基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法.方法:用终浓度分别为3、6、9和12 μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析.结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6 μg/ml时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果.对PBMC刺激5天后进行分析相对较好.结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平.     

细胞膜电位的动态监测及其在银杏内酯研究中的应用

建立了一种简便、快速的膜电位的测量方法.采用亲脂性阴离子荧光探针DiBAC4(3)标记大鼠脑神经元细胞,以倒置荧光显微镜观察并记录细胞膜电位的变化.用所建方法研究了银杏总内酯,及银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对大鼠脑神经元细胞膜电位的影响.结果显示,加入银杏总内酯及各种银杏内酯后细胞出现去极化,膜电位迅速改变,随后回复至正常水平,银杏总内酯对细胞膜电位的影响大于各单体,其中以银杏内酯B的作用为主.     

豚鼠离体活外毛细胞内电位的观察

目的：为了观察了解豚鼠耳蜗外毛细胞内电位情况，从而进一步去探讨耳蜗活外毛细胞将声音由声能转化成电信号的机制。方法：将豚鼠断头活杀快速取出双侧颞骨听泡于Hank液中（pH7．4，渗透压300moSm），在解剖显微镜下打开听泡及耳蜗，取出3—4回基底膜于浓度为O．25mg/mL的Ⅳ型胶原酶（Sigma产品）中，在室温下消化10min，用hank液洗涤2次以终止消化。取终止消化后的细胞悬液1mL与等体积浓度为5umol的DiBAC4（3）（用Hank液配制）混合（终浓度为2．5umol），在37℃下避光染色20min。取染色后的细胞悬液20uL加入预先涂有0．25mg／mL多聚赖氨酸（sigma产品）。在室温下干燥后的ACAS570特制培养皿中，使染色后的外毛细胞粘附于培养皿底部。选一活性良好、附壁牢固的外毛细胞，使用ACAS570在40×物镜下．动态观察膜电位探针DiBAC4（3）指示的外毛细胞内的荧光强度，共观察32个活性良好的外毛细胞，实验全过程均在室温（20℃-25℃）下完成，实验结束时细胞仍保持良好的活性。结果：豚鼠离体耳蜗活外毛细胞在Hank液中呈圆柱体并能保持良好的活性。用膜电位分子探针DiBAC4（3）染色后的外毛细胞内荧光强度不等，且位于细胞底部细胞核处荧光最强，位于细胞顶端的表皮板处荧光相对较弱，位于两者之间的散在区域荧光强度界于细胞核和表皮板之间。这些荧光强度不同的散在区域可能是各种具备单位膜结构的细胞器。提示豚鼠耳蜗离体活外毛细胞内各细胞器及细胞质内电位不同。结论：豚鼠耳蜗离体活外毛细胞内电位不同的各个部位分别是细胞核、表皮板及其他具备膜性结构的细胞器。这种各细胞器内电位呈梯度分布特征可能与外毛细胞完成声一电转换的需要密切相关。     

细胞内钙离子指示剂的光致荧光增强

目的钙离子(Ca2+)指示剂的光学稳定性对于显示细胞胞浆内Ca2+浓度的时间特性非常重要,定量研究Ca2+指示剂的光致荧光增强现象。方法分别用5种不同功率的光照射5种不同细胞系(MC3T3-E1、RAW264.7、MLO-Y4、MEF3T3、HEK293),研究两种Ca2+指示剂Fluo-4 AM和Oregon green的光致荧光响应。观察光致荧光增强以及随后发生的荧光淬灭,并进一步利用毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)刺激引起钙响应峰,分析响应峰的特征参数。结果高功率光对于Fluo-4 AM或Oregon green都可引起荧光增强现象,但Oregon green染色细胞的响应比例以及光致响应峰的大小和时间跨度都显著小于Fluo-4 AM染色细胞。结论使用低功率光照射Oregon green染色细胞显示细胞内Ca2+浓度变化具有更好的光学稳定性。     

IFN-γ/IL-4对呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞TLR3和TSLP mR-NA表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞16HBE对Toll样受体3(TLR3)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)mRNA表达的影响,并探索Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4对RSV感染16HBE细胞TLR3和TSLPmRNA表达的作用.方法:利用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;不同浓度人工合成双链RNA(dsRNA)聚肌胞加入细胞培养基中,实时荧光定量RT-PCR检测16HBE细胞TLR3mRNA和TSLP mRNA表达水平变化;RSV感染16 HBE细胞试验分组:对照组、RSV感染组(MOI为2的RSV病毒感染16HBE6h)、RSV/IFN-γ组(RSV病毒感染,同时重组人IFN-γ 100μg/L加入培养基)、RSV/IL-4组(RSV病毒感染,同时重组人IL-4 100μg/L加入培养基),实时荧光定量RT-PCR检测TLR3mRNA和TSLPm RNA表达水平变化.结果:经Hep-2细胞培养扩增获得足量Long株RSV病毒;聚肌胞能有效刺激16HBE细胞TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),并随聚肌胞浓度增加提高;RSV感染16HBE细胞6 h,TLR3和TSLPmRNA表达水平均升高(P<0.01);Th2细胞因子IL-4可以加强RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),而Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLP mRNA表达水平升高(P<0.01).结论:TLR3刺激物聚肌胞能有效刺激人呼吸道上皮细胞TLR3 mR-NA和TSLPmRNA表达水平升高;RSV感染16HBE细胞引起TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高;Th2细胞因子IL-4能协同病毒感染增加TSLPmRNA表达水平;Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高.     

5-ALA在口腔鳞状细胞癌中诱导内生原卟啉Ⅸ荧光强度的研究

目的 应用酶标仪检测5-ALA在不同分化程度的人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中产生原卟啉Ⅸ(PpⅨ)的荧光强度,以期指导临床鉴别和诊断OSCC.方法 将2×104个SAS细胞接种到96孔板中,应用酶标仪检测不同浓度的PpⅨ水溶液荧光强度,制作PpⅨ浓度的标准曲线,计算判定系数R2.在SAS、HSC-3和HSC-4细胞中分别加入浓度为0、0.5、1、1.5、2mmol/L的5-ALA,孵育0、2、4、6、8、10小时后应用酶标仪检测细胞荧光强度.结果 酶标仪检测的荧光强度与PpⅨ含量呈线性相关(判定系数R2=0.9982),5-ALA在OSCC细胞中最佳的代谢浓度为1mmol/L,代谢时间为4小时.并且5-ALA在中分化的SAS细胞中产生的荧光强度显著高于高分化的HSC-3和HSC-4细胞(P＜0.05).结论 5-ALA在不同分化程度的OSCC细胞中产生不同的荧光强度,可辅助用于临床鉴别诊断OSCC.     

135Hz极低频电磁场对HepG-2细胞内Ca^2＋浓度的影响

目的:研究135 Hz(电场强度为80 V·m-1)极低频电磁场(ELF)暴露对HepG-2细胞内Ca2+浓度的影响.方法:采用荧光探针Fluo-3/AM标记细胞内Ca2+,135 Hz ELF照射HepG-2细胞1 h后,利用激光扫描共聚焦显微镜技术测定细胞内Ca2+浓度,加入L-型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平,探讨135 Hz ELF影响HepG-2细胞内Ca2+浓度变化的具体机制.结果:未暴露组细胞荧光强度较弱,ELF暴露组细胞荧光强度增高,与未暴露组有统计学意义(P<0.01);用硝苯地平干预组细胞荧光强度减弱,与未干预组有统计学意义(P<0.01).结论:135 Hz ELF可能通过引起L-型Ca2+通道的开放造成HepG-2细胞发生Ca2+超载.     

脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因

目的明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果。结果倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果。     

乙肝免疫球蛋白不能阻断乙肝病毒感染人绒毛膜癌细胞

目的: 观察不同浓度乙肝免疫球蛋白(HBIG)在体外对乙肝病毒(HBV)感染人绒毛膜癌细胞系JAR细胞的影响。方法: 实验分为HBIG实验组、空白对照组(胎牛血清)、阴性对照组(健康人血清)。HBIG实验组又分为高浓度HBIG组(HBV+10³IU/L HBIG、HBV+10² IU/L HBIG)、最低保护浓度HBIG组(HBV+10 IU/L HBIG)、低浓度HBIG组(HBV+1IU/L、HBV+0.1 IU/L)和HBV组;采用MTT法检测HBIG对细胞生长的影响;采用实时荧光定量PCR检测细胞内HBV-DNA的表达;采用细胞免疫荧光染色法检测细胞内乙肝表面抗原(HBsAg)的表达变化。结果: (1) 不同浓度的HBIG对JAR细胞生长无影响;(2) 不同浓度HBIG组的细胞内HBsAg的荧光强度无显著差异(P>0.05);(3)不同浓度HBIG组的细胞内HBV-DNA无显著差异(P> 0.05)。结论: HBIG不能阻断HBV感染体外培养的JAR细胞。     

木犀草素对肥大细胞脱颗粒影响及机制的研究

目的:探讨木犀草素(Luteolin)的抗I 型变态反应的作用机制。方法:通过建立DNP-BSA-IgE 激发致敏的大鼠RBL-2H3 细胞模型,分别采用MTT 法检测不同浓度(5、15、25 mol/ L)Luteolin 对RBL-2H3 肥大细胞活性的影响;ELISA 法检测不同浓度Luteolin 对RBL-2H3 细胞分泌 hexosa minidase( HEX)及细胞因子TNF 影响;Flou-4AM 荧光探针检测细胞内Ca2+浓度变化;Western blot 检测AKT,P-AKT 的表达。结果:成功建立致敏的细胞模型,低浓度的Luteolin 对RBL-2H3 细胞活性无明显影响;不同浓度Luteolin 刺激RBL-2H3 细胞后,对 HEX 和TNF鄄琢的释放抑制作用呈线性相关,且细胞内Ca2+ 明显减少;Western blot 结果显示随着Luteolin 浓度的增加AKT 磷酸化水平明显下降。结论:Luteolin 呈剂量依赖性抑制RBL鄄2H3 肥大细胞脱颗粒,且通过调节细胞内Ca2+浓度与AKT 活性参与其中。     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用研究

目的：体外观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,初步探讨EGCG治疗酒精性痴呆(alcohol-associated dementia,AAD)的可行性。方法：以SH-SY5Y神经元细胞为实验对象,酒精组给予100 mol/L酒精37℃培养24 h, EGCG+酒精组在其培养液中同时加入不同浓度的EGCG(1~100μmol/L)及100 mol/L酒精,37℃培养24 h;另设相同浓度的EGCG对照组(EGCG组)及空白对照组(对照组)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以Annexin-V APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡及光镜下观察细胞形态。结果：MTT结果证实EGCG(25~100μmol/L)作用24 h后可明显促进SH-SY5Y细胞存活,并呈浓度依赖关系(P<0.001)。流式检测及细胞形态观察结果证实酒精组细胞凋亡率(21.82%±1.27%),明显高于对照组(4.90%±0.80%)(P<0.001)及EGCG组(7.82%±0.68%)(P<0.001);EGCG(100μmol/L)+酒精组细胞凋亡率(10.81%±0.31%),明显低于酒精组(P<0.001)。结论：EGCG可抑制酒精诱导SH-SY5Y细胞凋亡发生并促进细胞存活,提示EGCG对于AAD治疗具有潜在价值。     

白藜芦醇对神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖变化规律和生长状况的影响。方法:通过不同浓度(0.15～500)μmol/LRes作用于SH-SY5Y,检测药物作用5d后各组细胞增殖率和细胞生长状态,同时通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度,并对各组细胞进行Hochest染色,检测其细胞凋亡情况。结果:Res5μmol/L组细胞增殖率为(117.00±15.30)%显著高于空白对照组(P0.05),15μmol/L组细胞增殖率为(31.33±2.89)%,50、150、500μmol/L组,细胞出现负增长。Res对SH-SY5Y的IC50为12.78μmol/L,细胞杀伤浓度(即增殖率为0%)为19.88μmol/L。Res50～500μmol/L各组内,部分细胞皱缩,突起减少或消失,并出现凋亡细胞。结论:Res在0.15～500μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y的增殖影响存在浓度依赖性,并依次表现为促进增殖、抑制增殖和杀伤细胞三个方面效应。其中杀伤细胞效应与促进SH-SY5Y的凋亡启动相关。     

应激和分子伴侣对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的:本文探讨应激和分子伴侣(stress and chaperone,STCH)对鱼藤酮的神经毒性之于SH-SY5Y细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用不同浓度鱼藤酮处理SH-SY5Y-pcDNA 3.1和SH-SY5Y-pcDNA3.1-STCH稳定细胞株,并观察细胞形态;采用MTT法和Western蛋白印迹法检测MAPK通路相关的信号分子和凋亡相关蛋白变化。结果:与未处理组相比,鱼藤酮均能引起细胞活力显著下降(P<0.05);STCH对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞毒性具有明显的保护作用(0.1μmol/L-5μmol/L),但10μmol/L浓度组与转染空载体组无显著差异。激活型caspase-3蛋白在鱼藤酮毒素处理后表达明显,p38磷酸化增强,过表达STCH在鱼藤酮处理后p38磷酸化受到明显抑制,裂解的caspase-3活性形式减少。结论:STCH对鱼藤酮诱导神经毒性的保护作用可能通过抑制p38磷酸化而实现。     

MG132对SH-SY5Y细胞Aβ水平的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH-SY5Y细胞凋亡及调节β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)生成的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养SH-SY5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,24 h后检测各项指标。MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β-分泌酶(BACE1)、早老蛋白1(presenilins 1,PS1)、早老蛋白2(presenilins 2,PS2)、nicastrin(NCT)和α-分泌酶(ADAM10)蛋白表达。结果:经MG132处理后,细胞活力明显下降,诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为36.97%、46.20%、50.50%;细胞Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显。结论:MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生,说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。     

β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响

目的研究β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响及其意义。方法选择不同浓度B一淀粉样肽。处理SH—SY5Y细胞,用比色法测定细胞四甲基偶氮唑盐（MTT）还原率、脂质过氧化产物（丙二醛）、蛋白氧化产物（蛋白羰基）及磷脂含量,高效液相色谱法测定细胞胆固醇及辅酶Q水平,放射性配体一受体结合实验测定胆碱能受体．配体结合率,Western印迹方法测定细胞膜神经型尼古丁受体亚单位α3及α7蛋白表达水平,并对照研究维生素E的抗氧化作用。结果用低浓度（0．1μmol／L）β-淀粉样肽处理细胞后即出现MTT还原率和磷脂水平的下降,丙二醛及蛋白羰基水平升高,用较高浓度（1μmol／L）β-淀粉样肽处理细胞后胆碱能受体．配体结合密度、尼古丁受体亚单位α3,胡蛋白水平及辅酶Q含量降低,但未引起细胞胆固醇含量的改变。维生素E能明显对抗B-淀粉样肽的细胞毒性作用。结论β-淀粉样肽引起细胞膜脂质成分改变以及胆碱能受体水平降低,这些改变可能与其诱导的氧化应激增强有关。     

盐酸石蒜碱对TPC-1细胞增殖和周期的影响

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制.方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC50.参照IC50,将对数生长期TPC-1细...     

鱼藤酮致多巴胺能神经细胞早期凋亡模型的研究

目的 :探讨鱼藤酮引起多巴胺能神经细胞早期凋亡的时间和浓度规律 ,为进一步研究其机制建立平台。方法 :不同浓度鱼藤酮作用多巴胺能神经细胞系SH SY5Y细胞不同时间 ,用四唑盐比色法检测细胞活性 ,用流式细胞术检测细胞的线粒体膜电位。结果 :低剂量 ( 5nmol/L和 2 0nmol/L)鱼藤酮处理 4 8h内对细胞活性无明显影响 (P >0 .0 5) ;超过 10 0nmol/L的鱼藤酮明显抑制细胞活性 (P <0 .0 5) ,并且抑制的程度呈剂量依赖性。 2 0nmol/L及更高浓度的鱼藤酮作用 2 4h可以引起细胞线粒体膜电位明显下降 (P <0 .0 5)。结论 :采用2 0nmol/L鱼藤酮作用 2 4h可以建立鱼藤酮多巴胺能神经细胞早期凋亡模型。     

Responsiveness of voltage-gated calcium channels in SH-SY5Y human neuroblastoma cells on micropillar substrates

In this study, poly-L-lactic acid micropillar substrates were fabricated to evaluate the influence of topographic substrates on cell morphological and functional characteristics, such as spreading area, voltage-gated calcium channels (VGCCs) and membrane potential. The proliferation, spreading area, perimeter and circularity of SH-SY5Y cells interfaced with different substrates were first investigated. In addition, the cytoskeleton and focal adhesion of a cell as important manifestations of cell morphology were analyzed by immunofluorescence. VGCC responsiveness was evaluated by measuring the dynamic changes in intracellular Ca²⁺ evoked by 50 mM extracellular K⁺. To determine study whether the differences in VGCC responsiveness were caused by the differences in VGCC gene expression, the expression of N/L- type VGCCs was determined by qPCR and fluorescence staining. Notably, improved measurement of the membrane potential with potentiometric fluorescent dye TMRM was applied to determine the membrane potential of SH-SY5Y cells. Results indicated that the SH-SY5Y cells were deformed significantly to adapt to the substrates; however, no distinct effect on the proliferative ability of SH-SY5Y cells was observed. The micropillar substrates markedly influenced VGCC responsiveness, which correlated strongly with cell spreading but not with VGCC expression. The resting membrane potential of SH-SY5Y cells cultured on different substrates also changed, but no effect on responsiveness of VGCC was observed. These results suggest that the effect of the micropillar substrates on cell VGCC responsiveness may be attributed to changes in the functionality of the ion channel itself. Thus, topographic substrates can be used to engineer cell functionality in cell-based drug screening.     

孕酮减轻ATP诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨孕酮对抗腺苷三磷酸(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用和机制。方法:取对数生长期的SH-SY5Y细胞按照孕酮或ATP浓度的不同进行分组,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Fluo-3染色检测细胞内Ca~(2+)浓度的变化,Western blot法检测嘌呤能P2X_7受体表达的变化。结果:与对照组相比,不同浓度(1、3、5和7 mmol/L)ATP作用2 h,SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P0.05),细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度明显增加(P0.05),且呈剂量依赖性。浓度为3、10和30 nmol/L的孕酮预孵育30 min可减轻ATP损伤作用,细胞存活率较单纯ATP组明显升高(P0.05或P0.01)。孕酮(30nmol/L)或P2X_7受体拮抗剂KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min均可显著抑制ATP诱导的胞内YO-PRO-1的荧光增强(P0.01),而孕酮和KN-62两者之间没有明显差异。正常组细胞内钙离子含量少,ATP组细胞内钙离子荧光强度较对照组明显增高(P0.05),孕酮(30 nmol/L)或KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min可明显降低(P0.05)ATP诱导的胞内钙荧光增强,而孕酮和KN-62两者之间的作用无明显差异。ATP组SH-SY5Y细胞P2X_7受体表达较对照组明显增加(P0.05),而孕酮(30 nmol/L)预孵育30 min则可显著降低ATP诱导的P2X_7受体表达(P0.05)。结论:孕酮可抑制ATP诱导的P2X_7受体表达、膜孔形成和胞内Ca~(2+)升高,降低细胞死亡率,明显减轻高浓度ATP对SH-SY5Y细胞的损伤作用。