甲～庚型肝炎患者肝组织中TT病毒DNA

目的 证实在非甲－庚型病毒性肝炎患者肝组织中TT病毒（transfusion-transmitted virus,TTV)的存在。方法 采用地高辛素标记TTV DNA探针以原位杂交技术对51例血清学病毒标记非甲－戊型、免疫组化检测肝组织中HBsAg、HCV NS3Ag及HGV N55Aag阴性的病毒性肝炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测。结果 各型病毒性肝炎肝组织中TTV基因的总检出率为27．5％,其中急性轻型肝炎的检出率为30．8％（4 ／13）,急性重型肝炎为1／8,亚急性重型肝炎为3／7,慢性肝炎为2／6,活动性肝硬化为2／9,慢性重肝肝炎为1／4,原发性肝癌为1／4。TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内,以核型多见。在急性肝炎,TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内,慢性肝炎于汇管区附近较为密集,而在肝硬化病例,阳性细胞在假小叶内多呈片族状不规则分布。结论 在不明原因病毒性肝炎患者血清及肝组织中TTV DNA的检出表明TTV为一种新型的肝炎病毒,TTV为一种嗜肝性病毒。     

广州地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒核酸检测和病毒核苷酸测序

目的 了解广州地区肝炎患者中庚型肝炎病毒（HGV）的感染情况及基因型特点。方法 采用逆转录－套式聚合酶链反应（RT－nested PCR)方法检测出肝炎患者血清中HGV RNA,引物位于HGV基因组的非编码区,并对扩增产物进行直接测序。结果 251例急慢性肝炎血清中共检出25例HGV RNA阳性,总阳性率为9．96％,其中56例非甲－戊型肝炎中要出4例阳性（7．14％）,77例乙型肝炎（HB）中检出8例阳性（10．39％）,118例丙型肝炎（HC）中检出13例阳性（11．17％）;2株HGV广州核苷酸之间的同源性为98．0％,与非洲洲的同源性分别为81．7％和84．2％,与美国株的同源性均为91．1％。结论 广州地区肝炎患者中存在HGV感染,2株HGV广州株可能为同一基因型,且与HGV美国株具有较高的同源性。     

丙型肝炎病毒血清型对慢性丙型肝炎干扰素抗病毒疗效影响的研究

目的研究丙型肝炎病毒血清型对慢性丙型肝炎于扰素抗病毒疗效的影响。方法对慢性丙型肝炎患者的血清进行ALT检测，采用Cobas amplicor monitor test，version 2．0（v2．0）试剂进行HCVRNA定量和Abbott公司的Murex HCV Serotyping 1-6 Assay试剂进行HCV血清学分型检测。对慢性丙型肝炎患者进行聚乙二醇于扰素a-2a（派罗欣）与罗荛愫（Roferon—A）治疗24周和24周随访结束的生化指标和病毒学应答进行观察，分析不同HCV血清型患者在抗病毒治疗后生化和病毒学应答的差异。结果98例患者共检出血清6型2例、5型1例、4型1例、3型10例、2型23例和1型44例，仍有17例未能分出血清型。派罗欣治疗组24周治疗结束时各血清型和未分型组之间的ALT复常率和病毒应答率无差异，而48周随访结束血清非1型的ALT复常率（76．2％）和持续病毒应答率（66．7％）高于血清1型，血清1型ALT复常率和持续病毒应答率分别为27.3％和27．3％，差异有统计学意义（P=0．035）。罗荛愫组末分型组、血清1型和非1型之间24周治疗结束时和随访结束时的ALT复常率和病毒学应答率均无差异。结论在6个月的IFN抗病毒疗程时，HCV血清型仅在派罗欣治疗组影响慢性丙型肝炎抗病毒治疗的持续病毒应答率。     

河北某非法采血村人群感染HCV基因亚型调查

目的 了解河北某非法采血村村民感染丙型肝炎病毒(HCV)基因亚型分布情况.方法 对该村全体村民采集静脉血标本计520份,无菌分离血清;以RT-PCR法扩增其中可利用的483份血清HCV之C/E1基因片段,双脱氧链终止法测序;用Mega4.0软件进行HCV系统进化分析,构建系统进化树,判定基因亚型.结果 483份标本中,HCV RNA阳性者70份,阳性率14.5%;基因分型1b亚型36例,占51.4%;2a亚型34例,占48.6%.结论 该村村民血清HCV检出率约为14.5%,远高于一般人群;HCV亚型构成为1b、2a各半.     

Evaluation of the clinical usefulness of COBAS AMPLICOR HCV MONITOR assay (ver2.0): Comparison with AMPLICOR HCV MONITOR assay (ver1.0) and HCV core protein level

The quantitation of serum levels of hepatitis C virus (HCV) RNA in chronic hepatitis C has been regarded as one of the most important indicators for the outcome of interferon (IFN) therapy. The AMPLICOR HCV MONITOR version 1.0 (AMPLICOR v1.0) assay is widely used for the evaluation of the HCV level. A new generation assay called the COBAS AMPLICOR HCV MONITOR version 2.0 (COBAS v2.0) assay, which is semiautomated and modified to amplify all genotypes equally, has been developed. The aim of this study was to evaluate the clinical relevance of the COBAS v2.0 assay in comparison with the AMPLICOR v1.0 assay and HCV core protein assay in patients with chronic hepatitis C before IFN therapy. HCV RNA was detectable in 230 cases (97.5%) and undetectable in 6 cases (2.5%) by the COBAS v2.0 assay. The RNA levels measured by the AMPLICOR v1.0 assay correlated significantly with those measured by the COBAS v2.0 assay, and the sensitivity of the new version 2.0 assay was better than that of version 1.0, especially in serotype 2. In relation to the outcome of IFN therapy, HCV RNA levels from virologically sustained responders by the AMPLICOR v1.0 assay were 82.3 +/- 22.9 kcopies/ml in serotype 1 and 36.9 +/- 13.4 kcopies/ml in serotype 2, and those from virologically nonsustained responders were 525.2 +/- 48.6 kcopies/ml in serotype 1 and 76.7 +/- 19.5 kcopies/ml in serotype 2.The rates of sustained response to <100 kcopies/ml were 34/63 (54.0%) in serotype 1 and 24/48 (50.0%) in serotype 2. A statistically significant virological response was seen in serotype 1 (P < 0.0001), but not in serotype 2. In contrast, the levels in virologically sustained responders by the COBAS v2.0 assay were 88.2 +/- 20.5 KIU/ml in serotype 1 and 136.8 +/- 40.1 KIU/ml in serotype 2, and those in virologically nonsustained responders were 608.8 +/- 48.4 KIU/ml in serotype 1 and 328.3 +/- 62.8 KIU/ml in serotype 2. The rates of sustained response to <100 KIU/ml were 33/60 (55.0%) in serotype 1 and 21/35 (60.0%) in serotype 2. Statistical significance in virological response was seen in both serotype 1 (P < 0.0001) and serotype 2 (P < 0.05). Although the sensitivity of the HCV core protein assay was lower than that with the COBAS v2.0 assay, the HCV core protein levels also correlated well with the results of the COBAS v2.0 assay. The HCV core protein levels of virologically sustained responders were 37.6 +/- 12.0 pg/ml in serotype 1, 81.3 +/- 37.0 pg/ml in serotype 2, and those of virologically nonsustained responders were 289.9 +/- 23.5 pg/ml in serotype 1, 191.4 +/- 32.1 pg/ml in serotype 2. This assay could predict the outcome of IFN therapy in both serotype 1 (P < 0.0001) and serotype 2 (P < 0.05). Thus, both the COBAS v2.0 assay and the HCV core protein assay showed that the viral load was an indicator of virologically sustained response in serotype 2 and in serotype 1.