赖氨大黄酸通过抑制EGFR信号通路诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的 研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡的影响及EGFR信号通路在其中的作用.方法 应用MTT法检测RHL对CaSki细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测EGFR信号通路蛋白表达水平及其蛋白磷酸化水平.结果 RHL能有效抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,48和72 h的ⅠC50值分别是84.57 μmol/L和74.79μmol/L,RHL能诱导CaSki细胞凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够抑制EGFR、AKT蛋白磷酸化,并显著下调NF-κB、BCL-2及Survivin蛋白的水平(P＜0.01),同时RHL还上调BAX蛋白的表达(P＜0.01).结论 RHL可能通过EGFR/AKT/NF-κB/Survivin信号通路诱导CaSki细胞凋亡.     

赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响

目的研究赖氨大黄酸(RHL)、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法肺癌细胞系A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot法检测细胞48 h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase(PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响简

 目的 研究赖氨大黄酸（RHL）、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法 肺癌细胞株A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot 法检测细胞48h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果 细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P<0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P<0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

Caspase 3在PAB诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用

目的研究Caspase 3在土荆皮酸诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法使用不同浓度的PAB处理He-La细胞，应用流式细胞仪检测细胞周期的分布，采用Western Blot方法检测HeLa细胞经PAB作用前后Bcl-2和Caspase3蛋白的表达变化。结果经PAB作用后，HeLa细胞出现剂量依赖性G2／M期阻滞伴随细胞凋亡，随药物浓度增加Bel-2蛋白表达逐渐下降，Caspase 3蛋白表达上调，Caspase 3活化百分率增高。结论PAB能通过调节Bcl-2蛋白的表达激活Caspase 3，从而诱导HeLa细胞发生凋亡。     

13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌细胞株T24 凋亡的机制研究

目的： 研究13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌T24细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制。方法：将不同浓度的13-甲基十四烷酸作用于膀胱癌T24细胞,用MTT法检测细胞增殖, 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡指数,蛋白免疫印迹法分析参与凋亡的蛋白。结果：药物处理2 h后p38、JNK磷酸化增强,AKT磷酸化减弱,8 h后线粒体中细胞色素C释放,FADD及磷酸化FADD没有明显变化,caspase酶底物 PARP、lamin B、RB在12 h出现明显的裂解片段,且药物诱导T24细胞凋亡的过程有时间浓度依赖效应。结论：在13-MTD诱导T24细胞凋亡的过程中p38MAPK和JNK/SAPK信号通路被激活,PI3K/AKT信号通路被抑制,进而激活线粒体凋亡途径,使线粒体内的细胞色素C释放到胞浆,激活caspase酶,裂解相应的凋亡底物lamin B、Rb、PARP,促进T24细胞凋亡。     

天花粉蛋白抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡之机制探讨

目的研究天花粉蛋白（TCS）对人宫颈癌HeLa细胞生长抑制作用及其机制,探讨HeLa细胞凋亡发生的分子机制.方法采用CCK-8的方法,检测TCS对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞仪检测TCS对细胞周期的影响;电子显微镜和Annexin法观察TCS对HeLa细胞诱导凋亡的作用;应用Western blotting观察HeLa细胞caspase-3酶原的变化;用caspases活性检测试剂盒,检测caspase-3,8,9的活性.结果1.TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用;2.TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;3.TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,HeLa细胞出现典型的凋亡特征--染色质浓缩和凋亡小体,且凋亡率具有时间依赖性;4.caspase-3酶原表达的降低呈现时间和浓度依赖性,而caspase-3活性随时间依赖性的增高,提示在TCS诱导HeLa细胞凋亡的过程中caspase-3被激活;5.caspase-8,9的活性增高,有时间依赖性,且具有时间顺序.100 mg/L TCS处理24h后,caspase-8早于caspase-3被激活,提示活化的caspase-8可能对caspase-3起到激活作用.结论TCS对HeLa细胞的抑制作用是通过将HeLa细胞阻滞于S期和诱导细胞凋亡来实现的.caspase-3的激活是介导TCS诱导HeLa细胞发生凋亡的通路,同时,活化的caspase-8,9可能参与了caspase-3的激活和凋亡的诱导.     

去甲斑蝥素通过半胱氨酸天冬氨酸酶诱导HeLa细胞凋亡

目的：研究去甲斑蝥素（NCTD）通过半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase）途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制。方法： 采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳、乳酸脱氢酶（LDH）检测及Western blot检测法。结果： 去甲斑蝥素能显著诱导HeLa细胞发生凋亡，caspase-家族、caspase-3、-8、-10抑制剂可以部分地抑制NCTD诱导的细胞死亡。细胞凋亡时caspase-3、-8、-9酶活力升高，而且caspase-3的作用底物-caspase-3 激活的DNA酶抑制物（ICAD）蛋白表达下降。结论： 去甲斑蝥素通过激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

叶黄素抑制叔丁基过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞凋亡

目的:观察叶黄素(lutein)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的视网膜神经节细胞(RGC-5细胞系)的保护效应并探讨其作用机制。方法:用免疫荧光染色检测视网膜神经节特异性蛋白Brn-3和神经微管结合蛋白MAP-2的表达来鉴定RGC-5细胞;将RGC-5细胞随机分为对照组、t-BHP处理组、t-BHP和lutein共同处理组、lutein处理组,培养24 h,MTT实验检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学技术检测caspase-3蛋白的活化情况;Western blot检测Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3、JNK和c-Jun蛋白的变化。结果:MTT实验和流式细胞检测结果显示,lutein能提高t-BHP处理的RGC-5细胞的活力,并降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡;免疫荧光结果显示lutein能抑制t-BHP诱导的caspase-3的活化;与对照组比较,t-BHP处理后RGC-5细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P0.05),Bax/Bcl-2比率升高,cleaved caspase-3表达上调(P0.05),JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平增加(P0.05),t-BHP的上述作用可被lutein部分逆转。结论:Lutein能够降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡,其机制与其上调Bcl-2的表达、抑制caspase-3的活化并降低JNK和c-Jun蛋白的磷酸化有关。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

miR-874-3p靶向GALNT4调控宫颈癌细胞增殖与凋亡的分子机制研究北大核心CSCD

目的:研究miR-874-3p是否通过靶向GALNT4影响宫颈癌细胞增殖和凋亡。方法:qRT-PCR和Western blot检测宫颈癌细胞系miR-874-3p、GALNT4 mRNA和GALNT4蛋白表达。HeLa细胞转染miR-874-3p或si-GALNT4,Western blot检测GALNT4、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、Cleaved-Caspase-3、β-catenin表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。starBase预测与双荧光素酶活性检测分析miR-874-3p和GALNT4的靶向关系。共转染miR-874-3p和pcDNA-GALNT4,观察过表达GALNT4对miR-874-3p过表达诱导的HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果:与宫颈上皮永生化细胞H8相比,宫颈癌SiHa、HeLa、Caski细胞miR-874-3p表达降低,GALNT4 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。过表达miR-874-3p降低HeLa细胞CyclinD1、β-catenin蛋白表达及细胞增殖率,提高Cleaved-Caspase-3蛋白表达和凋亡率(P<0.05)。抑制GALNT4表达降低HeLa细胞CyclinD1蛋白表达及增殖率,提高Cleaved-Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率(P<0.05)。miR-874-3p靶向调控GALNT4表达。过表达GALNT4可部分反转miR-874-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、CyclinD1、β-catenin蛋白表达的抑制作用,及对细胞凋亡、Cleaved-Caspase-3蛋白表达的促进作用。结论:miR-874-3p通过靶基因GALNT4调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制宫颈癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

PRR11在宫颈癌中的表达意义及对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响

目的研究富含脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11,PRR11)在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌患者临床病例特征及预后的关系,并探讨PRR11对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法免疫组化检测PRR11在60例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中的表达水平,并分析宫颈癌组织中PRR11的表达与临床病例特征的关系及患者预后的影响。Western-blot检测PRR11蛋白在宫颈癌细胞系HeLa和人宫颈上皮永生化细胞H8中的表达;HeLa经脂质体分别转染PRR11 siRNA(si-PRR11)和对照(si-NC)48h后,采用MTS实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期阻滞和凋亡情况,Western-blot检测各组细胞中CyclinD1、caspase-3蛋白的影响。结果免疫组化结果显示宫颈癌组织中PRR11的阳性表达率显著高于正常宫颈组织中的表达,PRR11阳性表达与宫颈癌肿瘤大小及组织学分级显著相关(P均<0.05),宫颈癌组织中PRR11阳性表达患者生存期较短。PRR11在宫颈癌细胞系HeLa中的表达均显著高于人宫颈上皮永生化细胞H8(P<0.05);转染PRR11 siRNA后,HeLa细胞增殖能力下降、细胞阻滞在G1期,凋亡细胞增多,CyclinD1蛋白表达减少,caspase-3蛋白表达增加(P均<0.05)。结论PRR11在宫颈癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与肿瘤大小、组织学分级及不良预后相关,同时PRR11可能通过调控CyclinD1、caspase-3蛋白促进宫颈癌增殖和抑制细胞凋亡,PRR11可以作为治疗子宫颈癌的潜在分子靶点。     

hTERT启动子驱动的TRAIL诱导宫颈癌细胞的凋亡作用

目的：探讨端粒酶（hTERT）启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对宫颈癌细胞生长抑制的作用。方法：脂质体转染将hTERT-TRAIL转染至宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测TRAILmRNA的表达;通过MTT、流式细胞术检测稳定转染细胞的生长情况,电镜观察转染细胞的超微结构。结果：转染真核表达载体hTERT-TRAIL组细胞中TRAILmRNA细胞表达量高于对照组（P〈0.05）;hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的抑制率高于CMV-TRAIL组和对照组（P〈0.05）;hTERT-TRAIL组细胞对宫颈癌细胞的凋亡率明显高于转染CMV-TRAIL组和对照组（P〈0.01）;电镜结果显示,hTERT-TRAIL对细胞作用是以细胞凋亡为主。结论：hTERT启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人宫颈癌细胞的生长有明显的抑制作用和诱导凋亡作用,为宫颈癌的研究奠定基础和临床治疗提供思路。     

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

 目的：研究膜联蛋白A2（annexin A2, ANXA2）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法：以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞。将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组。应用real-time PCR法检测ANXA2 mRNA表达水平及Western blotting检测ANXA2蛋白表达水平。分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果：ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响。结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力。ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点。     

钙激活性中电导钾离子通道在宫颈癌组织中的表达

 目的：观察钙激活性中电导钾离子通道（IKCa1）在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法：应用RT-PCR技术研究18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;利用IKCa1通道的阻断剂----克霉唑处理宫颈癌HeLa细胞,应用RT-PCR技术检测细胞IKCa1 mRNA的表达的变化,MTT法观察细胞增殖抑制的变化。并在倒置相差显微镜、透射电镜下观察HeLa细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率及表达水平（分别为73.33%、1.14±0.45）明显高于正常宫颈组织（分别为11.11%、0.86±0.23）,P<0.05。克霉唑以浓度和时间依赖的方式抑制HeLa细胞的增殖,抑制HeLa细胞的生长,下调IKCa1 mRNA的表达水平,诱导细胞凋亡,并观察到细胞凋亡的形态学改变。 结论：IKCa1的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,降低其表达可能通过诱导细胞凋亡,从而抑制宫颈癌细胞的增殖。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察宫颈癌细胞系HeLa细胞在膜联蛋白A5表达降低后,细胞增殖和凋亡的情况. 方法 采用BNA干扰的方法,通过免疫印迹法筛选出对HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达抑制效率最高的siRNA,脂质体法将siRNA转染入细胞48h后,用MTT法检测细胞增殖的改变情况,用细胞凋亡光学检测试剂盒检测细胞的凋亡.结果 Helm细胞中膜联蛋白A5的表达被显著抑制,其增殖速度与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,无显著性差异;细胞凋亡显著减少,与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,有显著性差异. 结论 膜联蛋白A5低表达对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖未见显著影响,但可能影响了细胞的凋亡.     

Linc00152靶向miR-376c-3p对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA Linc00152对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞以及正常宫颈细胞Ect1/E6E7中Linc00152与微小RNA-376c-3p(miR-376c-3p)的表达水平。建立Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达的宫颈癌HeLa细胞系,MTT法、流式细胞术、集落形成实验和Western blot分别检测Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞的活力、凋亡、放射敏感性及相关蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证Linc00152与miR-376c-3p的调控关系。结果:与Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞中的Linc00152表达上调,miR-376c-3p表达下调(P<0.05)。Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达均可抑制HeLa细胞的活力,并诱导其凋亡,增强其放射敏感性,抑制cyclin D和Bcl-2蛋白表达,促进P21和Bax蛋白表达(P<0.05)。Linc00152在HeLa细胞中负向调控miR-376c-3p的表达,抑制miR-376c-3p表达可逆转Linc00152低表达对HeLa细胞活力、凋亡和放射敏感性的作用。结论:宫颈癌细胞中Linc00152高表达;Linc00152通过靶向调控miR-376c-3p影响HeLa细胞的生长、凋亡和放射敏感性,是宫颈癌潜在的诊治靶点。     

肼苯哒嗪对宫颈癌细胞株APC基因表达和甲基化状况以及细胞增殖与凋亡的影响

目的观察宫颈癌细胞株HeLa、CaSki和SiHa中APC基因的表达及其与甲基化修饰之间的相关性,探讨肼苯哒嗪对APC基因的去甲基化作用及其对细胞生长和凋亡的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）分析肼苯哒嗪处理前后宫颈癌细胞株APC基因的甲基化状态及表达情况;采用免疫组织化学SP法检测肼苯哒嗪对宫颈癌细胞株APC相关蛋白β-连环蛋白表达的影响;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及流式细胞术观察肼苯哒嗪对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。结果（1）HeLa及CaSki细胞APC基因分别为甲基化及半甲基化,SiHa细胞APC基因无甲基化。（2）40μmol／L肼苯哒嗪处理72h后,HeLa、CaSki和SiHa细胞的生长抑制率分别为（52．12．4-3．78）％、（44．31．4-2．59）％、（47．73．4-4．73）％,正常细胞人脐静脉内皮细胞（HECV）表现为耐药;HeLa和CaSki细胞中APC基因呈去甲基化状态且APCmRNA均呈阳性表达;HeLa、CaSki和SiHa三种细胞中APCmRNA表达分别比处理前增加10．35、11．40及0．73倍。（3）40μmol／L肼苯哒嗪作用HeLa、CaSki细胞72h后,可将细胞阻滞于S期和G2-M期并诱导细胞凋亡;β-连环蛋白在细胞膜上有明显的表达。结论APC甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,肼苯哒嗪能使甲基化的APC基因去除甲基化修饰重新表达,且能抑制宫颈癌细胞生长。     

干扰ADAM17抑制人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖

目的 探讨干扰去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖的影响,并对其作用机制进行初步探索.方法 在HeLa细胞中转染ADAM17干扰质粒,荧光定量PCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭;Western ...