皮下免疫锚定蛋白Z抵抗小鼠肺炎链球菌感染的作用研究

为探究锚定蛋白Z(midcell anchored protein Z, MapZ)皮下免疫小鼠后对肺炎链球菌感染模型的免疫保护作用,通过大肠埃希菌原核表达系统表达MapZ后用Ni柱纯化并去除LPS,经皮下注射免疫C57BL/6小鼠制备MapZ特异性抗血清。通过ELISA和Western blotting分析MapZ抗血清和6种临床常见血清型肺炎链球菌的结合能力及其特异性;建立细胞模型,进一步评价MapZ抗血清的调理吞噬和抗黏附作用。将C57BL/6小鼠随机分为PBS组、MapZ组及MapZ+铝佐剂组,构建肺炎链球菌致死性模型,评估MapZ皮下免疫的保护效果。结果显示,实验成功制备并获得目的蛋白MapZ。Western blotting和ELISA检测结果显示,MapZ抗血清能够特异性识别肺炎链球菌不同血清型中MapZ蛋白,并且相较于正常血清,具有较强的结合能力(均P0.05);同时,MapZ抗血清能够促进小鼠腹腔巨噬细胞对肺炎链球菌D39的吞噬作用(P0.01),抑制肺炎链球菌19F对A549细胞的黏附(均P0.05)。在肺炎链球菌致死性感染模型中,D39鼻腔攻毒后,免疫了MapZ及铝佐剂的小鼠相较于MapZ组及PBS组,生存率显著提高(P0.05,P0.01)。由此,MapZ是一种有潜力的肺炎链球菌候选疫苗,经皮下途径免疫小鼠后,能有效提高其感染致死性肺炎链球菌后的生存率。     

肺炎链球菌重组自溶酶(Re-LytA)滴鼻免疫小鼠的实验研究

目的 评价重组肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)自溶酶(autolysin,LytA)滴鼻免疫诱导小鼠抗Sp感染的保护性效果.方法 用亲和层析的方法纯化出重组Sp LytA蛋白,以CpG作佐剂,对小鼠进行滴鼻免疫(A组).对照组(B组)用无菌盐水滴鼻;多糖疫苗组(C组)用23价多糖疫苗肌肉注射.于末次免疫后2周,用Sp分别以滴鼻和腹腔注射两种方式进行攻击感染.攻击之前采集血清和鼻咽灌洗液等样品,采用ELISA测试其抗体水平.滴鼻攻击后4 d,采集小鼠鼻咽灌洗液和肺灌洗液,进行Sp细菌计数;腹腔注射攻击后7 d内观察各组小鼠死亡情况.结果 B组未检测到LytA抗体和多糖抗体,C组多糖抗体阳性;A组LytA抗体(包括tgG、IgA、sIgA)均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).腹腔注射攻击后,A、C组小鼠的存活率明显高于B组(P<0.05),A组和C组之间没有明显区别(P>0.05).滴鼻攻击后,A组鼻咽部灌洗液Sp细菌计数明显低于B组和C组(P<0.05).结论 Re-LytA滴鼻免疫可诱导实验小鼠产生一定的抵抗Sp感染的保护性免疫力,这种保护性的免疫力可能与sIgA相关.     

rIL-18对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/Th2免疫应答的影响

目的 研究重组白细胞介素18(rIL-18)对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/ Th2免疫应答的影响.方法 鼻腔接种肺炎链球菌建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将Balb/c小鼠24只随机分为3组,分别为对照组,肺炎组和肺炎rIL-18干预组(n=8 ),RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4 mRNA 的表达,同时支气管肺泡灌洗液(BALB)进行活菌计数,有核细胞分类计数.结果 ①肺炎rIL-18干预组BA LF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于肺炎组和对照组(P＜0.001);②肺炎rIL-18 干预组BALF活菌计数显著低于肺炎组(P＜0.001);③肺炎rIL-18干预组肺组织IFN- γ mRNA表达上调而IL-4 mRNA表达下调(P＜0.001).结论 在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成,促进Th1免疫应答,使Th1/ Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御.     

肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞及CD4~+T细胞的影响

目的探讨肺炎链球菌肺炎对Balb/c小鼠肺部树突状细胞及CD4~+T细胞的影响。方法 6~8周Balb/c小鼠随机分为对照组及肺炎链球菌感染组,流式细胞术检测肺炎链球菌感染后2 d、5 d肺组织中CD103~+DCs、CD11b~+DCs、p DCs及CD4~+T细胞亚类水平。结果肺炎链球菌肺炎致肺组织CD103~+DCs及p DCs水平显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),而肺组织CD11b~+DCs水平显著低于对照组。肺炎链球菌肺炎促进肺组织IL-17A~+CD4~+T细胞和Foxp3~+Tregs表达,与对照组比较,感染后2 d、5 d差异均有统计学意义(P0.05),随着感染控制,Foxp3~+Tregs表达水平回降,感染后5 d Foxp3~+Tregs水平显著低于感染后2 d水平(7.3%±0.41%vs 9.38%±1.34%,P0.01)。肺炎链球菌肺炎对肺部Th2表达水平无显著影响,感染后5 d IFN-γ~+CD4~+T细胞水平显著升高,与对照组、感染后2 d组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论肺炎链球菌肺炎促进肺组织CD103~+DCs、p DCs表达,诱导CD4~+Th17、Tregs细胞分化发育。     

免疫抑制剂对小鼠流感病毒性肺炎模型建立的影响

目的:将免疫学原理应用于流感病毒性肺炎小鼠模型的制备,并筛选出适宜浓度的免疫抑制剂浓度,从而建 立一个稳定的流感病毒性肺炎小鼠模型。方法:淤设免疫抑制剂环磷酰胺高[100 mg/ (kg·d)]、中[75 mg/ (kg·d)]、低 [50 mg/ (kg·d)]剂量组、对照组和正常组,各组腹腔注射相对应浓度的环磷酰胺或等量的生理盐水,1 次/2 d,除正常组外其 余各组于4 d 后进行A 型流感病毒滴鼻感染,于7 d 后取材。检测小鼠体重、脾指数、肺病理变化、脾病理变化以及白介素4 (IL-4)表达情况。于实验设环磷酰胺单用组、病毒单用组、环磷酰胺+病毒组、正常组。用筛选出的适宜浓度的免疫抑制剂及 同上一部分造模方式进行造模,分别于滴鼻当天与第1、3、5、7 天取材,检测小鼠体重、脾指数、肺病理变化、当天与第7 天脾 病理变化以及IL鄄4 表达情况。结果:淤免疫抑制剂适宜剂量的筛选结果显示:免疫抑制剂环磷酰胺高、中剂量均可使小鼠免 疫功能显著抑制,而感染病毒,而高剂量组小鼠死亡率明显高于中剂量组,故本研究拟以中剂量组[75 mg/ (kg·d)]作为适宜 剂量。于流感病毒性肺炎小鼠模型建立结果显示:肺部损伤以抑制剂+病毒组最为严重,模型稳定。结论:环磷酰胺中剂量组 的用药剂量75 mg/ (kg·d)为造模的免疫抑制剂适宜剂量,并且免疫抑制剂有利于建立稳定的流感病毒性小鼠肺炎模型。     

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3~+Tregs、Th17表达的影响

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3~+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(S.pneumonia组)。S.pneumonia组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103~+DCs、CD11b~+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3~+Tregs和IL-17~+CD4~+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P0.05),CD103~+DCs、Foxp3~+Tregs水平较对照组显著减少(P0.05),CD11b~+DCs及IL-17~+CD4~+T细胞较对照组显著增高(P0.01)。对照组肺部CD103~+DCs和Foxp3~+Treg表达呈正相关(P0.01,r=0.593),而新生期感染肺炎链球菌后CD103~+DCs和Foxp3~+Treg表达无相关性(P0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103~+DCs和Foxp3~+Tregs发育,促进CD11b~+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。     

黄芩、板蓝根等清热解毒药对流感病毒所致肺炎小鼠炎性因子蛋白表达的影响

目的 研究清热解毒代表药物对流感病毒FM1感染肺炎小鼠肺匀浆炎性细胞因子的影响,以筛选出对流感病毒具有更好免疫调控作用的清热解毒中药.方法 建立流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染的小鼠肺炎模型,采用双抗夹心ELISA法分别在感染后第1、3、5、7天检测空白对照组、模型对照组、黄芩组、板蓝根组、白头翁组、虎杖组、白花蛇舌草组小鼠肺匀浆TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-1、IL-10含量的变化.结果 流感病毒感染小鼠后,模型组TNF-α,IL-1,IL-6,IFN-γ的蛋白表达高于正常空白组,在第3天达峰值,差异有统计学意义(P＜0.05).清热解毒代表药物黄芩、板蓝根均可以降低TNF-α、IL-6、IL-1含量,提高IL-10、IFN-γ的含量,第3、5天时作用较明显,有统计学意义(P＜0.05).白头翁、虎杖及白花蛇舌草对炎性细胞因子在一定程度上有调节作用,但效果不及黄芩和板蓝根.结论 清热解毒代表药物黄芩、板蓝根可通过调节细胞因子水平来干预流感病毒引起的免疫损伤,从而发挥抗流感病毒的作用.     

肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测

目的 研究肺炎支原体(Mp) P1C-IL-2融合基因疫苗经鼻饲免疫小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用,了解IL-2对P1C核酸疫苗的免疫佐剂效应.方法 将构建的P1C-IL-2核酸疫苗鼻饲免疫BALB/c鼠,ELISA检测免疫小鼠血清IgG滴度、IgG亚类和支气管肺泡灌洗液中IgA及IFN-γ、IL-4的水平;建立小鼠Mp感染模型,观察Mp攻击后小鼠肺组织炎症情况和支气管肺泡灌洗液中Mp菌落数的变化.结果 P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a亚类和支气管肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-4水平均较PIC疫苗组小鼠显著增高(P＜0.05),但两组支气管肺泡灌洗液IgA差异无显著性(P＞0.05).用Mp滴鼻感染免疫小鼠,第1、3、6天P1C-IL-2双基因融合疫苗组小鼠肺组织炎症病理评分显著高于P1C单基因疫苗免疫组小鼠,两组小鼠支气管肺泡灌洗液中的Mp菌落数差异无显著性(P＞0.05).结论 IL-2能显著增强PIC疫苗的免疫应答水平,但在感染早期也激发了较强的肺组织炎症.     

咳宁方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织HSP70表达的影响

目的:探讨咳宁方对实验性小鼠流感病毒性肺炎预防作用及其机制。方法:将NIH小鼠50只随机分为5组,即正常对照组、模型组、病毒唑组、咳宁I方组、咳宁Ⅱ方组。将冻存的流感病毒鼠肺适应株(FM₁)复苏,在鸡胚中繁殖,用乙醚将各组小鼠分别轻度麻醉后,以FM₁ 15个LD₅₀滴鼻感染小鼠,正常对照组给等量蒸馏水滴鼻。各组感染病毒前2 d,开始灌胃给药或等量生理盐水,每日2次,每次0.3 mL,直至感染后4 d共给药6 d。小鼠于感染后第4 d处死,取肺组织置－70 ℃冰箱保存。用Lowry法测定肺组织总蛋白,Western blot测定HSP70含量,并用光镜观察小鼠肺组织的病理变化。结果:模型组、3个用药组HSP70均显著高于正常对照组(P＜0.01), 咳宁I方组HSP70显著高于模型组(P＜0.05),且与病毒唑组亦有显著差异(P＜0.05)。咳宁I方组和病毒唑组小鼠肺组织病变程度明显轻于模型组(P＜0.05)。结论:流感病毒性肺炎小鼠的肺组织中HSP70表达显著增加,咳宁I方诱导流感病毒性肺炎小鼠肺组织HSP70表达增加,提示咳宁I方对流感病毒性肺炎小鼠的肺组织有保护作用。     

新生期肺炎链球菌肺炎对VA的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系研究

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniaepneumonia,S.pp)对维生素A(VA)水平的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系。方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×10~7CFU肺炎链球菌5μl建立新生期S.pp模型,对照组滴注等量PBS,新生期肺炎链球菌肺炎补充VA组(S.pp+VA)感染后口饲补充VA,每天1次,连续4天,对照组给予等量VA溶解溶质菜籽油。收集感染后第7、14、21、28天肺组织、血清、肝脏组织标本,高效液相色谱仪(HPLC)监测组织中VA水平。小鼠成年后肺组织病理切片HE染色观察肺组织病理改变,体积描记法检测小鼠肺功能,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清IL-4、IL-5、IL-13、IL-17A、INF-γ水平,流式细胞术检测肺组织中的CD4+T细胞亚群Th1、Th2及Foxp3~+Treg。结果 S.pp组小鼠肺组织VA持续降低至感染后4周,血清VA降低直至感染后2周恢复正常,而肝脏中VA水平无统计学差异。S.pp+VA组肺组织炎性细胞浸润较S.pp组显著减轻,S.pp+VA组BALF中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17A水平显著低于S.pp组(P0.05),IFN-γ则显著增高(P0.01),肺组织Th1、Foxp3~+Treg显著高于S.pp组(P0.01),Th2水平明显降低(P0.01),且Th1/Th2比值显著增高(5.7 vs 1.7,P0.001))。S.pp+VA组小鼠气道反应性显著低于S.pp组(P0.001)。结论新生期肺炎链球菌肺炎致肺部VA水平持续降低至成年期,肺炎后补充VA能减轻新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织炎性细胞浸润,促进Foxp3~+Treg表达、纠正Th1/Th2失衡,抑制成年期气道高反应性形成。     

甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响

目的 研究甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响.方法 采用D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型,测定每组小鼠的体质量,计算脾脏指数和胸腺指数,观察脾脏组织超微结构,采用免疫组化法检测CD138的表达,ELISA检测小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量.结果 与正常对照组相比,衰老模型组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著降低(P＜0.01),与模型组比较,高、低剂量党参组和维生素E组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著升高(P＜o.ol).正常对照组脾小体中淋巴细胞的超微结构均正常,而模型组小鼠的脾脏超微结构有明显的损伤现象.低、高剂量党参组和维生素E组均使已受损伤的脾脏超微结构得以修复,其中高剂量党参组使受损的脾脏超微结构恢复到最接近正常水平.与正常对照组比较,衰老模型组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较低(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著减少(P＜0.01或P ＜0.05);与衰老模型组比较,正常对照组和高剂量党参组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较高(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著增加(P＜0.01或P＜0.05),而党参低剂量组和维生素E组无显著差异(P＞0.05).结论 甘肃党参水煎剂具有增强D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的作用.     

肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应

目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体(△A146 Ply)蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡(P=0.0018).在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.     

维生素D_3对肺炎支原体感染小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α表达的影响

目的探讨维生素D3(VD3)对肺炎支原体感染小鼠肺组织髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法 45只BALB/c小鼠随机分成对照组、MP感染组与维生素D3组。模型组与维生素D3组小鼠采用滴鼻法进行MP感染。模型制作7d后,处死小鼠,取肺组织,应用免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白的表达,real time PCR方法检测各组小鼠肺组织TREM-1mRNA及HIF-1αmRNA的表达水平。结果 MP感染组BALB/c小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白与m RNA的表达水平显著高于对照组,P0.01;给予维生素D3处理后,感染MP的BALB/c小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白与m RNA的表达水平显著降低,P0.01。结论维生素D3能够降低肺炎支原体感染小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α的表达。     

沉默附睾P34H基因对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶活性的影响

目的:通过慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)敲低P34H表达,分析其对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法:构建3种附睾精子P34H shRNA慢病毒表达载体GV-P34H-sh RNA-1、GVP34H-sh RNA-2和GV-P34H-sh RNA-3,提取阳性克隆质粒测序,转染HEK293T细胞,生产慢病毒颗粒。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别注入小鼠附睾中,用real-time PCR和Western blot法分别检测其对P34H m RNA和蛋白的沉默效果。采用免疫荧光法观察P34H蛋白在小鼠精子上的定位,改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测小鼠精子HYD活性(HYD阳性反应率和HYD活性强度)。结果:测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功。感染小鼠附睾后,P34H的mRNA及蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05);其中以GV-P34H-sh RNA-1作用最为显著,精子P34H阳性表达率和HYD活性均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05),而阴性感染组和正常对照组相比差异无统计学显著性。结论:附睾P34H基因沉默可抑制小鼠附睾中精子P34H阳性表达率和HYD活性。     

加味宣肺透解剂对流感病毒感染小鼠肺部细胞因子表达的影响

目的：观察加味宣肺透解剂对流感病毒感染小鼠肺部TNF-α、IL-β、MCP-1的影响，探讨其药效机制，为临床广泛应用提供理论和实验依据。方法：将小鼠随机分为5组：正常对照组、病毒感染模型组、利巴韦林组、加味宣肺透解剂高低剂量组。病毒感染后1h给药，连续给药4d，2次／日，0.5mL／次。利巴韦林组，腹腔注射给药，其余各组均灌胃给药，正常对照组和病毒感染模型组，灌服无菌蒸馏水。小鼠以乙醚轻度麻醉后，以25μL FM1病毒液滴鼻，正常对照组用等量无菌生理盐水滴鼻。观察14d小鼠的生存率；感染后第5天，摘取肺脏，称重，测定肺指数；肺组织福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，用SABC免疫组织化学法测定肺组织中TNF-α、IL-β、MCP-1，并进行图像分析。     

IL-2增强肺炎支原体P1C核酸疫苗的肌注免疫效果

目的:研究IL-2对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1C核酸疫苗经肌注免疫BALB/c小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用.方法:将P1C-IL-2核酸疫苗肌注免疫BALB/c鼠,ELISA检测疫苗免疫后56天小鼠血清IgG和IgG亚类、支气管灌洗液中SIgA、IFN-γ和IL-4的水平;用2×107 Mp菌落形成单位鼻饲感染BALB/c鼠,建立感染小鼠模型,病理切片检测Mp感染后小鼠肺部炎症病理改变;将系列10倍稀释的支气管灌洗液接种于SP4固体平板,并进行菌落计数.结果:P1C-IL-2核酸疫苗免疫组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a、IFN-γ和IL-4水平均较P1C单基因疫苗组显著增高(P＜0.05),但两组支气管灌洗液中SIgA差异无显著性(P＞0.05).Mp感染后第1、3、6天P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠肺组织病理评分(HPS)较P1C单基因疫苗免疫组显著增高,但支气管灌洗液中的Mp菌落数明显减少;第9天后两组HPS和Mp菌落数差异无显著性.结论:IL-2能显著增强P1C疫苗肌注的免疫保护作用和免疫应答水平,但同时在Mp感染早期激发了较重的肺组织炎症.     

新生期肺炎链球菌肺炎对成年期肺组织免疫状态及气道高反应的影响

目的研究新生期肺炎链球菌(S.pneumoniae)肺炎对成年期肺组织免疫状态及气道高反应的影响。方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×107CFU S.pneumoniae 5μl(肺炎链球菌肺炎组)或等量PBS(对照组),5周后用体积描计法检测小鼠肺功能,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),进行白细胞数及分类计数,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-10、IL-17A、IFN-γ及TGF-β水平,流式细胞术检测肺组织中的CD4+T细胞亚群Th1、Th2及Foxp3+Treg。结果新生期肺炎链球菌肺炎组小鼠成年后BALF中细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞水平显著高于对照组(P0.01)。BALF中IFN-γ、IL-10及TGF-β均显著低于对照组(P0.01),而IL-5、IL-17A显著高于对照组(P0.01);肺组织Th1、Foxp3+Treg显著低于对照组(P0.01);而Th2显著高于对照组(P0.05);Th1/Th2显著低于对照组(P0.01)。新生期肺炎链球菌肺炎小鼠成年后气道高反应显著高于对照组(P0.01)。结论新生期肺炎链球菌肺炎能影响肺组织免疫分化方向,促进成年后气道高反应的形成。     

NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒感染继发MRSA肺炎中的表达变化

目的:探索NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒(甲流病毒)HIN1感染继发耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)肺炎中的表达变化。方法:选取C57BL/6小鼠15只,分为空白对照组、MRSA组(MRSA滴鼻感染24 h)和H1N1+MRSA组(甲流病毒H1N1滴鼻预感染6 d后联合MRSA滴鼻感染24 h)。检测小鼠肺组织NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,并检测白细胞介素1β(IL-1β)在肺组织中的mRNA水平及在血清中的浓度。观察小鼠肺组织病理并分析小鼠IL-1β血清浓度与体重下降率的相关性。结果:MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比均无明显差异(P0.05),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3、caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,及IL-1β的mRNA表达水平和血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于MRSA组(P 0.01),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显低于MRSA组(P 0.01)。MRSA组肺组织病理呈炎症改变,H1N1+MRSA组肺组织病理改变较MASA组更严重。MRSA组及H1N1+MRSA组小鼠体重下降率与IL-1β血清浓度均成负相关(P 0.05)。结论:MRSA感染引起IL-1β的产生和释放不依赖NLRP3炎症小体,而甲流病毒预感染虽然激活了NLRP3炎症小体,但总体降低了机体抗MRSA免疫的IL-1β的表达及分泌,该效应可能是继发于甲流病毒感染的MRSA肺炎更为严重的机制之一。     

克拉霉素对小鼠肺炎支原体感染模型IL-4表达的影响

目的通过建立肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的模型,探讨克拉霉素对肺炎支原体感染小鼠IL-4表达的影响。方法 60只昆明小鼠随机分为对照组、MP感染组及克拉霉素治疗组,每组20只,建立小鼠肺炎支原体感染模型,克拉霉素治疗组用克拉霉素治疗5 d。HE染色观察病理组织学变化;Western blot方法检测各组小鼠肺组织IL-4的表达;RT-PCR方法检测各组小鼠肺组织IL-4 m RNA的表达水平。结果 MP感染后,小鼠肺组织呈间质性炎性改变,肺泡间隔增宽,大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管、血管周围,肺泡内有渗出;Western blot方法和RT-PCR方法检测发现,MP感染组小鼠肺组织IL-4蛋白和m RNA表达较对照组明显升高(P0.01),但是明显低于克拉霉素治疗组(P0.01)。结论克拉霉素可显著降低肺炎支原体感染小鼠肺组织IL-4水平。     

黏膜免疫壳聚糖-多胺转运蛋白D(PotD)DNA纳米微粒对小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植的保护作用研究

目的 探讨以壳聚糖包裹的PotD DNA(Chitosan-potD)纳米微粒经鼻黏膜免疫小鼠对肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.方法 将制备的Chitosan-potD微粒、裸pVAX1-potD重组质粒(裸potD)及pVAX1分别鼻腔免疫小鼠,收集黏膜和血清标本用以检测特异性抗体水平;分离并培养脾淋巴细胞,检测IL-17A、IL-4及IFN-γ的分泌水平;于免疫小鼠鼻腔进行肺炎链球菌攻击,通过菌落计数评估各免疫组对小鼠肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.结果 Chilosan-potD纳米微粒在小鼠体内诱导产生的抗PotD特异性血清IgG、IgG1、IgG2a、黏膜IgA抗体水平及IL-17A、IL-4、IFN-γ水平与裸potD组及pVAX1组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05);菌落计数结果 显示,Chitosan-potD微粒组在鼻咽部定植的肺炎链球菌数量显著减少(P<0.05).结论 壳聚糖包裹PotD DNA微粒对肺炎链球菌鼻咽部定植具有免疫保护作用.