DO11.10转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复

目的:通过比较两种小鼠-DO11.10和BALB/c小鼠脊髓损伤后不同的运动功能恢复程度和损伤区的形态学变化来分析T淋巴细胞对脊髓损伤修复的影响。方法:建立小鼠脊髓重度夹伤模型,HE染色,GFAP、CD11b和淋巴细胞免疫组织化学实验分析损伤14 d、21 d后损伤区的变化;在损伤后0 d、7 d、14 d和21 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动评分来评价小鼠运动功能恢复情况。结果:脊髓损伤后21 d,BALB/c小鼠产生了较厚的胶质瘢痕并伴有明显的固缩现象;而DO11.10小鼠中只观察到稀薄的胶质瘢痕形成并没出现明显的固缩。DO11.10小鼠脊髓损伤后14 d,巨噬/小胶质细胞浸润较BALB/c小鼠明显增加。脊髓损伤后21 d,DO11.10小鼠脊髓损伤区中的T淋巴细胞较BALB/c小鼠明显减少。BBB运动评分显示,在损伤后21 d内DO11.10小鼠较BALB/c小鼠有显著的运动功能恢复。结论:脊髓损伤后21 d内,针对神经组织抗原的自身反应性T淋巴细胞的浸润和存在不利于脊髓损伤后的运动功能恢复。     

醛糖还原酶在小鼠损伤脊髓小胶质/巨噬细胞中的表达及其作用

目的:观察小鼠在脊髓损伤(SCI)后,醛糖还原酶(AR)在脊髓损伤后修复过程中的作用及可能的机制。方法:采用C57BL/6-ar+/+(B6野生型小鼠)和C57BL/6-ar-/-(B6-AR基因敲除)小鼠,建立脊髓重度夹伤模型。首先分析了AR分子在损伤脊髓中的细胞表达类型及脊髓损伤后AR分子mRNA的表达水平变化情况;通过BBB运动学分析,比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况,对比损伤区面积变化;通过qRT-PCR方法,检测对比M1/M2型巨噬细胞特异分子iNOS和Arg I的表达变化。结果:AR分子在野生型小鼠损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞中高表达;qRT-PCR研究发现:脊髓损伤后AR表达逐渐升高,在损伤后第3天达到高峰。AR敲除小鼠在脊髓损伤后,其运动功能恢复好于野生型小鼠(P<0.05),同时损伤区面积也小于对照组。AR基因缺失后,损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞通过高表达Arg I向M2型巨噬细胞方向极化。结论:AR通过调节脊髓中小胶质/巨噬细胞的极化来影响脊髓损伤后的修复。     

醛糖还原酶基因敲除对小鼠脊髓损伤的保护作用及机制研究

目的:研究醛糖还原酶(AR)在小鼠脊髓损伤(SCI)的作用及分子机制。方法:利用野生型(WT)小鼠和AR敲除(AR KO)小鼠，制备小鼠脊髓钳夹伤模型，通过BMS评分对比观察损伤后两种小鼠在不同时间点(3、7、14和28 d)的运动功能恢复情况；采用免疫荧光染色观察小胶质细胞活化状态和损伤面积恢复程度；利用试剂盒和Western Blot检测损伤后小鼠脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化核因子-κB(NF-κB)家族p65、4-羟基壬烯醛(4-HNE)和活性氧(ROS)的表达。通过体外培养来源于小鼠小胶质细胞系BV2,给予脂多糖(LPS)及4-HNE联合刺激，利用免疫荧光染色观察BV2细胞极化状态，Western Blot检测iNOS和p-p65蛋白表达水平。结果:与WT小鼠相比，AR基因敲除促进小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复，损伤区面积显著减小，并且抑制小鼠脊髓损伤区小胶质细胞活化，NF-κB信号通路相关炎性分子iNOS表达水平明显下调。WT小鼠和AR KO小鼠在脊髓损伤后ROS、4-HNE的含量逐渐上升，在损伤后7 d表达较高，并且具有相似的表达变化模式。LPS联合4-H...     

五花血藤水煎液通过抗炎作用促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

目的 探讨五花血藤水煎液（Sargentodoxa cuneata,SCD）在小鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后的抗炎作用及其对运动功能恢复的影响。方法 选取36只SPF级小鼠随机分成假手术组、脊髓损伤组和SCD组，利用BMS评分检测小鼠后肢运动功能恢复情况，免疫蛋白质印迹法检测各组小鼠脊髓白细胞介素（IL）-6、IL-12A、肿瘤坏死因子（TNF）-α和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达，免疫荧光染色通过NeuN观察损伤处脊髓前角神经元变化，rAAV-retro逆行示踪观察各组小鼠胫骨前肌（tibialis anterior muscle,TA）相关脊髓运动神经元分布。结果 与脊髓损伤组相比，SCD组小鼠在损伤后7 d的BMS评分显著提高（P<0.05），损伤后14 d,IL-6、IL-12A和TNF-α表达明显降低（P<0.05）,BDNF的表达显著升高（P<0.05）；损伤处脊髓前角神经元数量显著增多（P<0.05）,TA相关运动神经元数量明显增多（P<...     

小鼠脊髓损伤早期不同炎症因子的表达变化

目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、IL-4、IL-10、TGF-β的表达变化情况。方法:6 8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6 h、12 h、24 h、3 d和7 d取以损伤区为中心共5 mm脊髓,用TRIzol试剂提取总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测上述各基因的表达情况。结果:小鼠脊髓损伤早期,损伤区促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子MCP-1、MIP-1急剧升高,6 h内即达高峰,随后开始下降,3 d内归于正常;而炎症抑制因子IL-4早期不升反降,3 d降至最低;IL-10在6 h有所升高,但无统计学意义;TGF-β逐渐升高,12 h至高峰,随后下降,7 d再度升高。结论:脊髓损伤早期损伤区促炎因子表达增加,炎症抑制因子表达不变或减少,可能使损伤局部的炎症反应呈扩大趋势,从而导致继发的炎症损伤。     

PD-L1转基因小鼠的建立及其脊髓损伤后的运动功能恢复

目的:建立广泛表达PD-L1的转基因小鼠,并且评价转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复情况。方法:克隆小鼠PD-L1基因编码区的cDNA,经测序正确后,将PD-L1基因cDNA插入到pCAGGS质粒中,构建pCAG-PD-L1转基因载体;经C57BL/6小鼠受精卵原核注射,建立PD-L1转基因小鼠;PCR鉴定转基因小鼠的基因型;以流式细胞术(FCM)检测转基因小鼠脾脏中T、B淋巴细胞PD-L1的表达情况;免疫组织化学检测转基因小鼠周围组织PD-L1表达情况;RT-PCR检测转基因小鼠神经组织内PD-L1表达;BBB评价转基因小鼠脊髓损伤后运动功能恢复。结果:获得PD-L1转基因小鼠,外源PD-L1基因可以顺利遗传给子代;免疫组织化学、RT-PCR和FCM发现:PD-L1转基因小鼠的神经组织、淋巴组织以及生殖器官中高表达PD-L1;PD-L1转基因小鼠脊髓重度夹伤后,其BBB运动学评分明显高于野生型小鼠(P<0.05)。结论:成功地建立了C57BL/6背景的PD-L1转基因小鼠,且PD-L1基因的高表达促进脊髓损伤后的运动功能恢复。     

Nogo(N-18)在正常大鼠脊髓和坐骨神经的分布及损伤后变化的免疫组织化学研究

目的　研究Nogo蛋白在大鼠脊髓的正常分布及损伤后的变化 ,探索其在脊髓运动神经元表达的意义和作用。　方法　大鼠分脊髓夹伤组、坐骨神经夹伤组及正常对照组。损伤动物存活 1d和 3d后 ,分别进行Nogo(N 18)抗体的免疫组织化学染色。　结果　正常大鼠脊髓灰质腹角的运动神经元出现强烈的Nogo(N 18)免疫反应 ;而在脊髓白质呈阴性反应 ;寡突胶质细胞呈明显的阳性反应 ;在脊髓全段未发现Nogo染色的星形胶质细胞。在脊髓夹伤区域以外的上下部分 ,灰质和白质对Nogo(N 18)的表达与对照组的脊髓相同 ,在损伤部位的白质 ,出现明显的Nogo(N 18)免疫反应物。在正常和损伤的大鼠坐骨神经均未发现阳性反应的施万细胞。　结论　Nogo蛋白在正常大鼠脊髓运动神经元的分布和在损伤部位的积聚 ,提示人们要重新认识Nogo的功能     

脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖及GFAP表达的变化

目的探讨脊髓损伤后NG2、Neurocan、GFAP表达的变化。方法将32只雌性SD大鼠随机分为空白对照组和模型组。模型组采用脊髓横切法制作脊髓损伤模型,空白对照组仅切除T10全椎板及T9、T11部分椎板,对脊髓未作任何处理。分别在大鼠脊髓损伤制作后3、7、14及28 d时取材,利用免疫组织化学染色方法检测NG2、Neurocan、GFAP的表达情况。结果模型组脊髓损伤后3 d时NG2的表达出现明显升高,7 d时NG2的表达达到最高点,14 d及28 d时NG2仍然维持在较高水平,但与7 d时的表达相比有下降,空白对照组NG2各时间点均呈低表达。模型组脊髓损伤后7 d时Neurocan的表达显著增加,于14 d时达到最高点,从14 d开始Neurocan的表达开始逐步下降,空白对照组Neurocan各时间点均呈低表达。模型组脊髓损伤后3 d时GFAP的表达明显升高,14 d时GFAP的表达达到顶点,28 d时损伤部位GFAP的表达均较空白对照组明显升高,两组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论脊髓损伤后NG2、Neurocan、GFAP表达升高,可能是脊髓损伤后抑制轴突再生的因素之一。     

转基因小鼠脊髓损伤后室管膜细胞的时空动态变化北大核心

背景:成年哺乳动物脊髓室管膜细胞损伤后表现出干/祖细胞特性。目的:利用Nestin和Foxj1转基因小鼠标记室管膜细胞,以便追踪室管膜细胞及其子代在成年小鼠脊髓损伤后的增殖分化命运。方法:对转基因小鼠T_(8)脊髓节段完全切除1 mm脊髓组织,术后1-7 d连续腹腔注射BrdU动态观察室管膜细胞,在脊髓损伤后不同时间点(3,7,14,28,56 d)借助BrdU,GFAP,Tuj1,NeuN免疫荧光染色,观察损伤区边缘室管膜细胞的遗传命运谱。结果与结论:①未损伤脊髓中,Nestin阳性的室管膜细胞处于静止状态;脊髓损伤后室管膜细胞被激活,第3天时在损伤区周围大量增殖;②在损伤后第28天,约3.3%Nestin阳性的室管膜细胞表达神经元标记物Tuj1;③在损伤后第56天,约25.7%Nestin阳性的室管膜细胞分化为星形胶质细胞并构成胶质瘢痕的核心,参与胶质瘢痕的形成;④通过检测室管膜细胞在脊髓损伤后的时空动态变化、增殖和分化特征,为理解脊髓损伤的病理过程提供理论依据,为脊髓损伤修复提供新的思路。     

罗格列酮对大鼠脊髓损伤后的保护作用及其机制

目的:探讨罗格列酮对脊髓损伤后的保护作用以及对表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化和胶质瘢痕形成的影响。方法:65只SD大鼠随机分为假手术组、溶媒对照组(1、3、7、14、21 d和28 d)与罗格列酮组(1、3、7、14、21 d和28 d)。溶媒对照组和罗格列酮组进行T10节段半横断(右侧),假手术组只行椎板切除,不损伤脊髓;罗格列酮组在术后5 min、6 h、24 h均以2.5 mg/kg剂量腹腔注射罗格列酮,其他组注射等量的生理盐水。术后行BBB评分。各时间点取材后采用免疫组化法检测脊髓组织过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)、p-EGFR及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,并经Motic Images Advanced 3.2系统处理后对免疫组化阳性区域的平均光密度值进行t检验、F检验。结果:BBB评分显示,罗格列酮治疗后运动功能明显恢复。免疫组化结果及统计学分析显示,脊髓损伤后PPARγ、p-EGFR及GFAP表达增高。罗格列酮组经治疗后PPARγ较溶媒对照组表达明显增多,尤其是7、14 d和28 d(P0.05);p-EGFR在各个时间点的表达均减少,尤其1、3、7 d差异明显(P0.05);GFAP随时间增长,呈现先增高后减少的趋势(P0.05),峰值出现在14 d。结论:罗格列酮能够促进脊髓损伤后PPARγ表达,下调p-EGFR及GFAP表达抑制星形胶质细胞的活性,这些可能是脊髓损伤后运动功能恢复的机制。     

Endogenous neural stem cells in central canal of adult rats acquired limited ability to differentiate into neurons following mild spinal cord injury

Endogenous neural stem cells in central canal of adult mammalian spinal cord exhibit stem cell properties following injury. In the present study, the endogenous neural stem cells were labeled with Dil to track the differentiation of cells after mild spinal cord injury (SCI). Compared with 1 and 14 days post mild injury, the number of endogenous neural stem cells significantly increased at the injured site of spinal cord on 3 and 7 days post-injury. Dil-labeled βIII-tublin and GFAP expressing cells could be detected on 7 days post-injury, which indicated that the endogenous neural stem cells in central canal of spinal cord differentiated into different type of neural cells, but there were more differentiated astrocytes than the neurons after injury. Furthermore, after injury the expression of inhibitory Notch1 and Hes1 mRNA began to increase at 6 hours and was evident at 12 and 24 hours, which maintained high levels up to 7 days post-injury. These results indicated that a mild SCI in rat is sufficient to induce endogenous neural stem cells proliferation and differentiation. However, the ability to differentiate into neurons is limited, which may be, at least in part, due to high expression of inhibitory Notch1 and Hes1 genes after injury.     

小鼠胸段脊髓背横切后Lingo-1的表达变化

目的 观察Lingo-1在小鼠脊髓背侧切割伤后不同时间窗的动态表达变化.方法 采用LISA脊髓损伤仪制作小鼠第9胸髓背侧切割伤模型(深度1.1 mm),运用Real time RT-PCR和Western blot观察Lingo-l mRNA和蛋白在术后1、3、7、14、28 d的表达变化.结果 Lingo-1 mRNA和蛋白的表达在小鼠脊髓背侧切割伤后1d即显著上调,7d时达高峰,并持续上调表达至术后2～4周.结论 Lingo-1在脊髓切割伤后表达上调,揭示其与脊髓损伤后轴突变性有关;对于治疗脊髓损伤促进轴突再生,Lingo-1拮抗剂应在损伤早期即开始并持续使用.     

人发角蛋白植入对大鼠脊髓损伤功能与形态的影响

目的：研究脊髓损伤后植入人发角蛋白（human hair keratin，HHK）对动物行为学影响及其对损伤脊髓的形态学影响与HHK本身的形态学变化。方法：采用重物下落撞击法制备大鼠脊髓损伤模型，在损伤处移植入HHK，分别于植入后5、10、15、20、25、30d进行行为学检查，于20d与30d脊髓进行形态学观察。结果：HHK植入后在30d内对大鼠的行为学影响与模型对照组没有统计学意义，但HHK可降解吸收融入损伤的脊髓组织，而受损伤的脊髓组织中可见大量胶质细胞、成纤维细胞与巨噬细胞浸润、神经纤维与髓鞘朗革非氏细胞。结论：HHK可能在脊髓损伤后的修复与重建中起作用。     

Blood–spinal cord barrier permeability in experimental spinal cord injury: dynamic contrast‐enhanced MRI

After a primary traumatic injury, spinal cord tissue undergoes a series of pathobiological changes, including compromised blood–spinal cord barrier (BSCB) integrity. These vascular changes occur over both time and space. In an experimental model of spinal cord injury (SCI), longitudinal dynamic contrast‐enhanced MRI (DCE‐MRI) studies were performed up to 56 days after SCI to quantify spatial and temporal changes in the BSCB permeability in tissue that did not show any visible enhancement on the post‐contrast MRI (non‐enhancing tissue). DCE‐MRI data were analyzed using a two‐compartment pharmacokinetic model. These studies demonstrate gradual restoration of BSCB with post‐SCI time. However, on the basis of DCE‐MRI, and confirmed by immunohistochemistry, the BSCB remained compromised even at 56 days after SCI. In addition, open‐field locomotion was evaluated using the 21‐point Basso–Beattie–Bresnahan scale. A significant correlation between decreased BSCB permeability and improved locomotor recovery was observed. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤小鼠运动功能的修复和镇痛作用

目的：探讨人脐带间充质干细胞（ hUC-MSCs）移植缓解脊髓损伤神经病理性痛,并促进功能恢复的效果及 其与脊髓损伤小鼠胶质细胞活化及炎症因子水平的调控关系。方法：建立ICR 小鼠脊髓损伤模型,同时构建慢病毒 载体介导绿色荧光蛋白（ GFP）标记体外培养的 hUC-MSCs ;将模型小鼠分为模型组和治疗组,治疗组于脊髓损 伤1 周后采用局部注射 hUC-MSCs 移植到脊髓中,每周进行运动功能（ BBB）评分及机械性痛觉过敏检测,持续8 周后行组织学评价与炎症因子检测。结果：治疗组脊髓组织中 GFP 荧光有表达。BBB检测结果显示,治疗组和模 型组小鼠随时间延长运动功能均逐渐恢复,其中治疗组运动功能恢复速度要显著快于模型组;机械触诱发痛检测显 示,小鼠脊髓损伤后痛阈值降低,随着时间延长痛阈值逐渐升高。同一个时间点治疗组的痛阈值显著高于模型组。 与模型组相比,治疗组小鼠脊髓组织的白细胞介素-6（ IL-6）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）表达下降,胶质细胞源 性神经营养因子（ GDNF）表达升高,同时脊髓组织巨噬细胞激活抗原1（ ED1/CD68） 荧光表达显著降低。结论： 脊髓损伤小鼠中hUC-MSCs 移植可能通过降低炎症因子 IL-6 和TNF-α 的分泌,提高 GDNF 的表达水平来促进受损 脊髓组织的修复,并发挥镇痛效应。     

低氧预处理脐带间充质干细胞移植促进大鼠脊髓损伤修复

目的:评估低氧预处理脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)移植修复大鼠急性脊髓损伤的作用并初步探讨其机制。方法:分别于常氧和低氧条件下培养UCMSCs,细胞免疫荧光鉴定细胞,ELISA测定细胞脑源性生长因子(BDNF)、血管源性生长因子(VEGF)、睫状生长因子(CNTF)和肝细胞生长因子(HGF)的浓度。采用改良的Al1en’s法(2.5 g×10 cm)建立60只大鼠T10脊髓损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低氧细胞移植组及常氧细胞移植组,每组20只,损伤后即刻移植1×10~6个细胞至低氧细胞移植组及常氧细胞移植组动物脊髓内。术前及术后每周进行运动功能BBB评分;采用免疫荧光法检测移植细胞的存活、神经细胞凋亡;采用ELISA法检测细胞移植第2、14、28 d脊髓组织肝细胞生长因子的浓度。结果:在低氧组,体外由UCMSCs分泌的BDNF、VEGF、CNTF和HGF浓度显著高于常氧组细胞。与模型组比较,细胞移植组运动功能评分和HGF含量增加,而神经细胞的凋亡率降低,但以低氧细胞移植组改变最明显。结论:低氧预处理的UMCSCs具有提高神经营养因子分泌作用,其机制可能与下调神经细胞凋亡,增加受损脊髓组织HGF有关。     

微囊化兔雪旺细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察大鼠脊髓损伤后及进行微囊化兔雪旺细胞移植后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化.方法: 130只成年SD大鼠随机分为微囊组、细胞悬液组、损伤对照组和正常对照组4组,术后3、 7、 14及28d,冰冻切片行免疫组织化学显色观察GFAP表达的变化.结果:大鼠脊髓损伤后3～14d, GFAP阳性细胞数及平均光密度均增加;至第28天时则减少,但仍高于正常组.其中阳性细胞数和平均光密度在第7天开始,微囊组与细胞悬液组、损伤组比较均有明显降低.结论: 微囊化异种雪旺细胞移植能抑制损伤脊髓GFAP的表达,减轻由反应性胶质化所形成的胶质瘢痕.